单纯疱疹病毒性脑炎模型中Toll样受体的表达及意义

目的:观察Toll样受体(TLRs)在单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)模型中的表达及意义。方法:小胶质细胞系BV2细胞接种1型单纯疱疹病毒(HSV-1)液,制作HSE细胞模型,实时荧光定量聚合酶链反应检测HSV-1感染组与对照组TLR2、TLR3、TLR9 mRNA转录水平。结果:感染组细胞TLR2、TLR3、TLR9 mRNA转录水平显著高于对照组(P0.01)。结论:小胶质细胞系BV2细胞受HSV-1刺激后可引起TLR2、TLR3、TLR9 mRNA转录水平升高,TLR2、TLR3、TLR9可能参与了BV2细胞对HSV的识别。     

黄芪注射液治疗鼠单纯疱疹病毒性脑炎的实验研究

目的 探讨黄芪注射液对Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)感染致病毒性脑炎的疗效及机制.方法 将60只小鼠随机分为对照组、模型组和黄芪治疗组,每组20只.建立HSV-Ⅰ感染致病毒性脑炎模型.观察各组小鼠的死亡率,检测小鼠血中自细胞介素-1β(IL-1β)、γ-干扰素(IFN-γ)、一氧化氮(NO)水平,电镜下观察小鼠神经细胞形态结构的变化.结果 电镜下HSV-Ⅰ感染后小鼠脑细胞胞质水肿明显,核仁固缩,核内结构破坏,多数线粒体呈空泡样改变,脊突破坏,髓鞘严重松解,核仁内可见病毒颗粒;IL-1β、IFN-γ、NO水平及小鼠的死亡率均较对照组明显上升(P均<0.01).黄芪注射液治疗后小鼠脑组织病理学改变减轻,死亡率及IL-1β、NO水平较模型组明显下降,而IFN-γ继续上升(P均<0.01).结论 早期应用黄芪注射液对单纯疱疹病毒性脑炎有一定的治疗效果,其作用机制可能是通过调节免疫应答,影响IL-1β、IFN-γ和NO等细胞因子的水平,从而减轻炎症反应.     

TLR4受体拮抗剂对Aβ1-42诱导的小胶质细胞炎性因子分泌的影响

目的探讨体外培养条件下Toll样受体4(TLR4)拮抗剂对β淀粉样蛋白1-42片段(Aβ1-42)诱导的小胶质细胞炎性因子分泌的影响。方法用不同浓度的Aβ1-42(终浓度为0、1、5、10、20、40、80μmol/L)及TAK-242(终浓度1μmol/L)处理小鼠小胶质细胞(BV2),24 h后取其上清干预小鼠海马神经元(HT22)。48 h后,应用CCK8方法检测HT22细胞的存活,ELISA方法检测BV2细胞上清液中TNF-α、IL-1β水平。结果与空白对照组相比,Aβ1-42直接作用于体外培养的小胶质细胞后,以剂量依赖的方式诱导TNF-α、IL-1分泌的增加(P0.05);与空白对照组相比,Aβ1-42诱导组培养液干预的HT22细胞存活率显著下降(P0.05)。给予TLR4拮抗剂TAK-242干预后,Aβ1-42诱导TNF-α、IL-1分泌的作用被抑制,细胞分泌TNF-α、IL-1β水平较Aβ1-42诱导组显著降低(P0.05),HT22细胞存活率也显著提高(P0.05)。结论阻断TLR4可抑制Aβ1-42诱导的小胶质细胞炎性因子的分泌,并减轻活化的小胶质细胞对海马神经元的损害。     

深部脑磁刺激改善大鼠卒中后抑郁样行为

目的：探讨深部脑磁刺激（DMS）对卒中后抑郁（PSD）模型大鼠抑郁样行为的治疗作用及其可能机制。方法：糖水偏好实验和旷场实验筛选42只正常的雄性成年SD大鼠,随机分为假手术组（Sham组,n=6）、卒中组（Stroke组,n=12）、卒中后抑郁组（PSD组,n=12）、深部脑磁刺激治疗组[（PSD+DMS）组,n=12];后3组颈总动脉线栓再灌注法构建脑缺血模型;假手术组只分离颈总动脉不结扎;PSD组和（PSD+DMS）组接受3周慢性温和应激制备PSD模型;（PSD+DMS）组每天接受40 min的40 Hz深部脑磁刺激治疗,共2周。旷场实验检测各组大鼠运动功能和焦虑样行为;糖水偏好实验检测各组大鼠快感缺失抑郁样行为;免疫荧光染色检测各组大鼠前额叶小胶质细胞激活标志物Iba-1的表达水平;蛋白质免疫印迹技术检测各组大鼠前额叶小胶质细胞激活阳性蛋白CD11b及炎性因子IL-1β和TNF-α的表达。结果：（PSD+DMS）组大鼠抑郁样行为较PSD组明显好转。卒中组大鼠前额叶小胶质细胞激活增加,炎性因子IL-1β和TNF-α的蛋白表达升高,PSD组大鼠前额叶小胶质细胞激活进一步增加,炎性因子...     

Tamoxifen对大鼠脊髓损伤后炎症反应的影响

目的：探讨tamoxifen对大鼠脊髓损伤（SCI）后炎症反应的影响。方法：60只SD大鼠采用改良Allen法建立大鼠SCI模型,并随机分为假手术组、对照组和干预组各20只,采用免疫荧光和免疫印迹探讨各组小胶质细胞活化以及炎性因子白介素-1β（IL—1β）的表达情况,采用伊文思蓝定量测定法观察SCI后血脊髓屏障通透性（BSCB）的变化。结果：SCI后小胶质细胞明显活化,并产生大量的炎性因子IL-16,BSCB的通透性也显著升高;干预组大鼠给予tamoxifen干预后,与对照组比较小胶质细胞活化受到抑制,IL-1β的产生有所减少,BSCB的破坏也得到明显改善（均P〈0．05）。结论：Tamoxifen可以减轻大鼠SCI后炎症反应,促进血脊髓屏障的恢复。     

单纯疱疹病毒性脑炎小鼠脑组织中IL-10的表达

目的通过检测白细胞介素10（IL-10）在单纯疱疹病毒性脑炎（HSE）小鼠脑组织中的表达,探讨IL-10在HSE发病中可能的免疫学机制。方法采用颅内接种法建立HSE小鼠模型。设置正常对照组、病毒感染组、阿昔洛韦组和地塞米松组。通过神经症状评分观察HSE小鼠的发病情况,应用免疫组化法测定各组小鼠脑组织中IL10的表达,并采用Pearson相关分析分析神经症状评分与IL-10表达的相关性。结果病毒感染组神经症状评分最高,生存率最低,阿昔洛韦组次之,地塞米松组神经症状评分最低,生存率最高（F=30．20,x^2=23．20,P〈0．05）。IL-10在HSE小鼠脑组织中的表达较正常对照组明显上调,病毒感染组较阿昔洛韦组增高,病毒感染组和阿昔洛韦组较地塞米松组增高（F-10．65,P〈0．05）。神经症状评分与IL-10的表达呈正相关（r=0．83,P〈0．05）。结论IL-10可能通过抑制小胶质细胞炎性因子的产生,减轻神经细胞损伤等介导宿主在HSE中的免疫应答作用。     

共轭亚油酸通过PPARγ通路调控小胶质细胞的 炎症表型

目的：探究共轭亚油酸（CLA）对脂多糖（LPS）刺激的小胶质细胞炎症表型转化的作用及机制。方法： ①体外构建LPS刺激的小胶质细胞炎症模型,给予CLA处理24 h。②PPARγ抑制剂GW9662处理小胶质细 胞炎症模型,同时给予CLA处理。采用实时荧光定量PCR,免疫荧光的方法探究小胶质细胞的炎症表型转 化。结果：①与对照组相比,LPS刺激小胶质细胞后,促炎分子IL-6、iNOS、IL-1β和TNF-α转录水平较对照 组显著上调（均 P＜0.05）;小胶质细胞内促炎标志物 CD16/32 蛋白水平明显升高（P＜0.05）,抗炎标志物 CD206水平明显降低（P＜0.05）。②与单纯LPS刺激相比,给予CLA处理后,小胶质细胞促炎基因被下调 （均P＜0.05）,而抗炎基因上调（均P＜0.05）。③给与PPARγ抑制剂处理后,与CLA处理组相比,小胶质细胞 的促炎基因表达明显上调（均 P＜0.05）,抗炎基因表达明显下调（均 P＜0.05）。结论：CLA 可能通过激活 PPARγ通路调控小胶质细胞由促炎表型向抗炎表型转化。     

异基因骨髓移植并发移植物抗宿主病小鼠体内IL-22的细胞来源

本研究探讨小鼠经异基因骨髓移植后发生移植物抗宿主病（GVHD）时体内IL-22的细胞来源。分别以C57BL／6和BALB／c小鼠为供受鼠,受鼠经致死剂量全身照射后输注供鼠骨髓和脾淋巴细胞悬液,建立GVHD模型。实验分为正常组（normal）、单纯照射组（TBI）、骨髓移植组（BMT）和骨髓联合脾细胞诱导GVHD组（BS）。ELISA法检测小鼠血浆中IL-22的水平;流式细胞术检测IL-22的细胞来源及所属亚群情况。结果表明,Bs组小鼠血浆中IL-22水平最高,与正常小鼠相比差异有统计学意义（P〈0．01）;BS组小鼠脾、淋巴结和外周血中淋巴细胞均可产生IL-22,且IL-22＋CD4＋T细胞百分率高于IL-22＋CD8＋T细胞;除Th22细胞外,Th1细胞和Th17细胞也是GVHD小鼠体内IL-22的细胞来源,但以Th22细胞分泌IL-22为主。结论：GVHD小鼠体内可产生高水平的IL-22,其主要来源于IFN-γ-IL-17-IL-22＋的Th22细胞。     

人参二醇对鱼藤酮MPP＋诱导的BV2细胞活性下降的作用

目的观察人参二醇对鱼藤酮、MPP＋诱导的小鼠小胶质细胞活性下降的影响。方法以小鼠BV2细胞为研究对象,以鱼藤酮（0．03、0．1、0．3、1、3μmol／L）或MPP＋（10、30、100、300、1000μmol／L）处理24h和诱导细胞活性下降。设阴性对照组、人参二醇对照组（100mg／L）,鱼藤酮（0．1μmol／L）或MPP＋（100μmol／L）损伤组,人参二醇治疗组（10、25、50、75、100mg／L）。采用MTT法检测细胞活性。结果各浓度人参二醇对BV2细胞的活性无明显影响。鱼藤酮或MPP＋处理24h可诱导BV2细胞活性下降,各浓度人参二醇不能逆转鱼藤酮或MPP＋造成的细胞活性下降。结论人参二醇对鱼藤酮或MPP＋诱导的BV2细胞活性下降无保护作用。     

副猪链球菌临床分离株引起小鼠大脑炎性反应的特征及机制研究

目的 研究副猪链球菌临床分离株引起小鼠大脑炎性反应的特征及其机制。方法 副猪链球菌临床分离株NN1和BS26及高致病型猪链球菌P1/7感染C57BL/6小鼠后,观察其脑组织中的细菌载量,并提取脑组织RNA,使用实时荧光定量聚合酶链式反应方法明确诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、促炎性细胞因子IL-1β以及核苷酸结合寡聚化结构域样受体（NOD1/2）表达的时间动力学特征。副猪链球菌临床分离株NN1和BS26及猪链球菌P1/7分别与小鼠原代星型胶质细胞及小胶质细胞细胞系BV2细胞相互作用后,分别测定细胞上清液中一氧化氮（NO）浓度以及IL-1β和NOD1/2 mRNA转录水平的时间动力学特征。结果 副猪链球菌临床分离株感染小鼠后可在小鼠脑组织中持续存在超过48 h,并在感染早期引起小鼠脑组织中iNOS、IL-1β及NOD1/2受体转录水平的显著升高（P<0.05）。小胶质细胞可能在副猪链球菌临床分离株诱导脑组织产生NO和IL-1β中发挥重要作用。副猪链球菌通过NOD1/2受体激活星形胶质细胞的能力显著强于小胶质细胞（P<0.05）。结论 副猪链球菌临床分离株NN1和BS26在感染...     

Brain immune cells undergo cGAS/STING-dependent apoptosis during herpes simplex virus type 1 infection to limit type I IFN production

Protection of the brain from viral infections involves the type I IFN (IFN-I) system, defects in which render humans susceptible to herpes simplex encephalitis (HSE). However, excessive cerebral IFN-I levels lead to pathologies, suggesting the need for tight regulation of responses. Based on data from mouse models, human HSE cases, and primary cell culture systems, we showed that microglia and other immune cells undergo apoptosis in the HSV-1–infected brain through a mechanism dependent on the cyclic GMP-AMP synthase/stimulator of interferon genes (cGAS/STING) pathway, but independent of IFN-I. HSV-1 infection of microglia induced cGAS-dependent apoptosis at high viral doses, whereas lower viral doses led to IFN-I responses. Importantly, inhibition of caspase activity prevented microglial cell death and augmented IFN-I responses. Accordingly, HSV-1–infected organotypic brain slices or mice treated with a caspase inhibitor exhibited lower viral load and an improved infection outcome. Collectively, we identify an activation-induced apoptosis program in brain immune cells that downmodulates local immune responses.     

单纯疱疹病毒性脑炎8例病例分析

目的探讨单纯疱疹病毒性脑炎(HSE)的临床表现、辅助检查、诊断及治疗,提高HSE的早期诊断和治愈率。方法回顾8例HSE患者的临床表现,脑电图、影像学、脑脊液检查结果及治疗,并结合相关文献进行分析。结果 HSE患者均急性或亚急性起病,主要临床表现为发热、头痛、意识及精神障碍。头颅MRI、脑电图检查有利于早期诊断。脑脊液HSV-1 IgM抗体阳性及PCR DNA检测发现该病毒DNA可确诊。结论通过HSE的临床特点,结合脑电图、脑脊液及影像学检查,对HSE作出早期诊断,尽早使用抗病毒治疗是改善预后的关键。     

小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎中基质金属蛋白酶-2、8、9阳性细胞计数及意义

目的探讨单纯疱疹病毒性角膜炎小鼠角膜中基质金属蛋白酶(MMP)-2、8、9阳性细胞计数、细胞来源及临床意义。方法建立小鼠单纯疱疹病毒性角膜基质炎(HSK)模型,分别收集正常角膜和感染1型单纯疱疹病毒(HSV-1)后2d、7d、14d的小鼠角膜,行免疫组化染色。在光学显微镜下对免疫组化切片的结果进行分析,观察不同时间点MMP-2、8、9在角膜组织中的定位,并分别统计中央角膜及周边角膜基质中MMP-2、8、9阳性细胞、MMP-2、8、9阳性的中性粒细胞及浸润的中性粒细胞、总细胞的数量,进行统计分析。结果感染后第2天,上述各细胞表达增加,主要位于浅表基质层及上皮下的炎性细胞,周边角膜组织中的中性粒细胞和MMP-2、8、9阳性细胞数明显高于中央角膜基质中;感染后第7天,MMP-2、8、9及中性粒细胞表达下降;感染后第14天可见中央角膜坏死及角膜溃疡形成,同时角膜基质和浸润的炎性细胞中尤其溃疡处,可见MMP-2、8、9表达显著增加。结论 HSV-1感染角膜后,大量中性粒细胞自角膜缘血管网侵入中央角膜基质。中性粒细胞与角膜细胞释放大量的蛋白水解酶(MMP-2、8、9),可能在角膜上皮炎、角膜溃疡穿孔、新生血管形成等过程中发挥重要作用。     

性病门诊2300例患者单纯疱疹病毒抗体的血清学检测

目的探讨我院皮肤性病门诊患者单纯疱疹病毒的感染情况及在典型和非典型生殖器疱疹患者中的发病率。方法采用酶联免疫法（ELISA）对2300例患者进行血清学HSV—I和HSV-Ⅱ的IgM、IgG抗体检测。结果2300例患者中,HSV-I的IgM和IgG的检出率分别是6．87％（158／2300）和86．10％（1980／2300）,HsV-Ⅱ的IgM和IgG检出率分别是10．00％（230／2300）和40．60%（933／2300）,两种血清型中以HSV—I感染为主,且IgG阳性率明显高于IgM（HSVI的x^2=2901．1,P-0．000;HSV-II的x^2=1240．0,P=0．000,P〈0．05）;具有典型生殖器疱疹或高度可疑生殖器疱疹症状者924例,其中HSV-IIgM感染者46例（男31例,女15例）,感染率为5．0％（46／924）;HSV—IIgG感染者451例（男296例,女155例）,感染率为48．8％（451／924）;HSV—IIIgM感染者410例（男246例,女164例）,感染率为44．4％（410／924）;HSV-IIIgG感染者515例（男316例,女199例）,感染率为55．7％（515／924）。女性HSV-Ⅱ感染率高于男性,二者差异有显著性（x^2=19．2,P—0．000,P〈0．05）。结论本地区性病门诊中HSV抗体检出率高,以HSV-I感染为主;在有典型生殖器疱疹或高度可疑患者中,女性HSV-11感染率高于男性;在无明显生殖器疱疹症状患者中,亦可以检出HSV-II,且存在混合感染,临床上需重视。     

Intravascular naked DNA vaccine encoding glycoprotein B induces protective humoral and cellular immunity against herpes simplex virus type 1 infection in mice

Naked plasmid DNA (pDNA) vaccine expressing herpes simplex virus type 1 (HSV-1) glycoprotein B (gB) was tested for protective activity against acute HSV-1 infection in mice. The pDNA was intravenously injected into Balb/c mice via their tail vein under high pressure, and the vaccination was performed two times at an interval of 7 days. The gB gene vaccination significantly protected the mice from subsequent intraperitoneal challenge with a lethal dose of HSV-1, which killed all the animals given control plasmid or saline. The protective activity was correlated with the dose of the plasmid inoculated, the survival rate reaching 83% in mice vaccinated with 5 microg of pDNA. The vaccinated mice were also protected from latent HSV infection. The immunized mice showed significant elevation in neutralizing antibody against HSV-1 as well as serum levels of interleukin-12 (IL-12) and interferon-gamma (IFN-gamma). When mice were immunized with 5 microg of an Epstein-Barr virus (EBV)-based plasmid vector harboring the gB, the cytotoxic T lymphocytes (CTLs) activity and proliferative response for HSV-1 were also induced. The results strongly suggest that intravenous immunization of naked pDNA may induce humoral and cellular immune responses against the virus, leading to a significant prophylactic outcome against HSV-1 infection in mice.     

天花粉蛋白对单纯疱疹病毒1型DNA聚合酶和DNA结合蛋白mRNA表达的影响

目的探讨天花粉蛋白对体内外单纯疱疹病毒-1（HSV-1）DNA聚合酶和DNA结合蛋白mRNA表达的抑制作用。方法 36只小鼠随机分为正常组、模型对照组和天花粉蛋白治疗组,每组各12只,小鼠颅内接种HSV-1建立病毒性脑炎模型,治疗组于接种HSV-1前30min腹腔注射天花粉蛋白注射液,于接种病毒后12h、24h、48h、96h分别测定脑组织HSV-1DNA聚合酶和DNA结合蛋白mRNA表达水平。体外培养神经细胞分为正常组、药物对照组、病毒对照组和药物预处理组,接种病毒后12h、24h、48h、96h分别测定各组培养神经细胞的HSV-1DNA聚合酶和DNA结合蛋白mRNA表达水平。结果天花粉蛋白治疗组于小鼠颅内接种HSV-1后12h、24h、48h、96h脑组织HSV-1DNA聚合酶mRNA表达水平（8.39±0.84、9.62±0.87、7.81±0.90、7.66±0.85）显著低于模型组（11.26±1.02、12.43±1.17、11.56±1.68、12.78±1.71）（P〈0.05）;治疗组脑组织HSV-1DNA结合蛋白mRNA表达水平（7.28±1.07、8.25±0.78、7.56±0.96、7.85±1.22）显著低于模型组（10.45±2.72、12.33±1.97、11.24±1.86、12.54±2.32）（P〈0.01）。药物预处理组在12h、24h、48h、96h培养神经细胞HSV-1DNA聚合酶mRNA表达水平（9.33±0.87、9.57±0.97、9.73±0.94、9.84±0.86）显著低于病毒对照组（10.15±1.12、15.63±1.24、12.77±2.38、16.58±1.92）（P〈0.05）;药物预处理组在24h、48h、96h培养神经细胞HSV-1DNA结合蛋白mRNA表达水平（7.58±1.75、8.63±1.79、7.38±1.47）显著低于病毒对照组（10.24±2.16、10.85±1.67、11.63±2.05）（P〈0.05）。结论天花粉蛋白对体内外HSV-1DNA聚合酶和DNA结合蛋白mRNA表达具有抑制作用。     

Genetic susceptibility to virus associated encephalitis or encephalopathy

There has been rapid progress in the understanding of the protective mechanism against infection during the past decade. We reviewed the genetic susceptibility in familial or recurrent encephalitis/encephalopathy and subacute sclerosing panencephalitis (SSPE). Recessive mutation of UNC-93B1 and dominant mutation of TLR3 were associated with herpes simplex encephalitis (HSE). Those mutations impair the dsRNA-induced IFN-alpha/beta and IFN-lambda production and predispose to HSE. Dominant mutation of RANBP2 (encoding a nuclear pore protein) was detected in familial or recurrent patients with acute necrotizing encephalopathy. Polymorphisms of MxA, IL-4, IRF1, TLR3, PD1 and TLR3 are probably associated with the development of SSPE. Identification of causing or predisposing genes would enable the early diagnosis and the establishment of effective protection or treatment.     

Development of a novel non-human primate model for preclinical gene vector safety studies. Determining the effects of intracerebral HSV-1 inoculation in the common marmoset: a comparative study

The owl monkey (Aotus trivirgatus) has served as the standard non-human primate model of herpes simplex virus-1 (HSV-1) infection because it is highly susceptible to HSV-1 encephalitis. Owl monkeys, however, are expensive, difficult to obtain, and difficult to maintain in captivity, thus greatly hampering the efficiency of preclinical gene therapy trials for brain tumors using HSV-1-based vectors. We have therefore compared the susceptibility of the common marmoset (Callithrix jacchus) with the owl monkey in a model of intracerebral inoculation of wildtype HSV-1 F-strain at increasing titers. The common marmosets consistently succumbed earlier to viral encephalitis than the owl monkeys. The histological evaluation of the common marmoset revealed extensive HSV-1 infection with a concomitant yet less marked inflammatory response compared to the owl monkeys. PCR for HSV-1 demonstrated a similar extra-CNS shedding route in both experimental models. Our findings show that the common marmoset is at least as susceptible to intracerebral HSV-infection as the owl monkey and that it can therefore serve as a valid and reliable experimental model for the important preclinical safety tests of HSV-based therapeutic viral vector constructs in the brain.     

1082例妊娠妇女TORCH感染情况调查分析

目的了解目前重庆地区妊娠期妇女感染弓形虫(TOX)、风疹病毒(RV)、巨细胞(CMV)、单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-Ⅱ)的现状。方法采用抗体捕获酶联免疫吸附试验(ELISA)对2008年8月至2009年10月进行孕前或产前检查的1082例妇女进行TOX、RV、CMV、HSV-Ⅱ检测。结果妊娠期妇女感染弓形虫、风疹病毒、巨细胞、单纯疱疹病毒Ⅱ型的阳性率分别为7.30%、3.33%、2.40%、9.43%。结论重庆地区妊娠期妇女单纯疱疹病毒Ⅱ型、弓形虫感染较高,针对目前妊娠期妇女感染TORCH后无特效治疗状况,应加强TORCH知识普及,加强孕前检查。做好优生优育工作,提高人口素质。