乙型肝炎病毒DNA检测结果分析

聚合酶链反应 (ＰＣＲ)检测乙型肝炎病毒ＤＮＡ(ＨＢＶ -ＤＮＡ) ,是确定乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染及其病毒复制的指标 ,作者采用ＰＣＲ法检测ＨＢＶ -ＤＮＡ，以探讨ＨＢＶ感染者的不同感染状态是否存在传染性和病毒复制。１材料和方法１．１血清来源对健康查体者１８５０人 (初筛ＨＢｓＡｇ阳性者 )取静脉血３ｍｌ,筛选乙肝５项指标不同组合者 ,分离血清 -２０℃保存。１．２检测方法 (１)ＨＢｓＡｇ、抗 -ＨＢｓ、ＨＢｅＡｇ、抗 -ＨＢｅ、抗 -ＨＢｃ用ＥＬＩＳＡ法。试剂为上海科华生物制品工程公司生产 ,有效期内按说明书操作。使用Ｃ…     

乙型肝炎病毒核酸检测试剂临床应用的分析

目的 了解HBV/HCV/HIV联合核酸检测的临床应用.方法 使用Abbott Architecti2000化学发光检测盒对534份血浆样品进行血清学检测,Roche COBAS AmpliPrep/COBAS TaqManHBV Test试剂定量检测分别与2种联合核酸检测结果 进行比较分析.结果 81份HBsAg、HBeAg、抗-HBc 3项均阳性样品联合核酸检测均为HBV阳性,200份HBsAg阴性的样品中联合核酸检测试剂分别有11、19份检测为HBV阳性.HBV DNA定量检测>500 IU/ml的193份样品联合核酸检测试剂阳性符合率分别为96.9%、94.3%,117份样品<500 IU/ml阳性符合率分别为40.2%、45.3%,151份HBV DNA阴性样品联合试剂阴性符合率为99.3%、96.0%.结论 中国人群中存在一定比例低载量HBV携带者,联合核酸试剂作为献血员筛查的补充方法 在提高血液及其制品使用的安全性方面具有一定的临床使用意义.     

试剂反复冻融对乙型肝炎病毒核酸检测结果的影响

<正>血浆(清)乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量是乙肝感染者病毒复制的直接指标。HBV DNA定量检测结果的准确性直接关系到乙肝感染者病毒复制水平、抗病毒药物疗效、肝移植术后HBV复发感染。为保证HBV DNA定量检测结果的准确性,对     

乙型肝炎病毒血清标志物与HBV DNA定量结果分析

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)血清学检测出现的组合模式与HBVDNA定量之间的关系,正确评价其临床意义。方法用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清标志物,用荧光定量PCR检测HBVDNA含量,依据乙肝病毒标志物阳性出现的模式分为7组A组191例,为HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性(俗称大三阳);B组328例,为HBsAg、HBe-Ab、HBcAb阳性(俗称小三阳);C组26例,为HBsAg、HBeAg阳性;D组54例,为HBsAg、HBcAb阳性;E组35例,HBsAb、HBeAb、HBcAb阳性;F组11例,为HBsAb、HBcAb阳性;G组10例,为HBcAb阳性。结果各组HBVDNA>1.00ⅹ103拷贝/ml的阳性增高百分率分别为A组98.95%(189/191);B组46.34%(152/328);C组100%(26/26);D组57.41%(31/54);E组20.00%(7/35);F组18.18%(2/11);G组20.00%(2/10)。A组、C组与B、D、E、F、G组间HBVDNA阳性增高率有显著性差异(P<0.01),其他各组间比较有些差异有显著性,有些差异无显著性(P<0.01或P>0.05)。结论正确合理地分析HBV血清学指标出现的类型,与HBVDNA的联合动态检测有助于临床诊断、疗效观察及预后判断。     

新型丙型肝炎病毒核酸定量试剂检测性能验证

目的验证新型丙型肝炎病毒核酸定量试剂的检测性能。方法运用ABI 7500荧光定量PCR仪,按CNAS-CL02-A009文件要求,分别验证其精密度、正确度、线性及可报告范围和抗干扰能力等指标。结果精密度:低浓度和高浓度样本的重复精密度标准差值均小于3/5TEa,低浓度和高浓度样本的中间精密度标准差值均小于4/5TEa;正确度:2017年卫计委10份室间质评样本的检测结果均在靶值允许的上下限范围之内,且与靶值的偏倚均≤±7.5%,正确率高达100%;线性及可报告范围:新型试剂在50IU/ml～1×10~8 IU/ml范围内具有良好的线性关系,线性回归方程为y=0.988x+0.1891,R~2=0.9996>0.95;抗干扰能力:2g/dl的血红蛋白、28mg/dl的总胆红素、3000mg/dl的甘油三酯、40g/L的总IgG对检测结果没有影响。结论新型试剂具有重复性好、稳定性高、结果准确可靠、线性范围宽、抗干扰能力强等优势,其检测性能满足ISO15189要求,可有效用于临床样本检测并适合于在各医学实验室推广使用。     

慢性乙肝患者乙型肝炎病毒DNA、HBV-M、ALT及AFP检测结果分析

目的 探讨慢性乙肝患者血清学标志物(HBV-M)与乙型肝炎病毒(HBV)DNA、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、甲胎蛋白(AFP)的检测结果及其关系. 方法 对1 838例慢性乙肝患者采取空腹静脉血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV-M及AFP,用赖氏法检测ALT,用套式PCR(nPCR)检测血清HBV DNA. 结果 1 838例慢性乙肝患者HBV DNA阳性率、ALT异常率、AFP阳性率分别为56.75%(1 043/1 838)、13.93%(256/1 838)、2.23%(41/1 838).HBV-M模式检测中,"大三阳"占14.52%,"小三阳"占76.13%."大三阳"患者HBV DNA阳性率(96.97%)明显高于"小三阳"患者(47.04%),二者差异有统计学意义(P＜0.01);"大三阳"患者ALT异常率、AFP阳性率(22.35%、3.41%)高于"小三阳"患者(11.42%、1.45%),差异均有统计学意义(P均＜0.05).HBV DNA(+)组ALT异常升高率、AFP阳性率(20.04%、3.26%)均明显高于HBV DNA(-)组(5.91%、0.88%),差异均有统计学意义(P均＜0.01). 结论联合检测慢性乙肝患者血清HBV DNA、HBV-M、ALT、AFP,对乙型肝炎的临床诊治和预后判断具有重要意义.     

3种荧光定量PCR试剂检测HBV-DNA结果比较

乙型病毒性肝炎(乙肝)是一种严重影响我国人民健康的传染病,检测血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量是反映HBV复制的程度,考核抗病毒药物治疗效果的重要依据。用PCR检测HBV-DNA是最常用的检测方法,由于该法受一系列的技术以及人为因素影响,易使检测结果产生误差,甚至造成假阴性的结果。为此,我们对48份HBV-DNA检测阴性标本,用多种不同厂家生产的PCR试剂进行同步复核,探讨其假阴性结果的真实性,现报道如下。材料与方法1标本来源宁波市传染病院2005~2005年住院和门诊乙肝患者2333份血清标本,均未经抗病毒药物治疗,其血清病毒学标志检…     

乳汁样本乙型肝炎病毒DNA提取方法探讨

目的 探讨不同样本处理方法对乳汁样本中HBV DNA定量结果的影响,筛选出适合临床实验室检测病毒DNA的样本前处理方法.方法 分别采用专用DNA提取液法、碱裂解法、酸化法、无水乙醇法和冷藏法,提取不同HBV DNA载量的乳汁样本中的HBV DNA,然后进行荧光定最PCR检测.结果乳汁样本中的HBV DNA>10~4 IU/mL时,以专用DNA提取液法、碱裂解法、冷藏法处理的乳汁样本HBV DNA结果阳性率达100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,酸化法和无水乙醇法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符 率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测,且NaOH浓度应控制在0.4%～1.0%之间. HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符 率100%,酸化法和无水乙醇法 理的乳汁样本HBV DNA均为阴性;当乳汁样本中的HBV DNA<10~4 IU/mL时,以碱裂解法(NaOH浓度为0.4%～1.0%)处理的乳汁样本HBV DNA检测结果阳性率100%,HBV DNA阳性血清用乳汁稀释与用阴性血清稀释的定量结果符合率100%,其余方法处理的乳汁样本HBV DNA均为阴性.结论 碱裂解法提取乳汁样本中的HBV DNA适用临床样本检测     

贵州省HBsAg筛查阳性孕妇乙型肝炎病毒DNA检测分析

目的分析贵州省孕妇乙型肝炎病毒(HBV)DNA状况,为制定和调整HBV母婴阻断方案提供科学依据。方法采用分层随机抽样的方法抽取4个市州,在4个市州中随机抽取9个县级医院作为调查单位,对调查单位内2014-2015年住院分娩的孕妇开展HBV表面抗原(HBs Ag)筛查;对HBs Ag阳性的孕妇开展问卷调查并采集血标本,分离血清后采用PCR结合荧光探针的体外DNA扩增和检测技术定量检测血清标本中的HBV DNA含量。结果共筛查9个县级医院18 007名孕妇,经ELISA方法复测HBs Ag阳性534名,孕妇HBV DNA阳性率为55.99%。9个县孕妇HBV DNA阳性率33.33%~85.29%,差异有统计学意义(P0.05)。城市、农村孕妇HBV DNA阳性率分别为56.99%和55.78%,城、乡差异无统计学意义(P0.05)。≤20岁组孕妇HBV DNA阳性率为59.06%,21~30岁组为46.67%,差异有统计学意义(P0.05)。HBs Ag、HBe Ag阳性孕妇HBV DNA阳性检出率分别为59.27%和90.61%,HBs Ag、HBe Ag阳性分别与HBs Ag、HBe Ag阴性(18.06%、33.02%)孕妇间HBV DNA阳性检出率差异有统计学意义(P0.01)。HBs Ag、HBe Ag阳性孕妇分别与HBs Ag、HBe Ag阴性孕妇间HBV DNA平均载量差异有统计学意义(P0.05)。结论定量检测孕妇HBV DNA能真实反映HBV的复制情况,可为制定预防和控制HBV母婴传播策略提供科学依据。     

不同试剂检测HBsAg结果比较

本文介绍了应用不同的试剂，同一方法检测HBsAg，其检出结果有一定差异．这一实验结果为今后检测HBsAg选用试剂提供了依据．     

DNA芯片检测乙型肝炎病毒基因型

目的 制备检测HBV基因型的DNA芯片并进行杂交验证.方法 设计多条HBV分型寡核苷酸探针,固定于醛基基片的特定位置,制备成芯片,采用酶呈色技术(BCIP/NBT显色)检测杂交信号,进行杂交验证分析.结果 106例临床样本均测出基因型,其中B型37例,C型69例;对所有样本进行测序分析,结果与芯片杂交一致,杂交的灵敏度和重复性等指标均佳.结论 DNA芯片检测HBV基因型,操作简便易行,技术要求不高,适于临床推广应用.     

乙型肝炎病毒核酸载量与乙型肝炎病毒大蛋白的相关性研究

目的 探讨慢性乙型肝炎e抗原( HBeAg)阴性患者血清中乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)病毒核酸载量与乙型肝炎病毒大蛋白(hepatitis B virus large surface protein,LHBs)之间的相关性,从而探讨LHBs是否可以用作HBeAg阴性乙型肝炎患者病毒复制程度的判定指标.方法 采集83例HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清,采用ELISA进行LHBs检测,全自动免疫分析仪进行HBeAg检测,实时荧光定量PCR方法进行HBV DNA检测.分析HBV DNA无拷贝数组、低拷贝数组及高拷贝数组3组中LHBs的检出率以及HBV DNA不同拷贝数组与LHBs的相关性.结果 在HBV DNA无拷贝数组,LHBs的阳性率为6.4％;低拷贝数组,LHBs的阳性率为56.3％,吸光度值与拷贝数对数值呈正相关,但无统计学意义(r=0.25,P=0.362);高拷贝数组,阳性率为95.0％,吸光度值与拷贝数对数值有良好相关性(r=0.90,P＜0.001).结论 检测HBeAg阴性慢性乙型肝炎患者血清LHBs,有助于判断患者体内HBV的复制程度,但是否能够作为HBeAg阴性乙型肝炎抗病毒治疗终点的有效判定指标,尚有待进一步探讨.     

动态监测乙型肝炎病毒大蛋白在乙肝治疗中的作用

目的观察乙型肝炎病毒大蛋白(HBV-LP)在乙肝治疗中的动态变化,为临床应用提供依据。方法收集衡阳市中心医院自2008年1月至2010年6月间收治的乙肝患者共160例。分别在抗病毒治疗0,3,6,9,12个月时进行血清HBV DNA和HBV-LP检测。结果乙肝患者中HBV-LP与HBV DNA的阳性率及治疗后HBV-LP与HBV DNA的转阴率无显著差异,但HBV DNA的平均转阴时间短于HBV-LP。治疗有效的患者在治疗过程中HBV-LP与HBV DNA均下降,但HBV DNA下降的幅度要快于HBV-LP下降的幅度;而治疗无效的患者在治疗过程中HBV-LP与HBV DNA表达无显著变化。结论动态监测乙型肝炎病毒大蛋白可作为病毒复制和疗效判定的重要指标。     

剖析住院患者中的乙肝病毒携带状态

目的 剖析住院患者中的乙型肝炎病毒（HBV）携带状态,为制定护理人员HBV职业感染的防护方法提供依据.方法对992例连续入院的住院患者入院时取空腹静脉血3 ml,分离血清于-40℃保存备用.使用ELISA法检测每份血清的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）.使用套式聚合酶链反应（n-PCR）检测所有HBsAg阳性患者和100例连续入院的HBsAg阴性患者血液的HBV DNA.将n-PCR检测HBV DNA低限作为一个HBV感染剂量,使用n-PCR极量稀释法检出每份HBV DNA阳性血清所含的HBV感染剂量/ml,以此作为HBV传染性或病毒浓度的指标.结果 992例住院患者中156例HBsAg阳性（HBsAg阳性者）,依据HBeAg是否阳性将HBsAg阳性者分为HBeAg阳性和阴性2种类型,HBeAg阳性者31例（19.87%）,阴性者125例（80.13%）.73.7% 的HBsAg阳性者HBV DNA阳性,病毒浓度范围为0～109感染剂量/ml,26.3%的 HBsAg阳性者HBV DNA阴性,病毒浓度在n-PCR的检测阈值之下.9%的HBsAg阴性者HBV DNA阳性,病毒浓度范围在0～104感染剂量/ml,最大传染性较HBsAg阳性者小105感染剂量/ml.HBeAg阳性者的病毒浓度范围在102～109 感染剂量/ml,阴性者在0～106 感染剂量/ml;HBeAg阳性者的病毒浓度较阴性者高103倍.结论住院患者中存在隐匿性和HBsAg阳性2种HBV携带状态,两者的最大HBV浓度相差105感染剂量/ml;HBeAg阳性者是HBV携带者中传染性较强部分,病毒浓度较阴性者高103倍.这些特点可为制定护理人员HBV职业感染的防护方法提供依据.     

慢性乙型肝炎重叠戊型肝炎病毒感染的临床分析

目的 探讨慢性乙型肝炎(慢乙肝)患者合并戊型肝炎病毒(HEV)感染的临床特点及HEV感染后病情的转归.方法 采用ELISA法检测嗜肝病毒血清标志物,PCR法检测HBV DNA,同时检测肝功能及凝血酶原时间(PT).随机选择慢乙肝合并HEV感染的患者(重叠感染组)与同期单纯慢乙肝患者(对照组)各50例,对两组进行临床比较分析.结果 重叠感染组与对照组中AST与球蛋白差异均无统计学意义(P>0.05),但总胆红素、ALT、白蛋白、PT和HBeAg阳性率,差异均有统计学意义(P<0.05).重叠感染组重型肝炎病死率为47%.结论 HBV与HEV重叠感染肝细胞损害加重,病情趋向重症化.HBeAg阴性的慢乙肝患者可能比HSeAg阳性者更易重叠感染HEV.     

急性乙型肝炎临床特征和病毒标志物动态变化分析

目的 探讨急性乙型肝炎(AHB)临床特征和病毒标志物动态变化规律及其与慢性乙型肝炎(CHB)急性发作的鉴别诊断.方法 通过比较2005-2009年同期住院的105例AHB患者和102例CHB急性发作息者的肝功能、乙型肝炎三系和HBV DNA定量变化,总结AHB动态变化规律及区别于CHB急性发作的鉴别指标.结果 AHB组入院时一般情况、ALT、TBil、HBsAg、HBeAg、HBV DNA水平与CHB组差异无统计学意义,但AHB组抗-HBc-Igm滴度为(26.34±3.74)S/CO,明显高于CHB组的(14.46±3.10)S/CO,差异有统计学意义(P<0.05).治疗2周后,AHB组ALT、TBil下降值分别达(1540.50±225.54)IU/L、(103.60±46.48)μmol/L,明显高于CHB组;AHB组HBsAg、HbeAg、HBeAg、HBV DNA分别下降(2558.46±644.26)IU/mL、(285.20±66.20)S/CO、(4.53±1.42)log10拷贝/mL,均明显高于CHB组,差异有统计学意义(P<0.05);两组抗-HBc-IgM滴度下降值比较差异无统计学意义(P>0.05).AHB患者入院时,19.04%的患者HBV DNA已经阴转.AHB患者HBsAg和HBeAg阴转迅速,随防结束时,AHB患者90.47%出现HBsAg血清转换;94.24%出现HBeAg血清转换;ALT下降快速但其复常明显较病毒清除慢.结论 入院时AHB和CHB急性发作患者的临床特征基本相似,但经治疗后AHB组的肝功能恢复明显较CHB组快.抗-HBc-IgM持续强阳性(≥20 S/CO)、病毒标志物的快速下降和早期阴转或血清转换、ALT≥20×ULN且快速下降和复常缓慢是AHB区别CHB急性发作的主要鉴别指标.     

乙肝免疫球蛋白阻断乙肝病毒母婴传播50例临床分析

目的:探讨乙型肝炎表面抗原(HBsAg)携带孕妇及其新生儿应用乙肝免疫球蛋白(HBIG)阻断乙肝病毒母婴传播的效果。方法:A组50例于孕28、32、36周分别注射HBIG200IU,B组40例仅常规产前检查及监护。结果:A组较B组新生儿出生时脐静脉血HBsAg阳性率显著降低(P0.05)。结论:对HBsAg携带者孕晚期多次应用HBIG,可有效阻断乙肝病毒母婴垂直传播。     

乙型肝炎病毒DNA和血清学标志物的相关分析

目的分析乙型肝炎病毒(HBV)DNA与HBV血清标志物之间的关系。方法应用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和荧光定量PCR分别检测468例乙型肝炎患者血清标志物和HBV-DNA含量。结果 HBsAg、HBeAg、抗-HBc抗体和Pre-S1Ag阳性患者组的HBV-DNA阳性率(50.6%,χ2=56.28,P<0.001;97.7%,χ2=122.65,P<0.001;46.8%,χ2=8.46,P<0.01;62.4%,χ2=39.93,P<0.001)均显著高于相应的阴性患者组;抗-HBs抗体和抗-HBe抗体阳性患者组的HBV-DNA阳性率(2.1%,χ2=35.61,P<0.001;38.0%,χ2=6.34,P<0.05)均显著低于相应的阴性患者组。血清HBsAg含量和HBV-DNA拷贝数之间存在相关性(r2=0.028,P=0.016)。结论乙型肝炎患者血清HBV-DNA含量与HBV血清学标志物测定结果之间存在关联。     

实时荧光定量聚合酶链反应检测唾液HBV-DNA含量

目的:采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法准确地定量检测血清、唾液中乙型肝炎病毒(HBV)的数量和免疫指标,进而全面评估唾液乙肝DNA在乙型肝炎的预防、诊断及治疗方面的意义。方法:采用FQ-PCR法检测200例乙型肝炎患者血清、唾液中HBVDNA的含量。结果:(1)经FQ-PCR检测,200份标本中血清HBVDNA含量>103copies/ml的有180例(90%),相应的唾液中HBVDNA含量>103copies/ml的有145例(72.5%),同时病毒含量>105copies/ml标本中血清168例(84.0%),唾液98例(49.0%),血清HBVDNA与唾液HBVDNA水平之间存在显著相关(r=0.79,P<0.001)。(2)在不同的血清免疫指标组合中乙肝病毒含量也不相同,在HBeAg( )组与HBeAg(-)组中,血清与唾液的病毒含量与阳性率均存在HBeAg( )组明显高于HBeAg(-)组,在HBeAg( )组中血清、唾液HBVDNA平均水平分别为7.13、5.01 logcopies/ml。血清、唾液病毒含量在两组不同免疫组合中差别均有统计学意义(P<0.01)。结论:(1)乙型肝炎患者除了血清外,唾液中也存在具有感染性的高病毒载量HBVDNA,可能成为传染源之一。(2)唾液中定量检测HBVDNA与血液中HBVDNA含量存在明显相关性,在一定程度上也能反映HBVDNA在体内复制情况。