原发性胆汁性肝硬化患者外周血APRIL基因表达水平初探

目的 建立检测人增殖诱导配体（APRIL）mRNA的实时荧光定量PCR方法,探讨外周血单个核细胞APRIL mRNA表达水平与原发性胆汁性肝硬化（PBC）的相关性。方法 采用实时荧光定量PCR法检测30例正常人和40例PBC患者外周血单个核细胞（PBMC）APRIL基因的相对表达量,以Ct值比较法计算APRIL基因相对表达水平。结果 PBC患者外周血单个核细胞APRIL mRNA的△Ct值为9．3±2.0,与正常对照组比较．差异显著（P〈0．05）。采用2^-△△Ct法进行数据分析后,PBC组APRIL mRNA相对表达量比正常对照组高3．5倍。PBC患者中抗核抗体（ANA）阳性占80％,其中荧光模式为核膜型19例。其他型13例（着丝点型10例,混合型3例）,其APRIL基因相对表达量比正常对照组高6.5和1．7倍。结论 PBC患者外周血单个核细胞APRIL mRNA表达水平显著升高,且与ANA荧光模式相关。     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血TRAIL基因表达水平初探

目的建立检测人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）mRNA的实时荧光相对定量方法,探讨其基因表达与原发性胆汁性肝硬化（PBC）的相关性。方法基于TaqMan—MGB探针技术,以B—actin基因为内参照,通过目的基因与内参基因荧光强度达到一定阈值时的循环数之差,即△Ct值定量原始模板浓度,建立实时荧光逆转录聚合酶链反应（FQ—RT—PCR）相对定量方法,检测30例PBC患者、25例乙型肝炎（简称乙肝）后肝硬化患者及30名正常人外周血单个核细胞（PBMC）TRAIL基因的表达,同时检测血浆γ－谷氨酰转肽酶（GGT）和碱性磷酸酶（ALP）浓度,并作相关性分析：结果PBC患者PBMCTRAIL基因检测的△Ct值为2．4±1．2,其相对表达量是正常对照组的6．96倍,差异有统计学意义（P〈0．05）,乙肝后肝硬化患者TRAIL基因△Ct值为3．3±1．7,其相对表达量是正常对照组的3．73倍,差异有统计学意义（P〈0．05）,而PBC组与乙肝后肝硬化组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。PBC患者TRAIL的△Ct值与GGT浓度的对数值呈显著相关（r=－0．396,P〈0．05）。结论PBC患者及乙肝后肝硬化患者PBMC TRAIL基因表达水平明显升高,提示TRAIL在自身免疫性肝病及肝脏病毒损伤中均具有重要作用。     

增殖诱导配体及其受体在肿瘤组织中的表达与意义

目的分析增殖诱导配体（APRIL）及其受体在不同肿瘤组织及肿瘤发展不同阶段的表达水平,探讨其与肿瘤发生的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（RFQ-PCR）检测了临床上常见肿瘤组织中APRIL及其受体mRNA的准确含量,并以靶基因和内参mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果肿瘤组织中APRIL表达水平显著高于交界组织（P〈0．05）和正常组织（P〈0．05）;B细胞成熟抗原（BCMA）和穿膜蛋白活化物（TACI）表达水平在大多数肿瘤组织中与正常组织差异无统计学意义（P〉0．05）;APRIL在肠上皮化生、异型增生和胃癌组织中表达水平显著高于正常黏膜（P〈0．05）,APRIL在胃癌组织中表达水平显著高于肠上皮化生和异型增生（P〈0．05）,而其受体BCMA和TACI在各组胃黏膜病变之间表达水平无统计学意义（P〉0．05）。结论成功建立RFQ-PCR检测APRIL及其受体mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;APRIL在肿瘤发生、发展过程中可能起了重要作用;除了BCMA和TACI外,肿瘤细胞可能还存在APRIL未知受体;APRIL在某些类型肿瘤有可能主要是通过受体BCMA而不是TACI发挥作用。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中ISGl5mRNA表达水平的研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中ISG15mRNA表达及其与疾病活动性的关系。方法采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—RT-PCR）的方法，在Light Cycler RealtimePCR检测仪上检测89例SLE患者（活动期50例、缓解期39例）、结缔组织病（CTD）患者34例（疾病对照组）、健康体检者35名（健康对照组）外周血PBMCs中ISG15mRNA的表达水平和含量。以△Ct=Ct（待测基因）-α（内参基因）来比较基因表达水平的变化。结果活动期SLE患者ISG15mRNA表达水平（ACt=2．04±1．07）明显高于缓解期SLE患者（△Ct=5．48±1．72，t=11．572，P〈0．01）；活动期SLE患者ISC15mRNA表达水平（△Ct=2．04±1．07）明显高于疾病对照组（△Ct=5．90±1．72，t=12．69，P〈0．01）和正常对照组（△Ct=5．66±1．63，t=12．359，P〈0．01）；缓解期SLE患者ISG15mRNA表达水平与正常人及疾病对照组的差异无显著性（P〉0．05）。SLE患者FBMCs中ISGl5mRNA的表达水平与SLE疾病活动评分指数（SLEDAI）评分及抗双链DNA抗体呈显著正相关（均P〈0．n1），与补体C3、C4呈显著负相关（均P〈0．01）。结论活动期SLE患者ISG15mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期，提示ISG15的表达可能参与了SLE的发病过程并与疾病的活动性显著相关。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中MBD4 mRNA表达水平的研究

目的探讨系统性红斑狼疮（SEE）患者外周血单个核细胞中MBD4 mRNA表达及其与疾病发病机制、疾病活动性的关系。方法以pactin为内参照,建立逆转录实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）方法,在LightCycler RealtimePCR检测仪上检测70例SLE患者（活动期32例、缓解期38例）、其他结缔组织病（CTD）患者30例（疾病对照组）、健康体检者30例（正常对照组）外周血单个核细胞（PBMCs）中MBD4 mRNA的表达水平和含量。以△Ct=Ct（待测基因）-Ct（内参基因）来比较基因表达水平的高低。结果SLE患者PBMC中MBD4mRNA表达水平高于正常对照组与疾病对照组（P〈0．05）,且疾病不同病期（活动期与缓解期）MBD4 mRNA表达水平差别有统计学意义（P〈0．01）。结论结果显示SLE患者PBMC中MBD4 mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组,提示MBD4 的表达与SLE的发生发展存在一定关联性,可能参与了SEE的发病过程并与疾病的活动性有关。     

I型自身免疫性肝炎增殖诱导配体、B淋巴细胞刺激mRNA的表达与临床特点

目的检测I型自身免疫性肝炎（autoimmune hepatitis type I,AIH—I）患者增殖诱导配体（aproliferation-inducing ligand,APRIL）和B淋巴细胞刺激因子（B-lymphocyte activating factor,BAFF）mRNA水平,研究APRIL和BAFFmRNA的表达与AIH—I临床特征之间的关系。方法半定量PCR法检测37例I型AIH确诊患者（I型AIH组）、19例乙型肝炎患者（乙型肝炎组）、15例正常人（正常对照组）外周血单核细胞APRIL和BAFFmRNA的表达水平,同时检测I型AIH患者外周血中IgG、C3、C4、抗核抗体（ANA）、抗平滑肌抗体滴度（ASMA）、丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、球蛋白（GLO）、C反应蛋白（CRP）水平。结果APRIL、BAFFmRNA在I型AIH组的表达水平（O．65±0．39,0．76±0．35）显著高于乙型肝炎组（O．33±0．26,0．37±0．24）和正常对照组（0．30±0．25,0．23±0．20）。APRIL和BAFFmRNA表达水平在I型AIH、乙型肝炎组、正常对照组中均呈中等强度的正相关（r=0．418,P〈0．05）。APRIL、BAFFmRNA表达水平与疾病活动度指标（ALT、AST、GLO、IgG、CRP）、肝组织学炎症与纤维化评分之间无明显相关（P〉0．05）。结论I型AIH患者的APRIL、BAFFmRNA的表达水平显著升高,其水平与患者的预后有一定的相关性。     

血清APRIL表达水平与非霍奇金氏病相关性的初步研究

目的研究非霍奇金氏病（NHL）患者血清增殖诱导配体（APRIL）蛋白水平，并探讨其与血清乳酸脱氢酶（LDH）的关系。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测LDH升高患者组（10例）和LDH正常NHL患者组（12例）血清APRIL水平，以健康志愿者（23例）作为对照；同时将血清APRIL水平与患者血清乳酸脱氢酶（LDH）进行相关性分析。结果NHL患者血清APRIL水平与健康对照组无显著性差异（P〉0．05），但LDH升高患者组血清APRIL水平明显高于LDH正常患者组（P〈0．05）；NHL患者组和LDH升高患者组血清APRIL水平与LDH正相关（r=0．923,0．799，P〈0．05）。结论NHL患者血清APRIL水平与健康对照组无显著性差异，LDH升高患者组血清APRIL水平明显高于LDH正常患者组，提示APRIL可能与NHL的预后及恶性程度有关。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中ISG15 mRNA表达水平的研究

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中ISG15 mRNA表达及其与疾病活动性的关系.方法 采用逆转录实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)的方法,在Light Cycler Real time PCR检测仪上检测89例SLE患者(活动期50例、缓解期39例)、结缔组织病(CTD)患者34例(疾病对照组)、健康体检者35名(健康对照组)外周血PBMCs中ISG15 mRNA 的表达水平和含量.以ΔCt=Ct(待测基因)-Ct(内参基因)来比较基因表达水平的变化.结果 活动期SLE患者ISG15 mRNA表达水平(ΔCt=2.04±1.07)明显高于缓解期SLE患者(ΔCt=5.48±1.72,t=11.572,P＜0.01);活动期SLE患者ISG15 mRNA表达水平(ΔCt=2.04±1.07)明显高于疾病对照组(ΔCt=5.90±1.72,t=12.69,P＜0.01)和正常对照组(ΔCt=5.66±1.63,t=12.359,P＜0.01);缓解期SLE患者ISG15 mRNA表达水平与正常人及疾病对照组的差异无显著性(P＞0.05).SLE患者PBMCs中 ISG15 mRNA的表达水平与SLE疾病活动评分指数(SLEDAI)评分及抗双链DNA抗体呈显著正相关(均P＜0.01),与补体C3、C4呈显著负相关(均P＜0.01).结论 活动期SLE患者ISG15 mRNA表达水平显著高于正常人、疾病对照组和疾病缓解期,提示ISG15的表达可能参与了SLE的发病过程并与疾病的活动性显著相关.     

结直肠癌组织cripto基因mRNA水平及临床意义

目的检测cripto基因mRNA在结直肠癌及其癌旁组织中mRNA表达情况，并探讨其在结直肠癌发生发展中的意义。方法提取36例人大肠癌及癌旁正常组织中总mRNA，采用实时荧光定量PCR法检测其中cripto mRNA表达情况；并分析其表达与患者淋巴结转移、肿瘤分化程度和Dukes’s分期相关性。结果cripto mRNA表达在大肠癌组织中阳性表达率为86．1％（31／36），而正常肠组织未见cripto mRNA表达，统计学差异显著（P〈0．0001）。criptomRNA表达与浆膜侵袭、淋巴结转移和Duke’s分期密切相关（P〈0．05，P〈0．05，P〉0．05），而与患者肿瘤发生部位和分化程度无关（P〉0．05，P〉0．05）。结论cripto基因在结直肠癌组织中高表达，可能与大肠侵袭痈转移有关。     

APRIL／BlyS表达与原发性胆汁性肝硬化的关联性研究

目的 探讨APRIL/BlyS在原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中的mRNA表达水平以及与体液免疫水平的关联性.方法 设计特异性的引物和探针,以人基因GAPDH为内参照,用实时定量PCR的方法检测42例健康人和56例原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞中APRIL,BlyS的mRNA表达水平,采用ELISA方法在全自动酶标仪上检测血清中IgG,IgA,IgM的浓度.结果 与健康人比较,原发性胆汁性肝硬化患者外周血中APRIL,BlyS mRNA的表达升高(P<0.01),患者血清中IgM显著增高(P<0.01),患者中BlyS mRNA表达与IgM成显著正相关(r=0.763,P<0.01),而APRIL mRNA的表达与IgM的水平无相关性.结论 ARPIL,BlyS系统及其受体可能参与原发性胆汁性肝硬化的疾病进程,为监控原发性胆汁性肝硬化的病情和有效治疗提供了新的依据.