过敏性休克死亡豚鼠脏器中IgE、IL-4的表达及其法医学意义

【目的】寻找法医学鉴定过敏性休克死亡的病理形态学诊断指标。【方法】利用组织芯片技术采用免疫组化方法（SP法）检测35只过敏性休克豚鼠（实验组28只，对照组7只）死后0、6、12、24h4个时间点的心、肝、肺、肾、脾、胃、肠、气管及扁桃体组织中的ISE及IL-4的表达情况。【结果】ISE的表达：实验组肺及气管组织呈阳性表达，并以0、6h表达最强，各时间点的表达强度有统计学意义，P〈0．01；脾组织呈弱阳性表达。各时间点的表达强度无统计学意义，P〉0．05；实验组其它脏器及对照组所有脏器均无表达。IL-4的表达：实验组肺、气管及胃组织呈阳性表达，并以0、6h表达最强，各时间点的表达强度有统计学意义，P〈0．01；肠组织呈弱阳性表达，各时间点的表达强度无统计学意义，P〉0．05；实验组其它脏器及对照组所有脏器均无表达。【结论】免疫组化方法检测ISE、IL-4的表达，可望作为鉴定过敏性休克死亡的病理形态学诊断指标。     

过敏性休克死亡豚鼠脏器中IgE蛋白表达

目的:检测过敏性休克死亡豚鼠脏器中IgE的蛋白表达情况,探讨法医学鉴定过敏性休克的病理形态学诊断标准. 方法:建立豚鼠异种血清过敏性休克模型,利用组织芯片技术、采用免疫组化方法SP法检测25例过敏性休克死亡鼠脏器中IgE蛋白的表达情况,并与常规切片比较. 结果:过敏性休克死亡豚鼠在肺小血管壁及其血管周围 ,气管黏膜上皮内、小血管壁及结缔组织和脾髓质中IgE蛋白呈阳性表达,而肝、肾、心等脏器中IgE蛋白表达呈阴性. 结论:过敏性休克时,肺、气管和脾组织中可检见IgE.     

TLR4在过敏性休克死亡豚鼠中的表达及法医学意义

目的探讨过敏性休克豚鼠多种器官TLR4的表达,为过敏性休克死亡的法医学鉴定寻找新指标。方法将35只豚鼠随机分为实验组(26只)和对照组(9只),实验组豚鼠注射人血清致敏原建立过敏性休克豚鼠模型,对照组注射生理盐水。采用RT-PCR及免疫组织化学分别检测2组豚鼠死后即时、冷藏48h、冰冻7d气管、肺、胃和脾等组织TLR4的表达水平。结果实验组豚鼠死后即时、冷藏48h、冰冻7d气管、肺、胃和脾TLR4mRNA及蛋白表达水平均较对照组显著升高(P<0.05);实验组豚鼠死后各时段气管、肺、胃和脾TLR4mRNA及蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 RT-PCR、免疫组织化学检测气管、肺、胃及脾TLR4表达可能为法医学鉴定过敏性休克猝死提供参考;过敏性休克死亡在尸体保存条件良好情况下,TLR4在7d内降解不明显。     

豚鼠过敏性脑脊髓炎CNS中IL-1R的表达

目的 探索中枢神经系统脱髓鞘疾病进程中IL－1R的表达与神经胶质细胞活化的关系。方法 用牛脊髓髓鞘碱性蛋白加完全福氏佐剂对豚鼠进行免疫,诱发实验性过敏性脑脊髓炎（EAE）模型,采用免疫组化方法对EAE不同时期中枢神经系统中IL－1R的表达进行研究,同时采用抗蓖 凝集素RCA－1标记小胶质细胞、抗胶质纤维酸性蛋白标记星型胶质细胞。结果 在EAE症状出现之前3d至临床高峰期,小胶质细胞样细胞呈现IL－1R免疫反应阳性,表达IL－1R的星型胶质细胞样细胞呈活化状态,而恢复期则主要为星型胶质细胞样细胞呈现免疫反应阳性。结论 在EAE不同时期表达IL－1受体的细胞型不同与不同时期神经胶质细胞的活化类型有关,即与EAE早期小胶质细胞的活化和恢复期星型胶质细胞增生有关。     

豚鼠过敏性休克死亡白细胞介素-4、白细胞介素-13与免疫球蛋白E的表达及法医学意义

目的：建立豚鼠过敏性休克死亡动物模型,探讨豚鼠血清中白细胞介素（interleukin,IL）-4、IL-13和免疫球蛋白E（Im－munoglobulin E,IgE）的表达,旨在为临床和法医学诊断过敏性休克提供科学、客观的参考依据。方法：用酶联免疫吸附测定（en－zyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法检测30只过敏性休克豚鼠（实验组20只,对照组10只）血清IL-4、IL-13和IgE的表达情况。结果：实验组血清IL-4水平明显高于对照组（P=0.000）;实验组血清IL-13水平明显高于对照组（P=0.000）;实验组血清IgE水平明显高于对照组（P=0.000）。结论：实验组血清IL-4、IL-13与IgE水平明显高于对照组,为过敏性休克临床诊断及法医学鉴定提供了参考依据。     

清开灵注射剂致过敏性休克死亡4例法医学鉴定

[目的]探讨清开灵注射剂所致过敏性休克死亡的法医病理学鉴定特点.[方法]通过系统法医病理学尸体解剖、组织病理学检验及IgE水平检测,结合相关案情、临床病史及用药史等对清开灵注射剂所致过敏性休克死亡案例进行法医病理学司法鉴定.[结果]4例中1例发生在一级医院,3例在个体诊所;抗菌素或其他药物与清开灵注射剂联合用药或混合用药;4例均于输注完毕后30～150min之间死亡,无充分的抢救时间或条件;多数器官和组织充血水肿伴有点状或灶状出血;多个器官和组织内有不同程度的嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润及脱颗粒现象,血清总IgE水平高于200U/mL;全身各器官和组织未见致命性器质性病理变化.[结论]排除自身致命性器质性疾病、机械性损伤和窒息及药物中毒,既往有清开灵注射剂用药史,有典型的过敏性休克临床表现,组织病理学检查组织内有嗜酸性粒细胞、肥大细胞浸润及脱颗粒现象,血清IgE水平升高等进行综合评定,可确定清开灵注射剂致过敏性休克死亡的法医病理学司法鉴定.     

钙蛋白酶在正常豚鼠耳蜗中的定位表达

目的 研究钙蛋白酶(calpain)在正常豚鼠耳蜗中的定位与表达.方法 应用免疫组织化学SABC法结合显微图像分析技术,观察耳蜗组织中calpain的表达;同时采用电生理指标听性脑干反应(auditory brainstem response,ABR)检测豚鼠的听力.结果 calpain免疫反应活性主要见于耳蜗血管纹、螺旋韧带、螺旋神经节及毛细胞,螺旋神经节的染色较深;其中,calpain 1表达多见于螺旋神经节细胞的胞浆中,而calpain 2免疫染色几乎出现在整个螺旋神经节细胞中.结论 calpain在正常豚鼠耳蜗的多种细胞中都有表达.     

豚鼠哮喘模型血红素氧合酶-1表达的研究

探讨血红素氧合酶 - 1(HO- 1)在豚鼠哮喘模型中的表达特点。将 2 4只豚鼠随机分为 4组 ,每组 6只 :1正常对照组 (A组 ) ;2哮喘即刻激发组 (B组 ) ;3哮喘发作 1周组 (C组 ) ;4哮喘发作 2周组 (D组 )。测定全血一氧化碳血红蛋白 (COHb)的百分比含量并观察气道壁嗜酸性粒细胞 (EOS)浸润情况 ;用免疫组织化学染色方法观察 HO- 1在豚鼠哮喘模型肺组织中的表达特点。发现 HO- 1主要表达在气道上皮细胞 ,各组 HO- 1阳性表达的平均吸光度分别为 0 .0 32±0 .0 0 4、 0 .112± 0 .0 11、 0 .12 3± 0 .0 11和 0 .135± 0 .0 12。哮喘各组 (B、C、D组 ) HO- 1的表达水平均显著高于 A组 (P<0 .0 1)。HO- 1的表达水平与全血 COHb的百分比含量及气道壁 EOS计数均呈显著正相关 (分别为 r=0 .88,P<0 .0 0 1和 r=0 .86 ,P<0 .0 0 1)。结果表明哮喘豚鼠气道上皮细胞 HO- 1的表达水平显著增加 ,提示 HO- 1可能参与了哮喘的发病过程     

大肠癌组织中PDCD4表达的临床病理学意义及其对预后的影响

目的检测肿瘤抑制基因PDCD4在大肠癌组织中的表达,探讨其在大肠癌发生发展中的作用及对预后的影响。方法应用western印迹分析和免疫组织化学染色方法,检测了大肠癌及癌旁的正常组织中PDCD4的表达,观察其与大肠癌患者临床病理学参数之间的关系,并分析其对预后的影响。结果Western印迹分析和免疫组化染色均显示,与癌旁的正常大肠组织相比,癌组织中PDCD4的表达明显下降。免疫组化染色显示,在65例大肠癌组织中,高、中、低分化腺癌分别占49.2%（32/65）、33.9%（22/65）和16.9%（11/65）。在高、中、低分化腺癌中,PDCD4（＋）表达率分别为81.3%（26/32）、50.0%（11/22）和18.2%（2/11）。相关分析显示,PDCD4的表达水平与大肠癌的程度密切相关,分化越差,表达越低。Kaplan-Meier生存分析显示,PDCD4的表达水平与预后有关,PDCD4阴性者预后差。应用Cox比例风险模型进行多因素分析,结果显示,本组资料中,Dukes分期、PDCD4表达水平以及术后是否进行化疗影响大肠癌的预后。结论本研究显示,大肠癌组织中PDCD4的表达下降,并与肿瘤的分化程度和不良预后相关。作为一种肿瘤抑制基因,PDCD4可能在大肠癌的发生发展中起重要作用。PDCD4还可能作为有效的预后因子,有助于判断预后。     

白化豚鼠与花色豚鼠高脂造模以及降脂药效学的比较

目的 比较分析白化豚鼠与花色豚鼠在构建高脂血症模型以及评价降脂药效学方面的差异,为高脂血症模型建立时豚鼠的品种选择提供参考。方法 选取5周龄的白化豚鼠和花色豚鼠测定基础血脂水平,具体包括总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）和低密度脂蛋白（LDL-C）。随后分别随机分为正常组（12只）和高脂模型组（24只）,正常组饲喂普通饲料,高脂模型组饲喂高脂饲料以构建高脂血症模型;饲喂4周后,同上测定血脂水平。进一步将高脂模型组随机分为匹伐他汀钙组（12只）和溶媒对照组（12只）,匹伐他汀钙组每天灌胃给予匹伐他汀钙（1mg/kg）,溶媒对照组每天灌胃给予同体积的溶媒,持续给药4周,并同步饲喂高脂饲料;给药结束后,同上测定血脂水平。结果 当给予普通饲料喂养时,白化豚鼠血脂较为稳定,随周龄增长没有显著变化,而花色豚鼠的TC和LDL-C在9周龄后才比较稳定。当给予高脂饲料喂养时,白化豚鼠的TC、TG和LDL-C在造模的四周时间内迅速上升,且增幅显著大于花色豚鼠,HDL-C与花色豚鼠的变化幅度相似。运用模型组豚鼠,进行降脂药效学的考察,匹伐他汀在白化豚鼠高脂血症模型中降脂（TC、TG和LDL-C）幅度更大、升高HDL-C的作用更显著。结论 在选用正常豚鼠评价降脂作用时,降TG或升HDL-C类药物宜选用5周龄之后的白化豚鼠,降TC或LDL-C类药物宜选用9周龄之后的花色豚鼠;在选用高脂血症豚鼠模型评价降脂作用时,白化豚鼠较花色豚鼠在造模后的血脂水平更加紊乱,且对降脂药物的敏感程度更高,故可作为构建高脂血症模型和评价降脂药效学研究较佳的实验动物。     

盐酸小檗碱对豚鼠血液动力学的影响

静脉灌注Ber能引起豚鼠血液动力学参数(LVP、±dp/dtmax、SBP和DBP)明显增加,4mg/kg时,+dp/dtmax和-dP/dtmax均增快41％,而对心衰豚鼠增快更显著,分别增快76％和70％。表明Ber有正性肌力作用,对心衰有效。     

庆大霉素在豚鼠外淋巴中的蓄积现象

根据药力代动力学原理，采用荧光偏振免疫法（ＦＰＩＡ）检测不同时间内豚鼠外淋巴中庆大霉素的浓度，了解其蓄积的情况。结果表明：（１）外淋巴内的药物浓度随庆大霉素用药量的增加而上升、基本上呈线性关系；（２）在注射７ｄ的一组动物，停药７２ｈ仍能测到药物，其浓度接近血清最侈有效浓度，达１．３７±０．９５μｇ／ｍｌ，提示内耳对药物排泄十分缓慢，确实存在外淋巴对庆大霉素的明显蓄积；（３）前述事实表明，即使已停药     

老龄豚鼠耳蜗微循环与SOD变化

[目的]研究老龄豚鼠血管纹微循环与脑SOD含量变化在豚鼠老年聋发生过程中的作用。[方法]根据21只26月龄雄性豚鼠,8只3月龄豚鼠的听性脑干诱发电位(ABR)测量结果,将动物分成老龄组、老年聋组、正常组。比较各组豚鼠血管纹微血管面积与脑组织超氧化物歧化酶(SOD)含量的关系。[结果]老龄组与老年聋组豚鼠的血管纹微血管面积均比正常3月龄豚鼠减少,SOD含量亦明显减少,相关性检验表明老年聋豚鼠血管纹微血管面积与脑组织超氧化物歧化酶(SOD)含量有显著性相关。[结论]随增龄的微循环障碍不是导致老年聋发生的唯一决定因素。缺血再灌注可能产生了更多的自由基,对组织的损害更严重。自由基的清除障碍可能对听觉神经传导具有一定的影响。     

熊果苷制剂对豚鼠皮肤安全性及脱色作用的研究

目的研究不同浓度的熊果苷制剂外用对豚鼠皮肤的敏感性、刺激性及黑素细胞和黑素颗粒的变化,为临床治疗黄褐斑及炎症后色素沉着提供安全和治疗依据。方法选用不同浓度的熊果苷制剂涂抹豚鼠皮肤,通过皮肤敏感试验、刺激试验、皮肤色素值测定和组织病理学检查等方法,观察豚鼠皮肤的形态学和组织学的变化。结果豚鼠皮肤对不同浓度的熊果苷制剂无过敏反应;而刺激反应不同,3%、5%和10%浓度的熊果苷制剂对皮肤没有刺激,15%的熊果苷制剂可引起皮肤轻微潮红,无水肿,为弱刺激性;20%的熊果苷制剂引起皮肤潮红、水肿,具有中等刺激性。豚鼠皮肤颜色的变化随着熊果苷浓度的增加色素值明显减少,其中3%、5%、10%浓度的熊果苷制剂使用3、4周后色素值的变化与单霜相比具有统计学意义。组织病理显示:3%、5%、10%浓度的熊果苷制剂对黑素细胞数量无影响,黑素颗粒随着浓度的增加逐渐减少,15%和20%的熊果苷制剂使黑素细胞数量明显减少,黑素颗粒减少。结论 3%、5%、10%熊果苷制剂外用对豚鼠皮肤是安全且有效的。     

雾化吸入肝素对致敏豚鼠血及肺组织组胺含量的影响

目的 :观察吸入肝素对致敏豚鼠血、肺组织组胺含量的影响。方法 :以卵蛋白作为抗原 ,激发豚鼠形成哮喘豚鼠模型 ,随机分成致敏组 (A组 )、给药组 (B组 )和对照组 (C组 ) ,在卵蛋白雾化吸入后 3 0min、17h测定血、肺组织组胺浓度。结果 :致敏豚鼠吸入肝素后 ,再次接触抗原可抑制血、肺组织组胺浓度升高。结论 :肝素抑制过敏反应可能和抑制肥大细胞释放组胺有关     

福氏志贺菌感染豚鼠和HeLa细胞的毒力

目的 研究福氏志贺菌感染豚鼠和HeLa细胞后细菌致病能力的差异，探讨痢疾的防治。方法 选用28株福氏志贺菌感染豚鼠眼角膜，观察角膜结膜病变反应，并进行细胞学、细菌学、病理组织切片检查。然后再选出12株福氏志贺菌强毒株和两株弱毒株，通过噬斑形成实验，观察对HeLa细胞的侵袭能力。结果 28株福氏志贺菌均在3d之内引起豚鼠发病，但症状表现有差异，除2株福氏志贺菌感染豚鼠后发病时间延长、症状轻微外。其余菌株则引起较为严重的角膜结膜炎，尤其在感染第3天，出现最为典型的临床表现。噬斑形成试验结果与豚鼠感染试验基本相符。结论 检测福氏志贺菌的毒力可用HeLa细胞噬斑形成试验替代Sereny试验。利用Sereny试验和HeLa细胞噬斑形成试验鉴定出26株福氏志贺菌的强毒株和2株弱毒株，用于毒力基因的进一步分析。     

豚鼠溃疡性结肠炎模型

采用二硝基氯苯以及乙酸分别复制出二种豚鼠溃疡性结肠炎UC。急性组均表现为结肠粘膜充血水肿,大量炎性细胞浸润,溃疡形成,严重者发生坏死。但慢性组无慢性炎症改变。二硝基氯苯所致的UC模型提示细胞免疫反应参予了UC的病理过程。而乙酸则为UC的直接致炎剂。二种豚鼠模型的比较显示了UC病因发病机理的复杂性。     

吸入肝素对哮喘豚鼠气道炎症影响的研究

目的:研究吸入肝素对哮喘豚鼠气道炎症的影响,探讨肝素治疗哮喘的可能机制。方法:建立哮喘豚鼠模型,用肝素雾化吸入,观察支气管灌洗液(BALF)和支气管或细支气管壁的细胞成分变化。光镜和电镜下观察气道及肺组织病理变化。结果:肝素治疗组BALF中淋巴细胞、嗜酸性粒细胞、上皮细胞较哮喘模型组有显著减少(P<0.01),在支气管或细支气管壁,肝素治疗组肥大细胞数显著高于哮喘模型组(P<0.01),嗜酸性粒细胞有显著下降(P<0.01),光镜和电镜下气道损伤减轻。结论:肝素可以抑制哮喘豚鼠气道炎症,减轻哮喘豚鼠气道炎症损伤。