三氧化二砷与甲磺酸伊马替尼对慢性粒细胞白血病原代细胞增殖与凋亡的协同作用研究

目的：探讨三氧化二砷（Arsenic trioxide,ATO）对甲磺酸伊马替尼（STI571）在慢性粒细胞白血病（CML）原代细胞中对细胞增殖及凋亡的影响。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察STI571单独使用与联用ATO对慢性粒细胞白血病原代细胞增殖抑制的变化情况。流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：无毒剂量的ATO（0.15μmol·L-1）联用STI571（IC500.324±0.011μmol·L-1）较单独使用STI571（0.580±0.007μmol·L-1）时对细胞抑制率显著增大,IC50下降1.79倍（P〈0.05）。细胞经ATO（0.15μmol·L-1）、STI571（0.5μmol·L-1）联合处理24h、48h时,细胞凋亡率增大为15.6%、50.7%,协同作用为增强（＋＋）。结论：ATO能增强STI571对CML原代细胞敏感性,能促进细胞凋亡与STI571具有增强的协同作用。     

新三类抗心律失常药物CPUY11018的潜在致心律失常作用

目的:考察化合物CPUY11018对心电复极的影响,评估其潜在致心律失常作用。方法:观察CPUY11018和阿奇利特对正常豚鼠心率(HR)、QT间期、校正QT间期(QTc)及校正QT间期离散度(QTcd,QTcmax～QTcm in)的影响;正常家兔连续给予异丙肾上腺素(5 mg.kg-1.d-1,sc)7 d,诱发心肌缺血性肥厚,甲氧胺法观察CPUY11018对肥厚心肌尖端扭转性室性心动过速(TdP)的诱发作用。结果:小剂量CPUY11018可浓度依赖性延长QT间期,药物剂量为0.203 mg.kg-1时,其对豚鼠心电图的影响达到平台,加大给药剂量,心电图并无明显改变,显示出明显的自限特征;甲氧胺法诱发家兔TdP模型中CPUY11018(0.15和0.3 mg.kg-1.m in-1)无诱发TdP心律失常作用。结论:CPUY11018对QT间期有限延长,诱发心肌病变家兔TdP上作用弱。此作用可能与化合物兼具钙通道阻断作用有关。     

山奈酚对急性短暂缺氧时大鼠海马CA1神经元电压依赖性钾通道的作用

目的研究山奈酚对正常和急性短暂缺氧时大鼠海马CA1锥体神经元电压依赖性钾通道的作用.方法急性分离大鼠海马CA1区锥体神经元,采用全细胞记录,用含有氰化钾(KCN)60μmol·L-1的标准外液灌流模拟细胞缺氧,观察山奈酚对正常和缺氧时海马CA1区神经元电压依赖性钾通道的作用.结果山奈酚对正常和缺氧时海马CA1神经元电压依赖性K 电流有明显的抑制作用,可同时抑制瞬时外向型钾电流(IA)和延迟整流性钾电流(Ik),具有浓度依赖和电压依赖性;山奈酚对IA的半数抑制浓度(IC50)约为50μmol·L-1,对IK的IC50约为80μmol·L-1.结论山奈酚对正常和缺氧时大鼠海马CA1神经元电压依赖性钾通道有抑制作用,其对钾通道的抑制作用可能参与脑缺血保护.     

异丙酚对大鼠脊髓背角神经元TTX敏感型钠通道失活和去失活效应的影响

目的：观察异丙酚对急性分离的大鼠脊髓背角神经元TTX敏感型钠通道电流的影响及相关机制。方法：取出生后7d的雄性SD大鼠,击昏后断头取脊髓腰膨大部位,分离背角神经元,应用全细胞膜片钳记录模式记录钠电流。距离神经细胞100μm施加0.3-30μmol/L不同浓度的异丙酚,应用-10mV（持续30 ms）刺激电压诱发钠电流,求出异丙酚对钠电流的半效抑制浓度（IC50）。观察异丙酚对钠通道失活效应的影响时,应用从-80mV至-20mV的预刺激电压（阶差为10mV,持续30ms）,再应用0mV刺激电压（持续30ms）诱发钠电流产生,向神经细胞施加IC50水平的异丙酚。观察异丙酚对钠通道去失活效应的影响时,应用-10mV的预刺激电压（持续30ms）,再给予-10mV、持续30 ms的刺激电压诱发钠电流产生,两刺激电压的间隔时间为2-24ms。结果：异丙酚可浓度依赖性地抑制TTX敏感型钠电流,其IC50为（5.35±0.25）μmol/L。钠通道失活实验中,预刺激电压在-60mV到-40mV范围内,IC50水平的异丙酚可显著抑制由刺激电压（0mV）诱发的钠电流（P〈0.05）。钠通道去失活实验中,两刺激的间隔时间在2-6ms之间时,IC50水平的异丙酚可显著性抑制由刺激电压（-10mV）诱发的钠电流（P〈0.01,P〈0.05）。结论：异丙酚可抑制大鼠脊髓背角电压依赖性钠通道电流,这一作用与促进钠通道的失活和抑制钠通道的去失活有关。     

蛋白激酶C抑制药enzastaurin对吉非替尼耐药的人非小细胞肺癌细胞株生长的影响

目的：观察新型靶向制剂enzastaurin单独或联合吉非替尼对耐药人非小细胞肺癌细胞株的影响,设计合理的治疗药物组合。方法：CCK8法检测细胞增殖,Chou-Talalay联用指数法判定联合用药效果,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果：单药吉非替尼及enzastaurin作用NCI-H460耐药肺癌细胞72 h的半数抑制浓度（IC50）分别为6.99μmol·L-1（95%CI 3.55~13.79μmol·L-1）,7.25μmol·L-1（95%CI 4.77~1.02μmol·L-1）。两药联合应用对肺癌细胞的抑制作用增强（P 〈0.05）,同时给药组抑制效果更显著（P〈0.01）。同时给药组、序贯给药组（先用吉非替尼）和序贯给药组（先用enzastaurin）吉非替尼对H460细胞的IC50值分别为0.006μmol·L-1（95%CI 0.002~0.020μmol·L-1）,0.02μmol·L-1（95%CI 0.011~0.037μmol·L-1）,0.085μmol·L-1（95%CI 0.042~0.170μmol·L-1）。联合指数法显示在吉非替尼浓度0.05μmol·L-1以上时,同时给药组联合指数均〈1。细胞周期分布实验结果显示同时给药组可显著提高G0/G1期细胞比例（P〈0.05）,阻滞细胞于G1期。结论：蛋白激酶C抑制药enzastaurin与EGFR抑制药吉非替尼联用具有较好的协同作用,两药联合应用可能是出现吉非替尼耐药的非小细胞肺癌后续治疗的一个新选择。     

3,5,4＇-三甲基白藜芦醇对豚鼠心室肌细胞钠电流和钾电流的影响

目的研究3,5,4＇-三甲基白藜芦醇（trans-resveratrol derivative3,5,4＇-trimethoxystilbene,TMS）对豚鼠心室肌细胞钠电流（INa）和钾电流（IK1）的直接作用,探讨其心肌保护作用。方法用全细胞膜片钳技术记录TMS对单个心室肌细胞INa和IK1的作用。结果TMS（10μmol·L^-1）可快速抑制豚鼠心室肌细胞INa,用药后3min左右即开始起效,10min时抑制率为（36.8±5.6）%（P〈0.005）,洗脱后可完全恢复;1,3μmol·L^-1TMS未影响INa大小。TMS不改变INa的最大激活电压,也不影响IK1的大小。10μmol·L-1使半数最大失活电压（V1/2）由（-87.0±3.3）mV变化到（-96.7±3.5）mV（P〈0.001）,使失活曲线斜率（S）由（4.9±0.3）mV变化到（5.4±0.3）mV（P〈0.01）;使半数最大激活电压（V1/2）（-38.9±1.4）mV变化到（-47.3±1.3）mV（P〈0.001）,未改变激活S。结论TMS可直接作用于豚鼠心室肌细胞,快速抑制INa,且此作用快速、可逆。     

黄芩苷对γ-氨基丁酸受体和抗焦虑症作用研究

目的观察黄芩苷与γ-氨基丁酸（GABA）受体的关系及其所具有的抗焦虑作用。方法采用同位素标记GABA受体结合实验观察黄芩苷与GABA受体的关系;采用高台十字迷宫实验和四孔箱实验观察动物服用黄芩苷后行为的改变。结果 GABA受体竞争结合试验显示,黄芩苷可竞争性抑制50%GABA受体苯二氮类结合浓度（IC50）为（117.62±8.50）μmol·L-1,抑制结合常数（Ki）为（77.10±4.79）μmol·L-1。黄芩苷可增加实验动物进入十字迷宫开放侧次数,百分率和滞留时间,减少在四孔箱中探头和竖身的次数。这些变化与黄芩苷剂量有明显的关系,可被GABA受体阻断剂Ro 15-1788阻断。结论黄芩苷是GABA结合位点的配体,具有一定的抗焦虑作用。     

花生四烯酸乙醇胺对大鼠心肌细胞L型钙电流的影响

目的研究anandamide(花生四烯酸乙醇胺)对单个大鼠心肌细胞L型钙电流(I Ca-L)的影响。方法应用全细胞膜片钳技术记录I Ca-L,并观察anandamide对该电流的作用。结果 (1)anandamide浓度依赖性地减小I Ca-L,其IC50值为(1.3±0.3)μmol·L-1。(2)1μmol·L-1anandamide可明显使稳态失活曲线左移,失活中点电压(V1/2)由(-34.4±0.2)mV变为(-42.2±0.6)mV,K值由(5.7±0.2)变为(6.4±0.4),表明anandamide改变了钙通道失活的电压依赖性。anandamide 1μmol·L-1对稳态激活曲线无明显影响。结论 anandamide可使稳态失活曲线左移而剂量依赖性地减小I Ca-L。     

新型[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-f]异吲哚酮衍生物的设计、合成与活性研究

本文设计、合成了一系列新型[1,3]二氧杂环戊烯并[4,5-f]异吲哚酮衍生物,并对其进行了乙酰胆碱酯酶抑制活性以及由东莨菪碱致小鼠记忆障碍的改善作用测试。实验结果表明目标化合物对乙酰胆碱酯酶(ACh E)均有抑制作用,IC50值在微摩尔级,其中化合物I1(IC50=0.086μmol·L-1)和I2(IC50=0.080μmol·L-1)对ACh E的抑制活性较好,与阳性药多奈哌齐(IC50=0.094μmol·L-1)相当;且化合物I1~I4均具有改善由东莨菪碱引起的小鼠记忆障碍的作用。     

大黄素体外抑制膀胱癌BIU-87细胞增殖的实验研究

目的探讨大黄素对人膀胱癌BIU-87细胞增殖的抑制作用及其可能机制。方法采用倒置显微镜观察细胞生长,DAPI染色观察凋亡细胞;CCK-8法检测不同浓度的大黄素作用不同时间对BIU-87细胞增殖的抑制作用;JC-1检测线粒体跨膜电位并衡量线粒体去极化的比例以及caspase-9活性检测探讨大黄素抑制BIU-87细胞增殖的作用机制。结果不同浓度(10,20,40,60,80μmol·L-1)的大黄素均可抑制膀胱癌BIU-87细胞的增殖,且抑制率呈浓度依赖和时间依赖关系;大黄素作用BIU-87细胞24、48、72小时后半数抑制浓度(IC50)分别为:(46.27±2.32)μmol·L-1、(34.79±1.75)μmol·L-1、(25.58±1.24)μmol·L-1。随大黄素作用时间以及剂量的增加,BIU-87细胞凋亡率增加,线粒体跨膜电位逐渐下降,作用12小时后caspase-9活性随药物浓度增加而增加。结论大黄素能有效地抑制人膀胱癌BIU-87细胞的增殖,其可能机制为通过线粒体途径诱导细胞凋亡。     

马蹄金素衍生物的合成及其抗HBV活性研究

目的对马蹄金素[N-(N-苯甲酰基-L-苯丙氨酰基)-O-乙酰基-L-苯丙氨醇,MTS]进行结构修饰,以期寻找到抗乙肝病毒(HBV)活性更强、毒性更低的马蹄金素衍生物。方法以马蹄金素为先导化合物进行结构优化,合成一系列不同取代基团的马蹄金素衍生物并对其进行抗HBV活性测试。结果合成了马蹄金素衍生物共计9个,经体外活性筛选结果显示有4个衍生物具有抗HBV活性,4a(IC50:24.20μmol·L-1,SI:3.69)、5f(IC50:252.60μmol·L-1,SI:>3.96)、5g(IC50:0.82μmol·L-1,SI:52.57)、5h(IC50:1.44μmol·L-1,SI:59.97)。结论化合物5g和5h显示较强的抗HBV活性,选择指数较高,具有进一步研究开发的价值。     

尼美舒利抑制肝癌Hep3B细胞增殖及β-连环蛋白的转录活性的研究

目的:观察环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利对体外培养的人肝细胞癌Hep3B细胞增殖和细胞内β-连环蛋白(β-catenin)转录活性的影响,以探讨尼美舒利抗增殖作用的分子机制。方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Hep3B细胞内COX-2mRNA的表达水平;将细胞分别加入10、25、50、100、200μmol·L-1尼美舒利及尼美舒利(100μmol·L-1)+前列腺素E(2PGE2,10μmol·L-1)处理,CCK-8细胞计数法测定细胞增殖活性,双荧光素酶报告系统检测β-catenin的转录活性。同时各试验均设空白对照组进行比较。结果:Hep3B细胞高表达COX-2mRNA。与空白对照组比较,尼美舒利可浓度依赖性地抑制细胞的增殖(P<0.01),作用72h的半数抑制浓度(IC50)为76.33μmol·L-1;尼美舒利显著抑制Hep3B细胞内β-catenin的转录活性(P<0.05),加入PGE2后可显著减弱尼美舒利的作用(P<0.05)。结论:尼美舒利可能通过抑制COX-2活性和PGE2的生成,从而抑制β-catenin的转录活性发挥抗肝癌细胞增殖的作用。     

3,4-二氢-4-芳基香豆素类化合物的合成及其生物活性研究

目的 设计合成一系列3,4-二氢4-芳基香豆素类化合物,并评价其抗氧化、抗肿瘤活性.方法 以取代苯甲醛为原料,经缩合及Ponndorf反应制得目标化合物.采用DPPH法测定目标化合物的抗氧化活性;采用MTT法以胃癌细胞BGC-823为测试细胞株对目标化合物进行体外抗肿瘤活性评价.结果 与结论合成了10个新的3,4-二氢...     

人参皂苷Rb1对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞增殖及[Ca~（2＋）]_i的影响

目的：探讨人参皂苷Rb1对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞增殖及[Ca2＋]i的影响。方法：采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）研究人参皂苷Rb1对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞增殖的影响,应用荧光分光光度法观察人参皂苷Rb1对吗啡慢性作用SK-N-SH细胞内[Ca2＋]i的影响。结果：与对照组相比,吗啡慢性作用48h可显著抑制SK-N-SH细胞的增殖,细胞内游离钙离子浓度显著增高（P〈0.01）;单独加入16μmol.L-1Rb1可显著促进SK-N-SH细胞的增殖（P〈0.05）;人参皂苷Rb1（16μmol.L-1,32μmol.L-1）对细胞进行预处理能缓解吗啡对细胞的抑制作用（P〈0.05）。单独加入16μmol.L-1Rb1可使SK-N-SH细胞内[Ca2＋]i显著降低（P〈0.01）;慢性吗啡作用SK-N-SH细胞48h,能使细胞内[Ca2＋]i明显升高（P〈0.01）;慢性吗啡作用SK-N-SH后,加入（16μmol.L-1,32μmol.L-1）人参皂苷Rb1能有效地抑制吗啡引起的细胞内[Ca2＋]i升高（P〈0.01）。结论：人参皂苷Rb1可显著缓解吗啡对SK-N-SH细胞的抑制作用和吗啡引起的[Ca2＋]i升高。     

生姜醇提取物对人肺腺癌细胞(A549)增殖和凋亡的影响

目的:研究生姜醇提取物对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用浓度为10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物分别处理A549细胞24h,以未经生姜醇提取物处理的A549细胞为对照。MTT比色法检测A549细胞增殖能力;光镜观察细胞的生长情况、形态学改变;原位末端TdT酶标记技术(TUNNEL)检测细胞凋亡的情况。结果:MTT比色法结果表明,10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物抑制率分别为14.87%、24.72%、38.21%,与对照组(0.04%)比较抑制率显著增加(P<0.01),并随生姜醇提取物浓度增高而显著增加;光镜观察对照组细胞生长正常,凋亡细胞少见,而生姜醇提取物处理的A549细胞生长疏散,凋亡细胞的比例增加,程度随生姜醇提取物浓度增高而加重,尤以40μmol·L-1作用24h最显著;TUNNEL检测的10、20、40μmol·L-1生姜醇提取物下的A549细胞凋亡细胞指数分别为(9.36±0.82)%、(13.74±1.15)%、(19.17±1.40)%,与对照组(4.81±0.36%)比较均有显著差异(P<0.01),并随生姜醇提取物浓度增高而显著增加。结论:生姜醇提取物能抑制人肺腺癌细胞的增殖,其作用呈明显剂量依赖性,即随剂量的增加而抑制率增加。     

大豆苷抑制A549细胞增殖和迁移的实验研究

目的 探讨大豆苷对A549细胞增殖和迁移的调节作用.方法 将DMSO、50、100和150 μmol· L-1大豆苷作用于A549细胞,通过CCK8观察大豆苷对细胞增殖的影响,将浓度为0～200 μmol·L-的大豆苷作用于A549细胞,计算大豆苷对于A549细胞的IC50,采用流式细胞技术分析大豆苷对细胞周期的影响;...     

核酸类似物PNA在HepG2．2．15细胞中对乙型肝炎病毒复制的抑制作用

目的评价核酸类似物PNA在HepG2．2．15细胞中对乙型肝炎病毒复制的抑制作用。方法以HepG2．2．15细胞作为细胞模型,拉米夫定作为阳性对照药物。HepG2．2．15细胞于药物处理14d后,收集上清液及细胞。采用ELISA检测上清液中HBsAg和HBeAg含量,HBV荧光定量检测上清液和细胞内HBV DNA水平,CCK-8试剂盒检测药物对细胞的毒性作用。结果核酸类似物PNA与拉米夫定在浓度1．6-1000μmol·L^-1内对HepG2．2．15细胞的毒性均较小。与药物未处理组比较,PNA和拉米夫定均可有效抑制细胞上清HBV DNA,半数抑制浓度（IC50）分别为0．05-0．10μmol·L^-1和0．09-0．18μmol·L^-1,两者之间差异无统计学意义。结论在体外细胞实验中,PNA对细胞的毒性小,与拉米夫定的安全指数相当;PNA对乙型肝炎病毒复制有较强的抑制作用,且具有一定时效量效关系,与拉米夫定的抑制强度相当。