大肠埃希菌中AmpC酶和质粒介导的ampC基因的发生和检测

目的从临床分离的大肠埃希菌(E.coli)中检测AmpC酶及质粒介导的ampC基因。方法选择从临床分离的可疑产ESBLs和AmpC 2种酶的40株大肠埃希菌,用NCCLS推荐的微量肉汤稀释法检测耐药表型,三维酶试验检测AmpC酶和ES-BLs,PCR扩增质粒型ampC基因和ESBLs基因,肉汤交配法检测质粒型ampC基因的接合传递性。结果在三维试验中,40株菌中有39株产β-内酰胺酶,其中21株产ESBLs和AmpC 2种酶,15株单产ESBLs,3株单产AmpC酶。在PCR扩增试验中,8株扩增出质粒介导的ampC基因,7株为C IT型,1株为DHA型;34株扩增出b laTEM、b laCTX-M、b laOXA 3型ESBLs基因中的至少1个型,未扩增出b laSHV。8株携带质粒型ampC基因的菌株,共筛选出9株接合子。结论AmpC酶已在我院的大肠埃希菌中出现,由质粒编码的AmpC酶可在细菌间传递。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌表型及基因型研究

目的 了解我院临床分离的大肠埃希菌超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）表型和基因型分布情况.方法 对88株大肠埃希菌进行耐药分析,并用筛选试验和确证试验确认产ESBLs菌株,对耐药基因进行聚合酶链反应（PCR）扩增分析,选部分产物测序.结果 88株大肠埃希菌中共检出31株产ESBLs（35.2%）菌株.产ESBLs菌株对头孢他啶的敏感率为58.1%,对头孢噻肟和头孢曲松的敏感率均为3.2%.PCR结果显示,产ESBLs大肠埃希菌基因主要是CTX-M型（90.3%）,其中以CTX-M-14、CTX-M-3型为主;TEM基因均为TEM-1型,SHV基因均为SHV-1型.结论 我院产ESBLs大肠埃希菌检出率为35.2%,其耐药性明显高于非产ESBLs菌株;其基因均为CTX-M型,其中以CTX-M-14和CTX-M-3型为主;TEM-1型广谱酶广泛存在于产ESBLs的大肠埃希菌中,则SHV-1型少见.     

变性高效液相色谱对CTX-M型超广谱β内酰胺酶基因分型研究

目的 探讨湖南省CTX-M型超广谱B内酰胺酶(ESBLs)基因型分布情况和变性高效液相色谱(DHPLC)方法检测CTX-M型ESBLs基因型的准确性.方法 用多重PCR扩增标准菌株和ESBLs表型阳性的临床菌株blaCTX-M基因,扩增产物经DHPLC分析得到标准菌株和临床菌株色谱峰图,通过比对标准色谱峰图对临床菌株进行基因分型,同时采用单纯随机抽样法选择25株多重PCR扩增阳性菌株进行特异PCR扩增,其产物冉进行基因测序来评估DHPLC法的准确性.结果 142株产ESBLs的肠杆菌科细菌经多重PCR扩增证实109株携带blaCTX-M基因,检出率为76.8%(109/142).109株扩增阳性的菌株经DHPLC分析后检出4种不同的blaCTX-M基因型:33株携带CTX-M-3、19株携带CTX-M-15、5株携带CTX-M-9、52株携带CTX-M-14.25株基因测序结果与DHPLC基因分型结果作比较显示:24株DHPLC的基因分型结果与基因测序结果完全吻合,但有1株DHPLC基因分型为CTX-M-15,而测序为CTX-M-82.结论 DHPLC可对耐药进行基因快速基因分型,具有准确、快速和经济等优点.     

产超广谱β-内酰胺酶及AmpC酶的阴沟肠杆菌的耐药性分析

目的 分析产超广谱β-内酰胺酶（extended spectrum β lactamases,ESBLs）及AmpC酶的阴沟肠杆菌的分布情况及耐药特征.方法 选择49株阴沟肠杆菌,采用纸片扩散法进行药物敏感试验,按美国临床实验室标准化协会推荐的确证试验检测产ESBLs阳性菌株;头孢西丁纸片扩散法初步筛选产AmpC酶阳性菌株,采用PCR检测AmpC酶基因.结果 抗生素敏感试验结果显示阴沟肠杆菌对头孢西丁、替卡西林/克拉维酸、头孢曲松、氨曲南的耐药率均达79.6％以上,对美罗培南敏感率较高,达91.8％.49株阴沟肠杆菌中对头孢西丁耐药的菌株46株（93.9％）;产ESBLs菌株29株（59.2％）,PCR 扩增产AmpC酶的阴沟肠杆菌36株（73.5％）,同时产两种酶的菌株为13株（26.5％）.结论 产ESBLs 及AmpC酶阴沟肠杆菌普遍且耐药现象严重.     

医院感染铜绿假单胞菌产超广谱β-内酰胺酶基因型研究

目的研究医院感染铜绿假单胞菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的基因型分布。方法用聚合酶链反应（PCR）对68株医院感染铜绿假单胞菌的SHV、TEM、CTX-M、OXA-10、VEB和PER等基因进行扩增和序列测定。结果68株医院感染铜绿假单胞菌中,检出26株产OXA-10群ESBLs,检出率为38．23％（26／68）;其中1株既产OXA-10群ESBLs又产TEM型广谱β-内酰胺酶;其余基因型未检出。经序列测定为OXA-10-like基因和TEM-1基因。结论医院感染铜绿假单胞菌所产的ESBLs主要为OXA-10群,且为多重耐药菌株。     

阴沟肠杆菌产超广谱β内酰胺酶的研究

目的了解我院2004年110月临床分离的83株阴沟肠杆菌中产ESBLs的情况，并对1株多重耐药菌株进行耐药机制研究。方法采用改良双纸片法（MDDT）进行ESBLs的初筛。以8对ESBLs引物（CTX—M，CTX-M-1，CTX-M-2，CTX-M-9，SHV，TEM，VEB，PER型）进行PCR扩增，对其中1株菌株（37号菌株）的扩增产物进行序列分析。结果MDDT初筛结果证明有43株菌产ESBLs，41株菌多种ESBLs引物均有扩增产物，序列分析表明37号阴沟肠杆菌携带的ESBLs为CTX-M-9，CTX-M-1样，SHV型。结论产多种ESBLs是引起该株阴沟肠杆菌对第三代头孢菌素耐药的重要原因。     

多重PCR同时检测病原菌及其耐药基因

目的建立一种多重PCR方法,在同一扩增体系内同时检测病原菌及其β-内酰胺类耐药基因,探讨采用多重PCR同时鉴定病原菌及其耐药基因的可行性。方法根据细菌基因序列和对β-内酰胺类抗生素耐药特点,设计一对细菌鉴定通用引物和三对β-内酰胺类耐药基因引物,并在同一扩增体系内行PCR扩增。结果 MRSA和大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌的产酶标准菌株的bla mecA、blaTEM、blaSHV和16S-23S rRNA基因间隔区（ISR）多重扩增均为阳性,对本实验室内保存的50株多重耐药的葡萄球菌（包括40株表型筛查为MRS菌株及10株非MRS菌株）及30株ESBLs阳性的大肠埃希菌及30株肺炎克雷伯菌的多重PCR结果显示：MRS阳性菌株均同时扩增出了葡萄球菌特有的多态性及blamecA指纹图谱,而多重耐药的非MRS菌株也都扩增出了blamecA,ESBLs表型阳性的大肠埃希菌多以blaTEM为主,而肺炎克雷伯菌多以blaSHV为主。结论多重PCR与传统的培养及药敏试验相比敏感、特异、迅速,对于解决难培养或不能培养的微生物的鉴定和药敏试验,是一种很有前景的方法。     

下呼吸道感染产ESBLs肺炎克雷伯菌基因型分析

目的了解引起下呼吸道感染产ESBLs肺炎克雷伯菌的耐药性及ESBLS和AmpC基因型，指导临床合理用药。方法收集产ESBLs肺炎克雷伯菌36株，用纸片扩散法进行药敏性试验，表型筛选法检测出同时产AmpC酶的菌株，PCR法检测ESBLs和AmpC酶的基因型。结果产ESBLs肺炎克雷伯菌对亚胺培南和美罗培南全部敏感，对所测试的其他药物最小同程度耐约。36株产ESBLs肺炎克雷伯菌中，20株扩增出CTX—M—Ⅲ群基因，15株扩增出TEM基因，SHV和OXA基因各1株，ACT-1（MIR-1）和DHA-1（DHA-2）各4株，12株细菌同时携带2种以上的基因型。结论本院下呼吸道感染患营中分离的产ESBLs肺炎克雷伯菌主要携带CTXM和TEM基因型，少数携带ACT、DHA、SHV和OXA基因型，可介导对口内酰胺类药物的耐药。本研究未对TEM和SHV基因型作进一步分析。     

鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素耐药性分析

目的对多重耐药的鲍曼不动杆菌进行β-内酰胺类抗生素耐药性分析。方法K-B法、琼脂稀释法检测35株鲍曼不动杆菌对14种β-内酰胺类抗生素的敏感性;碘—淀粉测定法、三维试验、协同法、纸片扩散确证试验检测青霉素酶、头孢菌素酶(AmpCs)、金属β-内酰胺酶和超广谱β-内酰胺酶(ESBLs);PCR扩增β-内酰胺类抗生素耐药基因Tem-1。结果35株菌株有28株表现为对β-内酰胺类抗生素多重耐药,其中产青霉素酶的菌株16株,产AmpCs的菌株10株,产金属β-内酰胺酶的菌株2株,产ESBLs的菌株3株;9株同时产青霉素酶和AmpCs,2株同时产金属β-内酰胺酶和ESBLs。多数耐药菌株均扩增出Tem-1基因。结论鲍曼不动杆菌产生β-内酰胺酶是其对β-内酰胺类抗生素耐药的主要原因。     

大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶的基因型检测

目的 了解大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶的现状及其基因型.方法 收集任一第三代头孢菌素和头孢西丁耐药的大肠埃希菌临床分离株42株,以改良三维试验检测超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和AmpC酶,用碱裂解法提取质粒,应用多重聚合酶链反应(multiplex polymerase chain reaction,MPCR)对AmpC酶的基因进行检测,对PCR扩增阳性的样本进行基因测序以确定基因型.结果 42株大肠埃希菌中,经三维试验检测,单纯产ESBLs者18株(42.8%),单纯产质粒AmpC酶者4株(9.5%),同时产质粒AmpC酶与ESBLs者1株(2.3%),5株AmpC酶三维试验阳性菌株,经PCR扩增其中4株扩增到了清晰的条带,1株扩增为阴性,PCR产物经测序分析其基因型均为DHA-1型.结论 大肠埃希菌临床分离株产ESBLs率较高,并己经出现了质粒介导的AmpC酶,其基因型为DHA-1型.     

产质粒介导AmpC酶大肠埃希菌中整合子的检测

目的探讨大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶对抗生素的耐药情况,以及整合子的存在状况,为临床合理用药提供依据。方法收集河南省人民医院临床分离大肠埃希菌,对头孢西丁耐药株以酶提取物改良三维试验筛选高产AmpC酶株;多重PCR和DNA测序分析质粒AmpC基因型;用PCR-限制片段长度多态性（RFLP）初筛整合子并分型,PCR扩增整合子的可变区并测序。结果 126株大肠埃希菌中,检出产质粒介导AmpC酶14株（26.9%）,对筛出的耐药菌株采用琼脂对倍稀释法检测耐药性;多重PCR扩增分析示：其基因型均为CMY-2型。8株耐药菌株检出1类整合子,序列分析显示存在aadA4、aadA5、aadB、cm lA、cm lA1、和dfr17基因盒,它们分别介导对氨基糖苷类抗生素、氯霉素和甲氧苄明的耐药。结论治疗产质粒介导AmpC酶的细菌感染时,应以第四代头孢菌素和碳青霉烯类抗生素为首选。我院大肠埃希菌临床分离株产质粒介导AmpC率较高,其基因型为CMY-2型,而相关耐药基因盒并未位于整合子上。     

运用多重PCR技术检测CTX-M型耐药基因的研究

目的了解产CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肠杆菌科细菌的阳性率、耐药性以及基因型分布。方法采用K-B琼脂扩散法,检测临床分离的85株大肠埃希菌和41株肺炎克雷伯菌对18种抗生素的耐药性,用双纸片增效试验检测产ES-BLs菌株,用多重PCR技术检测相关耐药基因,用DNA序列分析确认基因亚型。结果检测菌株中,ESBLs阳性56株,阳性率为44.4%。所有检测菌株对亚胺培南敏感。产ESBLs的菌株对头孢唑啉、头孢噻肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶等的耐药率为100.0%;质粒接合试验证实,CTX-M型ESBLs介导的耐药可以水平转移;ESBLs阳性菌株中有48株扩增到CTX M型耐药基因,其中CTX-M-3型11株,CTX-M-9型7株,CTX-M-14型25株。结论产CTX-M型ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌检出率较高,以CTX-M-14型为多。碳青霉烯类抗生素是目前治疗产ESBLs最有效药物。     

大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶的基因型检测

目的 了解大肠埃希菌产质粒介导AmpC酶的现状及其基因型。方法 收集任一第三代头孢菌素和头孢两丁耐药的大肠埃希菌临床分离株42株．以改良三维试验检测超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和AmpC酶。用碱裂解法提取质粒，应用多重聚合酶链反应（multiplex polymerase chain reaction，MPCR）对AmpC酶的基因进行检测。对PCR扩增阳性的样本进行基因测序以确定基因型。结果 42株大肠埃希菌中，经三维试验检测，单纯产ESBLs者18株（42．8％），单纯产质粒AmpC酶者4株（9．5％）．同时产质粒AmpC酶与ESBLs者1株（2．3％），5株AmpC酶三维试验阳性菌株，经PCR扩增其中4株扩增到了清晰的条带，1株扩增为阴性，PCR产物经测序分析其基因型均为DHA-1型。结论 大肠埃希菌临床分离株产ESBLs率较高，并己经出现了质粒介导的AmpC酶，其基因型为DHA-1型。     

73株大肠埃希菌整合子分布与耐药性关系

目的 分析73株大肠埃希菌整合子分布特征及与耐药性关系.方法 采用聚合酶链反应（PCR）方法检测整合酶基因（intI）;采用微量稀释法测定21种抗生素的敏感性;采用纸片确认法检测ESBLs菌株.结果 73株大肠埃希菌中37株Ⅰ类（51%）,未检出Ⅱ类及Ⅲ类整合酶基因.产ESBLs菌株20株,其中12株为Ⅰ类整合酶基因阳性（60%）;非产ESBLs菌株53株,其中25株为Ⅰ类整合酶基因阳性（47%）.整合酶基因阳性组耐药率明显高于阴性组.结论 Ⅰ类整合子在大肠埃希菌中广泛地存在,是导致多重耐药重要因素之一.     

尿液分离产ESBLs大肠埃希菌对磷霉素耐药的分子流行病学及耐药机制研究

目的 探究尿液分离产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌对磷霉素耐药的分子流行病学及其耐药机制。方法 收集南京大学医学院附属鼓楼医院2016年1-12月尿液分离大肠埃希菌308株，通过药敏试验筛选产ESBLs及磷霉素耐药菌株；PCR扩增ESBLs基因及磷霉素相关耐药基因；采用多序列位点分型（MLST）对菌株进行遗传相关性分析，采用接合试验验证耐药基因的转移性。结果 308株尿液分离大肠埃希菌中产ESBLs的菌株168株（54.54％）；产ESBLs菌株中检出磷霉素耐药菌株18株（10.71%）。其中，ESBLs耐药基因携带率为blaSHV 88.9%（16/18）、blaCTX-M 77.8%（14/18）、blaTEM-208，5.6%（1/18）；blaTEM-1b 61.1%（11/18）；fosA3基因的携带率为83.3％（15株）。 MLST分型主要为ST131（27.78%），接合试验表明，fosA3阳性菌株的耐药性均具有可转移性。结论 产ESBLs的大肠埃希菌对磷霉素的耐药率仍处于较低的水平，fosA3基因是这些菌株磷霉素耐药的主要机制，该基因位于可接合的质粒上，易于水平传播，需要高度重视。 关键词：大肠埃希菌； 产超光谱β内酰胺酶； 磷霉素； 耐药机制     

CTX—M型超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学研究

目的了解湖北地区产CTX—M型超广谱β内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的流行基因型，为有效预防和控制该类感染提供理论依据。方法临床分离的无重复产ESBLs的肺炎克雷伯菌70株，采用NCCLS表型筛选和确证试验检测ESBLs，采用聚合酶链反应（PCR）检测CTX—M基因型，并采用PCR—RFLP检测blaCTX—M基因分型，质粒接合试验探讨产CTX—M型ESBLs菌株的传播机制。结果70株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中，产CTX—M基N型的肺炎克雷伯菌有26株（37％），PCR-RFLP及DNA测序证实其均为CTX—M-1亚组，其中CTX—M-3型最常见，质粒接合试验证实CTX—M型ESBLs介导的耐药可以水平转移。结论湖北地区存在着CTX—M基因的流行，且产CTX—M型ESBLs菌株的传播机制以质粒介导的为主，可以水平传播，应加强湖北地区产CTX—M型ESBLs菌株的分子流行病学检测。     

CTX-M型超广谱β内酰胺酶肺炎克雷伯菌的分子流行病学研究

目的了解湖北地区产CTX—M型超广谱β内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌的流行基因型，为有效预防和控制该类感染提供理论依据。方法临床分离的无重复产ESBLs的肺炎克雷伯菌70株，采用NCCLS表型筛选和确证试验检测ESBLs，采用聚合酶链反应（PCR）检测CTX—M基因型，并采用PCR—RFLP检测blaCTX—M基因分型，质粒接合试验探讨产CTX—M型ESBLs菌株的传播机制。结果70株产ESBLs的肺炎克雷伯菌中，产CTX—M基N型的肺炎克雷伯菌有26株（37％），PCR-RFLP及DNA测序证实其均为CTX—M-1亚组，其中CTX—M-3型最常见，质粒接合试验证实CTX—M型ESBLs介导的耐药可以水平转移。结论湖北地区存在着CTX—M基因的流行，且产CTX—M型ESBLs菌株的传播机制以质粒介导的为主，可以水平传播，应加强湖北地区产CTX—M型ESBLs菌株的分子流行病学检测。     

烟台地区产金属β-内酰胺酶铜绿假单胞菌的耐药性分析及基因型检测

目的研究烟台地区产金属伊内酰胺酶铜绿假单胞菌的耐药性,基因型及菌株的同源性,为监控产酶菌株的流行及指导临床合理选择抗生素提供依据。方法EDTA纸片复合法和E—test法分别筛选产金属β-内酰胺酶菌株,PCR扩增耐药基因imp、vim、spm和gim,用MIC法测定产金属G内酰胺酶菌株对8种常用抗菌药物的敏感度,用肠杆菌科基因间重复一致序列为引物的聚合酶链反应（ERICPCR方法）确定菌株之间的同源性。结果42株耐亚胺培南和头胞他啶铜绿假单胞菌EDTA纸片复合法筛选出18株金属酶菌株、E—test法15株、PCR法12株;PCR法检测到imp阳性菌株4株,vim阳性菌株8株;产金属β-内酰胺酶菌株呈多重耐药,且PCR法阳性产金属酶菌株呈现为高水平耐药;ERIC—PCR结果显示,18株产金属伊内酰胺酶菌株呈现7种基因模型,其中10株为同一基因模型。结论经济简便快捷的EDTA纸片复合法可作为首选方法来对产金属酶铜绿假单胞菌进行筛选,烟台地区临床分离的铜绿假单胞菌所产金属β-内酰胺酶基因型以vim型为主,阿米卡星、环丙沙星具有较好的抗菌活性,某医院在一定时期曾出现爆发流行。     

广州地区泌尿系统感染的产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药特征和基因分型

目的了解本地区泌尿系统感染的产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌耐药特征及其基因型分布。方法收集广州地区13家医院2001~2003年间自尿培养分离的大肠埃希菌623株,用NCCLS规定的ESBLs初筛和确证试验检测ESBLs,用K-B琼脂扩散法进行药物敏感试验,用PCR方法对分离的产ESBLs菌株进行SHV、CTX-M基因型检测。结果产ESBLs大肠埃希菌检出率为33.4%(208株),其中53.8%(112株)携带CTX-M基因,20.7%(43株)携带SHV型基因,并有2.8%(6株)同时携带CTX-M基因和SHV型基因。产酶株的耐药率显著高于非产酶株,产ESBLs细菌对青霉素类、环丙沙星及头孢菌素类抗生素耐药率较高(高达84.1%~97.6%),对加用酶抑制剂克拉维酸或他唑巴坦的耐药率较低。结论广州地区泌尿系统感染的产ESBLs大肠埃希菌具有多重耐药的特点,其中CTX-M型是流行的基因型。     

鲍曼不动杆菌ESBLs和金属酶的基因型分析

目的了解天津地区鲍曼不动杆菌中超广谱β-内酰胺酶和金属酶基因的分布情况。方法对天津地区6所三级甲等医院临床分离的72株鲍曼不动杆菌,以K—B法进行抗生素敏感试验;用双纸片增效法对亚胺培南耐药菌株进行金属酶表型筛选,并以PCR方法检测IMP-1、IMP-2、VIM-2型金属酶基因;用三维试验对第三代头孢菌株进行ESBLs表型初筛,并以PCR方法检测ESBLs基因。结果8株（8／72）耐药亚胺培南鲍曼不动杆菌中,4株金属酶表型阳性。以PCR方法检测,1株IMP1阳性,3株出现IMP-1＋IMP2＋VIM-2型金属酶基因同时阳性;30株（30／72）耐第三代头孢鲍曼不动杆菌中,11株产TEM型ESBLs,4株产PER型ESBLs,1株产VEB-1型ESBLs。结论天津地区鲍曼不动杆菌主要以携带TEM型ESBLs为主,在耐亚胺培南鲍曼不动杆菌中发现IMP—1、IMP-2和VIM-2型金属酶,并且VEB-1型ESBLs和VIM-2型金属酶为天津地区首次报道。