睾丸支持细胞和间质细胞在生精细胞凋亡中的作用

睾丸精子发生过程中存在生精细胞凋亡，支持细胞和间质细胞作为非生殖细胞对生精细胞凋亡具有重要作用。本文对这方面的研究作一综述。     

活化的肝星状细胞促进调节性T细胞的表达

目的 越来越多的研究证实,活化的肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)具有免疫抑制功能.本研究观察了HSCs对T细胞介导的适应性免疫应答的影响及其与调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的关系.方法 分离培养小鼠HSCs,运用混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR),体外观察活化的HSCs对T细胞增殖和Treg细胞的影响.结果 活化的HSCs能导致树突状细胞(dendritic cells,DCs)介导的适应性免疫应答中T细胞的低反应性:抑制T细胞的增殖,同时诱导Treg细胞的表达.结论 活化的HSCs能通过促进Treg细胞表达而诱导适应性免疫应答中T细胞的活化无能,促进免疫耐受.     

共培养条件下骨髓基质细胞与嗅鞘细胞的相互作用

[目的]研究骨髓基质细胞与嗅鞘细胞共培养条件下,两种细胞之间的相互作用,为进一步行细胞联合体内移植提供理论基础。[方法]取大鼠骨髓基质细胞和嗅鞘细胞进行分离培养纯化及鉴定,将纯化后的骨髓基质细胞和嗅鞘细胞共培养,对共培养细胞进行形态学观察,检测间充质干细胞标记物Vimentin、NGF受体标记物P75、神经干细胞标记物Nestin。[结果]共培养部分细胞形态上具有神经细胞特征;经免疫荧光观察一部分细胞呈p75阳性,另一部分细胞呈Vimentin阳性,它们呈条索状包绕p75阳性细胞,细胞簇中央的细胞呈Nestin阳性。[结论]骨髓基质细胞和嗅鞘细胞能在体外共同存活、生长,且通过细胞的相互作用,能激活BMSCs向神经元样细胞分化的潜力,提示借助于细胞间的相互作用,采取恰当的细胞联合移植干预有可能弥补单一细胞类型自身的不足,这为BMSCs和OECs体内联合移植的可行性提供了理论依据。     

肾脏细胞凋亡的分子机理研究进展

凋亡与增殖是调控细胞数目趋态的，作用相反的一对机制，细胞凋亡与肾脏疾病的发生，发展及转归均密切相关，本文综述了参与细胞凋亡的信号分子以及肾脏细胞凋亡领域的研究进展。     

细胞衍生的细胞外基质支架在骨科组织工程的研究进展

[目的]对细胞衍生的细胞外基质支架在骨科组织工程中的应用及制备细胞衍生的细胞外基质支架的方法进行综述。[方法]查阅近年国内外相关文献,总结细胞衍生的细胞外基质支架在骨科组织工程中的研究进展,对细胞衍生的细胞外基质脱细胞方法进行归纳和分类。[结果]近年来细胞衍生的细胞外基质支架在来源细胞、培养条件和脱细胞方法等方面有了一些进展,但仍然没有统一的标准。[结论]目前来看,细胞衍生的细胞外基质在骨科组织工程中有很大的应用价值,是很有希望的研究方向。     

细胞外信号调节激酶对人血管平滑肌细胞的作用及其机制

目的观察磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)对离体培养的平滑肌细胞增殖、凋亡和表型改变的影响。方法培养人大隐静脉平滑肌细胞,实验组培养液中加入PD98059对磷酸化ERK进行阻断后,观测平滑肌细胞的增殖活性,凋亡细胞所占比例以及细胞表型,并与对照组比较。结果实验组与对照组相比,细胞增殖活性明显低于对照组(P<0.01),电镜和荧光染色测定凋亡细胞所占比例明显高于对照组(P<0.01),电镜检测合成型细胞所占比例明显低于对照组(P<0.01),收缩型细胞所占比例较对照组明显为高(P<0.01),α肌动蛋白免疫荧光化学检测显示处理组荧光表达强于对照组。结论对离体培养的人大隐静脉平滑肌细胞磷酸化ERK进行阻断后,平滑肌细胞的增殖受抑,凋亡增加,细胞由合成型向收缩型转变。     

T细胞疫苗诱导免疫耐受与外周血T细胞凋亡的关系探讨

目的　探讨T细胞疫苗诱导特异性免疫耐受与外周血T细胞凋亡的关系。方法　制备针对Wistar大鼠的SD大鼠T细胞疫苗 ,然后用该疫苗免疫健康SD大鼠 ,每周 1次 ,连续 3周 ,作为实验组 (n =6)。对照组 (n =6)用RPMI 164 0培养液替代T细胞疫苗。以被免疫的SD大鼠的脾细胞作为反应细胞 ,以Wistar大鼠的脾细胞作为刺激细胞 (经丝裂霉素处理 ) ,于接种前和每次接种后第 5天进行单向混合淋巴细胞反应 (3 H TDR掺入法 ) ,测定其cpm值 ;用流式细胞仪对外周血T细胞凋亡情况进行检测。结果　混合淋巴细胞反应结果显示 ,实验组SD大鼠脾细胞免疫应答能力于接种后受到显著抑制 ,其cpm值较接种前显著降低 (P<0 .0 1) ;对照组接种前后各时点比较 ,其差异无显著性(P>0 .0 5 ) ;接种后相同时点的cpm值组间比较 ,实验组显著低于对照组 (P <0 .0 1) ;与接种前比较 ,接种后实验组外周血T细胞凋亡率显著增高 (P<0 .0 1) ,且随着疫苗接种次数的增加而升高 ,而对照组接种后各时点T细胞凋亡率与接种前比较差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论　T细胞疫苗可以诱导同种特异性免疫耐受 ,其机理可能是通过诱导外周血T细胞凋亡 ,清除抗原特异性反应性T细胞克隆来实现的。     

睾丸支持细胞与生精细胞凋亡的关系

生精细胞处于支持细胞构造的环境中 ,激素、生长因子和温度以及它们与支持细胞的联系调控着生精细胞的分化与成熟 ;细胞之间的旁分泌信号转导亦调节着生精细胞凋亡的过程。在睾丸生精细胞发生的自发性凋亡和诱发性凋亡中 ,支持细胞表达和分泌的产物扮演重要角色。     

树突状细胞与肾细胞癌治疗的进展

树突状细胞(DC)是一类具有典型树突状形态、膜表面高表达MHC-Ⅱ类分子、能移行至淋巴器官和刺激初始型T细胞增殖活化的细胞。本文就DE的分类、生物学作用及其机理、肾细胞癌患者DE的变化、肾细胞癌的DC治疗进展作一综述。     

免疫细胞化学法检测尿足细胞的临床应用

目的：免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学两种方法检测尿足细胞的比较，以促其临床推广应用。方法：尿标本均为我科住院患者的肾活检日新鲜晨尿，采用抗人足细胞标记蛋白Podocalxin（PCX）单克隆抗体进行尿沉渣免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学染色。14例患者均经肾活检，肾组织由光镜、免疫荧光和电镜检查做出病理诊断。结果：（1）14份尿标本应用免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学方法均可检测到足细胞。（2）同一份尿沉渣采用免疫荧光细胞化学法检测足细胞均数为（16、7±15、1）／HP，而免疫酶细胞化学法检测足细胞均数为（26，1±24、3）／20HP，两组比较有统计学意义（P〈0、05）；但两种方法所测足细胞数之间有很好的相关性（r=0、969）。结论：免疫荧光细胞化学和免疫酶细胞化学两种方法检测尿足细胞，前者较简便、镜下易辨认，后者设备简单、标本可保存。     

ptsA58H质粒转染人胚腱细胞的增殖特性及端粒酶活性分析

目的 分析体外长期传代ptsA58H质粒转染人胚腱细胞的增殖能力及端粒酶活性。方法 选用连续传代培养的第40代、第70代、第75代转化人胚腱细胞,免疫组化染色观察细胞分泌胶原类型,比较细胞生长曲线,并行染色体核型分析,流式细胞术检测细胞增殖周期,提取细胞总RNA,RT－PCR二步法检测细胞我端粒酶逆转录酶mRNA表达。结果 转化人胚腱细胞传代至70代以后,细胞形态发生改变,出现复制哀老现象。细胞具有正常分泌Ⅰ型胶原的能力,转化人胚腱细胞染色体呈异倍性（2n=94）。转化人胚腱细胞无人端粒酶逆转录酶mRNA特异扩增带,无端粒酶活性表达。结论 单纯SV40转染不能使人胚腱细胞永生化,同时也说明转化人胚腱细胞无恶性转化倾向。     

胃癌腹膜种植瘤动物模型的构建

目的建立稳定实用的人胃癌鼠腹膜种植瘤模型。方法通过对裸鼠和SCID鼠腹腔注射胃癌细胞株AGS、NCI—N87和SNUl6构建腹膜种植瘤模型,比较不同细胞株模型成功率和生存期的差异。结果裸鼠腹腔种植5×106个AGS、NCI—N87和SNUl6细胞腹膜瘤形成率分别是（3／8、6／8和2／8;SCID鼠腹腔种植5×106个AGS、NCI—N87和SNUl6细胞,腹膜瘤形成率分别是0／6、6／6和6／6。SCID鼠腹膜瘤模型中位生存期：NCI—N87细胞组（10x10。）为74d;SNUl6细胞3个不同剂量组（10×106、20×106和40×106）分别为95、78和44d。结论SCID鼠腹腔种植（20—40）×106个SNUl6细胞可以构建稳定实用的胃癌腹膜种植瘤模型。     

高低不同分化特性人成骨肉瘤MG-63克隆细胞株的建立

目的：建立分化程度高低不同的骨肉瘤细胞株。方法：用有限稀释法将人成骨肉瘤MG-63细胞系单克隆化，并作如下鉴定：(1)细胞增殖；(2)细胞形态学；(3)软琼脂克隆形成率；(4)染色体分析；(5)细胞周期时相分析；(6)碱性磷酸酶的活性；(7)细胞运动能力；(8)裸鼠成瘤实验。结果：共得到23个克隆，命名为MG-63-1～MG-63-23。其中的5、18号细胞株具有明显差异，18号为大核长梭形细胞，无接触抑制，克隆形成率高，体内成瘤时间短，代表低分化的骨肉瘤细胞株。5号以短梭形为主，核质比例变小，有一定的接触抑制，致瘤能力较低，为高分化的骨肉瘤细胞株。结论：通过对骨肉瘤细胞系MG-63的单克隆化，建立了具有高、低不同分化程度的两个人骨肉瘤细胞株。     

肺癌抑癌基因-1对人骨肉瘤细胞株MG63的侵袭和转移抑制效应研究

目的观察肺癌抑癌基因-1（TSLC1）稳定转染至骨肉瘤细胞株后对其侵袭、转移及裸鼠皮下成瘤能力的影响。方法采用稳定表达TSLC1基因的人骨肉瘤细胞株M8T为研究对象,转染空载体的细胞系M8P设为对照组,MG63细胞株为空白组;Transwell法检测三组细胞株的体外侵袭和迁移能力;将细胞制成1×107细胞悬液,于裸鼠尾静脉注射,第4周开始处死裸鼠,肉眼及镜下观察肺部转移灶形成情况,肺组织石蜡包埋切片HE染色检测。将0.5 mL磷酸盐缓冲液（PBS）重悬2×107细胞皮下注射5周龄裸鼠,皮下肿瘤生长情况1周检测1次。结果 M8T细胞株体外侵袭细胞数目为（25.86±2.12）,迁移的细胞数目为（37.55±3.46）;其裸鼠皮下成瘤形成时间：于注射后第4周开始生长,较对照组和空白组细胞株成瘤时间晚,体积显著减小,体内肺转移形成时间为注射后第9周,肺部转移灶发生率为40%。结论 TSLC1基因可明显抑制人骨肉瘤细胞的侵袭和转移及皮下成瘤能力。     

C57BL/6j小鼠异种移植瘤模型的建立

目的 建立C57BL/6j小鼠人神经母细胞瘤移植瘤模型.方法 取对数生长期SK-N-SH细胞1×107个/ml,分别接种3 d、7 d、3周、4周、5周、6周、7周C57BL/6j系小鼠及6周BALB/C系裸鼠,观察小鼠成瘤率、相对肿瘤体积(RTV)、相对肿瘤增长速率(K)、相对肿瘤倍增时间(Td)、宿主存活时间及移植瘤病理学情况.结果 C57BL/6j各年龄段及BALB/C持续成瘤率分别为:100%、100%、90%、70%、60%、0%、0%、100%.3周龄C57BL/6j与BALB/C比较RTV、K、Td及存活时间均差异无统计学意义(P＞0.05).结论 在C57BL/6j小鼠体内成功建立人类异种移植瘤模型,3周龄为最适宜接种时间点.

Abstract：

Objective To investigate the feasibility of human neuroblastoma xenograft model in C57BL/6j mice. Methods Three-day, 7-day, 3-week, 4-week, 5-week, 6-week and 7-week age C57BL/6j and 6-week age BALB/C nude mice were subcutaneously inoculated with 1 × 107 cell/ml SK-NSH cells in logarithmic phase, respectively. The tumor generation rate, relative tumor volume ( RTV), relative growth rate (K), relative doubling time (Td), survival time and pathological changes were tested.Results The continuing tumor generation rate of C57BL/6j mice and BALB/C nude mice was 100% (10/10) at the 3rd day, 100% (10/10) at the 7th day, 90% (9/10) at the 3rd week and 70% (7/10) at the 4th week, 60%(6/10) at the 5th week, 0%(0/10) at the 6th week, 0%(0/10) at the 7th week, and 100% (10/10) at the 6th week, respectively. There was no significant difference in RTV, K, Td, and survival time (P＞0.05) between 3-week age C57 BL/6j mice and BALB/C nude mice. Conclusion Human neuroblastoma xenograft models were successfully established the in C57BL/6j mice, and 3-week age was the most appropriate opportunity of vaccination.     

激酶4抑制因子家族基因表达的激活对肠癌细胞增殖侵袭的影响

目的探讨激活激酶4抑制因子（INK4）家族（P15ink4b和P16ink4a／CDKN2）基因表达对结肠癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法应用1×10^-7、5×10^-7及1×10^-6mol／L不同浓度的特异性DNA甲基转移酶抑制剂（5-Aza-CdR）对结肠癌RKO细胞进行去甲基化处理（分别为A、B、C3个实验组）,另设阳性对照组（未经处理的RKO细胞）。Western blot法检测INK4家族基因的蛋白表达：软琼脂克隆细胞集落实验评估体外致瘤情况;Transwell小室实验评估体外迁移情况。将各组RKO细胞注射BALB／c裸鼠（每组10只）,通过称量瘤体的重量和体积评估体内成瘤情况。结果A、B、C3组实验组细胞中P15ink4b和P16ink4a／CDKN2蛋白表达分别为阳性对照组的1．13、1．38、1．92倍和1．11、1．45、2．14倍。体外实验显示,B组和C组的细胞集落数明显少于阳性对照组（P〈0．05）;3组实验组的细胞迁移数均明显少于阳性对照组（P〈0．05）。体内实验显示,相对于阳性对照组,3组实验组裸鼠的抑瘤率分别为2．1％、16．8％和26．2％,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论激活INK4家族基因的表达能有效抑制结肠癌细胞的增殖和迁移。     

切割bcl-2核酶对人胆管癌细胞致瘤性的影响

目的研究切割bcl-2mRNA核酶对人胆管癌细胞致瘤性的影响。方法将合成的切割bcl-2mRNA核酶(ribozyme,RZ)基因定向插入到真核细胞表达载体pDOR-neo内,并用重组后的载体转染人胆管癌细胞QBC939,再将经转染核酶基因的胆管癌细胞5×10     

组织工程肌腱低温贮存的初步研究

目的　研究深低温冻存组织工程肌腱适宜的抗冻剂。方法　选用近交系裸小鼠 6 4只 ,4只为空白对照组 ,6 0只左侧为实验组 ,右侧为对照组。将第 5 4代转化人胚肌腱细胞与碳纤维和聚羟基乙酸编织带体外复合培养构建组织工程肌腱。组织工程肌腱制备完成后在 1、2、3和 4号抗冻剂保护下液氮冻存 2个月。快速复温后植入实验组修复跟腱缺损 ,缺损长度为 5 mm,占裸鼠跟腱总长 6 5 .7% ;对照组组织工程肌腱不经冻存处理。术后 2、4、6、8和 12周后各组取出 ,观察形态学、组织学和免疫组织化学变化 ,并行短串联重复位点检测。结果　实验组体内植入的肌腱细胞形态随时间增加而逐渐恢复正常 ,合成胶原能力逐渐增强 ,12周后仍有肌腱细胞存活并具有分泌 I型胶原功能 ,与对照组差异逐渐减小。经 1号抗冻剂保存的肌腱细胞线粒体空泡减少 ,肌腱细胞排列整齐 ,胶原纤维增粗并连接。结论　 1号抗冻剂可以在深低温下保护组织工程肌腱     

不同压力CO2气腹对胃癌细胞裸鼠移植瘤成瘤能力的影响

目的 通过将不同压力CO2气腹环境下培养的胃癌MKN-45细胞接种于裸鼠皮下,观察CO2气腹对胃癌细胞体内生长增殖的影响.方法 将胃癌MKN-45细胞置于0、10、12和15 mm Hg CO2气腹环境下培养4 h,然后取2×106个细胞接种于裸鼠皮下,3周后处死裸鼠,测量肿瘤的体积和重量,再对各组移植瘤行HE染色和Ki-67免疫组化染色.结果 0、10、12 mm Hg CO2气腹组裸鼠移植瘤成瘤时间、肿瘤体积和重量(分别为7.8 d、7.2 d、7.8 d;1.2 cm3、1.3 cm3、1.3 cm3;1.5 g、1.9 g、1.6 g)与对照组(分别为7.3 d、1.2 cm3、1.4 g)比较差异均无统计学意义(P>0.05),15mm Hg CO2气腹组移植瘤成瘤时间(12.5 d)与对照组比较显著延长,肿瘤体积(0.5 cm3)和重量(0.5 g)与对照组比较显著下降(P<0.05).0、10、12 mm Hg CO2气腹组裸鼠移植瘤细胞内Ki-67抗原阳性率(61.2%、60.5%、63.4%)与对照组(59.6%)比较差异均无统计学意义(P>0.05),15 mm Hg CO2气腹组的阳性率(27.5%)与对照组比较显著下降(P<0.01).结论 临床常用压力CO2气腹对胃癌MKN-45细胞体内生长增殖无显著影响.     

Influence of linomide on local tumor growth and metastasis of the human hormone-resistant prostate cancer cell line PC3 in an orthotopic model

OBJECTIVE:It has been demonstrated that quinoline-3-carboxamide, linomide, inhibited angiogenesis and reduced the volume of tumors grown from human hormone-resistant prostate cancer cell lines after subcutaneous implantation in mice. However, subcutaneous xenograft models may not mimic human conditions due to the absence of prostatic stromal cells at the ectopic site. Therefore, we investigated the influence of linomide on local tumor growth and metastasis of the human hormone-resistant prostate cancer cell line PC-3 in an orthotopic model. METHODS: In 30 athymic nude mice, 5x10(5) PC-3 cells were injected into the dorsal prostate after surgical exposure. After 7 days, group 1 (n = 15 mice) received linomide 100 mg/kg/day in the drinking water (per os). The other 15 mice (group 2) served as controls. All mice were sacrificed after 38 days followed by macroscopical and histological evaluation of local tumor growth and metastasis. Microvessel density was determined by immunohistochemical staining for von Willebrand factor as well as silver staining followed by morphometric analysis in an area of highest vessel density. RESULTS: In the control group, local tumorigenicity and locoregional lymph node metastasis was 100%. The mean weight of the local tumor was 894 mg (395- 1,261 mg). The mean transversal diameter of the lymph node metastases was 4.0 mm (1.5-5. 4 mm). In the treatment group, local tumor growth and lymph node metastasis was 100% with a mean local tumor weight of 869 mg (232-1, 131 mg) and a mean lymph node metastasis diameter of 4.6 mm (1.3-5.9 mm). Microvessel density of the local tumor in the control and treatment group did not differ significantly. CONCLUSION: Contrary to the results reported in subcutaneous animal models, linomide per os has no effect on net tumor growth and metastasis after orthotopic implantation of the human hormone-resistant prostate cancer cell line PC-3 in nude mice.