腺苷A2a受体激动剂对脓毒症急性肾损伤中内质网应激的调节作用

目的:通过建立慢性间歇性低氧(CIH)大鼠模型，探讨CIH暴露对肝脏铁代谢的影响及可能的机制。方法:将20只SD大鼠随机分为常氧对照组(对照组)和模型组(CIH组),将模型组大鼠置于动物间歇性低氧舱内，前1.5min向舱内充入100%氮气使氧气浓度降至5%,后1.5min充入100%氧气使氧气浓度升至21%,每一循环3min, 8h/d, 35d;常氧对照组大鼠置于相同舱内，充入正常空气。HE染色观察肝脏损伤情况，比色法检测血清铁和总铁结合力(TIBC);普鲁士蓝染色观察肝脏铁含量；Western blot检测肝脏二价金属转运蛋白[DMT1(+ire)、DMT1(-ire)]、膜铁转运蛋白(FPN1)、转铁蛋白受体1(TfR1)、铁蛋白(FTL)、p-STAT3、STAT3蛋白表达；Q-PCR检测肝脏铁调素(hepcidin)、DMT1(+ire)、DMT1(-ire)、FPN1、TfR1、白细胞介素-6(IL-6)mRNA表达。结果:与对照组相比，模型组大鼠肝脏细胞结构紊乱，出现脂肪空泡、细胞核萎缩；与对照组相比，模型组大鼠TfR1和DMT1(+ire)mRNA及蛋白表达显著上升(P...     

高糖培养对LO2肝细胞株铁代谢相关蛋白的影响

目的 探讨高浓度葡萄糖对LO2肝细胞株铁调节蛋白1(iron regulatory protein 1,IRP1)、转铁蛋白受体1(transferring receptor 1,TfR1)、转铁蛋白受体2(transferring receptor 2,TfR2)、铁调素(hepcidin)表达的影响. 方法 LO2肝细胞株分为高糖组(25 mmol/L葡萄糖)和对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)培养0-48 h,分别在0 h,12 h,24 h,48 h检测细胞活性氧(ROS)水平及IRP1、TfR1、TfR2、hepcidin的表达量. 结果 高糖组细胞内ROS水平、IRP1、TfR1、TfR2表达量随培养时间延长逐步升高(P<0.01),hepcidin从24 h时表达量显著升高(P<0.01);12 h,24 h,48 h时高糖组与同时刻对照组相比细胞内ROS水平、IRP1、TfR1、TfR2表达量均显著升高(P<0.01);24 h与48 h时高糖组与同时刻对照组相比hepcidin表达量升高(P<0.01);对照组细胞内ROS水平从24 h时升高(P<0.05),以上蛋白在各时间表达均无显著变化(P>0.05). 结论 高浓度葡萄糖使正常人肝细胞铁代谢相关蛋白的表达增加,可能与高糖培养诱发活性氧的大量增加有关.     

睡眠剥夺对大鼠肝脏铁代谢的影响

目的 探讨睡眠剥夺对大鼠肝脏铁代谢的影响及相关分子机理.方法 20只雄性SD大鼠（180±10 g）随机分为对照组（CG）和睡眠剥夺组（SDG）.CG大鼠正常饲养,SDG大鼠采用改良多平台睡眠剥夺法建立模型.睡眠剥夺5d后,采用比色法检测血清、肝组织铁离子浓度,实时荧光定量PCR检测肝组织铁调素基因HAMP及IL-6、IL-1 mRNA表达水平,Western-Blot检测肝组织铁蛋白、磷酸化STAT3蛋白表达.结果 与CG组相比,SDG大鼠血清铁离子降低（P＜0.05）,而肝脏内的铁离子浓度升高（P＜0.01）;SDG大鼠肝组织HAMP、IL-6和IL-1 mRNA表达量分别升高1.1、3.2和1.7倍（P值均小于0.01）;SDG大鼠肝脏组织铁蛋白和pSTAT3蛋白表达显著高于对照组（P＜0.01）.结论 睡眠剥夺可能通过IL-6-hepcidin轴导致大鼠机体铁代谢紊乱.     

维生素E对不同糖浓度培养LO2细胞铁代谢相关蛋白表达的影响

目的探讨维生素E对不同浓度葡萄糖培养下LO2肝细胞株铁调节蛋白1(IRP1)、转铁蛋白受体1(TfR1)、转铁蛋白受体2(TfR2)、铁调素(hepcidin)表达的影响。方法 LO2细胞培养基分为5.5,15,25 mmol/L三种葡萄糖浓度。分别在这三种葡萄糖浓度培养中,再分别加入0,0.1,1 mg/L和10 mg/L维生素E。其中0 mg/L维生素E剂量组作为相同葡萄糖浓度组中的对照组。各组培养时间均为24 h。用荧光染色法检测各组细胞活性氧(ROS)水平,用蛋白免疫印迹法检测IRP1、TfR1、TfR2、hepcidin的表达量。结果①相同葡萄糖浓度组与0 mg/L维生素E对照组相比,5.5 mmol/L组添加各剂量维生素E后细胞ROS水平、IRP1、TfR1和TfR2表达没有显著差异(P>0.05);15 mmol/L组和25 mmol/L组中1 mg/L和10 mg/L维生素E组分别与其对照组相比,细胞ROS水平、IRP1、TfR1和TfR2表达分别下降(P<0.01);15 mmol/L和25 mmol/L组中0.1 mg/L维生素E组与相应对照组相比细胞ROS水平、IRP1、TfR1和TfR2表达没有显著差异(P>0.05)。②相同剂量维生素E组内:LO2细胞ROS水平、IRP1、TfR1、TfR2表达量分别随葡萄糖浓度的升高而逐渐升高(P<0.01)。③在各葡萄糖浓度组内,各剂量维生素E组间细胞的hepcidin表达没有显著性差异(P>0.05)。在各剂量维生素E组中,15 mmol/L和25mmol/L葡萄糖组与相应5.5 mmol/L葡萄糖组相比,hepcidin表达显著升高(P<0.01),而15 mmol/L和25 mmol/L组间hep-cidin表达没有显著差异(P>0.05)。结论维生素E能够降低高糖培养下细胞活性氧的含量,缓解IRP1、TfR1、TfR2蛋白表达增加的幅度。hepcidin表达变化并没有受维生素E的影响,提示hepcidin在高糖环境下的表达增加可能不是或不仅仅是受过量ROS的影响。     

高脂血症小鼠铁调素表达与肝功能损伤的关系

目的 观察高脂血症小鼠血清铁调素表达变化,探讨肝功能损伤与高脂血症小鼠铁调素的相关性。方法 60只4周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为6组,每组10只,分别为0、2、4、6、8周组以及8周正常对照组,造模组40只给予脂肪乳灌胃,分别在2、4、6、8周处死,复制高脂血症伴有肝脏损伤模型。对照组给予等体积生理盐水,造模成功后,取血分离肝脏。全自动生化分析仪检测血脂（TC、TG、LDL-C、HDL-C）、肝功能（ALT、AST）、血清铁（FER、TRF）。血清酶联免疫吸附法测：血清铁调素（hepcidin）水平。结果 与空白组比较,模型组TC、TG水平明显升高（P<0.05）造模成功,2周组小鼠hepcidin表达水平明显下降（P<0.05）。与空白组比较,小鼠铁调素（hepcidin）表达水平随高脂喂养时间延长,铁调素表达有升高趋势,以8周组下降差异有统计学意义（P<0.05）。血清铁调素与肝功能损伤程度间呈负性相关（r=0.878,P<0.01）。结论 高脂血症小鼠血清铁调素表达随血脂水平升高而增多。伴随肝功能受损程度加重,铁调素表达下降,表明铁调素水平能反映肝脏损害程度。     

益气消毒方对炎症性贫血模型大鼠造血功能的影响

[目的] 探讨益气消毒方对炎症性贫血(anemia of inflammation,AI)模型大鼠造血功能,以及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、铁调素(hepcidin)水平的影响。[方法] 40只Wistar大鼠中随机选取5只作为正常组,35只采用尾部皮下注射胶原乳剂的方法制备胶原诱导型关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型,并在此基础上,连续7 d腹腔注射0.1 μg·mL-1的IL-6溶液0.4 mL,诱导胶原诱导型关节炎伴炎症性贫血(collagen-induced arthritis with anemia of inflammation,CIA-AI)。将造模成功的20只大鼠随机分成模型组,益气消毒方低、中、高剂量组,各组每天灌胃给予相应药物,连续2周。检测大鼠外周白细胞(white blood cell,WBC)、红细胞(red blood cell,RBC)、血红蛋白(hemoglobin,HGB)、平均红细胞体积(mean red blood cell volume,MCV)和血小板(platelet,PLT)水平;计算比较肝脏和单侧股骨指数;以酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠血清及肝组织匀浆IL-6、hepcidin、铁蛋白和铁水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察骨髓病理形态学变化。[结果] 与正常组比较,模型组WBC、RBC和HGB水平明显降低,肝脏指数升高(P＜0.05),单侧股骨指数显著下降(P＜0.01);血清及肝组织匀浆IL-6、hepcidin、铁蛋白水平显著升高(P＜0.01),铁水平明显下降(P＜0.05);股骨骨髓中粒细胞和巨核细胞减少,髓腔内充填水肿的血管纤维脂肪组织。与模型组比较,益气消毒方高剂量组大鼠外周血WBC、RBC和HGB水平升高,单侧股骨指数升高,肝脏指数下降,血清及肝组织匀浆中铁水平显著升高(P＜0.01),IL-6、hepcidin、铁蛋白水平下降(P＜0.05);股骨骨髓病理形态改善。[结论] 益气消毒方可能通过调控机体炎症及骨髓造血关键因子IL-6、hepcidin水平,发挥纠正CIA-AI模型大鼠贫血的功效。     

骨髓增生异常综合征患者骨髓铁调素水平的研究

目的 研究铁调素及其相关因素对骨髓增生异常综合征（MDS）患者铁过载水平的评估价值。方法 选取64例MDS患者,采用ELISA法对患者的外周血和骨髓铁调素水平进行测定;Real-Time PCR法测定骨髓生长分化因子15（GDF15）和扭转原肠胚形成同系物1（TWSG1）mRNA的表达;流式细胞仪对T淋巴细胞亚型（CD4+、CD19+）和极化进行测定;采用磁共振成像T2*（MRI T2*）技术对心脏和肝脏铁沉积程度进行测定;结合患者的血清铁蛋白（SF）、C反应蛋白（CRP）和促红细胞生成素（EPO）资料,对数据进行分析。结果 64例MDS患者外周血与骨髓的铁调素表达水平无明显差异（P=0.134）。根据WHO 2008分型分组,难治性贫血伴环形铁粒幼细胞增多（RARS）亚型的骨髓铁调素表达水平最低[（105.40±5.13）ng/mL],难治性贫血伴原始细胞增多（RAEB）亚型的骨髓铁调素表达水平最高[（335.71±25.16）ng/mL],各组间比较差异有统计学意义（P=0.041）。根据IPSS积分和WPSS积分分组,低危组和高危组骨髓铁调素表达水平比较差异均有统计学意义（P<0.05和P<0.01）;但与WPSS低危组相比,WPSS高危组的SF和GDF15 mRNA均明显高表达（P<0.05）,而IPSS低危组与高危组比较差异无统计学意义（P>0.05）。根据T淋巴细胞亚型和极化分组,CD4+高表达组骨髓铁调素水平较正常组高（P<0.05）;CD19+高表达和正常组间骨髓铁调素水平比较无统计学意义（P=0.206）;Th1/Th2>70.6组骨髓铁调素水平高于Th1/Th2≤70.6组（P<0.001）。将铁调素与SF、心脏T2*值、肝脏铁浓度（LIC）（由肝脏T2*值换算得到）做逐步回归分析,仅有LIC水平与铁调素存在相关性（r=0.582,P<0.001）。结论 炎症对于调节铁调素表达至关重要,T淋巴细胞的活化及极化趋势可能在其中起到部分作用。MRI T2*对于评估MDS患者铁过载水平的效能优于SF。     

急性白血病患者红细胞生成素及EPOR的表达及其临床意义

目的分析急性白血病患者红细胞生成素(EPO)及红细胞生成素受体(EPOR)的表达及其临床意义。方法选取本院2018年2月至2019年7月收治的急性白血病患者80例,其中急性髓系白血病患者(AML组)与急性淋巴细胞白血病(ALL组)各40例,并选择同期收治的40例非血液系统疾病患者作为对照组。比较3组EPO、EPOR表达情况。结果ALL组、AML组骨髓血浆中的EPO表达明显高于对照组,EPOR表达明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);ALL组、AML组骨髓血浆中的EPO mRNA、EPOR mRNA水平均明显高于对照组(P<0.05);ALL组、AML组骨髓血浆中的EPO、EPOR蛋白水平明显高于对照组(P<0.05)。结论急性白血病患者的EPO、EPOR呈高表达,可根据EPO、EPOR表达量判断患者预后。     

甲状腺功能亢进对大鼠肝脏铁含量及铁转运相关蛋白 mRNA 表达的影响

目的：通过检测甲状腺功能亢进（甲亢）时大鼠肝脏铁含量和铁蛋白（ Fn ）、转铁蛋白受体1（TfR1）、二价金属离子转运体1（DMT1）、膜铁转运蛋白1（Fpn）mRNA的表达,探讨甲亢对大鼠肝脏铁代谢的影响。方法雌性SD大鼠54只,随机分组,每组6只,8个模型组经左旋甲状腺素钠灌胃给药建立甲亢模型,1个对照组灌服生理盐水。于第1～8周末各取1个模型组大鼠肝脏,行组织切片后经DAB增强的Perl′s铁染色检测肝脏铁含量,经RT－PCR检测大鼠肝脏Fn、TfR1、DMT1、Fpn mRNA的表达。结果模型组大鼠肝脏铁染色明显高于对照组,且随着时间的延长明显增强。对照组大鼠肝脏表达Fn H、Fn L、TfR1、DMT1和 Fpn mRNA。模型组Fn L mRNA在1～3周与对照组比较差异无统计学意义（P＞0．05）,而4～8周均略低于对照组（P＜0.05）。模型组Fn H mRNA随造模时间延长逐渐升高（P＜0.05）,且各时间点表达均高于对照组。模型组TfR1 mRNA和DMT1 mRNA各时间点表达量均高于对照组（ P＜0.05）。模型组Fpn mRNA的表达量随造模时间延长逐渐降低（ P＜0.05）,且在各时间点均明显低于对照组。结论甲亢可引起大鼠肝脏铁含量增加,Fn、TfR1和DMT1 mRNA表达升高,而Fpn mRNA表达下降。肝脏铁含量升高可能与TfR1、DMT1和Fpn表达改变有关,肝脏Fn增加对升高的铁具有储存作用,防止铁超载对肝细胞的损害。     

降糖调脂灵对2型糖尿病大血管病变的保护作用研究

目的研究降糖调脂灵对2型糖尿病(T2DM)大鼠大血管病变的保护作用,并探讨其可能机制。方法将40只健康成年雄性Wistar大鼠随机分为4组:对照组、模型组、双胍组、中药组,各10只。对照组大鼠喂以标准饲料且不做任何处理;其余各组大鼠通过高糖高脂饲料喂养+腹腔注射链脲佐菌素(STZ)诱发糖尿病,继续喂以高糖高脂饲料。同时双胍组大鼠给予二甲双胍134 mg.kg-1.d-1灌胃,中药组大鼠给予降糖调脂灵690 mg.kg-1.d-1灌胃;而对照组和模型组给予相当量的0.9%氯化钠注射液灌胃。3个月后检测各组大鼠血糖、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素、血脂〔总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)〕水平;计算胰岛素敏感性指数(ISI);酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清可溶性转铁蛋白受体(sTfR)水平;RT-PCR法检测平滑肌细胞转铁蛋白受体(TfR)mRNA表达量;透射电镜观察主动脉平滑肌细胞超微结构改变。结果 (1)4组大鼠血糖、HbA1c、胰岛素、ISI、血脂、sTfR水平及主动脉壁平滑肌细胞TfR mRNA表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05);其中模型组大鼠血糖、HbA1c、胰岛素、TC、TG、LDL、sTfR水平及TfR mRNA表达量高于对照组,ISI及HDL水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);双胍组大鼠胰岛素、血脂、sTfR水平及mRNA表达量与模型组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);而中药组大鼠血糖、HbA1c、胰岛素、TC、TG、LDL、sTfR水平及TfRmRNA表达量均低于模型组,ISI及HDL水平高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)模型组大鼠可见主动脉壁平滑肌细胞成退行性改变,细胞核内电子密度升高,异染色质增多,细胞质内大量线粒体出现明显的嵴断裂、空泡样变、髓鞘样变,高尔基复合体内出现大空泡。双胍组大鼠主动脉壁平滑肌细胞也出现类似变化。中药组大鼠主动脉壁平滑肌细胞损坏轻微,但也有少量平滑肌细胞的线粒体、高尔基复合体和粗面内质网呈现退行性改变,可见部分空泡变、髓鞘样变线粒体和空泡变的粗面内质网。结论降糖调脂灵对T2DM大血管病变具有保护作用,其机制可能与其降低血糖、血脂,从而改善铁代谢紊乱有关。