过表达KLF4对棕榈酸所致L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗的影响

目的探讨Krtippel样因子4（KLF4）过表达对大鼠L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗的影响。方法采用棕榈酸诱导法建立大鼠IJ6骨骼肌细胞的胰岛素抵抗模型,随机分为对照组和转染组。对照组转染腺病毒空载体（Ad）,转染组转染KLF4腺病毒表达载体（Ad—KLF4）。采用Real—timePCR和Western—blot检测两组KLF4、胰岛素受体（IR）和葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）的表达水平,采用葡萄糖氧化酶法检测两组培养液中的葡萄糖浓度。结果与对照组比较,棕榈酸诱导组对葡萄糖的摄取量显著降低（P〈0．05）,KLF4、IR、GLUT4表达显著下调（P〈0．05）。KLF4过表达可显著提高细胞对胰岛素的敏感性,并上调IR、GLUT4表达。结论过表达KLF4可导致IR、GLUT4表达上调,并改善骨骼肌细胞的胰岛素抵抗。     

p38MAPK信号通路对骨骼肌胰岛素抵抗模型GLUT4表达的研究

目的通过建立棕榈酸(PA)诱导的大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗模型,并探讨P38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路对胰岛素抵抗模型葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)表达的影响。方法不同浓度的棕榈酸(PA)分别培养不同时间已分化的L6肌细胞,用葡萄糖氧化酶法分别检测各组培养液中剩余葡萄糖浓度,并以此判断胰岛素抵抗形成与否。L6肌细胞胰岛素抵抗模型建立后,给予不同条件干预,用Western blot方法检测胰岛素抵抗组(IR组)和吡格列酮干预组(IR+PIO组)中p-p38MAPK和GLUT4蛋白表达水平。结果通过葡萄糖氧化酶法检测培养皿上清液中葡萄糖含量发现,0.4 mmol·L-1的棕榈酸在作用24～36 h或0.6～0.8 mmol·L-1棕榈酸作用8～24 h后,其上清液中葡萄糖含量和对照组相比,明显高于对照组(P<0.05)。据此可以认为胰岛素抵抗模型建立。Western blot结果显示:和IR组相比I,R+PIO组p-p38MAPK和GLUT4水平明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过一定浓度和作用时间的PA的刺激可以建立大鼠L6成肌细胞胰岛素抵抗模型。p38MAPK信号通路可能是影响GLUT4表达的重要信号通路之一。吡格列酮作为PPARγ激动剂,其改善胰岛素敏感性的机制之一可能是通过激活p38MAPK信号通路。     

二甲双胍及有氧运动对肥胖大鼠骨骼肌脂联素和葡萄糖转运体4的影响

目的 探讨二甲双胍及有氧运动对高脂饲料喂养的肥胖大鼠骨骼肌中脂联素(APN)和葡萄糖转运体4(GLUT4)的影响,以及APN和GLUT4之间的关系。 方法 4周龄50只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为普通对照组(NC组)和高脂饮食组(HD组),NC组予普通饲料饲养,HD组高脂饲料喂养。12周后,HD组采用随机数字表法分为:二甲双胍组(MT组)、游泳运动组(SE组)和高脂肥胖组(HF组)。SE组大鼠每日游泳运动,MT组给予二甲双胍(每日200 mg·kg-1)灌胃,共6周,空腹取血测相关代谢指标,分离骨骼肌组织测APN和GLUT4的表达。 结果 HF组大鼠体质量(BW)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平、HOMA-IR指数均明显高于NC组(P＜0.05),骨骼肌APN和GLUT4的表达较NC组明显下调(P＜0.05)。运动、二甲双胍干预后能降低体质量(P＜0.05),降低血糖、血脂(P＜0.05),改善胰岛素抵抗(P＜0.05)。运动干预同时上调骨骼肌中APN和GLUT4的表达(P＜0.05),二甲双胍干预后骨骼肌中GLUT4的表达明显上调(P＜0.05),APN表达变化不明显(P＞0.05)。 结论 有氧运动可上调骨骼肌组织中APN及GLUT4的表达,二甲双胍可上调骨骼肌中GLUT4的表达,但对APN的表达无明显改善作用。     

2型糖尿病大鼠模型GLUT4 mRNA表达的研究

目的：研究葡萄糖转运体4（GLUT4）mRNA表达在2型糖尿病胰岛素抵抗中的分子机制。方法：采用高脂高糖饲养，一次性腹腔注射链脲佐菌素（STZ）制备2型糖尿病大鼠模型。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分析大鼠骨骼肌、心肌和脂肪组织中GLUT4 mRNA的表达量变化与差别。结果：正常对照组和2型糖尿病大鼠模型组GLUT4 mRNA在骨骼肌中有相对较高表达，在心肌中表达次之，在脂肪组织中表达相对偏低。2型糖尿病大鼠模型组骨骼肌中GLUT4 mRNA表达量只有对照组骨骼肌的48％、心肌的44％、脂肪组织的38％。结论：GLUT4 mRNA表达量下降导致骨骼肌、心肌和脂肪组织对葡萄糖摄取利用减少是胰岛素抵抗的重要分子基础，是诱发2型糖尿病原因之一。     

JNK在棕榈酸致骨骼肌细胞胰岛素抵抗中的作用

目的:探讨棕榈酸造成L6GLUT4myc骨骼肌细胞胰岛素抵抗过程中c-JunN-末端激酶(JNK)所起的作用。方法:将L6GLUT4myc成肌细胞培养于24孔和6孔培养板中,随机分为溶剂组和棕榈酸组,分别用0.3mmol/L的棕榈酸盐和溶剂牛血清白蛋白(BSA)孵育16h,在棕榈酸组的后30min加入JNK的抑制剂,于胰岛素刺激前后用酶联免疫吸附测定(ELISA)细胞膜上GLUT4myc的含量,免疫印迹法测定蛋白激酶B(Akt)、JNK和胰岛素受体底物1(IRS1)的磷酸化。结果:与溶剂组相比,棕榈酸组中胰岛素增加的GLUT4myc水平的倍数和Akt的磷酸化降低(P<0.05);JNK和IRS1的丝氨酸位点S307的磷酸化水平变化差异无统计学意义(P>0.05)。结论:棕榈酸导致L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗的机制可能不涉及JNK,或JNK的作用很小。     

胰岛素抵抗骨骼肌细胞中P-Ser473PKB及糖原合成酶-3表达

目的探讨棕榈酸(PA)诱导的胰岛素抵抗(IR)骨骼肌细胞中P-Ser473PKB及糖原合成酶(GSK)-3的表达。方法培养大鼠骨骼肌细胞,免疫荧光鉴定原代大鼠骨骼肌细胞;设立对照组、PA组(0.6mmol/L PA),在细胞培养6、122、4 h后,胰岛素刺激15 min,葡萄糖氧化酶-过氧化物酶偶联(GOD-POD)法测定培养液中葡萄糖的浓度;Western blot检测P-Ser473PKB及P-Ser21/9GSK-3α/β的蛋白表达。结果 90%以上的肌细胞-αsarcometric actin单克隆抗体染色呈阳性,证明培养的为骨骼肌细胞;培养24 h后,PA组培养液中葡萄糖浓度高于对照组,P-Ser473PKB蛋白水平低于对照组,而P-Ser21/9GSK-3α/β高于对照组(P值均<0.05)。结论 PA作用下,胰岛素刺激的骨骼肌细胞对葡萄糖的处理能力下降,即PA可诱导骨骼肌细胞产生胰岛素抵抗,其机制可能与P-Ser473PKB蛋白表达下调,P-Ser21/9GSK-3α/β表达增加有关。     

芒果苷对胰岛素抵抗HepG2细胞糖脂代谢的影响

目的:分析芒果苷(MGF)对胰岛素抵抗HepG2细胞(IR-HepG2细胞)糖脂代谢的影响,并探讨潜在机制。方法:以人肝癌HepG2细胞为对象,以1 mmol/L棕榈酸+2 mmol/L油酸联合培养建立IR-HepG2细胞模型。以盐酸二甲双胍为阳性对照,分别检测低、中、高浓度MGF(125、250、500μmol/L)作用24 h对IR-HepG2细胞中校正葡萄糖耗氧量和三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)含量的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测细胞中腺苷一磷酸活化蛋白激酶(AMPK)通路上游关键因子脂联素(APN)、脂联素受体2(AdipoR2)、APPL1、AMPK以及下游胰岛素信号通路关键因子胰岛素受体底物1(IRS-1)、蛋白激酶B(Akt)、葡萄糖转运体4(GLUT4)mRNA的相对表达量;采用Western blot法检测AMPK蛋白的磷酸化水平。结果:与对照组比较,模型组细胞校正葡萄糖消耗量和APN、AdipoR2、APPL1、AMPK、IRS-1、GLUT4 mRNA的相对表达量以及AMPK蛋白磷酸化水平均显著降低,TG、TC含量均显著升高(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,各药物组校正葡萄糖消耗量和APN(MGF中、高浓度组除外)、AdipoR2、APPL1、AMPK(MGF中、高浓度组除外)、IRS-1(MGF中、高浓度组除外)、Akt(阳性对照组除外)、GLUT4(MGF高浓度组除外)mRNA的相对表达量以及AMPK蛋白磷酸化水平均显著升高,TG、TC含量均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:芒果苷可能通过激活通路上游靶点APN,进而调控AMPK信号通路,从而促进IR-HepG2细胞对葡萄糖的摄取,降低TG、TC含量,发挥改善胰岛素抵抗及糖脂代谢异常状态的作用。     

JNK在棕榈酸造成骨骼肌细胞胰岛素抵抗中的作用

目的:探讨棕榈酸造成L6GLUT4myc骨骼肌细胞胰岛素抵抗的机制中,c-Jun N-末端激酶(JNK)的作用。方法:第一部分将细胞分两组,分别用0.3 mmol／L的棕榈酸盐或用溶剂牛血清白蛋白（BSA）孵育16 h;第二部分在如上处理的后30 min加入JNK的抑制剂,用或不用胰岛素刺激后,检测细胞膜上GLUT4myc的含量以及蛋白激酶B(Akt)、JNK和胰岛素受体底物1（IRS1）的磷酸化。结果：与溶剂组相比,棕榈酸组中胰岛素刺激的GLUT4myc转位和Akt的磷酸化降低(P<0.05);JNK和IRS1Ser307的磷酸化水平则没有变化。结论：棕榈酸导致L6骨骼肌细胞胰岛素抵抗的机制可能不涉及JNK或JNK的作用很小。     

小牛血清去蛋白注射液对2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型骨骼肌GLUT4 mRNA表达的影响

目的观察小牛血清去蛋白注射液(DECB)对2型糖尿病胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌中葡萄糖转运因子4(GLUT4)的mRNA表达的影响。方法以高脂高糖饮食加链脲佐菌素制作2型糖尿病胰岛素抵抗大鼠模型,观察DECB对大鼠葡萄糖耐量(OGTT),运用RT-PCR方法检测大鼠模型骨骼肌中GLUT-4的mRNA表达。结果 DECB可改善OGTT,增加大鼠模型骨骼肌中GLUT4的mRNA表达。结论 DECB具有较好的降血糖、改善胰岛素抵抗、防治糖尿病并发症的作用。     

内质网应激介导高脂及棕榈酸致骨骼肌胰岛素抵抗及非诺贝特的干预机制初探

目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)介导高脂及棕榈酸致骨骼肌胰岛素抵抗及非诺贝特(fenofibrate,FF)的干预机制。方法♂SD大鼠随机分为标准饮食组(SCD)、高脂饮食组(HFD)及治疗组(HFD+FF)。高脂组和治疗组先分别给予高脂饮食20周,高脂组继续给予高脂饮食8周,治疗组给予非诺贝特(30 mg·kg-1·d-1)灌胃治疗8周。分析大鼠胰岛素抵抗的改善作用、骨骼肌葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录因子GADD153(CHOP)和过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)基因的表达。将骨骼肌细胞C2C12分为正常对照组(NC组)、模型组(棕榈酸组,PA)、阳性对照药组(衣霉素组,TM)、治疗组(棕榈酸+非诺贝特酸,PA+FA),分别检测GRP78、CHOP、Akt和pAkt的表达。结果与SCD组相比,HFD组大鼠体重和血脂水平明显增高,出现明显的胰岛素抵抗,GRP78和CHOP基因表达水平均明显上调;与HFD组相比,HFD+FF组上述指标均出现明显改善。与NC组相比,PA组GRP78和CHOP基因表达明显增加,p-Akt明显下调;与PA组相比,PA+FA组GRP78和CHOP基因表达明显降低,p-Akt明显上调。结论非诺贝特有改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗的作用,这可能与其降低ERS中CHOP和GRP78的表达有关。     

米非司酮对胰岛素抵抗大鼠心肌损伤的保护作用及其机制

目的：考察米非司酮对高脂饮食所致胰岛素抵抗大鼠心肌功能和结构变化的影响,并从细胞水平研究其作用机制。方法：1）将40只SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、吡格列酮组及米非司酮高、低剂量组,每组8只。除正常对照组给予普通饲料外,其余各组均给予高脂饲料。正常对照组和模型组每日灌胃给予0．5％CMC-Na溶液（0．1mL·kg^-1）,给药组分别给予吡格列酮（3mg·kg^-1·d^-1）及米非司酮（40,20mg·kg^-1·d^-1）。8周后,测定各组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素水平,计算HOMA-胰岛素抵抗指数,模型组该指数显著高于正常对照组时,视为造模成功;采用套尾法测定各组大鼠血压,并做心脏病理切片观察心肌功能和结构的变化。2）将原代培养2—3天的心肌细胞随机分为正常对照组、地塞米松（6×10^-6mol·L^-1）组、地塞米松（6×10^-6mol·L^-1）＋吡格列酮（2×1^-4mol·L^-1）／米非司酮（高、中、低剂量）（2×10^-4,2×10^-5,2×10^-6mol·L^-1）组、胰岛素（5×10^-6mol·L^-1）组、胰岛素（5×10^-4mol·L^-1）＋吡格列酮（2×10^-4mol·L^-1）／米非司酮（高、中、低剂量）（2×10^-4,2×10^-5,2×10^-6mol·L^-1）组。分组给药、连续培养48小时后,测定各组原代心肌细胞葡萄糖消耗量、细胞活力及游离脂肪酸和乳酸脱氢酶的含量,考察心肌细胞功能状态变化。结果：1）高脂饮食饲养8周后,大鼠出现胰岛素抵抗并伴有脂质代谢紊乱,血清皮质酮含量升高,病理切片结果显示模型组大鼠心肌受损,米非司酮组上述状况明显改善（P〈0．01）。2）胰岛素和地塞米松均能造成原代心肌细胞胰岛素抵抗模型,并造成细胞代谢紊乱,而米非司酮可改善地塞米松造成的心肌功能状态异常（P〈0．05,P〈0．01）,但对胰岛素诱导的异常无效（P〉0．05）。结论：米非司酮可降低高脂饮食所致的胰岛素抵抗大鼠心肌受损程度,推测其通过拮抗糖皮质激素而发挥作用。     

米非司酮对胰岛素抵抗人脐静脉内皮细胞功能的影响及其机制

目的：考察米非司酮对单用或合并使用胰岛素和地塞米松诱导的胰岛素抵抗人脐静脉内皮细胞功能的影响,并初步探讨其作用机制。方法：1）将常规培养的人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组,胰岛素（5×10^-6、5×10^-1和5×10^-8mol·L^-1）组,地塞米松（3×10^-5和3×10^-6mol·L^1）组,胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6和1．5×10^-7mol·L^1）组。培养24或48h后,测定各组细胞葡萄糖消耗量,以考察人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗的形成情况,并通过胰岛素刺激和模型持续时间研究进一步验证造模效果。2）将人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组,米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组,胰岛素（5×10^-7mol·L^1）组,胰岛素（5×10^-7mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6、1×10～×10^-7mol·L^1）组,地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）组,地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组,胰岛素（2．5×10^-5mol·L^1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^1）组,胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组。分别加入不同浓度的药物培养24或48h,然后对各组细胞葡萄糖消耗量、一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性和抗超氧阴离子自由基活力单位进行测定,以考察细胞功能状态变化。结果：1）胰岛素（5×10^-7mol·L^-1）作用24h可诱导人脐静脉内皮细胞发生胰岛素抵抗并可维持24h,地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）作用48h可诱导细胞的胰岛索抵抗并可维持36h,胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6molL^-1）共同作用48h可诱导细胞的胰岛素抵抗并可维持24h。2）地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5和1×10^-6mol·L^-1）组,以及胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5和1×10^-6mol·L^-1）组人脐静脉内皮细胞的葡萄糖摄取量、一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性和抗超氧阴离子自由基活力单位分别显著高于地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）组和胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）组;胰岛素（5×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^-1）组细胞的上述指标则与胰岛素（5××10^-7mol·L^-1）组无显著性差异。结论：胰岛素、地塞米松单独使用及合用均可诱导人脐静脉内皮细胞出现胰岛素抵抗并持续一定时间;米非司酮可改善地塞米松及地塞米松＋胰岛素诱导的胰岛素抵抗内皮细胞的功能紊乱,而对胰岛素诱导的胰岛素抵抗无改善作用。     

罗格列酮对糖耐量受损大鼠血清脂联素和肝脏脂联素受体表达的影响

目的探讨罗格列酮对糖耐量受损大鼠血清脂联素和肝脏脂联素受体-1表达的影响。方法60只Wistar雄性大鼠随机分为对照组(普通饲料喂养)和高脂组(高脂饲料喂养)。每周记录体质量变化,每2周作1次糖耐量试验;用HOMA胰岛素抵抗指数评价胰岛素抵抗程度,用反转录聚合酶链反应和蛋白印迹法分别测定脂联素受体1 mRNA和蛋白在肝脏的表达,成模后用罗格列酮干预4周。结果①12周时高脂组有18只大鼠成模,其2 h血糖均值达到了糖耐量受损的诊断标准,空腹血糖高于对照组(P<0.05),但未达到空腹血糖受损的诊断标准;②成模组大鼠体质量明显增加,空腹胰岛素和HOMA-IR指数高于对照组(P<0.05);③罗格列酮干预4周后血清脂联素水平较模型组升高(P<0.05),肝脏组织脂联素受体1 mRNA和蛋白的表达与模型组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论脂联素表达的下降在高脂饮食导致的胰岛素抵抗的发生中起着重要作用,罗格列酮可升高血清脂联素水平,但不影响肝脏脂联素受体-1的表达。     

水杨酸钠对胰岛素抵抗大鼠氧化应激水平的影响

目的探讨水杨酸钠对胰岛素抵抗大鼠胰岛素敏感性的影响及作用机制。方法分别给大鼠静脉输注脂肪乳＋肝素,脂肪乳＋肝素＋水杨酸钠和生理盐水7h,部分大鼠在输液的最后2h同时行清醒状态高胰岛素一正血糖钳夹试验,测定血浆葡萄糖、游离脂肪酸（FFA）、胰岛素、C肽、丙二醛（MDA）水平,检测肝脏、肌肉中MI）A含量及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）活性。结果脂肪乳输注组葡萄糖输注率（GIR）是生理盐水输注组的45％,输注水杨酸钠可使GIR提高1．3倍（P〈0．01）。与生理盐水输注组比较,脂肪乳输注组血浆、肝脏、肌肉中MDA水平增加了2～4倍（P〈0．01）;GSH—PX活性降低45％～50％（P〈0．01）。水杨酸钠输注使MDA水平较脂肪乳输注组降低了62％-66％（P〈0．01）,GSH-PX活性升高35％～38％（P〈0．05）。结论FFA增高引起机体氧化应激增强,可能是导致胰岛素抵抗发生的机制之一。应用水杨酸钠后大鼠氧化应激减弱,胰岛素抵抗改善,故水杨酸钠可能通过降低氧化应激途径而发挥改善胰岛素抵抗的作用。     

虫草多糖对2型糖尿病小鼠InsR／IRS-1通路及糖代谢的影响

目的：观察虫草多糖对2型糖尿病小鼠InsR／IRS—1通路及糖代谢的影响。方法：采用高脂饲料联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素（STZ,25mg·kg-1）建立胰岛素抵抗2型糖尿病模型,每日给予不同剂量虫草多糖（200,400mg·kg-1）治疗,28d后．免疫印迹法检测实验小鼠骨骼肌内胰岛素受体（1nsR）、胰岛素受体底物（IRS-1）及葡萄糖转运蛋白（GLUT4）的表达水平。检测肝脏葡萄糖激酶（GK）、磷酸果糖激酶（PFK）活性水平。结果：虫草多糖治疗组可显著改善糖尿病小鼠InsR／IRS一1及GLUT4蛋白的畀常表达（P〈0．05）;并呈剂量依赖性地增强小鼠肝脏GK及PFK酶活性,与糖尿病模型组比较差畀有统计学意义（P〈0．05或0．01）。结论：虫草多糖可增强胰岛素信号通路敏感性,改善葡萄糖代谢,从而缓解糖尿病小鼠胰岛素抵抗及高血糖症状,为胰岛素抵抗2型糖尿病的临床治疗提供新的依据。     

西他滨联合丙戊酸钠对白血病细胞株的促分化效应研究

目的探讨地西他滨(decitabine,DCA)和丙戊酸钠(valproic acid,VPA)联用对白血病细胞株HL-60的促分化影响。方法设立分组如下:对照组,DCAA组(1.0 mol.L 1),DCA B组(4.0 mol.L 1),VPA组(2.0 mmol.L 1),联合用药A组(DCA1.0 mol.L 1+VPA 2.0 mmol.L 1),联合用药B组(DCA 4.0 mol.L 1+VPA 2.0 mmol.L 1),作用48 h。流式细胞术检测CD34、CD117 MFI以及CD11b、CD14表达率。结果联合用药A、B组的CD117和CD34 MFI显著低于其各自的单药组(P<0.01);联合用药A组的CD11b和CD14表达率和联合用药B组CD11b表达率显著低于其各自的单药组(P<0.01)。结论 VPA与DCA联用对HL 60细胞具促分化作用。