蛋白激酶B调节骨桥蛋白在肝癌HepG2细胞中的表达

目的 转移相关基因骨桥蛋白(OPN)在肝癌中的表达方式、途径尚不清楚，检测OPN在HepG2细胞中转染蛋白激酶B(Akt)前后的表达，旨在探讨磷脂酰肌醇3激酶信号途径中的关键基因Akt与OPN表达的关系。方法 用脂质体介导的基因转染法将含有Akt基因的质粒转染HepG2细胞，并用Western blot鉴定；OPN的表达用Northern blot和Western blot方法检测。结果 Akt基因成功转染HepG2细胞，Western blot能检测到HepG2细胞中外源表达的Akt基因；Northern blot和Western blot检测发现，Akt在核酸和蛋白水平调节OPN的表达；在无血清培养条件下，OPN在HepG2中结构性表达量很少或无表达,转染活性型Akt后OPN表达升高；在有血清培养条件下,HepG2细胞转染缺陷型Akt基因后OPN表达下降。结论 Akt调节转移相关基因OPN在肝癌细胞中的表达，提示可通过使Akt基因失活来阻断OPN产生，从而抑制肝癌转移。     

骨桥蛋白及 CD44 v6在肺腺癌侵袭转移中的作用

目的：探讨骨桥蛋白（ OPN）及其受体CD44v6在肺腺癌侵袭转移中的作用。方法应用免疫组化方法检测129例癌旁组织、肺原位腺癌（AIS）、伏壁样生长为主型腺癌（LPA）患者手术切除标本中OPN、CD44v6的表达情况。检测H358细胞（原位癌细胞系）和A549细胞中OPN、CD44v6蛋白及mRNA的表达,Transwell 试验观察OPN、CD44 v6对H358细胞、A549细胞侵袭力的影响。结果 OPN、CD44 v6在LPA组织中的表达阳性率显著高于AIS及癌旁组织,AIS高于癌旁组织,OPN与CD44v6的表达呈显著正相关（ P＜0．05）。 OPN、CD44v6及OPN mR-NA、CD44v6 mRNA在A549细胞中的表达水平高于H358细胞。 Transwell试验提示OPN对A549细胞的趋化作用高于H358细胞。使用OPN抗体阻断OPN对两种细胞的趋化作用,两种细胞穿过数均减少;阻断CD44 v6受体通道后,OPN对两种细胞的趋化作用明显减弱。结论 OPN-CD44 v6复合体对肺腺癌的侵袭能力具有重要作用,OPN有望成为评估肺腺癌进展及预测肿瘤转移潜能的指标。     

OPN在喉癌组织中的表达变化及LV-shOPN对喉癌Hep-2细胞侵袭转移的影响

目的观察人喉鳞状细胞癌（LSCC）组织中骨桥蛋白（OPN）的表达变化及慢病毒shOPN对喉癌Hep-2细胞侵袭转移的影响。方法采用免疫组化SP法,检测44例LSCC及癌旁正常组织中的OPN。干扰OPN慢病毒载体（LV-shOPN）转染Hep-2细胞,Western blot检测该细胞其中的OPN,MTT法检测Hep-2细胞增殖活性,Transwell小室实验检测Hep-2细胞的侵袭力。结果 LSCC组织和癌旁正常组织中OPN阳性表达率分别为75.0%（33/44）、13.6%（6/44）,两者相比,P〈0.01;OPN的表达与LSCC颈部淋巴结转移、临床分期、病理组织学分级有关（P均〈0.01）。LV-shOPN转染后Hep-2细胞中OPN蛋白表达下降、细胞增殖活性及侵袭力降低（P均〈0.05）。结论 OPN在喉癌组织中的表达高于癌旁正常组织,可能参与了喉癌的发生、发展和转移;LV-shOPN能够有效抑制Hep-2细胞的生长和侵袭转移。     

骨桥蛋白参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移

目的检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对骨桥蛋白(OPN)表达的影响及其涉及的信号传导途径,并探讨OPN在AngⅡ诱导中膜平滑肌细胞(VSMCs)迁移中的作用。方法采用贴壁法培养SD大鼠胸主动脉的VSMCs。以免疫印迹(Western blot)法检测OPN表达。运用Transwell观察反义OPN在AngⅡ诱导的VSMCs迁移中的作用。结果(1)体外培养的大鼠VSMCs在基础状态下表达一定水平的OPN蛋白,经10-7mol/L AngⅡ诱导24 h后,OPN蛋白水平与对照组相比增加1.3倍(P<0.05);(2)预先给予AngⅡ1型(AT1)受体拮抗剂氯沙坦(losartan)、胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059和P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB202190后,AngⅡ诱导的OPN的表达分别下降44.2%、23.6%及72.5%(P<0.05),而其2型(AT2)受体拮抗剂PD123319对OPN的表达没有影响。(3)反义OPN可以明显抑制AngⅡ诱导的VSMCs迁移(每个视野平均迁移细胞数目26.34±5.47 vs 50.23±6.12,P<0.05),而OPN正义、错配义组无此变化。结论(1)AngⅡ上调VSMCs中OPN的表达;(2)AT1受体、ERK和P38MAPK信号系统参与AngⅡ诱导的OPN表达。(3)OPN参与AngⅡ诱导的VSMCs迁移。     

骨桥蛋白在慢性肝病发病机制中的作用

骨桥蛋白(OPN)于1986 年首次报道,是小整合素结合配体N端连接糖蛋白家族的成员,其单词前缀osteo-表示骨骼,后缀-pontin表示桥接,提示OPN在细胞外基质(ECM)中发挥连接蛋白的作用[1 ].近年来的很多研究借助OPN基因敲除小鼠(Opn-/-小鼠)和肝细胞过表达OPN的转基因小鼠(OpnHEP Tg)...     

OPN和PAI-1在肝纤维化时的表达特征

目的:研究骨桥蛋白(OPN)及纤溶酶原激活物抑制物(PAI-1)的表达特征及其在肝纤维化时的变化.方法:采用二甲基亚硝胺制作大鼠肝纤维化模型.大鼠肝脏常规HE和天狼猩红染色.采用SABC法作免疫组织化学染色及Western blot检测OPN和PAI-1蛋白表达:RT-PCR法检测OPN基因表达;检测结果采用计算机图像定量分析系统,扫描并计算染色阳性区域面积和阳性比率或条带的吸光度值.结果:正常大鼠肝组织OPN和PAI-1表达极弱,肝纤维化大鼠肝脏中OPN表达增强,阳性信号散在或弥漫性分布,主要见于小叶内中央静脉周围、纤维间隔内以及周围巨噬细胞胞质,库普弗细胞,门管区的部分肝细胞,肝窦壁内皮细胞.PAI-1在肝纤维化大鼠肝组织汇管区、肝细胞变性坏死处,肝窦周Disse间隙及毗邻以上部位的肝细胞,组织纤维间隔处及其外周细胞亦见阳性染色.Western blot检测正常大鼠肝脏OPN的蛋白表达极低,肝纤维化组OPN的蛋白表达较正常组显著增强(1.0907±0.2082vs 0.0673±0.0663,P<0.01).与正常组比,肝纤维化组PAI-1表达也显著增强(1.1407±0.3094vs 0.2464±0.2234,P<0.01).RT-PCR检测结果显示,正常大鼠肝脏OPN mRNA表达极低,肝纤维化大鼠肝脏OPN mRNA的表达明显增强(0.2128±0.0527 vs 0.1298±0.0316,P<0.05).结论:OPN及PAI-1的表达与肝纤维化密切相关,肝纤维化时大鼠肝组织OPN及PAI-1的表达水平显著增高,OPN可能会促进PAI-1的高表达,从而抑制细胞外基质(ECM)降解、加速肝纤维化进程.     

骨桥蛋白参与血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞迁移

目的检测血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对骨桥蛋白(OPN)表达的影响及其涉及的信号传导途径,并探讨OPN在AngⅡ诱导中膜平滑肌细胞(VSMCs)迁移中的作用.方法采用贴壁法培养SD大鼠胸主动脉的VSMCs.以免疫印迹(Western blot)法检测OPN表达.运用Transwell观察反义OPN在AngⅡ诱导的VSMCs迁移中的作用.结果 (1)体外培养的大鼠VSMCs在基础状态下表达一定水平的OPN蛋白,经10-7mol/L AngⅡ诱导24 h后,OPN蛋白水平与对照组相比增加1.3倍(P＜0.05);(2)预先给予AngⅡ1型(AT1)受体拮抗剂氯沙坦(losartan)、胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂PD98059和P38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB202190后,AngⅡ诱导的OPN的表达分别下降44.2%、23.6%及72.5%(P＜0.05),而其2型(AT2)受体拮抗剂PD123319对OPN的表达没有影响.(3)反义OPN可以明显抑制AngⅡ诱导的VSMCs迁移(每个视野平均迁移细胞数目26.34±5.47 vs 50.23±6.12,P＜0.05),而OPN正义、错配义组无此变化.结论 (1)AngⅡ上调VSMCs中OPN的表达;(2)AT1受体、ERK和P38MAPK信号系统参与AngⅡ诱导的OPN表达.(3)OPN参与AngⅡ诱导的VSMCs迁移.     

骨桥蛋白在炎症性肠病患者结肠组织中的表达

背景：骨桥蛋白（OPN）是一种分泌型磷酸化糖蛋白,参与细胞信号转导,促进细胞黏附和迁移。近年研究发现炎症性肠病（IBD）患者血浆OPN水平升高,患者结肠黏膜中可检出OPN表达。目的：了解OPN在IBD患者结肠黏膜组织中的表达情况,探讨其在IBD发病机制中的作用。方法：以免疫组化半定量方法检测53例溃疡性结肠炎（UC）、62例克罗恩病（CD）和15例源自结肠腺瘤患者的正常结肠组织标本中OPN的表达。结果：OPN广泛表达于结肠黏膜上皮细胞和固有层渗出细胞。UC组和CD组结肠上皮细胞的OPN平均光密度值显著低于对照组（11．84±0．98和10．04±1．37对12．64±1．45,P〈0．05）,结肠黏膜固有层渗出细胞的OPN阳性细胞百分率则显著高于对照组（20．31％±4．50％和12．69％±3．06％对3．85％±0．66％,P〈0．001）。UC和CD患者的病情严重程度与结肠上皮细胞和固有层渗出细胞中的OPN表达量均无相关性。结论：OPN在IBD患者结肠黏膜上皮和同有层中的表达不一致,结肠上皮细胞中OPN表达下调可能与肠黏膜屏障功能受损有关,而黏膜固有层渗出细胞中OPN表达上调可能与免疫反应有关。     

骨桥蛋白与糖尿病肾病

骨桥蛋白(OPN)是一种含精氨酸甘氨酸天冬氨酸的分泌型磷酸化糖蛋白,它可表达于肾小管、间质及球旁器,介导单核巨噬细胞的趋化,参与一氧化氮信号途径的调节。肾素血管紧张素系统、转化生长因子β、蛋白尿及高血糖可诱导OPN生成,促进细胞外基质合成并抑制其降解,参与肾小管间质损伤及糖尿病肾病的进展。早期阻断OPN在肾脏的表达可能对糖尿病肾病具有潜在的治疗价值。     

OPN转染BMSCs对高转移潜能肝癌细胞的影响

目的观察经骨桥蛋白(osteopontin,OPN)转染人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)对高转移潜能肝癌细胞(high metastatic potential hepatocellular carcinoma cells,MHCC97-H)增殖、侵袭能力的影响。方法构建OPN慢病毒载体,转染BMSCs。CCK-8法检测与BMSCs共培养前后MHCC97-H的增殖能力,共培养48 h,检测OD值。Transwell法检测BMSCs与MHCC97-H细胞共培养后细胞侵袭情况,共培养48 h,结晶紫染色,细胞计数。PCR法检测共培养前后MHCC97-H转移相关因子OPN、αV、β3、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)基因表达。结果 BMSCs基因转染成功,OPN高表达。MHCC97-H与BMSCs细胞共培养后,MHCC97-H增殖能力增强,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。经OPN转染的BMSCs细胞对MHCC97-H细胞增殖无明显作用(P0.05)。经OPN转染的BMSCs细胞对MHCC97-H细胞侵袭具有明显的促进作用(P0.05)。经OPN转染的MHCC97-H细胞OPN表达明显降低,而αv、β3、MMP-2表达明显升高(P0.01)。结论 BMSCs具有促进MHCC97-H细胞增殖的作用,OPN基因转染的BMSCs细胞具有促进MHCC97-H细胞侵袭的作用。外源性OPN抑制内源性OPN表达,外源性OPN通过激活MMP-2活性促进肿瘤侵袭。     

骨桥蛋白与支气管哮喘的研究进展

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是一种多功能的细胞外基质蛋白和免疫调节因子,在多种免疫疾病中表达异常.近期研究发现,OPN作为一种关键的细胞因子在支气管哮喘的发病机制中具有重要的作用,包括调节气道免疫炎症反应、参与气道组织重塑等.研究OPN的作用机制将有利于支气管哮喘发病机制的探索,并为临床治疗提供新的理论依据.     

骨桥蛋白与血管再狭窄的关系

骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是细胞外基质中一种重要的功能性蛋白,因其介导骨细胞与骨基质的连接、参与骨基质矿化和重吸收过程而得名,它在巨噬细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞(VSMC)及上皮细胞等中也有表达.作为一种新型的细胞因子,OPN参与多种生命现象,如骨代谢、肿瘤的生长转移、炎症与免疫等,尤其在组织的损伤与修复中受到广泛的关注.近年来的研究表明OPN在血管损伤后新生内膜中的表达明显上调,而且它能促进VSMC和外膜细胞的迁移,被认为是血管损伤修复过程中重要的始动因素[1].本文对OPN的基本特征以及它在血管再狭窄中的作用予以综述.     

骨桥蛋白与血管再狭窄

骨桥蛋白（OPN）是细胞外基质中一种重要的功能性蛋白，研究表明OPN在血管损伤后新生内膜中的表达明显上调，而且它能促进血管平滑肌细胞、外膜细胞的迁移，被认为是血管损伤修复过程中重要的始动因素，参与血管再狭窄形成，在动脉粥样硬化、血管再狭窄及动脉钙化发生过程中起着重要作用，应用骨桥蛋白及其抑制剂可能有助于血管再狭窄的防治。     

盘状红斑狼疮和天疱疮患者外周血CD44及血清OPN的表达及意义

采用流式细胞学技术检测10例盘状红斑狼疮(DLE)和10例天疱疮患者外周血CD 4T细胞表面CD44的表达水平,ELISA法测定其血清骨桥蛋白(OPN)水平.结果天疱疮患者外周血CD 4T细胞表面CD44表达水平显著高于健康成人(P＜0.01),DLE者CD 4T细胞表面CD44表达水平与健康成人比较差异无统计学意义;天疱疮与DLE患者血清OPN水平均显著升高,与健康成人比较,P＜0.01.认为OPN在口腔黏膜病中的显著升高促进了疾病发生发展;其机制可能与CD 4T细胞表面OPN受体CD44与OPN结合触发的效应有关.     

骨桥蛋白与糖尿病肾病

骨桥蛋白(OPN)是一种含精氨酸．甘氨酸一天冬氨酸的分泌型磷酸化糖蛋白，它可表达于肾小管、间质及球旁器，介导单核巨噬细胞的趋化，参与一氧化氮信号途径的调节。肾素-血管紧张素系统、转化生长因子-β、蛋白尿及高血糖可诱导OPN生成，促进细胞外基质合成并抑制其降解，参与肾小管间质损伤及糖尿病肾病的进展。早期阻断OPN在肾脏的表达可能对糖尿病肾病具有潜在的治疗价值。     

骨桥蛋白在肝细粒棘球蚴外囊壁中的表达

目的 研究骨桥蛋白（osteopontin，OPN）在肝细粒棘球蚴外囊壁中的分布及表达。 方法 用免疫组化、免疫荧光双标记法观察60例患者手术切除的肝细粒棘球蚴外囊壁及巨噬细胞中OPN的表达与分布；Von Kossa染色观察囊壁中钙化分布特征。 结果 肝细粒棘球蚴外囊壁中有不同程度OPN表达，75%（45/60）集中分布于近虫体侧纤维囊壁（内层），.3%（5/60）分布于近肝组织侧纤维性囊壁（外层），两者差异有统计学意义（P＜0.01）。在内、外层交界处可见巨噬细胞带，多数巨噬细胞胞浆内有OPN表达。OPN表达阳性的囊壁均合并有不同程度的钙盐沉积，其在囊壁内、外层的分布与OPN的基本一致。 结论 OPN主要分布在肝细粒棘球蚴外囊的内层纤维囊壁。     

骨桥蛋白介导类风湿关节炎发病机制的初步研究

目的研究骨桥蛋白(OPN)介导类风湿关节炎(RA)发病和促进炎症因子产生的作用。方法采用实时定量聚合酶链反应(PCR)的方法检测OPN在RA患者外周血、关节液和关节滑膜组织和在T淋巴细胞亚群中的表达;从蛋白水平分析RA患者关节液中促炎症细胞因子和抗炎症细胞因子的分泌格局,分析OPN与细胞因子的相关性。结果RA患者关节滑液和关节滑膜组织的OPN表达远远高于外周血单个核细胞的OPN基因表达,CD4 T细胞OPN基因表达均高于CD8 T细胞;RA患者关节液中OPN的表达显著高于血清,白细胞介素(IL)-10,干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平比自身血清及对照组血清增高,IL-18和IL-12水平比正常对照组明显升高。结论OPN可能通过调节病灶部位的细胞因子的分泌来调控RA病理过程中的炎症反应。     

骨桥蛋白及其在动脉粥样硬化中的作用

骨桥蛋白（osteopontin，OPN）是细胞外基质中一种重要的糖蛋白，骨组织中大量存在，其他组织中也有少量的表达，但正常血管壁中几乎不表达。1986年以前曾被称为早期T淋巴细胞活性1（early T lymphocyte activation，Eta-1）、分泌性磷蛋白1（secrected phosphoprotein 1，SSP-1）、骨唾液酸蛋白1（bone sialoprotein 1，BSP-1），自从被命名为OPN以来，已相继克隆了大鼠、小鼠、猪、牛、鸡和兔的OPN cDNA。近来研究发现在血管壁动脉粥样硬化处的内皮细胞和平滑肌细胞内OPN mRNA呈高表达状态。它在动脉粥样硬化中的作用已经引起人们的关注。本文就OPN及其在动脉粥样硬化中的作用作一综述。     

OPN与肝纤维化关系的研究进展

细胞外基质(ECM)蓄积是肝纤维化疾病最大特征,肝星形细胞(HSC)的活化是ECM合成的关键,骨桥蛋白(osteopon-tin,OPN)对HSC的激活、迁移和增殖都有很大的影响。在肝纤维化形成的过程中,与转化生长因子β(TGF-β)、有丝分裂素激活蛋白激酶类(MAPK)以及核转录因子κB(nuclear factorof kappa b,NF-κB)相关的信号通路对OPN的表达起重要的作用。现就OPN与肝纤维化的关系予以综述。     

骨桥蛋白在类风湿关节炎发病机制中的作用

骨桥蛋白（osteopontin，OPN），是一种早在1979年从骨细胞外基质分离出的磷酸化糖蛋白，又称早T淋巴细胞活化因子1（Eta—1），后来逐渐发现OPN表达于各种细胞，包括破骨细胞、巨噬细胞、活化的T细胞、上皮细胞、内皮细胞、平滑肌细胞，且存在于各种组织中包括骨、肾脏、胎盘、平滑肌、分泌性上皮。OPN参与多种生物学过程。包括细胞的趋化、聚集、黏附、增殖和迁移、免疫调节、信号转导、骨的再吸收、伤口愈合、组织修复及动脉粥样硬化、肾脏疾病和肿瘤的发生。最近发现OPN分别通过整合素αv、β3和CD44受体增加巨噬细胞表达白细胞介索（IL）-12，抑制IL-10表达，在自身免疫性疾病的发展中起了重要作用。本文就其在类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）中可能的作用机制作一综述。