表达干扰素-α2b重组长双歧杆菌工程菌的制备

目的构建表达人干扰素-α2b(hIFN-α2b)蛋白的双歧杆菌工程菌,并验证靶蛋白的表达水平。方法人工合成hIFN-α2b基因,插入双酶切的pBAD质粒,构建重组质粒pBAD-IFN。制备双歧杆菌感受态,用pBAD-IFN电转化后PCR鉴定、筛选阳性克隆,筛选的阳性双歧杆菌克隆在L-阿拉伯糖诱导下表达靶蛋白,并进行Western blot检测。结果测序和双酶切鉴定表明成功构建重组质粒pBAD-IFN,Western blot检测证明氨苄青霉素筛选出的该质粒转化双歧杆菌阳性克隆经L-阿拉伯糖诱导表达分子质量单位为18ku的hIFN-α2b蛋白。结论 hIFN-α2b表达载体pBAD-IFN转化双歧杆菌后可表达hIFN-α2b蛋白。     

人干扰素-α基因转移、表达及其抗乙型肝炎病毒的实验研究

目的研究人干扰素-α(hIFN-α)基因的转移、表达及其抗乙型肝炎病毒的作用.方法利用聚合酶链反应(PCR)技术和基因重组技术,体外扩增hIFN-α基因并构建重组表达hIFN-α基因的逆转录病毒表达载体(pDOR-IFN-α),用NIH 3T3细胞扩增法测定其假病毒颗粒滴度,用染料吸收法检测hIFN-α活性;将假病毒颗粒感染2.2.15细胞,用固相放免法检测其上清HBsAg和HBeAg,用斑点杂交法结合计算机扫描检测其细胞HBV DNA密度.结果PCR克隆出648 bphIFN-α全基因;假病毒颗粒滴度为1×106CFU/ml;hIFN-α生物活性为239 IU/ml/1×106/48 h;对HBsAg的抑制率随培养时间(2、4、6和8 d)的延长而逐渐增高,抑制率分别为33%、55%、55%和62%,而对HBeAg的抑制则在转染后的第2天抑制率最高,以后随培养时间延长而逐渐下降,其抑制率分别为67.7%、40%、19.5%和25.3%.而对照组对HBsAg第2、4、6、8天的抑制率分别为0%、10.8%、0%和13%,对HBeAg的抑制率分别为0%、0%、0%和1.2%.而且对HBV DNA亦有明显的抑制作用,抑制率达66%;而对照组(空白载体)抑制作用不明显.结论hIFN-α基因可以成功地转移和表达,并有抑制HBV复制和表达的作用.     

人用干扰素治疗SARS

目前人们已分离得到多株SARS冠状病毒 ,其中包括来自法兰克福大学医疗中心SARS患者的FFM 1和FFM 2 ,但是 ,迄今为止 ,对SARS仍没有针对性的治疗。我们评价了重组α、β和γ干扰素对这两株SARS冠状病毒的抗病毒潜力。方法我们使用的产品包括德国莫尼黑EssexPharm公司的IntronA (干扰素α 2b) ;柏林先令公司 (Schering)的Betaferon(干扰素 β 1b) ,以及英格海姆Boehringer公司的Imukin (干扰素γ 1b)。通过目测评价 96孔板中的Vero和Caco 2细胞在病毒侵染 72小时后细胞融合层的病理变化。选择性指数取细胞半数存活的干扰素浓度C…     

关于慢性HBV感染抗病毒治疗若干热点问题的讨论

有关乙型肝炎病毒(HBV)感染的抗病毒治疗近10余年来取得了巨大进展.目前干扰素α-2b(IFNα-2b)、聚乙二醇化干扰素α-2a(PFG-IFNα-2a)、拉米夫定、阿德福韦及恩替卡韦等5种药物已被美国FDA批准用于抗HBV治疗[1,2].此外,替比夫定即将上市,抗HIV药物如替诺福韦等也具有抗HBV活性[3].     

慢性乙丙丁各型肝炎干扰素疗法进展

干扰素(IFN)是一组宿主蛋白,对细胞内病毒有抗病毒作用,IFN有α、β、γ三种类型,α-IFN(或IFN-α)为白细胞产生的干扰素,常用的国产干扰素为血液棕黄层白细胞干扰素,进口的有类淋巴细胞干扰素(Wellferon)、重组人干扰素αA(Roferon)、重组人干扰素α_2b(IntronA),国产重组干扰素正在临床进行验证。IFN抑制病毒复制具有广谱性、间接性、相对种属特异性及选择性等特点,在正     

肝病生物治疗策略

1 慢性病毒性肝炎的治疗 对乙型肝炎和丙型肝炎的治疗均以干扰素为首选药物,干扰素分α、β、γ三大类,其抗病毒作用α、β较好,γ最差。常用的α干扰素分α1,α2……(即αD、αA……),虽然α1又分为1a、1b、1c,且α2也可分为2a、2b、2c,但常用者为2b及1b,不管哪一种亚型,其治疗效果均较接近。从比活性方面分析,人工合成的组合干扰素活性最高,但按产生抗体的程度和疗效来看,最好的是天然α干扰素(纯度在98％以上者),     

重组干扰素α-2b治疗慢性丙型肝炎68例

重组干扰素α-2b具有抗病毒、免疫调节、抗纤维化和减少肝癌发生的作用.我们应用α-2b干扰素(安福隆)治疗慢性丙型肝炎68例,取得了较好的临床效果,现报告如下.     

干扰素α2b与苦参素、胸腺肽α1联合、序贯治疗慢性乙型肝炎的实验研究

了解干扰素α2b与苦参素、胸腺肽α1联合治疗慢性乙型肝炎的实验研究。98例HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者随机分成治疗组和对照组。治疗组49例,同时使用干扰素α2b与苦参素、胸腺肽a1 13周,随后使用干扰素α2b及胸腺肽α1 13周,最后单用干扰素α2b 26周;对照组49例单用同样剂量干扰素α2b 52周。疗程中定期检测血常规、丙氨酸转氨酶(ALT)、HBeAg、抗-HBe、HBVDNA、透明质酸酶(HA)。全部患者完成1年治疗。治疗组 ALT、HA复常率、HBeAg／抗-HBe血清转换率、HBVDNA阴转率明显高于对照组(分别为81．6％和53．1％,P< 0．005;44．9％和22．4％,P<0．025;42．9％和20．4％,P<0．025:79．6％和51．0％,P<0．005)。干扰素α2b与苦参素、胸腺肽α1联合治疗慢性乙型肝炎疗效优于单用干扰素α2b。     

复合α干扰素治疗慢性丙型肝炎研究进展

迄今为止,α干扰素(IFN-α)仍为治疗慢性丙型肝炎的主要药物,各种重组干扰素如IFN-α2a、2b、1b和淋巴母细胞干扰素对慢性丙型肝炎的疗效大致相同.最近研制成功的一种新型干扰素--复合α干扰素对治疗慢性丙型肝炎有独到之处,特别在降低血清病毒负荷和治疗对其他干扰素无效或复发的病人方面,优于其他类型的干扰素.     

替比夫定与干扰素α2b治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎疗效比较

目的 比较替比夫定与重组人干扰素α2b治疗HBeAg阳性慢性乙型肝炎的临床疗效.方法 对220例门诊治疗的HBeAg阳性慢性乙型肝炎患者的临床资料进行回顾性分析.替比夫定治疗组104例及干扰素α2b组116例,治疗48周,观察两组患者血清HBVDNA水平、HBV血清学标志物、肝脏生化指标的变化,同时监测不良反应的发生.结果 治疗48周,重组人干扰素α2b组的HBeAg转换率优于替比夫定组,差异有统计学意义(P＜0.05).替比夫定治疗12周及24周,HBVDNA转阴率优于重组人干扰素α2b组,差异有统计学意义(P＜0.05).替比夫定组不良事件的发生率与重组人干扰素α2b组比较无明显差异,但血清肌酸激酶(CK)升高的病例高于重组人干扰素α2b组.结论 替比夫定在迅速持续抑制HBV的复制方面优于重组人干扰素α2b,而在HBeAg阴转率与重组人干扰素α2b接近,提示替比夫定除强效抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制外,同时存在免疫调节作用,不良反应较少,可用于慢性乙型肝炎的长期治疗.在治疗中应注意监测CK水平变化.     

干扰素治疗老年重型病毒性肝炎疗效及对血清肿瘤坏死因子-α及胰岛素样生长因子-Ⅰ的影响观察

目的观察干扰素α-2b注射治疗老年重型病毒性肝炎的临床疗效并探讨其治疗前后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)的变化情况。方法选取2012年5月至2014年5月在我院收治的老年重型病毒性肝炎患者54例,随机分为常规治疗组和干扰素治疗组,并选择同期25例健康正常人作为对照组;常规治疗组给予白蛋白及谷胱甘肽等综合治疗,干扰素治疗组在综合治疗的基础上给予干扰素治疗;观察干扰素α-2b治疗前后TNF-α、IGF-Ⅰ的水平,以及相关临床指标包括血清总胆红素(Tbi L)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、凝血酶原活动度(PTA)的变化情况,并与常规治疗组及对照组进行对比。结果干扰素治疗组的死亡率为33.33%,常规治疗组的死亡率为66.67%,2组比较差异有统计学意义。同时干扰素治疗组并发症的发生率也明显低于常规治疗组(P0.05);干扰素治疗组在治疗2周及4周后肝功能情况明显改善;此外干扰素治疗组可明显降低血清TNF-α及IGF-Ⅰ水平,与常规治疗组比较差异具有统计学意义(P0.05)。结论干扰素治疗老年重型病毒性肝炎可明显改善肝功能,降低患者的死亡率及并发症发生率,故认为干扰素可作为治疗及缓解老年重型病毒性肝炎病情的一种有效药物。     

干扰素联合利巴韦林治疗由一名献血员所致慢性丙型肝炎62例分析

目的 应用干扰素α-2b联合利巴韦林治疗由一名献血员所致62例慢性丙型肝炎(CHC)患者,评估其疗效.方法 62例输血后CHC患者给予干扰素α-2b联合利巴韦林治疗(标准干扰素3～5MU,隔日一次注射,口服利巴韦林0.6～ 1.0g/d),疗程48周,随访96周.以持续病毒应答(SVR)率、早期病毒学应答(EVR)率、治疗结束时病毒学应答(ETVR)率、停药后生物化学应笞率为考核指标,同时观察药物不良反应.计量资料用均数±标准差(x-±s)表示,计数资料用x2检验.结果 SVR率为83.9％ (52/62),EVR率为95.2％ (59/62),ETVR率为87.1％ (54/62),停药后生物化学应答率为100.0％.不同病毒载量(x 2=10.13,P＜0.05)和不同年龄(x 2=14.58,P＜0.01)患者SVR率差异明显.干扰素所致8例甲状腺功能轻度异常者经内分泌专科协助能坚持完成抗病毒治疗.结论 干扰素α-2b联合利巴韦林治疗CHC患者疗效显著,获得SVR的52例停药后随访96周均无复发,疗效与感染HCV时较年轻、感染时间较短、多数患者病毒载量较低、治疗依从性较好等因素有关,与性别无关.只要患者血清HCV RNA阳性,均应抗病毒治疗,以清除病毒、阻断和延缓病情进展.     

干扰素治疗乙型肝炎存在的问题与处理对策

与拉米夫定仅能抑制乙型肝炎病毒(HBV) DNA复制过程的药理特点相比,干扰素α不仅能在HBV基因的复制、表达等多个环节发挥抗病毒作用,而且能够调动宿主的免疫功能,形成双重机制的抗病毒活性,故干扰素α抗病毒的效果较强,乙型肝炎e抗原(HBeAg)／抗-HBe血清学转换率较高, 复发率较低,尤其是不易产生耐药性病毒变异,从而使干扰素     

重组犬α干扰素在昆虫细胞中的高效表达与抗病毒活性鉴定北大核心CSCD

目的利用杆状病毒表达系统制备犬α干扰素(Canine interferon-α,CaIFN-α)。方法根据昆虫细胞密码子偏爱性优化CaIFN-α基因,构建含双拷贝CaIFN-α优化基因的载体pFastBacDual-CaIFNα-CaIFNα,转化DH10Bac感受态后获得重组基因组rBacmid-CaIFNα-CaIFNα,转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rBac-CaIFNα-CaIFNα,接种Sf9细胞表达rCaIFN-α。采用PCR和透射电子显微镜鉴定重组杆状病毒的外源基因与病毒形态,采用间接免疫荧光染色法检测rCaIFN-α蛋白的表达,采用细胞病变抑制法测定rCaIFN-α抑制水疱性口炎病毒(VSV-GFP)在MDCK细胞的复制能力。结果重组杆状病毒rBac-CaIFNα-CaIFNα构建成功,rCaIFN-α在rBac-CaIFNα-CaIFNα感染的Sf9细胞中表达,其抗病毒活性为8.73×105 IU/ml。结论构建的杆状病毒表达系统能高效表达rCaIFN-α,该干扰素具有高效抗病毒活性,这为犬干扰素制剂的研究奠定了基础。     

重组犬α干扰素在昆虫细胞中的高效表达与抗病毒活性鉴定

目的利用杆状病毒表达系统制备犬α干扰素(Canine interferon-α,CaIFN-α)。方法根据昆虫细胞密码子偏爱性优化CaIFN-α基因,构建含双拷贝CaIFN-α优化基因的载体pFastBacDual-CaIFNα-CaIFNα,转化DH10Bac感受态后获得重组基因组rBacmid-CaIFNα-CaIFNα,转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rBac-CaIFNα-CaIFNα,接种Sf9细胞表达rCaIFN-α。采用PCR和透射电子显微镜鉴定重组杆状病毒的外源基因与病毒形态,采用间接免疫荧光染色法检测rCaIFN-α蛋白的表达,采用细胞病变抑制法测定rCaIFN-α抑制水疱性口炎病毒(VSV-GFP)在MDCK细胞的复制能力。结果重组杆状病毒rBac-CaIFNα-CaIFNα构建成功,rCaIFN-α在rBac-CaIFNα-CaIFNα感染的Sf9细胞中表达,其抗病毒活性为8.73×105 IU/ml。结论构建的杆状病毒表达系统能高效表达rCaIFN-α,该干扰素具有高效抗病毒活性,这为犬干扰素制剂的研究奠定了基础。     

干扰素α-2b对人肝癌细胞及血管内皮生长因子分泌的抑制作用

目的探讨干扰素(IFN)α-2b对人肝癌细胞及其血管内皮生长因子(VEGF)分泌的抑制作用。方法培养人肝癌HepG2细胞制成细胞悬液,同时设立空白组(培养液)、阴性对照组(培养液+HepG2细胞)、不同浓度IFNα-2b处理组。用MTT比色法、酶联免疫法检测HepG2的抑制率、VEGF蛋白表达水平。结果不同浓度IFNα-2b对体外培养肝癌细胞的生长抑制率具有时间、剂量双重效应(P均<0.05);IFNα-2b对VEGF蛋白表达抑制呈剂量效应(P均<0.01)。结论 IFNα-2b对肝细胞癌增殖和VEGF的分泌均有抑制作用。     

丙型肝炎

原卟啉钠抑制丙型肝炎病毒的体外实验研究，干扰素刺激基因ISG20真核表达载体的构建及其抗丙型肝炎病毒复制作用的研究，抗-HCV阳性反应血清的HCV核酸检测分析，聚乙二醇干扰素α-2b联合利巴韦林治疗慢性丙型肝炎的病毒学应答，丙型肝炎病毒F反式调节靶基因反式激活基因的筛选和生物信息学分析。     

对治疗无应答的慢性丙型肝炎处理研究进展

近10年来慢性丙型肝炎（CHC）的治疗取得了较大的进展，从最初的单用α干扰素治疗发展为α干扰素与利巴韦林联合治疗，到近几年来提倡采用聚乙二醇化（Peg）干扰素α-2a或2b加上利巴韦林治疗，使得持久病毒应答率（SVR）有了很大的提高。目前认为Peg干扰素α-2a或2b联合利巴韦林治疗是最有效的抗丙型肝炎病毒（HCV）的治疗方案，其次是普通α干扰素或复合干扰素与利巴韦林联合疗法，效果均优于单用α干扰素。     

从1例慢性乙型肝炎患者治疗过程分析慢性乙型肝炎的治疗策略

一、病例 患者男,47岁.从1981-2003年因ALT升高、HBsAg(+),HBeAg(+)、抗-HBc(+)在本院诊断为病毒性乙型肝炎.患者共住院治疗4次,住院期间先后给予一般保肝药物治疗、聚肌胞治疗,1997年肝功能正常且排除肝硬化后开始用干扰素(IFN)抗病毒治疗.给予基因工程干扰素α-2b(购自美国先灵葆雅公司)3 MU,隔天1次;2003年,改用注射用重组人干扰素α-2b(购自深圳海王英特尼公司)3 MU,隔天1次.     

从1例慢性乙型肝炎患者治疗过程分析慢性乙型肝炎的治疗策略

一、病例 患者男,47岁.从1981-2003年因ALT升高、HBsAg(+),HBeAg(+)、抗-HBc(+)在本院诊断为病毒性乙型肝炎.患者共住院治疗4次,住院期间先后给予一般保肝药物治疗、聚肌胞治疗,1997年肝功能正常且排除肝硬化后开始用干扰素(IFN)抗病毒治疗.给予基因工程干扰素α-2b(购自美国先灵葆雅公司)3 MU,隔天1次;2003年,改用注射用重组人干扰素α-2b(购自深圳海王英特尼公司)3 MU,隔天1次.