改良神经髓鞘的依来铬氰R染色法

为研究周围神经髓鞘被覆状态 ,我们经常要进行髓鞘染色 ,在实践中 ,我们摸索了一种便捷、有效、经济的染色方法 ,介绍如下。一、材料和方法1.取材、固定、切片 :取大鼠正常坐骨神经组织 ,4%甲醛生理盐水固定。石蜡切片 6～ 10 μｍ厚 ,6 0℃左右烘箱烘 3～4ｄ。2 .试剂配制 :(1)依来铬氰Ｒ液 :依来铬氰Ｒ 0 .2ｇ ,蒸馏水 96ｍｌ,10 %铁明矾液 4ｍｌ,浓硫酸 0 .5ｍｌ。 (2 )苦味酸丽春红Ｓ液 :1%丽春红Ｓ水溶液 10ｍｌ,苦味酸饱和水溶液 86ｍｌ,1%醋酸水 4ｍｌ。3.染色程序 :(1)石蜡切片 ,常规脱蜡水洗 ,吸干或烘干切片。 (2 )依来铬氰Ｒ液染…     

一种显示网状纤维的方法

网状纤维是一种嗜银纤维 ,如用一般的银浸染 ,纤维难于分辨 ,而采用碳酸铵银法染色网状纤维的结构则显示得异常清晰。因而 ,碳酸铵银法是一种较理想的显示网状纤维的方法 ,现将该方法介绍如下 :1 .用岑克液或 1 0 %福尔马林固定脾、肝标本。 2 .切片脱蜡后蒸馏水洗数次。 3.将切片放入 0 .3%高锰酸钾内 5 min。 4.切片经水洗后入 5 %草酸漂白 ,至切片上的组织呈现为白色为止。 5 .蒸馏水洗数次后 ,置切片于碳酸铵银内 ( 5 0℃ ) 30 min。铵银液配方 :1 0 %硝酸银 1 0 ml,磷酸钾饱和液 1 0 ml,上述二液混合后产生沉淀 ,倾去上层液体 ,将沉淀…     

显示肝、肾上腺脂类油红O方法探讨

油红 O为脂溶性 ,它是目前被认为最优良的脂肪染色染料 ,在脂肪内能高度溶解 ,从而染色 ,能保存组织中的脂肪滴。配制染料的溶剂是染色成败的关键 ,在此介绍一种油红 O染色的改进。油红 O原配方是由异丙醇 ,我们改用酒精配制效果同样满意。1取材 :小狗肝脏、肾上腺固定于 1 0 %中性甲醛溶液内 1～ 2 d。 2蒸馏水洗冰冻切片 1 0～ 2 0 μm入蒸馏水。 3用 70～ 80 %异丙醇或酒精稍洗或用蒸馏水稍洗。 4入油红 O染色 1 5～ 2 5 min。油红 O配方 :油红 O1 g,异丙醇 1 0 0 ml或 70 %酒精 1 0 0 ml,将油红 O放入烧瓶于水浴中加温溶解或放入温箱…     

胰岛B细胞、A细胞的快速双染

组织学特殊染色技术及免疫组织化学技术已广泛应用于基础医学和临床医学的科研工作中。本快速染色法即用组织学醛品红染色法和免疫组织化学 SP法在同一张切片上对胰岛 B细胞和 A细胞进行了双重染色 ,取得较好的效果 ,现作简单介绍。取大鼠胰腺 ,Bouin液固定 ,石蜡包埋 ,切 5 μm厚切片。双染步骤如下第一步 ,胰岛 B细胞的醛品红染色 :切片脱蜡到水 ;入 0 .2 5 %浓硫酸和 0 .2 5 %高锰酸钾等量混和液中 3min;蒸馏水洗后入 5 %草酸 2 min;蒸馏水洗 ;再经 70 %酒精后入醛品红染液 1 5 min;70 %酒精分色后 ,蒸馏水洗。第二步 ,胰岛 A细胞的免…     

大鼠海马神经细胞花生凝集素和ConA受体细胞化学技术

本实验应用 PNAg和 ConAg细胞化学技术 ,对大鼠海马神经细胞膜上的相应受体进行凝集素细胞化学反应。材料与方法 :雄性 SD大鼠 4只 ,体重2 5 0～ 30 0 g。动物经戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后 ,进行心脏灌注固定 (固定液为 4%多聚甲醛 0 .1 M PB( p H7.3)。动物静置于 4℃ ,3hr后取出大脑 ,用上述固定液后固定 3hr。取具有海马的脑组织 ,用梯度酒精脱水、透明、石蜡包埋、切片。PNAg和 Con Ag的制备 :1 )枸橼酸还原法配制 7nm胶体金 ;2 )胶体金分别与 PNA和 Con A稀释液按一定比例结合 ;3)超速离心 ,4℃ ,36 0 0 0 /rpm45分钟 ;4)收…     

细胞色素氧化酶的DAB法与Nadi反应的比较

过去常用经典的 Nadi反应显示细胞色素氧化酶以定位线立体的存在部位 ,现在广泛使用 DAB法。我们对这两种方法进行了比较。方法如下 :取 Wistar大鼠的心、肝、肾组织 ,用液氮骤冷 ,恒冷箱切片 (厚 7μm) ,进行以下实验 :Nadi反应 :切片入孵育液 ( N-苯基 -对 -苯二胺 3mg、1 -羟基 - 2 -萘酸 3mg溶于二甲基亚砜 0 .1 ml,0 .0 5 M的磷酸缓冲液 p H7.21 0 ml,混匀后过滤 )室温 30 min。入 Lugol碘液 2 min,入 5 %硫代硫酸钠 4min,入 1 %醋酸钴 6 0 min,蒸馏水洗 ,甘油明胶封固。DAB法 :切片入孵育液 ( 0 .0 5 M磷酸缓冲液 p H7.2 1 0 ml…     

Feulgen-Ag-NOR联合染色

NOR是核仁组成区相关嗜银蛋白的简称 ( Nuclear Organizer Region,NOR)。细胞学证明 ,银不与 r RNA结合 ,而与 r RNA相关的酸性非组蛋白结合。已有不少学者把它应用于肿瘤研究。本方法将脱氧核糖核酸 ( DNA) Feulgen反应法与 Ag NO3- NOR法联合染色 ,同时显示 DNA与 NOR,并在原法上做了改进。效果良好 ,结构清晰 ,定性准确。具体方法如下 :1 .组织固定于 1 0 %甲醛 1 2～ 2 4hr;2 .常规石蜡包埋 ,切片 4- 6 μm;3.切片脱蜡至水 ,蒸馏水洗 1 0 min;4.3.3mol/L HCl浸洗切片 1 min;5 .3.3mol/L HCl水解 2 5 min,37℃ ;6 .蒸馏水…     

石蜡切片显示大脑神经细胞方法探讨

以片显示大脑各种神经细胞一般都是用含有重铬酸钾的固定液固定,用硝酸银浸染的方法进行,所以要想制作大批教学标本只能用传统的方法。而大脑神经细胞的特殊染色,只能用火棉胶切片或冰冻切片制作标本,操作步骤复杂、时间长。为此我们对石蜡切片、镀银染色显示大脑神经细胞的方法进行了探讨。本实验选用小白鼠大脑,组织块大小为2×2cm,勿超过3cm;固定后入1%～1.5%硝酸银水溶液浸染5～7天;蒸馏水洗2分钟;用还原液作用24小时;组织块脱水、透明、浸蜡、包埋、切片,因低浓度酒精易使组织块退色,因此组织块经还原后在酒精内的脱水时间一定要精确。…     

大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元——免疫组织化学法研究

应用 ABC免疫组织化学技术对大鼠心内神经节胆碱乙酰转移酶阳性神经元进行了研究 ,发现大鼠心脏心房后壁神经节内存在着胆碱乙酰转移酶 ( Ch AT)免疫阳性神经元。材料与方法 ,成年大鼠 1 0只 ,雌雄不限 ,体重 1 5 0克左右 ,0 .4%戊巴比妥纳腹腔麻醉 ,经左心室 0 .9%Nacl灌洗 ,4%多聚甲醛 30 0 ml( p H7.2磷酸缓冲液 ) ,灌注固定。取心房后壁 ,后固定1 2 hr,常规石蜡包埋 ,切片厚 5 μm,切片脱蜡至水 ,用 SABC法免疫组织化学反应 :切片于 3% H2 O2 1 0 min,D· W洗 3次× 2 min,0 .0 1 M枸橼酸缓冲液 ( p H6 .0 )微波修复( 1 0 0℃ )…     

神经肌梭的染色方法

肌梭是一种本体感受器,广泛分布在全身的肌肉中,在四肢肌肉中特别多,我们在进行肌肉组织染色比较时,经过实践,发现该方法简单可行,特介绍如下。1.取材:哺乳动物的四肢肌肉(近腱处)。2.固定:取新鲜材料3毫米左右,人固定液(水合氯醛5克,无水酒精25毫升,蒸馏水25毫升)固定24小时。3.方法:(1)取出材料,用蒸馏水冲洗,入氨酒精(无水酒精100毫升,氧氢化氨0.5毫升)中24小时。(2)去除氨酒精,流水冲洗12-24小时,用蒸馏水洗多次,直至洗去组织上多余的氨酒精。(3)入2%硝酸银水溶液一周(37℃温箱)。     

Mallory三色法在小肠染色上的应用

本法主要是显示肌纤维、血细胞、结缔组织纤维和神经纤维等结构。原来我们将此法用在垂体染色上 ,现在我们用来染小肠、皮肤及含有结缔组织的器官等 ,可供教学及科研定性、定量分析 ,效果好 ,较传统的 H.E染色可更清晰地分辨各种结构。1 .组织固定 :取一小段用 Bouin氏液固定 2 4hr,常规包埋、切片、脱蜡。 2 .染色液的配制 :磷钨酸 5 g,橘红 G lg,苯胺蓝 0 .5 g,酸性复红 1 .5 g,蒸馏水 1 0 0 ml。先使磷钨酸溶于水内 ,逐次将染料加入 (要在前一染料完全溶解后 ,再加次一染料 )将三种染料混在一起用。 3.染色方法如下 :( 1 )常规方法脱蜡…     

改良溃变神经纤维镀染方法经验介绍

对于溃变神经纤维的镀染 ,Nute法是较可靠的形态学方法之一 ,但存在着程度较为复杂、烦锁等问题。为此我神经切片研究室在实际应用中 ,对于一些实验步骤 ,大胆地进行了改良和简化 ,结果与改良前相比没有显著差异 ,但操作过程却比原方法简便、易行、结果稳定 ,使实验者的工作量明显下降。现将改良的关键处介绍如下 :一、固定 :原方法 :灌注固定　先灌 0 .9%生理盐水冲出血液 ,再以 5 %重铬酸钾和 2 .5 %铬酸钾的水溶液 5 0 0 ml灌注固定。取出组织固定于 1 0 %中性福尔马林 1 w或更长至 3m。改良后 ,我们增加了取材后组织再浸泡于灌流液中 2…     

改良的Cajal—Faworsky组织块神经浸染法在神经病理切片染色中的应用

改良的Cajal-Fanwersky组织块浸染法(简称C-F法),系作者在神经病理科研过程中,经过多种方法的对比,并进行适当改进而成。此法染色性能稳定,效果较好,尤其在观察连续切片时更为适用。一、材料与方法: (一)试剂配制: 1.冰醋酸酒精固定液: 80%乙醇98ml 冰醋酸2ml 2.氨酒精溶液: 95%乙醇100ml 1～2滴浓氨水3.还原液: 焦性没食子酸2g 中性Formalin 10ml 蒸馏水90ml     

改良的Timm染色法显示大鼠海马苔藓纤维末梢出芽的变化

Timm染色方法是一种能够显示组织细胞内重金属分布的常用方法。苔藓纤维末端是脑内含锌量最高的区域 ,因此可以用此方法显示苔藓纤维末梢分布的情况。1、材料与方法1 .1　样品制备在恒温冷箱切片机中制备大鼠脑海马部位的连续冰冻切片 ,片厚 30 μm,吹干备用。1 .2　染色步骤采用改良的 Timm染色法配制 Timm′s混合液。用 30 g阿拉伯胶粉剂溶于 6 0 ml蒸馏水 ,搅拌均匀 ,放置 2 4hr,双层纱布过滤 ,配成 5 0 %的阿拉伯胶 6 0 ml。放入 1 0 ml枸橼酸缓冲液 ( 2 5 .5 %枸橼酸 2 3.5 %枸橼酸钠 )和30 ml5 .6 7%对苯二酚溶液 ,充分混合。切片…     

显示毛细胆管及 H.E 复染的改良法

以往显示毛细胆管多采用Golgi氏法,其缺点是往往出现被银浸染的胆小管退色和肝细胞核不能显示。我们采用Kopsch改良Golgi氏固定液,省去了用3％重铬酸钾媒染步骤,有保存肝细胞染色质的优点,切片经过纯酒精与95％酒精步骤时加入含有0.2％对苯二酚的0.5％甲醛溶液还原,这样胆小管保存完整,经过H.E复染后肝细胞核着色清晰,因而取得良好效果。现将步骤详细介绍如下:1.取新鲜家兔薄片肝脏二块,勿超过2毫米,入中性甲醛20cc和3.5％重铬酸钾水溶液80cc固定液24小时,室温20℃—30℃。2.蒸馏水速洗。入0.75％硝酸银水溶液     

显示三磷酸腺苷酶和乙酰胆碱酯酶的结合染色技术

三磷酸腺苷酶 (ATPase)和 Ach E是研究中常用的两种酶 ,将两种酶同时显示在一张切片上 ,收到良好效果 ,特介绍如下。材料和方法 :取新鲜的动物肌组织 ,平铺于滤纸上 ,在冰冻切片机上 ,进行纵行切片 ,厚度 10～ 30μm。也可用 4%中性甲醛固定保存在 0～ 4℃的冰箱内 ,时间不宜过长 ,2 4～48小时内 ,仍可收到良好效果。 ATPace显色 :将切片放在下列的孵育液内。孵育液为 :0 .1巴比妥钠 2 0 m l,0 .18M氯化钙 10 m l,双蒸馏水 30 ml,ATP钠盐 15 2 mg,用 0 .1M Na OH调至 9.4,再加蒸馏水至 10 0 m l,每配一次可使用 1周左右。在孵育液内 …     

骨骼肌m-ATPase染色改良法

我们在实验中发现 ,用常规的钙钴法很少能保存骨骼肌中 ATP酶的活性 ,且 ATP酶对固定非常敏度 ;而使用未固定的材料骨骼肌中常出现人工假象。固定液的张力很重要 ,而蔗糖是把张力提高到足够水平的最适当添加物。我们将原 ATP酶钙钴法作了如下改进 :1.固定 :将新鲜骨骼肌组织用双面刀片切成约 1 mm厚的薄片 ,入固定液中固定1 0 min,4℃。固定液配制 :多聚甲醛 4g;二甲砷酸钠 3.0 8g;氯化钙 0 .75 g;蔗糖 1 1 .5 g;双蒸水加至 1 0 0 ml,调节 p H值为 7.2。2 .OCT包埋 ,- 2 0℃恒冷箱切片( 8μm) ,室温下自然干燥 30 min。3.切片预处理 1…     

10%福尔马林与中性福尔马林的比较

传统上我们都采用 1 0 %福尔马林固定组织。福尔马林系甲醛液的俗称 ,是由甲醛 ( Formaldeny de HCHO)气体饱和于水而成。一般市售的福尔马林含甲醛 37%～40 %。配法 :取 40 %甲醛液 1 0 ml与蒸馏水90 ml混合 ,即得 4%甲醛 ,亦即 1 0 %福尔马林。由于福尔马林久存则氧化产生甲酸 ,呈酸性 ,固定标本不适宜 ,特别是需长期固定的组织更不适合 ,故我们主张采用中性福尔马林固定组织标本。其配法如下 :40 %甲醛 1 0 0 ml酸性磷酸钠 (或无水磷酸二氢钾 ) 4.0 g磷酸氢二钠 6 .5 g蒸馏水 90 0 ml因中性福尔马林中加入了磷酸缓冲液 ,不易被氧化 ,能…     

微囊牛肾上腺髓质细胞的冻存及其活性评价

目的　建立一种微囊牛肾上腺髓质细胞 (bovinechromaffincell,BCC)的冻存方法 ,为临床推广微囊人工生物细胞技术移植异种细胞奠定基础。方法　微囊化牛肾上腺髓质细胞冻存以二甲基亚砜为保护剂 ,循序缓慢降温 (4℃ ,1h ,- 2 0℃ 2h ,- 5 0℃过夜 ,液氮 ) ,复苏时迅速将冻存管放入 37℃水浴中。通过检测其基础儿茶酚胺分泌量和在高钾 (5 8mmol/L)、乙酰胆碱 (10 -4mol/L)刺激下的分泌量来观察其功能活性。结果　冻存复苏后微囊BCC保留了儿茶酚胺的分泌功能 ,基础与刺激分泌量分别为 (3.2 0 7± 0 .35 0 )ng/ml和 (12 .4 96± 2 .30 2 )ng/ml,大约为冻存前微囊牛肾上腺髓质细胞分泌量的 80 % ;同时刺激后儿茶酚胺分泌增加 (P <0 .0 1)。结论　建立一种微囊牛肾上腺髓质细胞的冻存方法 ,通过功能检测证明该方法是有效和成功的     

肥大细胞数量及脱颗粒变化在小鼠妊娠早期子宫中的观察

为了观察小鼠妊娠早期子宫中肥大细胞的变化 ,我们采用改良的甲苯胺蓝染色法对肥大细胞进行特殊染色 :1 .昆明小鼠 ,体重 2 5～ 30 g,雌雄 1 :1合笼 ,次日晨检见阴栓者定位妊娠第 1 d( D1 ) ,分别取未妊娠、D3、D4、D7、D8小鼠子宫 ,1 0 %甲醛 PBS( p H7.3)固定 2 4hs,石蜡切片。 2 .甲苯胺蓝染 30 sec,双蒸水洗去浮色 ,30 %酒精 PBS分色 1 min,蒸馏水终止反应。 3.光镜下对妊娠不同天数的小鼠子宫中的肥大细胞进行计数 ,同时比较肥大细胞脱颗粒的百分率。结果显示 :肥大细胞多散布于小鼠子宫的浆膜、浆膜下层以及系膜内 ,肌层中很少见…