骨胶原的制备及作为骨形成蛋白载体修复骨缺损的研究

在提取BMP的过程中,从废去的中间产物骨基质胶中同时提取胶原作为BMP的载体用于修复兔颅骨缺损.40只大白兔随机分为A、B两组,在兔颅顶骨两侧对称各制造直径为1cm的圆形骨缺损,A组兔颅顶骨缺损左侧植入骨胶原/BMP,右侧植入单纯骨胶原,B组兔左侧植入BMP,右侧空白对照,组织学检查显示:植入后7夭,骨胶原/BMP组即有软骨细胞岛出现,旦在各期的成骨面积均大于单纯BMP组和胶原组.另外,移植材料内的灰量测定结果及X线摄片结果也表明,骨胶原/BMP的成骨量明显大于单纯骨胶原组和BMP组(P<0.01),认为骨胶原作为BMP的载体有更多的优越性.     

复合骨形态发生蛋白胎儿骨修复长骨缺损的实验研究

寻找满意的骨形态发生蛋白（ＢＭＰ）的载体一直是应用ＢＭＰ修复骨缺损研究中的一个重要课题，为探讨胎儿骨（ＦＢ）能否成为ＢＭＰ载体，制备了复合ＢＭＰ胎儿骨（ＢＭＰ／ＦＢ），将其植入兔桡骨中段１５ｍｍ人工缺损处，以单纯ＦＢ植入、异体骨（ＡＬＢ）植入、空白作为对照，通过Ｘ线摄片，光镜观察，电子探针钙磷元素测定等方法了解各组骨缺损修复速度和愈合程度。结果发现ＢＭＰ／ＦＢ植入侧４周时骨缺损处有大量间充质细胞聚集，８周形成骨小梁，ＦＢ基本被吸收，１２周出现部分板层骨，钙磷值达到正常桡骨皮质骨水平，１６周骨细胞成熟，髓腔再通，外观塑形较好，在不同时间点骨缺损修复程度，ＢＭＰ／ＦＢ组明显优于ＦＢ组，ＦＢ组优于ＡＬＢ组，空白组骨缺损则被纤维组织，脂肪组织等填充。实验证明ＦＢ是一种良好的ＢＭＰ载体。     

多孔β—TCP／BMP复合人工骨的研制和动物体内的相关研究

多数人工骨缺损修复材料无骨诱导活性，为使人工植骨材料具有骨诱导活性并可在体内降解，本研究采用可降解陶瓷β－磷酸三钙（β－ＴＣＰ）与骨形成蛋白（ＢＭＰ）复合形成具有骨诱导能力的人工骨。将β－ＴＣＰ／ＢＭＰ、单纯ＴＣＰ、羟基磷灰石（ＨＡ）和ＴＣＰ／ＨＡ分别植入１６８只小鼠股部肌肉内，在２４、７２小时，１、２、４、８周取材，作大体观察、组织形态学观察、扫描电镜观察及碱性磷酸酶（ＡＬＰ）检测。另将上述材料植入５５只兔桡骨１．５ｃｍ缺损中，分别在２、４、８、１２、１６周取材，作大体、Ｘ线、组织形态学观察及计算机图像分析。研究结果显示：将β－ＴＣＰ／ＢＭＰ植入小鼠肌袋后１周软骨生成，４周有造血骨髓的板层骨生成。ＡＬＰ检测１、２周水平最高。植入材料与骨组织之间无纤维组织间隔。在兔桡骨缺损修复的研究中发现，β－ＴＣＰ／ＢＭＰ的骨缺损修复作用最强，１６周植入材料的降解达５３％，成骨量亦最多。研究结果表明：β－ＴＣＰ／ＢＭＰ是一种可降解、具有较强骨诱导能力、生物相容性较好的人工骨。     

骨形态发生蛋白复合纤维蛋白载体修复骨缺损的实验研究

目的：探讨以纤维蛋白作为骨形态发生蛋白的载本修复节段性骨缺损。材料和方法：于３６只新西兰白兔两侧桡骨干处造成１．５ｃｍ缺损，采用四种方法进行处理：Ａ组，植入２５ｍｇ ＢＭＰ与人纤维蛋白制成的复合物；Ｂ组，植入单纯２５ｍｇＢＭＰ：Ｃ组，植入单纯纤维蛋白；Ｄ组，留作空白对照，术后不同时间进行放射学，组织学和放射性核素显像检查。结果：Ａ组骨缺损区在成骨活跃程度，骨再生量和再生髓腔结构等方面均显著优于Ｂ组     

重组合异种骨的实验研究与临床应用

本文作者以牛ＢＭＰ与同源松质骨组合研制成重组合异种骨。将３６只新西兰家兔桡骨制成１５ｍｍ的骨缺损。Ａ组左侧植入重组合异种骨８０ｍｇ，左侧植入单纯松质骨。Ｂ组左侧植入重组合异种骨和自体红骨髓左侧植入生物陶瓷颗粒。术后１６周内，经放射学、组织学、四环素荧光双标记及免疫光检测。结果提示重组合异种骨的良好的填充修复骨缺损能力。临床应用３８例，其中随防６个月以上者３０例。除１例外，其余２９例均获得满意的骨愈     

应用胃蛋白酶消化的牛腱胶原作为骨形态发生蛋白的缓释载体（动物…

胃蛋白酶消化牛腱胶原的提取纯化以及作为ＢＭＰ的载体复合后注射入小鼠肌肉，术后７天组织学检查可见异位成骨，并有新生血管，胶原部分吸收。２８天时软骨被吸收并被有红骨髓的正常骨组织替代，大部分胶原被吸收，未见排斥反应，钙含量测定显示成骨量大于单纯植入ＢＭＰ组。单纯注射胶原组未见成骨。实验结果表明牛腿胶原经胃蛋白酶消化等提取纯化处理后，抗原性很弱，对部分纯化的ＢＭＰ有助溶助悬作用，吸收快，利于成骨，是ＢＭ     

应用胃蛋白酶消化的牛腱胶原作为骨形态发生蛋白的缓释载体（动物实验）

胃蛋白酶消化牛腱胶原的提取纯化以及作为ＢＭＰ的载体复合后注射入小鼠肌肉。术后７天组织学检查可见异位成骨，并有新生血管，胶原部分吸收。２８天时软骨被吸收并被有红骨髓的正常骨组织替代，大部分胶原被吸收。未见排斥反应。钙含量测定显示成骨量大于单纯植入ＢＭＰ组。单纯注射胶原组未见成骨。实验结果表明牛腱胶原经胃蛋白酶消化等提取纯化处理后，抗原性很弱，对部分纯化的ＢＭＰ有助溶助悬作用，吸收快，利于成骨，是ＢＭＰ的一种良好缓释载体。该种胶原与ＢＭＰ的复合物具有较大临床价值。     

纯化天然骨唾液蛋白的体内成骨活性

目的 评价骨唾液蛋白（ｂｏｎｅ ｓｉａｌｐｒｏｔｅｉｎ,ＢＳＰ）在大 本内的成骨活性。方法 应用从牛骨中提取纯化的ＢＳＰ与经盐酸胍处理诱导活性的不溶性骨基质（ｉｎｓｏｌｕｂｌｅ ｂｏｎｅ ｍｔｒｉｘ,ＩＢＭ）或提纯的１型胶原形成共价交联的复合物,将ＢＳＰ－ＩＢＭ复合物和ＢＳＰ－１型胶原复合物分别植入直径８ｍｍ的大鼠颅骨骨缺损和胸部皮下组织内。不含ＢＳＰ的ＩＢＭ或１型胶原也分别植入上述部位作为对照。     

珊瑚复合人工骨骨诱导活性的实验研究

目的弥补单纯珊瑚无骨诱导活性、骨修复能力弱等缺陷,为临床提供理想的骨移植替代材料。方法将珊瑚与胶原和重组人骨形成蛋白２（ｒｈＢＭＰ２）复合,制备珊瑚／胶原／ｒｈＢＭＰ２复合人工骨,将其植入大鼠背部肌肉陷窝,以珊瑚／胶原和珊瑚／ｒｈＢＭＰ２复合人工骨植入作对照;取材后通过组织学方法和图像分析评价其骨诱导活性。结果珊瑚／胶原／ｒｈＢＭＰ２植入后１周,在局部诱导出软骨细胞分化和软骨基质形成;植入后４周,形成含骨髓的板层骨;诱导成骨的量有明显的ｒｈＢＭＰ２剂量依赖性（Ｐ＜０．０１）;而珊瑚／胶原和珊瑚／ｒｈＢＭＰ２植入区均无骨或软骨形成。结论珊瑚／胶原／ｒｈＢＭＰ２复合人工骨具有良好的异位诱导成骨活性,是一种较理想的骨移植替代材料。     

复合rhBMP_2的异种骨(rhBMP_2/BCB)与骨膜联合移植修复兔桡骨节段性骨缺损

目的　探讨复合基因重组人ＢＭＰ２ 的异种骨（ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ） 移植及其与骨膜联合移植修复节段性骨缺损的效果。方法　将ｒｈＢＭＰ２ 与去抗原牛松质骨载体（ＢＣＢ）复合,制成ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ;并采用兔桡骨干１．５ ｃｍ 缺损的动物模型,通过Ｘ线、生物力学、骨密度、组织学等检测手段,比较单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植、ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 与带血运骨膜联合移植及ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 与游离骨膜联合移植修复节段性骨缺损的疗效。结果　（１） 单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ 移植,可在１６ 周使节段性骨缺损基本修复,其修复机制与过程和重组异种骨相似;（２）ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与带血运骨膜联合移植,８ 周即可修复骨缺损,其修复机制与骨折修复相仿,包括膜内成骨和软骨成骨两种机制;（３）ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与游离骨膜联合移植,在骨缺损修复早期（ ≤１２ 周） ,其成骨速度及成骨质与量均优于单纯ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ移植,约在１２ 周使骨缺损基本修复。结论　上述三种方法均可有效地修复节段性骨缺损,但以ｒｈＢＭＰ２／ＢＣＢ与带血运骨膜联合移植较为理想。该方法同时具有良好的骨生成、骨传导和骨诱导作用。     

骨形态蛋白与骨基质明胶复合修复骨缺损的实验研究

通过骨形态蛋白（ＢＭＰ）与其前身物质骨基质明胶（ＢＭＧ）复合，修复家兔桡骨缺损，同时以ＢＭＰ与羟基磷灰石（ＨＡ）复合作实验对照。结果发现：ＢＭＰ／ＢＭＧ组第４周即在骨缺损区出现纤维性骨痂，第８周可见大量的骨小梁形成，第１２周ＢＭＰ完全被吸收，为新生的骨组织所代替，第１６周出现髓腔再通现象。而ＢＭＰ／ＨＡ复合组，虽然在第４、８周也有纤维性骨痂形成，但ＨＡ不被吸收；第１２、１６周与第８周相似，无髓腔再     

纤维蛋白用作BMP载体的研究

目的：将纤维蛋白用作ＢＭＰ（骨形态发生蛋白）的载体材料。方法：用５ｍｇ ＢＭＰ分别与３种不同浓度的纤维蛋白制成复合物，植入小鼠肌囊后不同时间进行组织学观察、测定碱性磷酸酶活性和钙含量等。结果：纤维蛋白浓度为１２０ｍｇ／ｍｌ的复合物具有良好的骨诱导活性，成骨量是单纯５ｍｇ ＢＭＰ的两倍。结论：纤维蛋白是理想的ＢＭＰ载体材料，复合物可望应用于临床骨缺损的修复。     

诱导性人工骨膜的研制及实验研究

目的　本研究研制了一种诱导性人工骨膜。方法　用猪真皮提取纯化胶原,盐析法制备胶原膜,并用此吸附ＢＭＰ,制备成胶原－ＢＭＰ人工骨膜。用大鼠桡骨３ｍｍ长骨缺损作为骨折模型。设空白、单纯胶原膜、胶原－ＢＭＰ膜包绕骨折段以及新鲜同种异体植骨共４组。术后０．５、１、２和３个月分批处死各组大鼠数只,处死前２天每只大鼠腹腔内注射钙黄绿素８０ｍｇ／ｋｇ。处死后分别行Ｘ线和软Ｘ线摄片,血清ＢＧＰ测定以及荧光显微镜观察。结果　胶原－ＢＭＰ人工骨膜组的上述多项检测指标均表明其成骨效能明显优于其他各组。结论　作者认为该组成骨效果优良的原因是由于胶原膜吸附了ＢＭＰ,同时具有骨诱导和骨引导的两种成骨作用,而仅胶原膜包绕骨折段的单纯骨引导效果并不理想。     

BMP／DBM修复关节软骨缺损的实验研究

作者旨在对骨形态生成蛋白／脱钙骨基质（ＢＭＰ／ＤＢＭ）复合体在关节软骨缺损修复中的作用进行探讨。在１６只雄性兔双侧股骨髁间凹各做一直径４ｍｍ，深２．５ｍｍ的全层关节软骨缺损。１６个右膝缺损区植入ＢＭＰ／ＤＢＭ，８个左膝缺损内单独植入ＤＢＭ，另外８个左膝为空白。术后１２周处死动物，取材，石蜡包埋，连续切片，做苏木素一伊红，甲苯胺蓝及ｓａｆｒａｎｉｎ－Ｏ染色。结果显示，在ＢＭＰ／ＤＢＭ组，植入物完全被吸收并被新生软骨替代，１４例（１４／１６）愈合，且１２例ｓａｆｒａｎｉｎ－Ｏ阳染，新生软骨厚度和特征与邻近正常软骨相似。ＤＢＭ组只有２例（２／８）愈合，ｓａｆｒａｎｉｎ－Ｏ染色全部阴性。空白组未见新生软骨。结果说明，ＢＭＰ／ＤＢＭ能在关节腔内诱导软骨再生，并能以透明软骨修复全层关节软骨缺损。     

骨缺损中内源性BMP的分布及其作用

了解内源性ＢＭＰ的浓度及分布，对提高ＢＭＰ在骨再生中的作用有帮助。本实验在兔桡骨１０ｍｍ骨缺损模型上，利用ＢＭＰ免疫组化技术及真彩色计算机定量分析系统观察了内源性ＢＭＰ在骨缺损中的分布及对骨再生的作用。术后３日，骨端可见“空穴”，骨缺损间血肿ＢＭＰ染色阳性。来自骨内外膜的间质细胞，成软骨细胞。成骨细胞ＢＭＰ阳性。ＢＭＰ分布定量研究表明，骨缺损区存在ＢＭＰ浓度梯度，即距骨端愈远ＢＭＰ量渐渐下降。术后１周，ＢＭＰ值最大。提示内源性ＢＭＰ有骨端坏死，吸收及间质细胞分泌两种来源。据此，作者提出了内源性ＢＭＰ有效量的概念。提高内源性ＢＭＰ浓度，改善其分布，将是骨缺损治疗的有效途径。     

BMP促进去神经后废用性骨质疏松骨折愈合的实验研究

为了观察ＢＭＰ对去神经后废用性骨质疏松性骨折愈合的作用，作考选用６月龄健康标准大鼠，严格配对分组，切除双侧坐骨神经后３周证实有明显骨质疏松。然后在腔骨人工骨折骨缺损处分别植入酸解胶状鼠尾胶原（对照）及ＢＭＰ与胶原混和物（实验组）。通过血清钙浓度、碱性磷酸酶活性及骨组织形态计量学多项参数的观察，显示ＢＭＰ对去神经后废用性骨质疏松骨折愈合有明显促进作用（Ｐ＜０．０５～０．０１）     

聚乳酸作为骨形态发生蛋白载体修复骨缺损的实验研究

目的 探讨聚乳酸（ｐｏｌｙｌｄａｃ ａｃｉｄ,ＰＬＡ）作为骨形态发生蛋白（ｂｏｎ ｅ ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ ｐｒｏ－ｔｅｉｎ,ＢＭＰ）载体的可行性及观察其诱导成骨能力。方法 手术造成日本大耳白兔左尺骨中上段１２ｍｍ骨缺损实验模型。随机分为实验。对照及空白组,实验组植入以ＰＬＡ为载体的ＢＭＰ１０ｍｇ、对照组植入以牛松质骨基质为载体的ＢＭＰ１０ｍｇ、空白组不做任何处理,术后摄Ｘ线片观察各组不同时相骨缺损修复情况,并于术后第４、８、１２周观察各组缺损内组织学变化。图像分析骨小梁的生成量。结果 实验修复情况优于对照组,无论是骨连接发生时间还是骨成熟时间,实验组均较对照组提前２周左右,同期骨生成量也明显多于对照组,而空白组缺损内主要形成纤维组织。结论 ＰＬＡ可以作为ＢＭＰ的载体修复骨缺损,它比异种松质骨基质载体的成骨效     

引导性骨再生中内源性BMP的作用

为探讨引导性骨再生中，内源性ＢＭＰ对骨再生过程的作用而进行以下研究。手术的方法造成兔桡骨中段１０ｍｍ缺损。实验侧用硅胶膜管连结骨缺损，作为引导性骨再生模型。另一侧作为对照。１５只新西兰兔分为三组，分别于术后３，７及１４日处死，标本行组织学及ＢＭＰ免疫组化检查。切片上，距骨端１，２，５ｍｍ处设置ａ，ｂ，ｃ线。利用真彩色计算机图像分析系统在三条线上选点测量ＢＭＰ值。实验侧骨缺损区内有一个完整的血肿结构，其ＢＭＰ染色阳性，膜管外组织ＢＭＰ染色几乎完全阴性。对照侧ＢＭＰ弥散于骨缺损周围的肌肉组织中。１周时，实验侧及对照侧均可见新骨形成。２周时，对照侧已停止，实验侧仍可见持续骨再生。ＢＭＰ定量分析中，实验侧三条带的ＢＭＰ值大部分高于对照侧。实验侧和对照侧ｂ，ｃ带之间存在梯度差，但实验侧的差值小于对照侧。这不仅证明了Ｈｕｌｔｈ关于骨折间隙存在ＢＭＰ浓度梯度的假说，也显示膜在引导性骨再生中可将内源性ＢＭＰ局限于骨缺损区内，提高内源性ＢＭＰ浓度并改善其分布的作用。这有利于骨再生，可能是引导性骨再生机理之一。对照侧ＢＭＰ值１周时最高，而实验侧在２周时仍呈持续升高。这说明，内源性ＢＭＰ有两个来源：骨端吸收释放及骨形成细胞合成。     

老年男性甲状旁腺激素与骨密度的关系

本文的目的在于探讨在健康老年人中，甲状旁腺素（ＰＴＨ），钙（Ｃａ）、磷（Ｐ）、镁（Ｍｇ）、碱性磷酸酶（ＡＫＰ）、肌酐（Ｃｒ）与骨密度（ＢＭＤ）之间的关系。选择７０名健康老人，抽血查Ｃ－ＰＴＨ、Ｃａ、Ｐ、Ｍｇ、ＡＫＰ和Ｃｒ的水平。并在左侧桡骨远端１／３处，用单能光子骨密度测定仪测定ＢＭＤ。以正常参考值为标准（０．６２９７～０．７６９５ｇ／ｃｍ２），将对象分为ＢＭＤ降低组和ＢＭＤ正常组。结果显示：（１）在ＢＭＤ正常组（ＢＭＤ值为０．７３±０．０７ｇ／ｃｍ２）中，ＰＴＨ的水平为１５５．３６±９３．４５（ｎｇ／Ｌ），在ＢＭＤ降低组（ＢＭＤ值为０．５７±０．０４ｇ／ｃｍ２）中，ＰＴＨ的水平为２１４．１１±９１．９３（ｎｇ／Ｌ）。二组间差异有统计学意义。（２）在ＢＭＤ正常组中，血清钙的水平为２．１２±０．２２（ｍｍｏｌ／Ｌ），在ＢＭＤ降低组中，血清钙的水平为２．２３±０．１９（ｍｍｏｌ／Ｌ）。两组相比，差别有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。实验结果提示：在老年男性与年龄有关的骨密度降低中，ＰＴＨ的分泌起到重要作用。     

脱蛋白骨、骨形态发生蛋白和三种生长因子重组合人工骨成骨能力的比较研究

目的　比较三种重组合人工骨的成骨能力。方法　在５０ 只兔的１００ 个颅骨缺损动物模型中分别植入：①牛脱蛋白骨（ｂ Ｄ Ｐ Ｂ）／牛骨形态发生蛋白（ｂ Ｂ Ｍ Ｐ）／肿瘤坏死因子α（ Ｔ Ｎ Ｆα）;②ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／碱性成纤维细胞生长因子（ｂ Ｆ Ｇ Ｆ）;③ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／表皮细胞生长因子（ Ｅ Ｇ Ｆ）;④ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ。植入后１、２、４、６ 及８ 周行组织学检查及 Ｘ 线摄片; 植入后１０ 及４２ 天行　３５ Ｓ和４５ Ｃａ 液闪计数及灰重测定。结果　成骨能力：ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／ Ｔ Ｎ Ｆα＞ ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／ｂ Ｆ Ｇ Ｆ（ Ｐ＜ ０．０１） ＞ ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／ Ｅ Ｇ Ｆ（ Ｐ＜ ０．０１）;ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／ Ｅ Ｇ Ｆ 与 ｂ Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ 无显著性差异（ Ｐ＞ ０．０５）。结论　 Ｔ Ｎ Ｆα与 Ｂ Ｍ Ｐ及载体复合后,在体内对骨修复产生明显的促进作用,在载体／骨诱导因子／生长因子的重组合人工骨模式中, Ｄ Ｐ Ｂ／ｂ Ｂ Ｍ Ｐ／ Ｔ Ｎ Ｆα是一种有价值的骨移植材料。