复方黄芩片对人牙周膜细胞及牙周炎牙槽骨OPG/RANKL表达的影响

目的:探讨复方黄芩片对人牙周膜细胞表面以及对实验性牙周炎大鼠牙槽骨OPG/RANKL表达的影响。方法:采用酶消化组织块法培养hPDLCs,通过ELISA法测定复方黄芩片对LPS诱导下hPDLCs表面OPG/RANKL表达的影响;LPS局部注射法建立大鼠牙周炎模型,免疫组化法测定复方黄芩片对牙周炎大鼠牙槽骨OPG/RANKL表达的影响。结果:0.2 mg/L复方黄芩片溶液对10 mg/L LPS诱导下的hPDLCs表面OPG表达无明显影响,而hPDLCs表面RANKL的表达显著降低(P<0.05),且实验组 hPDLCs表面OPG/RANKL的比值较空白对照组显著降低(P<0.05);复方黄芩片治疗3周后各组大鼠OPG/RANKL免疫组化染色阳性细胞计数结果显示牙周炎组大鼠牙周组织中RANKL的表达水平明显高于其他各组,治疗组OPG表达水平明显高于其他各组。结论:复方黄芩片可以上调牙周膜细胞表面OPG/RANKL的比值;按黄芩苷2.85 g/kg·d^-1的剂量给予牙周炎大鼠复方黄芩片灌胃治疗,复方黄芩片可以抑制牙周炎牙槽骨中RANKL的表达,促进OPG的表达。提示复方黄芩片有望用于牙周炎的临床治疗。     

定量观察力值对人牙周膜细胞骨改建相关细胞因子表达的影响

目的 定量观察不同力值的机械牵张力对体外培养的人牙周膜细胞骨改建相关细胞因子的影响.方法 利用北京理工大学研制的细胞加力装置对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)施加不同大小的周期性牵张力(5％、10％细胞表面拉伸率),检测其对细胞的骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨保护素配体(receptor activator of nuclear factor kappa-Bligand,RANKL)及成骨相关转录因子RUNX2、Osterix表达的影响.实验结果用SPSS 13.0进行统计分析.结果 加力后RUNX2、Osterix在5％组表达量呈现时间依赖性增加,但变形量10％组增加出现的较早且之后会出现平台期;细胞受力后OPG在5％和10％组表达量均呈现时间依赖性增加,两组间不存在显著性差异;细胞受力后RANKL的表达量在两组中均受到抑制.结论 周期性牵张力刺激对人牙周膜细胞成骨相关因子RUNX2、Osterix和破骨相关因子OPG、RANKL的表达有一定的影响,并且在不同力值刺激下这些细胞因子的表达随时间变化的形式不同.     

重组人白介素-1α对人牙周膜成纤维细胞表达RANKL和OPG影响的荧光定量RT-PCR研究

目的：通过观察重组人白介素-1α（rhIL-1α）对体外培养人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）核因子kB受体活化因子配基（RANKL）和骨保护素（OPG）表达的影响来探讨牙槽骨改建的调节机制。方法：以不同浓度rhIL-1α（0、5、10、20μg/L）作用于体外培养HPDLFs,于24 h后收集细胞,利用荧光定量RT-PCR技术检测RANKLmRNA和OPG mRNA的表达。结果：rhIL-1α同时上调HPDLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,但RANKL/OPG的比值增加,这种调节作用在10μg/L的作用浓度时最明显。结论：rhIL-1α可在体外影响HP-DLFs表达RANKL mRNA和OPG mRNA,调节RANKL/OPG比值,与牙槽骨改建密切相关。     

人白介素－1β水平与人牙周膜细胞OPG表达关系

目的：检测不同浓度重组人白介素－1β（recombinant human interleukin－1β,rhIL－1β）对体外培养人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,HPDLCs）表达骨保护因子（osteoprotegerin,OPG）的影响,研究rhIL－1β水平对牙周膜细胞骨向分化的作用。方法：正畸需要而拨除的健康前磨牙牙周膜,体外传代培养HPDLCs;ELISA法和RT－PCR法测定不同浓度rhIL－1β（0、5、10、15μg／L）下HPDLCs的OPG分泌量及mRNA表达。结果：ELISA和RT－PCR法检测结果显示,5、10、15μg／L rhIL－1β作用于HPDLCs均会下调其OPG蛋白分泌和mRNA表达。同一时间点与0μg／L对照组比较,5、10、15μg／L组OPG蛋白分泌和mRNA表达依此下调,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：rhIL－1β水平升高会增强对HPDLCs的OPG表达抑制,对牙槽骨健康产生不利影响。     

抗牙龈素粘附片段Hgp44卵黄抗体对实验性牙周炎的抑制作用

目的: 观察抗牙龈素粘附片段Hgp44卵黄抗体(抗Hgp44-IgY)对大鼠实验性牙周炎的抑制作用。方法: 24只雄性SD大鼠随机分为4组:空白组(A),生理盐水孵育组(B),抗Hgp44-IgY孵育组(C)和西吡氯铵孵育组(D)。采用细线结扎大鼠4颗第一磨牙,分别接种经处理的牙龈卟啉单胞菌,辅以蔗糖饮水。4周后检测大鼠牙龈指数(GI),龈下菌斑的BANA试验。处死大鼠后检测牙槽骨丧失量(ABL),牙龈的HE染色,利用qRT-PCR检测牙龈中IL-10、OPG和RANKL mRNA相对表达水平以及OPG/RANKL比率。结果: C组和D组与B组相比,GI、ABL以及BANA结果均显著降低(P<0.01),牙龈组织中IL-10和OPG的mRNA表达水平均显著增高(P<0.01),RANKL mRNA的表达水平显著下降(P<0.05),OPG/RANKL比率显著增高(P<0.001),C组与D组相比,GI、ABL、BANA、IL-10,OPG mRNA水平和OPG/RANKL比率无统计学意义,OPG mRNA 表达水平显著降低(P<0.05)。结论: 抗Hgp44-IgY能减少牙槽骨的吸收,减缓大鼠实验性牙周炎的发展进程。     

高迁移率族蛋白B1对牙周膜成纤维细胞表达细胞因子影响的研究

目的观察高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对人牙周膜成纤维细胞表达白细胞介素-6（IL-6）、破骨细胞核因子κB受体活化因子（RANKL）、骨保护因子（OPG）的影响,初步探讨HMGB1在牙周疾病的作用。方法采用原代组织块培养法,培养人牙周膜成纤维细胞,用第4~6代的细胞进行实验。分别用10、30、100 ng·mL-1质量浓度的HMGB1孵育牙周膜成纤维细胞24 h后,RT-PCR检测IL-6、RANKL、OPG的mRNA表达;Western blot法检测RANKL、OPG的蛋白表达。均以0 ng·mL-1质量浓度组为对照,所得数据用单因素方差分析处理。结果HMGB1在10、30、100 ng·mL-1质量浓度时,细胞中的RANKL/OPG mRNA的比值增高（P<0.05）,100 ng·mL-1质量浓度时细胞中的IL-6 mRNA的表达量增高（P<0.05）。Western blot检测结果显示10 ng·mL-1质量浓度组的RANKL/OPG的比值有明显增高。结论一定浓度的HMGB1可使牙周膜细胞中的RANKL/OPG比值增高,还会诱导炎症因子IL-6 mRNA表达上调。提示HMGB1可能会在牙周炎的发病以及炎症进展中发挥作用。     

前列腺素E2对人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达的影响

目的：探讨前列腺素E2（prostaglandin E2,PGE2）对人牙周膜成纤维细胞（HPDLFs）核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）、骨保护素（OPG）mRNA表达的影响。方法：将体外培养的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度（10^-9、10^-8、10^-7、10^-6mol/L）的PGE2分别处理2、8、24、48h,使用Trizol抽提总RNA,通过半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）来观察人牙周膜成纤维细胞RANKL/OPG mRNA表达强度变化。结果：10^-9～10^-6mol/LPGE2在2～24h可上调人牙周膜成纤维细胞RANKL mRNA的表达,但抑制OPGmRNA的表达,且RANKL/OPG比率呈上升趋势。结论：PGE2有可能通过调节人牙周膜成纤维细胞的RANKL/OPG mRNA表达比例,从而间接地调节破骨细胞的分化和活性。     

缺氧与加力在正畸骨吸收作用中的细胞学研究

目的 观察缺氧对正畸压力侧破骨细胞形成的影响,探讨缺氧、加力在正畸骨改建中各自所起的作用,并分析其在破骨细胞形成过程中的相互作用关系.方法 建立人牙周膜细胞与外周血单个核细胞接触式共培养模型,模拟正畸缺氧、加力、缺氧+加力,不同条件作用1、3、6h后培养3d,TRAP染色检测破骨样细胞的形成.Reahime PCR检测骨改建相关因子HIF-1α 、IL-1β、RANKL、OPGmRNA的表达并计算RANKL/OPG比值.结果 TRAP染色阳性细胞在缺氧+加力组各个处理时间段都有出现,缺氧组则在处理3、6h中出现,加力组仅在处理6h中出现,且缺氧+加力组的阳性细胞数目均大于单独缺氧、加力组.HIF-1α、IL-1β、RANKL、OPGmRNA的表达及RANKL/OPG比值都呈现出缺氧+加力组均大于单纯缺氧、加力组.结论 缺氧和加力分别可以诱导与人牙周膜细胞共培养的单个核细胞向破骨细胞分化,缺氧和加力相互协同、共同促进正畸牙齿移动过程中骨吸收的发生.     

依那西普对牙龈卟啉菌内毒素作用下原代培养牙周膜细胞影响的实验研究

目的　观察依那西普（Etanercept）对牙龈卟啉菌内毒素（lipopolysaccharide,LPS)作用下体外培养的人牙周膜细胞(HPDLCs)的增殖能力的影响。方法　体外原代培养人牙周膜细胞,经免疫细胞化学鉴定,加入LPS和1 μg/ml Etanercept+LPS,LPS浓度分别为10、50、100、200、300 μg/ml检测（吸光度）A值。采用MTT法测定细胞增殖能力。结果　 人牙周膜细胞原代细胞生长状态良好。第3代细胞进行鉴定,Vimentin染色呈阳性,Ck(pan)染色呈阴性。MTT法检测加入梯度浓度的LPS 24 h后,HPDLCs增殖率随着LPS浓度的增加,对HPDLCs的增殖抑制逐渐增强,200 μg/ml LPS能最大程度抑制HPDLCS的增殖,抑制率为46.21%(P<0.01)。Etanercept + LPS组对HPDLCs细胞作用相对增殖率与LPS组比较（P＜0.01）,能明显抑制LPS对HPDLCs的抑制作用。结论　TNF-α抑制剂Etanercept能明显抑制牙周膜细胞在内毒素刺激下的死亡。     

基于RANKL/OPG通路探讨GsMTx4对大鼠正畸牙齿移动过程中压力侧牙周组织改建的影响

目的：从核因子-κB受体活化因子配体（RANKL）/骨保护素（OPG）通路探讨Piezo1蛋白通道的抑制剂GsMTx4对大鼠正畸牙齿移动过程中压力侧牙周组织改建的影响。方法：75只健康SD雄性大鼠构建正畸模型,随机分为对照、加力、加力+GsMTx4组。测量第一磨牙近中移动距离,HE染色观察上颌第一磨牙近中根压力侧牙周组织病理变化,免疫组化染色观察RANKL、OPG在压力侧牙周组织的表达量及定位,并观察RANKL/OPG比值的变化,抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察压力侧牙周组织中破骨细胞数量变化。结果：随着加力时间的延长,牙齿移动距离逐渐增加,加力组牙齿移动距离高于加力+GsMTx4组（P<0.05）;加力组与加力+GsMTx4组RANKL、RANKL/OPG比值以及破骨细胞数量均呈现先升高后降低的趋势,OPG呈现逐渐上升的趋势,且加力+GsMTx4组的值低于加力组（P<0.05）。结论：GsMTx4能够降低大鼠正畸牙齿移动过程中压力侧牙周组织中RANKL、OPG蛋白的表达,并且能够抑制破骨细胞的分化,从而降低骨吸收活动,进而抑制牙齿移动。     

破骨细胞核因子κB受体活化因子配体和骨保护素在根尖周囊肿和肉芽肿中的表达及意义

目的检测破骨细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）和骨保护素（OPG）在根尖周囊肿及根尖周肉芽肿中的表达水平,探讨RANKL和OPG在不同根尖周疾病周围骨质破坏机制中的作用。方法收集根尖周囊肿组织20例为囊肿组,根尖周肉芽肿组织20例为肉芽肿组,正常牙的牙周膜组织20例为对照组。采用免疫组织化学法检测RANKL和OPG在根尖周囊肿、根尖周肉芽肿和正常牙周膜组织中的阳性表达。结果在囊肿组、肉芽肿组、对照组中,RANKL的表达分别为75.00±7.54、68.40±6.74和29.40±2.46,OPG的表达分别为38.10±7.09、47.65±13.85和58.60±5.88,3组间的差异均有统计学意义（P<0.01）。相关性分析表明,囊肿组中RANKL与OPG呈负相关关系（r=-0.56,P=0.01）,肉芽肿组和对照组中RANKL和OPG无相关关系（P>0.05）。结论RANKL与OPG参与了根尖周病变引起的骨吸收过程。在根尖周病变中,RANKL和OPG的表达失调,RANKL增加而OPG减少,骨吸收活跃,导致溶骨性病变。根尖周囊肿的骨吸收活动较根尖周肉芽肿更活跃。     

静压力对人牙周膜干细胞骨向分化能力的影响

目的:观察静压力对人牙周膜干细胞(h PDLSCs)骨向分化能力的影响。方法:体外培养h PDLSCs,并将其随机分为4个组;置于压力加载装置内分别给予0(对照组)、20、100、200 k Pa的静压力刺激,连续加压6 h后分别采用Quantitative RT-PCR和Western-blots法检测h PDLSCs的破骨细胞核因子KB受体活化因子配基(RANKL)及骨保护因子(OPG)的表达。结果:与对照组相比,当压力值为20 k Pa时,RANKL mRNA和蛋白的表达量变化不明显(P>0.05),但OPG的表达量明显升高(P<0.05),RANKL/OPG的比值明显降低(P<0.05);当压力值为100 k Pa时,RANKL mRNA和蛋白的表达量明显升高(P<0.05),但OPG的表达量降低(P<0.05),RANKL/OPG的比值明显升高(P<0.05);当压力值为200 k Pa时,RANKL、OPG mRNA和蛋白的表达量均明显降低(P<0.05),其中以RANKL下降的程度更加明显,RANKL/OPG的比值明显降低(P<0.05)。结论:持续的静压力作用可使h PDLSCs表达OPG和RANKL的水平发生明显变化,并具有力值依赖性。     

体外培养的人牙周膜细胞在机械力作用下骨保护因子mRNA的表达

目的研究机械力对体外培养的人牙周膜细胞骨保护因子(osteoprotegerin,OPG)信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达的影响.方法应用细胞加力装置对体外培养的人牙周膜细胞施予间歇性牵张力48小时,原位杂交检测细胞加力前后OPG mRNA的表达.结果机械力作用下人牙周膜细胞OPG mRNA表达下降.结论正畸骨改建过程中,机械力引起牙周膜细胞OPG表达的变化.这一结论为进一步研究人牙周膜细胞在机械力作用下参与骨改建的机理打下基础.     

犬牙周膜牵张快速移动牙压力侧牙周组织中RANKL和OPG表达的研究

目的观察Beagle犬牙槽隔减阻牙周膜牵张(periodontal ligament distraction,PDLD)快速移动牙齿压力侧牙周组织中RANKL和OPG的表达变化。方法 8只纯种Beagle犬随机分为四组,每只犬下颌左右第一前磨牙随机分为PDLD侧和常规方法正畸牙齿移动对照侧。测量相同加力时间内移动牙的移动距离;取标本,HE染色观察移动牙压力侧牙周组织的形态学变化;TRAP染色观察压力侧牙周组织中破骨细胞数目的变化;免疫组化染色观察移动牙压力侧牙周组织中RANKL、OPG的变化。结果加力后,PDLD侧移动牙压力侧牙周组织中TRAP阳性破骨细胞数明显增加,在加力2周时达峰值。PDLD侧移动牙压力侧牙周组织中RANKL和OPG含量均有升高,RANKL/OPG含量比值在加力2周时最高。结论与常规正畸牙齿移动相比,在牙槽隔减阻牙周膜牵张移动牙齿过程中RANKL、OPG的表达和RANKL/OPG含量比值变化更显著,与移动牙压力侧牙周组织的快速改建有关。     

IL-1β对人牙周膜成纤维细胞OPG、RANKL mRNA表达的影响

目的:以体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)为研究对象,观察不同浓度的白细胞介素-1β(IL-1β)对人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)中骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化剂配体(RANKL)mR-NA表达的影响。方法:组织块法体外原代培养HPDLF并鉴定,以第5代HPDLF作为实验靶细胞,分别用不同浓度(0、0.01、0.1、1、10、100 ng/mL)的IL-1β进行干预,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HPDLF中OPG、RANKL mRNA的表达。结果:IL-1β在0.01～10 ng/mL浓度范围内能明显上调HPDLF中OPG mRNA的表达(P<0.05),并在0.1 ng/mL时上调作用达到最大(P<0.05)。此后,随着IL-1β浓度的增加,OPG mRNA的表达量逐渐减少。IL-1β在0.01～100 ng/mL浓度范围内均可明显上调HPDLF中RANKL、RANKL/OPGmRNA的表达(P<0.05),且呈剂量依赖性,即随着IL-1β浓度增加,HPDLF中RANKL、RANKL/OPG mRNA的表达也逐渐增加,各浓度组两两比较除10 ng/mL与100 ng/mL相比无显著性差异外,其余各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:IL-1β可促进HPDLF中RANKL mRNA的表达,上调RANKL/OPG mRNA的比值。     

黄芩苷对人牙周膜细胞功能活性调节的实验研究

目的：通过观察中药黄芩的有效成份黄芩苷对人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,hPDLCs）增殖、矿化成骨等功能活性的影响,研究黄芩对人牙周膜细胞的调节作用。方法：采用组织贴块联合胶原酶消化的方法,体外分离、培养、纯化和鉴定hPDLCs后,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法、酶联免疫吸附、半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）等方法,检测不同浓度的黄芩苷（10、1.0、0.1、0.01mg/L）对hPDLCs增殖、矿化成骨、骨保护素（osteoprotegerin,OPG）、细胞核因子-κB受体活化因子配基（receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL）mRNA表达等方面的影响。结果：0.1mg/L的黄芩苷对于增加人牙周膜细胞的增殖活性、碱性磷酸酶活性和Ⅰ型胶原蛋白的表达作用最强;适宜浓度的黄芩苷可以降低RANKL/OPGmRNA比值。结论：黄芩苷能促进hPDLCs的增殖和成骨作用,该作用可能与RANKL/OPG信号通路相关。     

低能量激光对正畸力作用下牙周膜细胞骨改建相关因子mRNA表达的影响

目的 研究低能量激光对正畸张应力及压应力作用下人牙周膜细胞骨改建相关因子mRNA表达的影响.方法 培养人牙周膜细胞,模拟正畸加力,结合低能量激光照射,在不同条件下(激光、应力、激光+应力)培养6 h,通过Realtime PCR检测IL-1β、Runx2、OPN、OPG、RANKL mRNA的表达并计算RANKL/OP...     

牵张应力对人牙周膜细胞MMP-2表达的影响及相关信号通路的研究

目的：探讨NF-κB通路对牵张应力介导的人牙周膜细胞（HPDLCs）中MMP-2表达的影响.方法：按胶原酶消化法培养HPDLCs,分为5组：非加力对照组（A组）;12％形变率,3h组（B组）;12％形变率,6h组（C组）;12％形变率,12h组（D组）;12％形变率＋PDTC干预,12h组（E组）,通过细胞牵张应力加载系统施加机械牵张应力,结束后收集细胞提取蛋白,用蛋白印迹法检测MMP-2蛋白表达的变化.结果：B、C、D组MMP-2表达大于A组,差异有统计学意义（P＜0.05）,且随着作用时间的延长蛋白表达增加;NF-κB通路抑制剂PDTC可抑制机械牵张应力作用下牙周膜细胞MMP-2表达的增加.结论：持续机械牵张应力可诱导人牙周膜细胞MMP-2表达的增加,从而影响牙周组织细胞外基质代谢,机械牵张应力可通过NF-κB通路影响MMP-2蛋白的表达.