二氧化硅和青石棉对小鼠肺泡巨噬细胞的影响

肺泡巨噬细胞(PAM),在炎症及免疫反应中起着重要作用,是肺的第一道防御屏障。目前,对PAM的吞噬功能方面研究较多,而对PAM体外集落形成能力方面报道较少。本文通过对小鼠经气管注入致纤维化粉尘(SiO_2和青石棉)及非致纤维化粉尘(TiO_2)后,着重观察其PAM体外集落形成能力的变化,以阐明吸入物质对PAM的增殖与分化的影响。 材料和方法 1.动物 C_3H/HeN纯系、健康雌性小鼠,6～7周龄。由日本SLC实验动物场提供。 2.实验粉尘 SiO_2(Min-u-sil;美国宾夕     

二氧化硅对矽肺患者肺泡巨噬细胞表皮生长因子表达的影响

目的探讨二氧化硅(SiO2)对矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)中表皮生长因子(EGF)表达的影响,以研究EGF对肺纤维化发生发展的影响。方法收集矽肺患者AM,加入含或不含SiO2的培养基离体培养3、6、12、18、24和36h,用免疫细胞化学法和酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测AM细胞内和上清中EGF的表达。结果经SiO2粉尘刺激AM(处理组:S组)的EGF的表达较未经SiO2粉尘刺激AM(对照组:C组)的EGF表达量明显升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论SiO可以促进矽肺患者AM表达EGF。     

硒锰对二氧化硅致巨噬细胞某些抗氧化指标变化的影响

目的 观察亚硒酸钠(Na2SeO3)与氯化锰(MnCl2)单独及联合作用对二氧化硅(SiO2)致肺泡巨噬细胞(AM)超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)及过氧化氢酶(CAT)水平变化的影响,寻找两者的最佳剂量组合.方法 采用大鼠肺灌洗法纯化获得AM(1×1012个/L),同时加入SiO2及不同浓度的Na2SeO3溶液、MnCl2溶液、Na2SeO3 MnCl2溶液,37 ℃,5%CO2培养箱培养18 h后,检测MDA、H2O2含量、SOD及CAT活力.结果 Na2SeO3与MnCl2单独及两者联合使用均具有拮抗SiO2细胞毒性作用.且以1.0 μmol/L Na2SeO3与1.00 mg/L MnCl2联合作用效果最好.结论 Na2SeO3与MnCl2单独及两者联合应用在体外可有效拮抗SiO2粉尘的细胞毒性作用,降低AM的MDA、H2O2含量,同时升高SOD及CAT活力,两者合用效果更佳.     

二氧化硅诱导的巨噬细胞活性因子对成纤维细胞生物合成的影响

本文报告了经二氧化硅粉尘作用过的大鼠腹腔巨噬细胞的培养介质对2BS成纤维细胞的生物合成的多方面影响。实验结果表明二氧化硅粉尘诱导巨噬细胞释放的活性物质不仅能在数量上刺激成纤维合成胶原、DNA、GAG,而且在质的方面促进成纤维细胞合成的前胶原向胶原转化,影响胶原和GAG各类型的构成比,因而有利于胶原的稳定和聚集。这些结果有助于对二氧化硅致纤维化作用的机理的认识。     

纳米二氧化硅诱导巨噬细胞焦亡对肺成纤维细胞的影响

目的 探讨纳米二氧化硅(SiNPs)诱导巨噬细胞焦亡对原代肺成纤维细胞基质金属蛋白酶及成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化的影响。方法 构建SiNPs致巨噬细胞焦亡模型后,采用纳米高光谱定位巨噬细胞中SiNPs、光学显微镜观察巨噬细胞SiNPs暴露后形态、Western blot检测焦亡相关蛋白表达。通过胰酶和Ⅳ型胶原酶消化法提取小鼠原代肺成纤维细胞;以光学显微镜和免疫荧光技术表征并鉴定原代肺成纤维细胞;体外构建SiNPs诱导巨噬细胞焦亡与原代肺成纤维细胞共培养模型。以正常巨噬细胞上清干预原代肺成纤维细胞作为MF组,焦亡巨噬细胞上清干预原代肺成纤维细胞作为PF组,采用qRT-PCR、Western blot技术分别检测原代肺成纤维细胞中MMP2、MMP9的mRNA水平和蛋白表达,免疫荧光、免疫细胞化学染色检测肌成纤维细胞标志物α-SMA蛋白表达。结果 纳米高光谱、形态学观察和Western blot检测结果显示, SiNPs 成功诱导J774A.1 巨噬细胞发生焦亡,光学显微镜观察发现,与胰酶消化法相比,Ⅳ型胶原酶法提取小鼠原代肺成纤维细胞的纯度更高;免疫荧光结果提示Ⅳ型胶原酶法获得的成纤维细胞波形蛋白呈现典型的微丝结构,细胞骨架结构完整。qRT-PCR 结果显示,PF组MMP2 和MMP9 mRNA水平较MF组增加(P<0.05), Western blot结果显示,PF组MMP2和MMP9蛋白表达水平较MF组升高(P<0.05), 免疫荧光结果显示,与MF组相比,PF组α-SMA红色荧光强度增加,免疫细胞化学染色为强阳性。结论 SiNPs诱导巨噬细胞焦亡能够促进原代肺成纤维细胞MMP2和MMP9表达水平上调,并促进成纤维细胞向肌成纤维细胞转分化。     

二氧化硅对肺泡巨噬细胞膜K^＋通透性和LDH影响的研究

采用体外培养方法，检测了不同剂量的ＳｉＯ２和同一剂量，不同培养时间对肺泡巨噬细胞（ＡＭ）膜Ｋ含量和ＬＤＨ活性的影响。结果表明，低剂量的ＳｉＯ２，ＬＤＨ即有较明显的变化，且Ｋ含量和ＬＤＨ活性的剂量－反应关系和时间－效应关系。Ｋ含量和ＬＤＨ活性为反映膜损伤较简便和敏感的指标，为及时保护扫尘工人的健康提供实验依据。     

二氧化硅粉尘对实验大鼠肺泡巨噬细胞的毒性效应

目的观察二氧化硅粉尘对大鼠肺泡巨噬细胞(AMs)的毒性作用。方法测定不同二氧化硅(SiO2)粉尘浓度培养AMs24小时以及培养不同时间的AMs上清中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)含量,并记录不同浓度粉尘刺激AMs的死亡率。同时以二氧化钛粉尘为阴性对照。结果巨噬细胞死亡率随粉尘浓度的增加而增加,AMs上清中LDH及MDA含量与SiO2粉尘浓度呈良好的剂量-反应关系,且与其刺激时间呈良好的时间-效应关系。结论染SiO2粉尘的实验大鼠巨噬细胞呈现明显的毒性效应。     

二氧化硅及柠檬酸铝对豚鼠肺泡巨噬细胞膜脂流动性影响的研究

本研究结果表明,SiO_2使巨噬细胞膜DPH荧光偏振度P减小,膜脂区微粘度η下降,膜流动性升高,其作用不仅有明显的剂量-效应关系,而且有明显的时间-效应关系;虽然柠铝本身对巨噬细胞膜流动性无明显影响,但柠铝对SiO_2有一定的拮抗作用,使升高的膜流动性下降,在一定程度上维持了巨噬细胞膜的稳定性,从而在降低SiO_2细胞毒性,保护巨噬细胞方面起了重要作用,     

二氧化硅对矽肺患者肺泡巨噬细胞白细胞介素-1β表达的影响

目的 探讨二氧化硅(SiO2)刺激矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)对白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响.方法 收集矽肺患者的肺泡灌洗液,分离培养AM,对照组加入无血清培养液,处理组加入含SiO2粉尘不含血清的培养液.两组在相同条件下分别培养3、6、12、18、24、36 h,用免疫细胞化学法和酶联免疫吸附(ELISA)方法检测AM细胞内及其培养上清中IL-1β的表达.结果 处理组AM胞质中的IL-1β表达呈双峰,3 h已有较高水平的IL-1β(平均吸光度值为0.2597±0.0102),并随刺激时间不同表达量不同,在12 h达最高浓度(平均吸光度值为0.3632±0.0076),且处理组AM胞质中IL-1β的表达在各个时间点均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);AM培养上清IL-1β的表达与细胞质内的情况一致.结论 SiO2可促进AM的IL-1β表达增高,IL-1β在肺纤维化形成过程中起较重要的作用.     

锌和锰联合对二氧化硅致巨噬细胞某些生化指标变化的影响

目的:研究葡萄糖酸锌(ZnG)和氯化锰(MnCl2 )单独及联合对二氧化硅(SiO2 )致巨噬细胞某些生化指标变化的影响。方法:采用肺灌洗法获得肺泡巨噬细胞纯化后(1×10. 9/L)与SiO2 ,同时加入不同浓度的ZnG、MnCl2 以及ZnG MnCl2 共同培养18h后,分别检测巨噬细胞中的丙二醛(MDA)的含量、超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性。结果:ZnG和Mncl2 ,以及二者联合使用在体外可以降低SiO2 粉尘致巨噬细胞的NDA的含量以及细胞培养液中LDH的活性,提高SOD的活性,二者共同作用效果更明显,ZnG和MnCl2最佳组合剂量是ZnG(1. 5mg/L) MnCl2 (0 . 2 5mg/L)。结论:ZnG和MnCl2 以及二者联合应用在体外可拮抗SiO2 粉尘所致巨噬细胞的细胞毒性,降低MDA含量,提高SOD活性。     

二氧化硅通过肺泡巨噬细胞的识别反应

矽肺是指长期接触二氧化硅粉尘后,潴留肺内的粉尘引起的以肺组织慢性持续性炎症与进行性纤维化为主要病理特点的全身性疾病,其基本病理变化过程为肺泡炎、肺肉芽肿、肺纤维化。肺泡巨噬细胞介导的固有免疫在矽肺炎性反应中起着重要的作用：由于吸入性二氧化硅尘粒形态十分类似病原体相关分子模式（PAMPs）或危险相关分子模式（DAMPs）,可引起肺泡巨噬细胞的清道夫受体（SR）、Toll样受体（TLRs）或核苷酸结合寡聚化结构域（NOD）样受体（NLRs）等模式识别受体（PRRs）识别,从而通过激活胞内NLRP3炎性体,介导肺泡巨噬细胞的细胞焦亡（pyroptosis）,进而释放白介素、前列腺素等促炎因子,导致肺组织炎性反应;与此同时,部分活化的肺泡巨噬细胞还会发挥抗原递呈作用,启动T细胞免疫机制,加剧肺内炎性反应,最终导致肺组织纤维化。     

二氧化硅对大鼠肺泡巨噬细胞和肺成纤维细胞TGF-β1表达的影响

目的探讨二氧化硅(SiO2)是否通过影响肺泡巨噬细胞(AM)和肺成纤维细胞(FB)中转化生长因子β(TGF-β1)的表达而参与矽肺纤维化的发生发展。方法以支气管肺泡灌洗法收集大鼠AM,在体外用含有SiO2(50μg/ml)的DMEM培养基和不含SiO2的DMEM培养基培养2,6,12,18,24,36 h,然后收集培养18 h的AM上清液。用胰酶消化法分离培养大鼠FB,与AM上清液共同孵育6,12,18,24,36和48 h,用免疫细胞化学的方法检测AM及FB中TGF-β1的表达。结果经SiO2刺激的大鼠AM中TGF-β1的表达与空白对照组比较增加,在6,12,18 h 3个时间点差异有统计学意义(P<0.05,平均吸光度A值分别为0.118±0.008 vs 0.107±0.008,6 h;0.135±0.010 vs 0.119±0.015,12 h;0.143±0.012 vs0.125±0.015,18 h);AM上清液也可使FB中TGF-β1的表达上调,经体外再次染尘的AM上清液作用更为明显,与空白对照组比较,在各个时间点差异均有统计学意义(P<0.01)。结论在本试验条件下,经体外细胞培养,显示SiO2可通过上调AM和FB中TGF-β1的表达,增加胶原合成而参与矽肺纤维化的发展。     

二氧化硅和二氧化钛对豚鼠肺泡巨噬细胞膜K~+通透性影响的比较研究

本文通过测定细胞k~+含量和细胞死亡率,比较研究了SiO_2和TiO_2对豚鼠肺泡巨噬细胞的细胞毒作用及其影响因素。结果表明:SiO_2的细胞毒性明显大于TiO_2,并且受血清、Con-A和柠檬酸铝的明显影响,而TiO_2的作用则不受影响。本文为进一步研究矽肺发病机理和探索新的防治措施提供了依据。     

凝聚二氧化硅粉尘对作业工人肺影响的动态观察

本文报道了凝聚二氧化硅粉尘对工人肺影响的观察结果。经五年多观察,车间空气中粉尘平均浓度为3mg/m~3,分散度<5μm者占71%以上,粉尘内不合结晶型SiO_2。181名有完整资料的接尘工人中发现28例0~ 者,其平均接尘工龄16.14年。X线胸片表现以类圆型阴影为主伴不规则小阴影及叶间胸膜损害,但在程度和范围上尚不足为诊断“尘肺”的依据。肺功能检查呈阻塞性通气功能障碍。结合动物实验资料,认为不能忽视凝聚二氧化硅粉尘对工人健康的危害。     

血脂康对鼠巨噬细胞摄取氧化低密度脂蛋白能力影响的观察

目的 :探讨血脂康对鼠腹腔巨噬细胞摄取氧化低密度脂蛋白 (OX—LDL)能力的影响。方法 :采用OX—LDL巨噬细胞降解实验 ,分别观察血脂康对不同浓度的 12 5I—OX—LDL巨噬细胞 (MCs)降解值和不同浓度血脂康对 12 5I—OX—LDLMCs降解值的影响。结果 :12 5I—OX -LDLMCs降解值随OX—LDL浓度增加而增大 (P <0 .0 5 ) ;当加入血脂康 (2 5 0 μg /ml)后 ,血脂康对不同浓度 12 5I—OX—LDLMCs降解值均有抑制作用 ,与对照组相比差异显著 (P <0 .0 5 ) ;且血脂康对12 5I -OX -LDLMCs降解值的抑制随血脂康浓度而加大 (P <0 .0 5 )。结论 :12 5I—OX—LDL促进MCs脂蛋白降解 ,增加MCs摄取OX—LDL ,有致动脉粥样硬化的作用 ;血脂康使OX—LDLMCs降解值下降 ,抑制MCs摄取OX—LDL ,具有抗动脉粥样硬化的作用。     

药物对实验性矽肺大鼠肺泡巨噬细胞影响的初步观察

许多从事矽肺研究工作者都认为石英破坏巨噬细胞是矽肺发病的一个重要环节。当肺泡巨噬细胞吞噬了石英粉尘,细胞被石英破坏,石英从细胞中溢出,然后再被吞噬。同时由于肺泡巨噬细胞不断地破坏,导致肺部发生纤维化作用,最后形成了矽结节。我们为了进一步了解矽肺发病过程和药物作用的原理,首先对石英引起的肺泡巨噬细胞结构与功能的改变做了初步探讨,同时也观察了一些治疗矽肺有效的药物在阻止石英破坏肺泡巨噬细胞这一作用上的表现,企图从中能找到一些规律,以便为寻找新的有     

石英和石棉对巨噬细胞的影响

石英在肺内的主要作用目标是肺泡巨噬细胞,被损害的巨噬细胞刺激成纤维细     

激活蛋白-1介导二氧化硅诱导的巨噬细胞细胞因子的表达

目的 探讨SiO2诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达改变是否与激活蛋白-1(AP-1)活化有关.方法 用AP-1的抑制剂姜黄素处理巨噬细胞后,用Western blotting检测核蛋白AP-1(c-jun/c-fos)的表达,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测细胞上清液中TNF-α、TGF-β1蛋白的含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-α、TGFβ1 mRNA的表达.结果 10和20 μmol/L姜黄素处理组c-jun的核蛋白表达为1.150±0.020、1.010±0.108,c-fos的核蛋白表达为0.430±0.023、0.256±0.015,明显低于SiO2刺激组(1.550±0..029、0.860±0.036),差异有统计学意义(P《0.01),且呈剂量依赖关系.20μmo/L姜黄素处理组TNF-α、TGFo-β1蛋白表达分别为123.58±45.78、32.12±5.34,明显低于SiO2刺激组(1582.18±437.52、55.60±5.51);TNF-α、TGF-β1 mRNA表达水平分别为0.74±0.01、0.22±0.04,也明显低于SiO2刺激组(2.27±0.33、2.96±0.15),差异均有统计学意义(P《0.01).结论 SiO2刺激巨噬细胞生成TNF-α、TGF-β1与AP-1的活化有关.     

二氧化硅作用下巨噬细胞蛋白质的变化及其致纤维化作用

在二氧化硅作用下,巨噬细胞的蛋白质发生了一些变化:(1)在SDS-PAGE图谱上,增加了一条C带蛋白(MW20KD)和J带蛋白(MW120KD)。(2)培养液中,经过HPLC,分离到具有刺激2BS细胞胶原合成活力的蛋白组分(MW10-18KD)。     

邻苯二甲酸二丁酯对小鼠腹腔巨噬细胞的影响

目的研究邻苯二甲酸二丁酯(dibutyl phthalate,DBP)对小鼠腹腔巨噬细胞的影响。方法昆明雌性小鼠腹腔巨噬细胞,经6种不同浓度(0、6.25、12.5、25、50、100μmol/L)的DBP分别暴露12、24 h后,观察细胞形态学变化,测定细胞活性(CCK-8)、乳酸脱氢酶(LDH)、活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)水平,观察50μmol/L维生素E(vitamin E,VE)对100μmol/L DBP所致氧化损伤的拮抗。结果随着DBP暴露剂量的增加,较高剂量的DBP(≥25μmol/L)可使小鼠巨噬细胞产生过量的ROS(P0.01),MDA含量明显上升(P0.01),同时伴有小鼠巨噬细胞的CCK-8含量下降(P0.01)及LDH释放增加(P0.01);与100μmol/L DBP组比较,100μmol/L DBP+50μmol/L VE组CCK-8含量上升,LDH、ROS及MDA水平均明显下降(P0.01)。结论结果表明,较高剂量(≥25μmol/L)的DBP可引起小鼠腹腔巨噬细胞的氧化损伤,致巨噬细胞活性降低和细胞膜破坏;维生素E作为抗氧化剂,在一定程度上可拮抗DBP造成的巨噬细胞损伤。