大鼠Ⅲ型胶原的提取方法

本文报道了大鼠Ⅲ型胶原的简易提取方法,将胃酶降解所得的Ⅰ、Ⅲ型胶原混合物,反复用含1.5M NaCl的中性盐溶液抽提,弃去上清中呈溶解状态的Ⅰ型胶原,Ⅲ型胶原则呈不溶状态保留于沉淀中,再将不溶的Ⅲ型胶原溶解于0.5M的乙酸溶液中。依次对不含NaCl和含1.5M NaCl的中性盐溶液透析。进一步去除残留的Ⅰ型胶原,可获得大鼠Ⅲ型胶原纯品。经巯基乙醇降解法、CNBr降解法及氨基酸分析法鉴定合格。该方法产量较高,简便易行,适用于大鼠Ⅲ型胶原的制备。     

金雀异黄素对肢芽软骨细胞的影响

Ⅱ型胶原是软骨基质的主要成分，由软骨细胞合成分泌．它的出现及分布变化可反映软骨组织的形成过程。金雀异黄素(GEN)可影响胚胎肢芽软骨细胞Ⅱ型胶原mRNA表达。为探讨其对胚胎肢芽软骨细胞的作用机制。我们采用cDNA-mRNA原位杂交法观察金雀异黄素对胚胎肢芽软骨细胞Ⅱ型胶原表达的影响。现将结果报告如下。     

矽肺及汉防己甲素治疗的大鼠肺中Ⅰ型胶原的免疫荧光研究

本文采用间接免疫荧光技术研究了矽肺大鼠和汉防己甲素(简称汉甲素)治疗矽肺的大鼠肺中Ⅰ型胶原的变化。Ⅰ型胶原是肺间质的重要成分。在发生矽肺纤维化时,肺泡间隔中的Ⅰ型胶原含量明显地高于正常的肺泡间隔。在矽结节中,可见到发射绿色荧光的Ⅰ型胶原纤维束排列致密,表明Ⅰ型胶原参与了矽肺纤维化。用汉甲素治疗后,矽肺纤维化受到抑制,胶原纤维松解、断裂,互相缠绕,说明汉甲素可减低胶原纤维的聚合程度,并对胶原有一定的降解作用。汉甲素治疗的大鼠矽肺中存在大量大细胞,大细胞胞浆内可见发射绿色荧光的Ⅰ型胶原,可能为大细胞所吞噬从而加速胶原的分解。     

MON和硒对软骨Ⅱ型胶原的影响及与大骨节病的关系

目的 大骨节病是一种地方性、慢性、退行性骨关节病,主要损害关节软骨,病变呈对称性.目前,大骨节病病因并不清楚,在我国研究较多的是真菌中毒说和缺硒说.流行病学资料和以往的实验研究表明,串珠镰刀菌素是在大骨节病病区检测到的镰刀茵毒素之一,该毒素在病区、非病区间存在显著差异.因此,串珠镰刀茵素作为大骨节病的可疑致病因子可能与大骨节病的发生、发展具有一定的相关性.Ⅱ型胶原作为软骨细胞外基质主要成分,可以作为软骨损伤的检测指标,该研究的目的就是检测串珠镰刀茵素对软骨细胞和体外再建软骨组织的Ⅱ型胶原的影响,以及硒的保护性作用,为大骨节病是否为真茵毒素和环境缺硒复合因素作用的病因假说提供一些实验证据.方法 采用PT-PCR方法检测串珠镰刀菌素毒素对Ⅱ型胶原mRNA的影响;用免疫组织化学的方法检测Ⅱ型胶原、MMP1、MMP13的表达.结果 串珠镰刀茵素能够使Ⅱ型胶原mRNA的表达和原位表达均减少,同时MMP1、MMP13的表达增加;补硒能缓解上述变化.结论 串珠镰刀茵素毒素能够抑制Ⅱ型胶原mRNA的合成,同时MMP1、MMP13的表达均增加,促进其分解代谢,使Ⅱ型胶原原位表达减少;最终导致软骨细胞损伤甚至变性坏死;补硒能减轻病情严重程度,但并不能完全阻止这些变化.这些都为进一步研究提供了实验证据.     

突出腰椎间盘中Ⅱ型胶原的表达及意义

目的检测突出组和正常组腰椎间盘基质中Ⅱ型胶原的表达,探讨Ⅱ型胶原与腰椎间盘退变、突出的关系。方法通过免疫组化方法,应用Ⅱ型胶原多克隆抗体,对40例突出腰椎间盘和20例正常腰椎间盘标本进行染色。结果正常组的Ⅱ型胶原阳性面积百分比显著高于突出组,包含组的Ⅱ型胶原阳性面积百分比显著高于非包含组。结论腰椎间盘基质中Ⅱ型胶原含量下降可能引起椎间盘退变、突出。     

盆底器官脱垂患者主韧带和阴道壁Ⅲ型胶原代谢变化

目的:观察POP患者的主韧带和阴道前壁组织中Ⅲ型胶原总量及其代谢标志物Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)情况,探讨Ⅲ型胶原代谢改变与POP发病的关系。方法:选择POP患者和因子宫良性病变行手术治疗的非POP患者各13例,术中取主韧带及阴道前壁组织,用免疫组化方法测定Ⅲ型胶原含量,用ELISA法测定PⅢNP含量。结果:POP组主韧带及阴道前壁组织的Ⅲ型胶原含量较对照组低,PⅢNP含量较对照组高,差异有显著性(P<0.05)。结论:POP患者韧带和盆底筋膜组织Ⅲ型胶原含量减少可能是由胶原降解增加引起的,负面影响盆底支持组织的强度和弹性,从而导致POP。     

实验性氟中毒骨组织中Ⅱ型胶原基因表达及结构的改变

目的 观察过量氟对大鼠骨组织中Ⅱ型胶原基因表达的影响和对大鼠骨骼中胶原类型及胶原结构的作用。方法 制备Ⅱ型胶原cDNA探针，采用cDNA-mRNA原位杂交技术，检测饮用过量氟水(氟化钠221mg／L)的大鼠骨组织中Ⅱ型胶原的改变。采用苦味酸天狼星红染色—偏振光法对骨组织中胶原类型及胶原纤维结构进行观察。结果 染氟后，股骨等骨组织出现成软骨细胞。cDNA-mRNA原位杂交显示，软骨化的骨组织软骨陷窝的软骨胞质中可见Ⅱ型胶原基因表达。染氟0．5个月组肋软骨软骨细胞胶原mRNA水平最高，其灰度值和标准误分别为0．086和0．013，染氟1个月及2个月后逐渐减弱，其灰度值和标准误分别为0．047、0．008和0．039、0．007。苦味酸天狼星红染色-偏振光法观察骨组织中出现多色性Ⅱ型胶原纤维，胶原纤维断裂、排列紊乱、含量下降。结论 过量氟可致骨组织中胶原类型和胶原结构的改变，导致Ⅱ型胶原在软骨化骨组织中的表达及在肋软骨组织中的表达增强。     

血清抗Ⅱ型胶原抗体与自身免疫病疾病活动性关系的探讨

目的:通过观察人血清CCP与抗Ⅱ型胶原抗体之间的关系,比较不同程度RA患者抗Ⅱ型胶原抗体的诊断界值,研究抗Ⅱ型胶原抗体应用于RA的临床价值。方法:采用ELISA法检测血清抗NatⅡIgG、抗CCP,用速率散射比浊法检测类风湿因子(RF)、C-反应蛋白(CRP),放射免疫法检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中的抗双链DNA(dsD-NA)。结果:RA患者血清中抗NatⅡIgG水平与SLE,骨关节坏死,正常对照组之间差别有统计学意义(P0.05)。RA患者血清抗NatⅡIgG水平与CCP、CRP含量呈正相关(相关系数r分别为0.007和0.023)。结论:抗NatⅡ抗体水平可作为RA及SLE患者关节损伤的辅助诊断指标。     

血清HA,LN,COLⅣ,PLD含量测定对肝纤维化诊断的价值

作者采用放射免疫法测定了20名健康输血员及106名各类肝病病人血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(COL Ⅳ)及用比色法测定了脯氨酸肽酶(PLD)降解产物等4项指标,以探讨它们对肝维化的诊断价值。1 材料和方法     

汉防己甲素对胶原直接作用的体外研究

本文研究了汉防己甲素(简称汉甲素)对胶原蛋白的直接作用。将汉甲素与Ⅰ型胶原(1:1)在酸性条件或中性条件下共同保温24小时后,部分胶原与汉甲素结合产生沉淀。进一步用SDS-PAGE电泳法和Sepharose-6B分子筛层析法观察经汉甲素作用后上清液中胶原分子量的改变,发现Ⅰ型胶原的γ、β聚集体及α链均被解聚并分解,产生小分子肽链。证明汉甲素可以与胶原等大分子蛋白质结合,并将其分解。这可能是汉甲素减缓矽肺纤维化进程的原因之一。在小剂量汉甲素作用下(1mg汉甲素:167mgⅠ型胶原),胶原未受到明显降解。     

对实验性矽肺大鼠肺胶原性质的进一步探讨

本文比较了实验性矽肺大鼠和正常大鼠肺中能为胃蛋白酶限制性降解法溶出的不溶性胶原的百分含量,并比较了它们的SDS-巯基乙醇间断凝胶电泳图谱。我们从结果中观察到,矽肺大鼠肺胶原中不能为胃酶限制性降解的成份较多,但在其为胃酶降解溶出的胶原中能被巯基试剂还原的Ⅲ型胶原含量较少。     

Ⅱ型胶原对T-2毒素诱导关节软骨损伤拮抗作用

目的 观察Ⅱ型胶原干预T-2毒素诱导大鼠关节软骨早期损伤的作用,为探讨关节软骨损伤的防治措施提供理论依据.方法 Wistar大鼠40只,随机分为4组,每组10只,对照组(常规成品颗粒料),T-2毒素组(含100 ng/kg T-2毒素饲料),Ⅱ型胶原0.5、5.0组(0.5、5.0 g/L)连续处理5个月,光镜下观察大鼠透明软骨组织病理学改变,用酶联免疫吸附试验检测大鼠血清Ⅱ型胶原羧基端端肽(CTX-Ⅱ)、软骨寡聚基质蛋白(COMP)及尿中吡啶啉(DPD)含量.结果 光镜下T-2毒素组大鼠关节软骨细胞排列紊乱,软骨细胞变形、变性,可见大面积软骨细胞坏死,而低、高剂量Ⅱ型胶原组表现为软骨表面原纤维形成,表层软骨细胞肿胀变圆,扁平的软骨细胞减少,软骨细胞簇集等骨关节炎早期病理改变.对照组,T-2毒素组,高、低剂量Ⅱ型胶原组大鼠血清CTX-Ⅱ、COMP含量分别为(25.07 ±9.17)、(39.17±10.49)、(28.20±9.74)、(29.73±9.32) μg/L与(6.38 ±2.23)、(24.53 ±4.26)、(20.32 ±4.74)、(19.44 ±4.92) μg/L,大鼠尿液DPD含量分别为(4.14±1.06)、(4.33±3.43)、(5.72±3.89)、(4.23±2.90) μg/L.与对照组比较,模型组大鼠血清CTX-Ⅱ、COMP含量明显升高(均P＜0.05),大鼠尿液DPD含量无明显改变;与模型组比较,Ⅱ型胶原组大鼠血清CTX-Ⅱ、COMP明显降低(均P＜0.05),大鼠尿液DPD含量无明显变化.结论 Ⅱ型胶原能拮抗T-2毒素所致软骨损伤作用,延缓关节软骨的破坏进程,其机制可能与降低大鼠血清中CTX-Ⅱ及COMP含量有关.     

过量氟对体外培养大鼠软骨细胞的作用

目的探讨过量氟对体外培养软骨细胞糖胺多糖(glycosaminoglycan,GAG)和胶原分泌的影响。方法取2月龄大鼠下肢髋关节及膝关节软骨分离、培养出软骨细胞后,接种于细胞培养瓶,分空白对照组和NaF受试组(6.25μmol/ml、12.5μmol/ml、25μmol/ml、50μmol/ml和100μmol/ml),孵育6 d后,分别进行GAG含量测定、阿利新蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色。结果 NaF受试6 d后,大鼠软骨细胞培养液GAG含量各组比较,差异无统计学意义(P0.05)。阿利新蓝染色显示NaF处理大鼠软骨细胞后,细胞内GAG分泌颗粒无明显差异;Ⅱ型胶原免疫组化染色则显示,过量氟可引起软骨细胞外Ⅱ型胶原的分泌增多,半定量分析显示随着剂量升高,软骨细胞外Ⅱ型胶原的分泌逐渐增多。结论 NaF对大鼠软骨细胞GAG分泌无影响,但可引起Ⅱ型胶原分泌增多,有一定的剂量-反应关系。     

矽肺及汉防己甲素治疗的大鼠肺中——Ⅲ型胶原的免疫荧光研究

本文采用间接免疫荧光技术研究了矽肺大鼠和汉防已甲素(简称汉甲素)治疗矽肺的大鼠肺中Ⅲ型胶原的变化。Ⅲ型胶原分布于肺泡间隔中,在发生矽肺纤维化时,肺泡间隔中Ⅲ型胶原含量高于正常肺泡间隔,但增长程度低于Ⅰ型胶原。Ⅲ型胶原是矽肺胶原纤维组分之一,在胶原纤维之间也有分布。汉甲素治疗后,矽肺纤维化受到抑制。大细胞由矽结节外周向矽结节中心浸润,并吞噬降解Ⅲ型胶原,证明汉甲素有促进胶原分解代谢的作用。     

血清透明质酸和胶原Ⅳ检测对诊断慢性肝炎肝纤维化的意义

透明质酸(Hyaluronic Acid,HA)是人体基质的主要成分之一,由间质细胞合成,经淋巴系统入血,大部分迅速被肝脏内皮细胞摄取及降解.由于HA主要在肝脏内代谢,肝病患者尤其是肝硬化患者HA代谢障碍,血中HA浓度明显升高,因而是临床判断肝硬化的生化指标之一.Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)是基底膜的主要组成部分,正常情况下主要分布于血管、胆管的基底膜中,其在血清中可出现三种主要降解片段,它们在血清中     

实验性矽肺病变中Ⅰ型及Ⅱ型胶原基因表达的研究

以斑点杂交法测定染石英尘后7、14、21、30及60天时大鼠肺组织中前胶原mRNA水平,与正常肺组织相比,显示在染尘后7天时,proα_1(Ⅱ)mRNA显著增加,14至21天时达高峰。30天后处于平稳增高水平。proα_1(Ⅰ)与proα_2(Ⅰ)mRNA在染尘后14天才开始显著增高,30天时达最高值。表明在砂肺病变中,Ⅰ、Ⅱ型胶原的基因表达都有增加,但在时相上有不同。一种自染石英尘大鼠肺泡巨噬细胞中提取的致纤维化因子可特异地刺激2BS细胞中Ⅰ、Ⅱ型胶原基因的表达,对矽肺病变中胶原基因的表达有重要的调节作用。放线菌素D可抑制胶原基因的转录。     

甲氨喋呤与养气血祛风湿方对Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠的抗炎作用研究

目的 探讨甲氨喋呤与养气血祛风湿方对Ⅱ型胶原诱导性关节炎小鼠的抗炎作用差别.方法 采用C57BL/6×DBA/1小鼠,复制Ⅱ型胶原诱导性关节炎,通过分别给予甲氨喋呤或养气血祛风湿方干预,观察Ⅱ型胶原诱导性关节炎的出现时间、Ⅱ型胶原抗体的浓度以及病理评分的改变.结果 甲氨喋呤与养气血祛风湿方对Ⅱ型胶原诱导性关节炎的出现时间和Ⅱ型胶原抗体的浓度无影响.但是甲氨喋呤可以减少软骨破坏[(1.60±1.51)分 vs (3.56±1.33)分,P＜0.05]和骨质侵蚀[(0.30±0.69)分 vs (1.67±1.50)分,P＜0.01)];而养气血祛风湿方则减少骨质侵蚀[(0.22±0.44)分 vs (1.67±1.50)分,P＜0.01].结论 甲氨喋呤减少软骨破坏和骨质侵蚀,而养气血祛风湿方只减少骨质侵蚀,说明甲氨喋呤与养气血祛风湿方抗炎作用靶点有差异.     

血清粘蛋白测定

粘蛋白是一种粘多糖与蛋白质结合成的复合蛋白质,它主要存在于α_1及α_2球蛋白部分,其粘多糖往往是由氨基葡萄糖、氨基半乳糖、甘露糖、岩藻糖及涎酸组成。粘蛋白成分复杂,分类和命名尚未一致。血清粘蛋白测定原理,以1.8M过氯酸溶液使血清中其他蛋白质沉淀,离心除去沉淀,粘蛋白则存在于离心后的上清液中,加入磷钨酸使粘蛋白沉淀,再用0.6M过氯酸溶液洗涤沉淀,然后用酚试剂测定其中蛋白质的含量。正常值为3.38±0.27mg/dL(以酪氨酸计)。临床意义:血清粘蛋白增加见于肿瘤(尤以女性生殖器肿瘤)、结核、肺炎、风湿热及风湿性关节炎等。     

低强度脉冲超声对兔膝骨关节炎软骨细胞外基质修复的影响及作用机制

目的探讨低强度脉冲超声对兔膝骨关节炎软骨细胞外基质修复的影响及其作用机制,为临床膝骨关节炎治疗方案的制定提供理论依据。方法选取90只成年雌性家兔,随机分为实验组和对照组,各45只。通过Hulth法建立膝骨关节炎模型,2周后实验组接受低强度脉冲超声治疗,对照组接受假低强度脉冲超声治疗。在治疗第2、4、8周两组各随机处死15只家兔,对比两组家兔的改良Mankin评分以及基质金属蛋白酶(MMPs)、蛋白多糖Ⅱ型胶原的检测结果,蛋白多糖和Ⅱ型胶原的相对表达量和关节软骨中一氧化氮浓度的变化情况。结果第2、4、8周,观察组的改良Mankin评分以及MMP-3、MMP-7、MMP-13的阳性细胞胞浆平均光密度值均低于对照组,蛋白多糖和Ⅱ型胶原的阳性细胞胞浆平均光密度值均高于对照组(P值均0.05);观察组关节软骨中一氧化氮浓度以及MMP-3、MMP-7、MMP-13的相对表达量均显著低于对照组,蛋白多糖和Ⅱ型胶原的相对表达量均显著高于对照组(P值均0.05)。结论低强度脉冲超声可抑制兔膝骨关节炎关节软骨MMPs的表达,降低一氧化氮的含量,减少软骨细胞外基质的降解,有利于关节软骨损伤的修复。     

慢性乙型肝炎肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原及MMP1、TIMP1的表达

目的观察慢性乙型肝炎患者肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的沉积以及基质金属蛋白酶1(MMP1)和金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)的表达,从胶原降解的角度探讨慢性乙型肝炎肝纤维化的发病机制。方法不同纤维化程度慢性乙型肝炎肝组织标本50例,用免疫组化方法检测肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及MMP1、TIMP1的表达。结果随着肝组织纤维化程度的加剧,慢性乙型肝炎患者肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及TIMP1表达显著增加,肝组织Ⅰ、Ⅲ型胶原表达与TIMP1呈明显正相关。结论慢性乙型肝炎患者肝纤维化的发生与TIMP1增加、间质胶原蛋白的分解降低有关。