传染性法氏囊病病毒分离株变 异的研究

为了了解我国传染性法氏囊病病毒（IBDV）的变异现状,并为研究高效疫苗打下基础,用琼脂糖凝胶电泳,SD－PAGE和序列分析等分子生物学方法,分析IBDV病毒RNA,结构蛋白的变异情况,结果表明：（1）3种不同源IBDV均由双节段RNA组成,大小基因片段的电泳迁移率各商毒间无差异;（2）不同源IBDV的结构蛋白带谱相同,但各蛋白带的百分含量有差异;（3）IBDV血清I型不同亚型的JS3和JS4毒株主要保护性抗原VP2高变区核酸序列的同源性最高达98％,与已发表的vvIBDV,IBDV变异株,IBDV经典株及IBDV弱毒株核苷酸序列同源性在92－98％之间,根据IBDV的大开放读框推导出该片段编码蛋白的氨基酸序列,JS3和JS4的同源性最高达97％,与上述其它毒株的同源性在91－97％之间,七肽区的氨基酸序列,在强毒株完全相同,而在弱毒株有一个丝忱酸突变成其它氨基酸。     

不同传染性法氏囊病病毒分离株变异的研究

目的 了解不同源IBDV和不同血清亚型IBDV病毒株的变异情况。方法 用琼脂糖凝胶电泳。SDS-PAGE和序列分析等分离生物学方法分析病毒RNA、结构蛋白的变异情况。结果 (1)三种不同源IBDV均由双节段RNA组成,大小基因片段的电泳迁移率在各病毒株间无差异;(2)SDS-PAGE分析表明各IBDV的结构蛋白带谱相同,但各蛋白带的百分含量有差异;(3)序列分析表明JS3、JS4与标准对照病毒株S1 IBDV VP2基因片段的核酸的同源性均为97％,JS_3与JS_4的同源性为99％。推导编码蛋白氨基酸序列,JS_3与S_1的同源性为97％,JS4与s1的同源性为96％,JS3与JS4的同源性为98％。结论 我国流行的IBDV病毒株与标准病毒株相比不仅在免疫学反应上有差异,而且在病毒核酸序列上有变异,这种变异是造成疫苗免疫失败或免疫逃避的分子基础。     

传染性法氏囊病病毒结构蛋白VP2比较及高表达毒株的分离

对29个传染性法氏囊病病毒（IBDV）的病理组织和毒株分别增殖后,采用不连续蔗糖密度梯度离心的方法纯化病毒,经SDS-PAGE分析,病毒结构蛋白VP2在不同毒株表达量有较大差异。对其中OOZB和99TA32个VP2相对高表达的IBD病理组织样品进行病毒分离,获得了2个IBDV VP2相对高表达毒株。     

传染性法氏囊病的防治

目的 研究以传染性法氏囊病病毒制成多价弱毒疫苗进行IBD的免疫预防效果。方法 分别从江苏、浙江等8省(市)采集IBD病鸡法氏囊病料,分离到32个野毒株,经SDS-PAGE鉴定,其中17株病毒为IBDV。应用交叉中和试验,将分离的IBDV分为5个亚型。用IBDVI型变异株高免血清作中和试验,其中5株有较高的中和效价,初步定为IBDVI型变异株。将其在CEF上连续传代致弱,与标准I型弱毒株联合制成多价弱毒疫苗。结果 试验表明它具有良好的免疫效果,免疫组攻毒100％保护,对照组攻毒死亡率为92％。以IBD病变典型的法氏囊组织制成的IBD油乳剂灭活疫苗具有满意的免疫效果。结论 将之免疫健康鸡和IBD康复鸡,制备高免血清和卵黄抗体,血清抗体的AGP效价均达1:32,最高达1:128,治疗IBD病鸡的有效率达90％～98％;卵黄抗体的AGP效价达1:64,应用于IBD病鸡治疗,治愈率达90％～95％。制备的二联卵黄抗体用于治疗IBD和ND混合感染病鸡,治愈率达71％。     

我国近期分离的6株狂犬病病毒的糖蛋白基因序列分析

目的  分析我国近期分离的6株代表性狂犬病病毒（rabies virus,RV）的糖（G）蛋白基因序列,了解RV街毒株与疫苗株在核苷酸和氨基酸序列水平的差异。方法  对6个RV街毒株G基因进行逆转录和PCR扩增,经纯化、克隆、测序后获得6条G基因全长序列,采用生物信息学软件对G基因序列进行分析。结果  6个街毒株的G蛋白在核苷酸水平的同源性为97.7％～100％,在氨基酸水平的同源性为97.9%~100%;与CTN-181疫苗株的核苷酸序列同源性最高,为86.7%~87.2%,氨基酸序列同源性为92.7%~93.1%。结论  6个RV街毒株的G蛋白在核苷酸及氨基酸水平上均有变异,但与CTN-181疫苗株关系最近,表明CTN-181疫苗株可能为我国境内流行的狂犬病提供良好的预防作用。     

柯萨奇病毒A组16型毒株的分离及其生物学特性初步分析

 目的  对柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CA16）毒株进行分离、鉴定,并分析其生物学特性,为CA16疫苗候选毒株的筛选奠定基础。方法  从手足口病患者的咽拭子或疱疹液样本中分离CA16毒株,经噬斑纯化后,用逆转录-聚合酶链反应进行病毒鉴定。将病毒连续传代后,对其VP1基因进行序列测定,分析VP1基因和氨基酸序列的同源性和遗传稳定性。结果  通过Vero细胞适应传代和噬斑纯化,获得遗传稳定的CA16毒株,感染Vero细胞后引起典型的细胞病变。病毒分离株经CA16特异性引物扩增后可见208 bp的特异性条带,经VP1基因测序进一步确定这些分离株为CA16。同源性和系统进化树分析表明,各毒株与shzh04-J31株的同源性最高,为92.4%~96.1%,均属于C基因亚型。病毒分离株在Vero细胞上连续传12代后,仅1株病毒的1个氨基酸发生改变。结论  成功分离到CA16毒株,其生物学特性稳定,可用于CA16疫苗的研发。     

我国丙肝病毒结构区的cDNA克隆

目的克隆我国西部丙型肝炎病毒全部结构区基因并进行序列分析,为研究丙肝病毒和基因工程表达做准备。方法从1名西安市丙肝感染者血液中,用Trizol试剂裂解HCV病毒颗粒,用糖原与RNA共沉淀提取HCVRNA,用AMV逆转录酶和随机引物逆转录为cDNA,用RT-PCR方法扩增目的片段并转化到pGEM-T质粒,得到pGEM-T-HCVc,pGEM-T-HCVe1和pGEM-T-HCVe2克隆。将以上3个克隆用特定的酶降解,用连结酶进行连接,构建了HCV结构区的完整克隆。结果将克隆好的质粒从两端双向测序,得到完整的HCV结构基因cDNA核苷酸序列,总长度为2238bp,与已发表的HCV序列长度一致,未发现缺失或移码突变,序列中间亦未发现转录终止子。本文序列与HCV1a,1b序列核苷酸的同源性分别为91.8%,84.5%。氨基酸的同源性分别为94.2%,86.3%。本文序列与HCV1a核苷酸及氨基酸的同源性均大于90%,应为HCV1a亚型。结论我国西部地区存在HCV1a亚型,所克隆HCV结构区cDNA克隆可以用于丙肝病毒研究和基因工程表达。     

HMGN2重组表达质粒的构建及其抗乙型病毒性肝炎的病毒活性

目的：构建HMGN2重组表达载体并观察高迁移率蛋白HMGN2分子的抗乙型病毒性肝炎的病毒作用。方法用基因克隆的方法,构建pET -32 a-c （＋）-HMGN2重组表达质粒;用亲和层析的方法,纯化His-HMGN2融合蛋白, Tricine-SDS-PAGE电泳、Western blotting对纯化得到的HMGN2分子进行分子鉴定。以HBV DNA转染的细胞株HepG2.2.15细胞为模型,用ELISA检测HBV表面抗原（HBsAg）及e抗原（HBeAg）,用实时荧光定量PCR法检测HBV DNA的含量。结果成功构建了pET-32a-c（＋）-HMG17重组表达质粒,其表达的融合蛋白可显著抑制HBeAg和HBsAg的表达,降低HBV DNA拷贝数。结论 HMGN2在体外细胞培养中有直接抗HBV的活性。     

用无神经氨酸酶的甲型流感病毒变异株对雪貂鼻内免疫的保护效果

美国弗吉尼亚大学Mishin等用基因重组技术删去甲型流感病毒〔A/Bayern/7/95类似株(H1N1)〕神经氨酸酶(NA)基因而构建了无NA的变异株(delNA-mutant),以及用一种编码嵌合蛋白(eGFP,由绿色荧光蛋白胞质尾区、跨膜区和NA主要区融合而成)基因插入取代NA基因而构建了另一变异株(delNA     

6例河南株HGV NS5基因变异的研究

目的：探讨河南省庚型肝炎病毒基因的变异特征。方法：利用逆转录巢式聚合酶链反应（ＲＴＮｅｓｔＰＣＲ） 扩增ＨＧＶＮＳ５ 区序列;将ＰＣＲ扩增产物克隆入Ｔ载体,进行测序和分析。结果：河南株ＨＧＶＮＳ５核酸和氨基酸序列与ＧｅｎＢａｎｋ 中ＨＧＶ 对应位置序列的同源性分别为８９．０％ ～９８．４％ 和９５．０％ ～９８．４％ ;河南株存在本地区的独特变异点（２３ 位Ａｌｇ→Ｇｌｙ,１１９ 位Ｐｈｅ→Ｌｅｕ ,１５３ 位Ａｓｐ→Ｇｌｕ） 。结论：ＨＧＶＮＳ５ 区基因相当保守,是ＰＣＲ方法检测ＨＧＶ的适宜扩增区段;推测这三个变异点可能是河南株ＨＧＶ 进化标志。     

重大突发公共卫生事件中政策对控制效果的影响——以重庆市新型冠状病毒肺炎疫情防控为例

目的:研究武汉封城及重庆市应对新型冠状病毒肺炎采取的政策措施对重庆市疫情防控的效果。方法:收集整理从疫情暴发初期至基本控制期间重庆市新型冠状病毒肺炎的流行病学数据与各级政府部门实施的防控政策,对数据进行趋势分析,探讨主要政策措施对疫情控制的效果。结果:武汉封城与小区封闭式管理等措施显著控制了疫情的传播。优化诊疗流程,缩短诊断时间,组建专家团队“一对一”救治等诊疗措施显著提高了治愈率,降低了病死率。结论:重庆市实施的各项防控政策措施,在控制疫情传播及提高治愈率中取得了显著的效果。     

输血前传染病检测在输血中的应用价值探究

目的:探讨在患者输血前接受传染病检测对输血的价值及意义。方法:以某院2012年9月~2013年9月收诊的90例接受输血治疗的患者为研究对象为A组,另外选取90例体检健康的患者作为参照,作为B组,对输血患者进行各项传染病指标检测。结果:90例患者在输血前传染病检测阳性率达到28.89%,仅对患者进行乙型肝炎(HBSAg、HBs、HBe Ag、HBe、HBc)检测阳性率已达到14.43%。90例健康人员的传染病检测阳性率达到12.20%,两组研究对象具有明显差异(P0.01),具有统计学意义。结论:在患者输血之前,对其进行有效的传染病指标检测可以有效的降低医院内交叉感染的发生,同时也可以减少医患之间医疗纠纷,创建良好医患关系,因此其具有重要的应用意义。     

血小板内皮细胞黏附分子-1基因Leu 125 Val分子变异与冠心病相关性

目的 :研究血小板内皮细胞黏附分子 - 1(PECAM - 1)基因Leu 12 5Val分子变异与中国人群冠心病的关联。方法 :选择 90例冠心病患者 (冠心病组 )及年龄、性别相匹配的 115例正常者 (对照组 ) ,用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)方法检测其PECAM - 1基因型。比较 2组基因型及等位基因频率分布。结果 :冠心病组V V基因型频率 (40 .0 0 % )明显高于对照组 (2 3.4 8% ) ,差别有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;与对照组相比 ,冠心病组V等位基因频率 (5 8.89% )明显升高 ,L等位基因频率 (41.11% )明显降低 (P <0 .0 5 ) ;吸烟使V V基因型者冠心病发病危险度由 2 .17上升至 3.5 0 (P <0 .0 5 )。结论 :PECAM - 1基因Leu 12 5Val分子变异与冠心病相关 ,V V基因型可能是中国人群冠心病的遗传易患因子。     

乙型肝炎病毒大蛋白检测的临床意义

目的探寻乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒表面大蛋白(LHBs)表达量的变化及其与病毒载量的相关性。方法对临床确诊为慢性乙型肝炎的170例病例及28例健康对照血清样本分析,ELISA检测乙型肝炎表面大蛋白的含量、实时定量PCR检测乙型肝炎病毒。结果乙型肝炎病毒表面大蛋白在乙型肝炎患者的血清中表达,在非乙型肝炎的患者中不表达,并且和乙型肝炎病毒的载量成正相关。结论乙型肝炎病毒表面大蛋白的表达,可以作为临床感染乙型肝炎病毒及临床疗效判断的参考依据。     

Insight into the Molecular Mechanism for the Discrepant Inhibition of Microcystins (MCLR,LA, LF,LW, LY) on Protein Phosphatase 2A

Microcystins (MCs) exhibit diversified inhibition effects on protein phosphatases (PPs) due to their structural differences. To fully evaluate the potential mechanism for the discrepant inhibition effects, the five most frequent MCs with varying residues at position Z⁴ were selected as the tested toxins. Their inhibition sequence on PP2A was detected as follows: MCLR > MCLW > MCLA > MCLF > MCLY. Combined with homology modeling and molecular docking technology, the major interaction parameters between the MCs and PP2A were obtained. The correlation analysis for the major interaction parameters and inhibition effects showed that the hydrophobicity of Z⁴ had an important influence on the interaction of the MCs to PP2A. The introduction of hydrophobic Z⁴ directly weakened hydrogen bonds Z⁴→Pro₂₁₃ and Z⁴←Arg₂₁₄, indirectly weakened hydrogen bonds Adda⁵←Asn₁₁₇, Glu⁶←Arg₈₉, and MeAsp³←Arg₈₉, but indirectly enhanced ionic bonds Glu⁶←Arg₈₉, Glu⁶-Mn₁²⁺, and Glu⁶-Mn₂²⁺. In this way, the combination of the MCs with PP2A was blocked, and thus, the interactions between PP2A and the Mn²⁺ ions (in the catalytic center) were further affected; metal bonds Asp₈₅-Mn₁²⁺ and Asp₈₅-Mn₂²⁺ were weakened, while metal bond His₂₄₁-Mn₁²⁺ was enhanced. As a result, the interactions in the catalytic center were inhibited to varying degrees, resulting in the reduced toxicity of MCs.     

COPD所致肺动脉高压与同型半胱氨酸相关性研究

目的：探讨慢性阻塞性肺疾病（COPD）所致不同程度肺动脉高压（PH）与血浆同型半胱氨酸（Hcy）的相关性。方法：应用反相高效液相色谱荧光检测法测定了COPD合并PH轻、中、重度患者以及COPD合并高血压及PH轻、中、重度患者的Hcy,采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。结果：COPD合并PH轻、中、重度患者血浆Hcy差异无统计学意义（P〉0.05）,但COPD合并PH及高血压患者的Hcy明显高于未合并高血压患者（P〈0.05）。结论：检测血浆Hcy对于高血压疾病的预防、诊断具有重要的临床应用价值,但对于COPD合并PH疾病无太大的临床应用价值。     

膀胱癌组织P~(53)基因表达的研究

本文采用免疫组织化学技术对32例膀胱癌组织P~(53)基因表达进行了检测,试图探讨抑癌基因(P~(53))与膀胱癌组织病理分级及生物学行为的相互关系。结果显示,32例膀胱癌组织P~(53)基因蛋白总阳性表达率为50％,G_1期为30％,G_2期为44.4％,G_3期为69.2％。化疗后复发的12例膀胱癌组织P~(53)阳性表达率为75％。实验结果提示P~(53)基因表达水平与膀胱癌的生物行为及病理学分级密切相关。     

类固醇生成因子-1(SF-1)的研究进展

类固醇生成因子-1(SF-1),又被称为Ad4BP或NR5A1,是孤儿核受体家族成员,在类固醇生成、脑和垂体激素调控、肾上腺肿瘤发生中发挥着关键作用,是肾上腺和性腺发育及功能的重要调控因子。最近几年,SF-1的研究取得了很大进展,本文将对SF-1的发现、分子结构、体内表达进行简述,重点阐述SF-1调控的靶基因、转录激活功能调控在生理病理中的研究,特别是相关的拮抗药物进展等几个方面。     

Human Toxicity of Cobalt-Containing Dust and Experimental Studies on the Mechanism of Interstitial Lung Disease (Hard Metal Disease)

Abstract

In the industry, the potential for exposure to cobalt metal dust is particularly important during the production of cobalt powder and the processing and use of hard metals and other cobalt-containing alloys. The different adverse health effects reported in these workers are reviewed. One of the main target organs is the respiratory tract, and this article concentrates on the lung parenchymal reactions induced by cobalt-containing dust. Clinical and epidemiological data indicate that this manifestation is rarely, if ever, induced by pure cobalt metal dust alone, but requires the concomitant inhalation of other compounds such as tungsten carbide in the hard metal industry (hard metal disease). Experimental studies demonstrate that cobalt metal and metallic carbides interact to produce an elective lung toxicity. Recent work on the mechanism of this interaction, which is based on the production of activated oxygen species, is reviewed. A practical implication in industrial hygiene should be that permissible exposure levels to Co dust might have to be different when exposure is to pure Co particles or an association with carbides.