HSV1-TK基因转导人肺腺癌细胞A549体内外表达的研究

目的:观察TK基因转导A549细胞后在体外和体内的表达.方法:将已构建的逆转录病毒表达载体PLXSN-TK用电穿孔法转化A549细胞,原位杂交检测TKmRNA在A549-TK细胞和由它接种裸鼠形成肿瘤组织中的表达.斑点杂交检测外源基因在细胞中整合.并体外观察A549-TK细胞对GCV的敏感性.结果:原位杂交表明A549-TK细胞及由其所形成的肿瘤组织中TKmRNA表达阳性,对照细胞无表达,斑点杂交证明A549-TK细胞中有TK基因整合.A549-TK细胞对GCV的敏感性是亲代细胞的46倍.结论:TK基因在A549-TK细胞中表达阳性,转基因细胞对GCV敏感.     

HSV1—TK基因转导入肺腺癌细胞A549体内外表达的研究

目的：观察ＴＫ基因转导Ａ４９细胞后在体外和体内的表达。方法：将已构建的逆转录病毒表达载体ＰＬＸＳＮ－ＴＫ用电穿孔转化Ａ５４９细胞，原位杂交检测ＴＫｍＲＮＡ在Ａ５４９－ＴＫ细胞和由它接种裸鼠形成肿瘤组织中的表达。斑点杂交检测外泊基因在细胞中整合，并体外观察Ａ５４９－ＴＫ细胞对ＧＣＶ的敏感性。结果：原位杂交表明Ａ５４９－ＴＫ细胞及由其所形成的肿瘤组织中ＴＫｍＲＮＡ表达阳性，对照细胞无表达，斑点杂交证明     

HSV1-TK/GCV系统对人肺腺癌细胞A549生物学特性的影响

目的　观察转TK基因肺癌细胞对丙氧鸟苷 (GCV)的敏感性及TK GCV系统杀灭肿瘤细胞机制。方法　观察转TK基因、转空载体A5 49细胞 (下分别简称A5 49 TK、A5 49 pLXSN)和A5 49细胞形态学改变、生长增殖特性。GCV对 3种细胞生长抑制 (MTT法 )。电镜、流式细胞仪观察A5 49 TK、A5 49细胞经 5 0μmol LGCV作用 3d后细胞凋亡。 结果　转基因细胞变为不规则 ,呈多角型 ,透亮度下降 ,体外增殖能力下降 ,A5 49 TK ,A5 49 pLXSN ,A5 493种细胞倍增时间分别为 42 .3 5、41.75、3 6.18h。依据IC5 0 ,A5 49 TK细胞对GCV敏感性比A5 49细胞提高 46倍 ,电镜发现A5 49 TK细胞有凋亡小体 ,核呈半月征等 ,流式细胞仪发现A5 49 TK、A5 49细胞亚G0 G1 期分别为 ( 12 .2 1± 1.76) %、( 1.3 2± 0 .47) % ,两者比较P <0 .0 1。结论　A5 49 TK细胞获得了对GCV敏感性 ,TK GCV杀灭肿瘤细胞与诱导凋亡有关。     

HSV1—TK／GCV系统对人肺腺癌细胞S549生物学特性的影响

目的 观察转ＴＫ基因肺癌细胞对丙氧鸟苷（ＧＣＶ）的敏感性及ＴＫ／ＧＣＶ系统杀灭肿瘤机制。方法 观察转ＴＫ基因，转空载体Ａ５４９细胞（下分别简称Ａ５４９－ＴＫ、Ａ５４９－ｐＬＸＳＮ）和Ａ５４９细胞形态学改变、生长增殖特性。ＧＣＶ对３种细胞生长抑制（ＭＴＴ法）。电镜、流式细胞仪观察Ａ５４９－ＴＫ、Ａ５４９细胞经５０μｍｏｌ／Ｌ ＧＣＶ作用３ｄ后细胞凋亡。结果 转基因细胞变为不规则，呈多角型，透亮度下降     

脂质体介导E1A—TK基因转染人肺腺癌细胞A549体外研究

目的用脂质体转染真核表达质粒PcDNA3E1A-TK入人肺腺癌细胞A549,观察丙氧鸟苷(GCV)、X射线及二者联合对转染细胞的体外杀伤作用。方法用阳离子脂质体介导真核表达质粒PcDNA3E1A-TK转染人肺腺癌细胞A549,PCR、RT-PCR方法分别检测转染细胞中E1A-TK基因DNA整合、mRNA表达。MTT法测不同浓度GCV、不同剂量X射线及一定剂量X线照射后再给一定量GCV对转染细胞的生长抑制率。结果PCR、RT-PCR结果表明转染细胞有E1A-TK基因整合、mRNA表达。根据IC50,转染细胞对GCV、X射线的敏感性分别比亲代细胞提高111.3倍和2.9倍,在作用相同时间后,GCV+X线照射治疗对转染细胞的生长抑制作用比单纯GCV或X线治疗明显增强(P<0.01)。结论脂质体介导外源基因E1A-TK成功转入人肺腺癌A549细胞并获得表达;转染细胞获得了对GCV和X线的敏感性,GCV和X线对转染细胞有协同杀伤作用。     

ACV治疗转TK基因人肺腺癌细胞A549裸鼠皮下成瘤的实验研究

目的 观察活体内转ＴＫ基因肺腺癌细胞对ＡＣＶ（无环鸟苷）的敏感性。方法 转ＴＫ基因肺腺癌细胞Ａ５４９－ＴＫ、亲代细胞Ａ５４９分别接种于裸鼠腹部皮下左右侧成瘤后,给予腹腔注射ＡＣＶ治疗２周,测量治疗前后肿瘤大小,并做病理观察。结果 Ａ５４９－ＴＫ细胞接种的肿瘤治疗前后体积增大不明显（Ｐ〉０．０５）;Ａ５４９细胞接种的肿瘤治疗后体积明显大于治疗前,光镜发现Ａ５４９－ＴＫ细胞接种的肿瘤有局部坏死,胞核裂     

放疗联合TK/GCV自杀基因系统对肺腺癌细胞凋亡活性的影响

目的研究放疗联合高效表达的胸苷激酶/丙氧鸟苷(TK/GCV)自杀基因系统对人肺腺癌细胞株A549细胞凋亡活性的影响,探寻肺腺癌放化疗联合治疗的新途径。方法利用前期研究成功构建的可调控自杀基因TK高效表达的pfos-iNOS/TK治疗载体转染A549细胞筛选阳性克隆。将阳性转染细胞(转染治疗载体组)和未转染的对照细胞(未转染组)分别给予2 Gy的X射线照射和10μmol/L、1000μmol/L的GCV。荧光显微镜观察细胞凋亡情况,检测各组细胞的凋亡率。结果给予10μmol/L、1000μmol/L的GCV作用后,治疗载体组凋亡率高于未转染(P<0.05);X射线照射联合GCV作用后,转染治疗载体组大量细胞发生凋亡,而未转染组仅有少量细胞发生凋亡(P<0.01)。结论放疗联合高效表达的TK/GCV自杀基因系统显著提高了对肺腺癌细胞的杀伤作用,为肺癌治疗带来了新的希望。     

不同转移潜能人肺癌细胞系KAI1基因的表达

目的：探讨ＫＡＩ１基因与人肺癌细胞系转移潜能的关系。方法：利用逆转录－ＰＣＲ和Ｎｏｒｔｈｅｍ ｂｌｏｔ杂交法分析不同转移潜能人肺癌细胞系中ＫＡＩ１ ｍＲＮＡ的表达,并用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测与突变的关系。结果：在高转移潜能细胞系ＰＧ中ＫＡＩ１ ｍＲＮＡ表达降低,在无转移潜能的ＰＡａ细胞中ＫＡＩ１的表达量比ＰＧ细胞高１０倍以上（积分光密度比值分别为０．７３１和０．０     

p73基因在肺腺癌组织中的表达

目的：p73基因在肺腺癌与癌旁正常组织中表达情况及突变的研究。方法：采用竞争性定量RT－PCR和PCR－SSCP方法检测62例肺腺癌及其癌旁非癌组织中p73基因突变情况。结果：（1）通过定量PCR分析，肺腺癌组织中p73的表达量与正常对照组表达量存在显差异（P＜0．01）。（2）在21例中高分化标本中检出9例呈中高表达，在41例低分化标本中检出32例呈中高表达，两之间存在显差异（P＜0．01）；（3）p73基因表达程度在29例Ⅰ-Ⅱ期标本中检出14例呈中高表达，33例Ⅲ-Ⅳ期标本中检出18例呈中高表达，两之间无显差异（P＞0．05）。（4）PCR－SSCP未检测出基因突变。结论：p73基因mRNA的表达可能与肺腺癌发生，发展和分化程度有关，与临床分期无关。     

ndr2基因在肺腺癌细胞GLC-82中的诱导表达

目的 构建蜕皮素诱导的抑癌基因ndr2哺乳动物真核表达载体（pIND-ndr2)，转染肺腺癌细胞GLC－82，观察ndr2基因表达，为进一步研究ndr2的生物学功能打下基础。方法 以RT－PCR方法确定正常人肺组织和肺腺癌GLC－82细胞ndr2的表达高低。PCR方法扩增ndr2，以BamHI EcoRI双酶切连接入pUC19载体中，测序正确后，插入到蜕皮素诱导的真核表达载体pIND中。连有ndr2基因的载体（pIND-ndr2)用指质体方法转染到培养的肺腺癌细胞GLC－82中。经G418和zeocin双抗生素筛选后，挑取单克隆进行培养，用蜕皮素诱导ndr2表达，用RT－PCR，western印迹和免疫组织化学方法验证获得表达的细胞株。结果 PCR的方法扩增获得大小约1200bp的片段，连接入预先插入HA－tag的pUC19载体的ndr2基因经HindⅢ EcoRI酶切后，构建到真核表达载体pIND中，酶切鉴定后证明连接片段正确。通过双载体转染和双抗生素筛选后，培养的细胞经诱导后检测到实验组ndr2的高表达，而对照组和未诱导的实验组ndr2表达均较低。结论 ndr2基因成功转染培养的肺腺癌GLC－82细胞，建立了ndr2的可诱导表达的细胞系。     

人金属硫蛋白1H基因对肺腺癌细胞A549耐药性的影响

目的：探讨金属硫蛋白1H（metallothionein 1H,MT1H）基因对人肺腺癌A549细胞耐药性的影响．方法：构建真核表达载体pcDNA3．1（-）-MT1H,利用脂质体介导将其转染肺腺癌A549细胞,G418筛选阳性克隆．分别以RT—PCR和Western方法检测MTIH mRNA和蛋白表达情况,MTT法检测细胞对顺铂的药物敏感性;流式细胞仪（FCM）检测顺铂诱导细胞凋亡率．结果：转染pcDNA3．1（-）-MT1H的细胞,其MT1H mRNA和蛋白表达水平显著高于亲本细胞及转染空载体细胞,细胞对顺铂药物敏感性明显下降,顺铂诱导的凋亡率明显降低．结论：MT1H能促进A549细胞耐药,可能和降低顺铂诱导细胞凋亡有关．     

人肺腺癌A549细胞系多重抗药性的形成

本文采用阿霉素逐步诱导人肺腺癌Ａ５４９细胞系，在体外持续培养６个月，获得了具有抗药性的Ａ５４９／Ｒ２细胞，该细胞能在０．２μｇ／ｍｌ ＡＤＭ下持续增殖。通过测定抗癌药物作用的５０％抑制浓度发现，Ａ５４９／Ｒ２细胞对ＡＤＭ的抗药性为Ａ５４９的７－１１８倍，同时对表阿霉素、长春新碱、足叶乙甙（ＶＰ－１６）也具有显著抗药性，对氮芥、丝裂霉素和卡铂低度抗药、对５－氟脲嘧啶、氨甲喋呤和平阳霉素无抗药性。Ａ５     

维甲酸诱导的人肺腺癌细胞促分化基因的克隆

肿瘤分子生物学研究揭示,正常细胞发生恶性转化时,有显性癌基因激活和抑癌基因失活,由于这些遗传改变破坏了细胞增殖与分化平衡的调控机制,导致癌症的发生和演进。大量基础和临床研究资料还表明,肿瘤细胞并没有完全丢失控制正常生长     

肺腺癌A549细胞中Nestin的表达

目的探讨nestin在肺腺癌A549细胞中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及nestin表达.结果四个肺癌标记物中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性,nestin在肺腺癌A549细胞中部分细胞表达.结论肺癌细胞中存在部分神经干细胞的标记物nestin.     

鬼臼毒衍生物诱导人肺腺癌A549细胞凋亡

目的: 研究鬼臼素衍生物CN-2对人肺腺癌细胞A549的凋亡诱导作用,并对其分子机制进行初步探讨. 方法: 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、电子显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳和细胞周期分析法检测A549细胞凋亡;采用流式细胞术(FCM)测定细胞Bcl-2, Fas及caspase3蛋白表达水平. 结果: CN-2对A549细胞增殖具有明显的剂量和时间依赖的抑制作用,24, 48, 72 h IC50分别为108.20, 41.28, 20.67 mg/L,电镜观察呈现典型的凋亡形态改变;DNA电泳可见明显的梯状条带;细胞周期分析显示S期细胞数明显增多,出现S/G2期阻滞;CN-2能显著降低Bcl-2蛋白表达(P＜0.05);Fas蛋白表达水平未见明显变化. 结论: CN-2通过诱导A549细胞发生S/G2期阻滞而抑制其增殖,其机制可能与下调Bcl-2表达及阻滞细胞周期有关.     

STAT3、CA125在人肺腺癌细胞A549中的表达及意义

目的：探讨信号转导和转录激活因子3（STAT3）对肺腺癌的诊断价值。方法：采用免疫组织化学PV二步法检测人肺腺癌细胞A549和正常人胚肺细胞MRC－5中STAT3、CA125蛋白表达,分析在人肺腺癌细胞A549中STAT3与CA125表达的相关性。结果：STAT3、CA125在人肺腺癌细胞A549中的阳性表达水平均明显高于正常人胚肺细胞MRC-5（P〈0．01）,且在人肺腺癌细胞．8549中STAT3与临床上常用的肺肿瘤标志物CA125的表达均呈正相关。结论：STAT3有望成为一种新的肺肿瘤标志物推荐临床使用。     

CUGBP1在人肺腺癌组织和细胞中的表达

目的比较分析CUGBP1基因在人肺腺癌组织和细胞内表达的特点,及其CUGBP1表达水平与癌细胞增殖活性的关系。方法以人肺腺癌组织标本和人肺腺癌细胞株A549为研究对象,应用免疫组化、WesternBlot、RT—PCR方法检测人肺腺癌组织、细胞内CUGBP1蛋白和基因的表达,并分析其特点。结果CUGBP1基因主要在人肺腺癌组织的细胞核呈强阳性表达,在所有类型腺癌组织中80％以上的癌巢细胞CUGBPl基因呈阳性表达,阳性表达率明显高于正常对照组,差异有显著性（t=100．01,P＜0．001）。95％以上的A549细胞CUGBP1表达呈阳性,且CUGBP1表达量明显低于LPS组,差异有显著性（t=407．53,P＜0．001）。结论CUGBPl基因在人肺腺癌癌巢细胞和A549细胞的胞核内高表达;炎性刺激可增强人肺腺癌细胞株A549的增殖和CUGBPl基因表达;CUGBP1基因可能成为人肺腺癌的早期诊断和增殖状态判断的新指标。     

人肺腺癌A549细胞系SP细胞亚群的分选及初步探讨

目的：探讨一种简单有效的分离肺癌干细胞的方法。方法：用免疫组化方法检测人肺腺癌A549细胞系中ABCG2蛋白的表达情况;用流式细胞学方法分选A549细胞系中side population cells（SP细胞）及非SP细胞亚群,并对该两亚群细胞的分化功能进行检测;用RT—PCR方法检测两亚群细胞ABCG2的表达。结果：免疫组化方法检测A549细胞系中ABCG2蛋白的阳性表达率为2％。流式方法成功分选得到SP细胞及非SP细胞亚群,其中SP细胞含量约为A549活细胞总量的1．09％,经拮抗剂Verapamil处理后下降为0．20％,两亚群细胞经培养后重新上机检测,发现SP细胞亚群可产生SP细胞及非SP两种细胞,而非SP细胞只能产生非SP细胞。SP细胞表达ABCG2,非SP细胞则不表达。结论：人肺腺癌A549细胞系SP亚群细胞富集了肺癌干细胞。通过流式细胞仪分选肺腺癌SP细胞亚群是分离肺腺癌干细胞的有效方法。     

龙葵氯仿提取物对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响

目的：观察龙葵氯仿提取物对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响