大黄素对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响

背景：既往研究显示,沉默交配型信息调节因子2同源蛋白1(silent mating-type information regulator 2 homolog 1,SIRT1)-雷帕霉素机械靶蛋白(mechanistic target of rapamycin,mTOR)信号在骨关节炎进展中起重要作用,大黄素对骨关节炎软骨细胞有一定的保护作用。目的：基于SIRT1-mTOR探究大黄素对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡和氧化应激的影响。方法：体外分离培养大鼠软骨细胞,采用10 ng/mL的白细胞介素1β诱导构建体外骨关节炎细胞模型,以CCK-8法测定经0,20,40,80,120,160μmol/L的大黄素处理后的大鼠软骨细胞活力,选出合适大黄素作用浓度。将软骨细胞随机分为对照组、模型组、大黄素低剂量组、大黄素高剂量组、SIRT1抑制剂EX527组、大黄素高剂量+EX527组,除对照组外其余各组以10 ng/mL的白细胞介素1β诱导构建体外骨关节炎模型,同时以大黄素和EX527分组处理细胞后,用CCK-8法、Edu染色法及流式细胞术分别检测各组细胞增殖与凋亡情况;用试剂盒检测各组细胞活性氧相对含...     

软骨细胞凋亡与骨关节炎

骨关节炎 (OA)是一种老年人常见的关节疾患 ,近年研究显示 ,软骨细胞过度凋亡可能在OA的发病中产生了重要影响。在OA中 ,软骨细胞凋亡多通过NO途径和Fas途径发生 ,并且受IL 1β、TNF α、IL 8、bcl 2等因素的影响。阐明软骨细胞凋亡在OA的发病机制中的作用 ,将有助于OA的防治。     

037 软骨细胞凋亡与骨关节炎

骨关节炎(OA)是一种老年人常见的关节疾患,近年研究显示,软骨细胞过度凋亡可能在OA的发病中产生了重要影响.在OA中,软骨细胞凋亡多通过NO途径和Fas途径发生,并且受IL-1β、TNF-αIL-8、bcl-2等因素的影响.阐明软骨细胞凋亡在OA的发病机制中的作用,将有助于OA的防治.     

CRNDE靶向微RNA-212-5p基因对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子分泌的影响

探讨CRNDE对白细胞介素1β（IL-1β）诱导的软骨增殖、凋亡和炎性因子表达的影响及可能机制。研究发现,与对照组比较,骨关节炎组患者软骨组织中CRNDE表达升高,而miR-212-5p表达降低。下调CRNDE可靶向负调控miR-212-5p提高IL-1β诱导的软骨细胞增殖,并降低细胞凋亡和炎性因子表达,CRNDE/m...     

依托考昔抑制SDF-1/CXCR4信号通路影响骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎性因子表达

为探讨依托考昔对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡、炎性因子表达的影响及其对基质细胞衍生因子1 (stromal cell derived factor 1,SDF-1)/CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR4)信号通路的调控作用,原代分离培养人骨关节炎软骨细胞,分别加入浓度为12....     

青藤碱对炎性刺激下体外培养关节软骨细胞的保护作用

目的体外培养脂多糖（LPS）诱导的初生小牛关节软骨细胞炎症损伤模型并以青藤碱（sN）干预,从而研究SN对关节软骨细胞的保护作用。方法无菌分离并体外培养初生小牛的膝关节软骨细胞,以不同浓度组LPS刺激细胞诱导炎症损伤模型,比色法检测培养液上清中的一氧化氮（NO）生产量,MTY法检测不同浓度SN对正常培养细胞活力的影响,从而选择合理的造模及给药剂量;以低、中、高3种剂量的SN干预LPS诱导的软骨细胞炎症损伤模型,并设立模型对照组、空白对照组,检测各组细胞培养液上清中的NO、丙二醛（MDA）产生量,检测一氧化氮合成酶（NOS）、超氧化物歧化酶（SOD）活性,分析sN对细胞炎症损伤模型的干预作用。结果各浓度LPS均能剂量依赖性地促进软骨细胞产生NO,依次为（11．0±0．4）、（16．7±0．5）、（21．0±0．7）、（26．3±0．6）、（42．4±0．5）、（52．4±0．9）、（72．3±0．5）μmol／L,分别与空白组比较,差异均有统计学意义（P值均〈0．01）。MTT法检测各浓度SN作用下软骨细胞相对活力,OD值分别为0．444-0．01、0．43±0．02、0．444-0．0l、0．43±0．02、0．43±O．02,分别与空白组差异均无统计学意义（P值均〉0．1）。未加SN干预LPS组与对照组NO、MDA、NOS、SOD比较差异有统计学意义,t值分别为-135．0、-16．1、-150．4、32．3,P值均〈0．0l。加入各浓度SN的LPS组分别与不加SN的LPS组比较NOS释放量SN组较低,t值分别为-74．7、-33．5、43．4,P值均〈0．01;分别比较NO释放量SN组较低,t值分别为-11．4、-7．1、-5．5,P值均〈0．01;分别比较SOD活力SN组较高,t值分别为-105．5、40．3、-20．5,P值均〈0．01;分别比较MDA产生量SN组较低,t值分别为21．5、10．7、17．7,P值均〈0．01,差异有统计学意义,且呈一定的剂量依赖性。结论sN能对抗LPS诱导的脂质过氧化及炎性损伤,提高软骨细胞的超氧化物歧化酶活性,提高氧自由基清除水平,对软骨细胞具有保护作用。     

circFADS2靶向miR-488-3p对骨关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响

目的：探讨circFADS2对骨关节炎（OA）软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子表达的影响及分子机制。方法：收集45例OA患者和33例健康体检者静脉血,RT-qPCR检测circFADS2和miR-488-3p表达水平;将软骨细胞分为control组、OA组（10μg/L IL-1β）、OA+si-circFADS2组、OA+si-NC组、OA+miR-488-3p mimic组、OA+miR-NC组、OA+si-circFADS2+miR-488-3p inhibitor组。MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA检测IL-6、IL-8水平;双荧光素酶报告实验检测circFADS2和miR-488-3p的靶向关系。结果：与健康体检者相比,OA患者血浆中circFADS2表达水平升高,miR-488-3p表达水平降低,且circFADS2和miR-488-3p的表达水平与患者年龄及OA分期显著相关（P<0.05）。抑制circFADS2表达或过表达miR-488-3p,OA细胞活性升高,细胞凋亡率降低,IL-6、IL-8水平降低（P<0.05）。circFADS2...     

青藤碱对RBL-2H3肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响

目的 通过研究青藤碱对肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响,深入探讨青藤碱的抗炎作用机理.方法 应用细胞培养,流式细胞术等方法,观察青藤碱等药物对体外培养的RBL-2H3肥大细胞增殖凋亡以及活化脱颗粒的影响.结果 青藤碱对肥大细胞增殖有明显的抑制作用,其IG50约为1 mmol/L,并能促进肥大细胞凋亡,且对RBL-2H3肥大细胞活化脱颗粒有较强的抑制作用.结论青藤碱可能部分通过下调肥大细胞功能发挥抗炎抗风湿作用.     

LncRNA TMPO-AS1通过调节miR-204-3p影响肺癌细胞的增殖、凋亡和侵袭

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)TMPO-AS1通过调节miR-204-3p的表达对肺癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法:实时荧光定量PCR(qPCR)检测人肺癌细胞系A549、H1975、H1299和H1650和人正常支气管上皮细胞系HBE中TMPO-AS1的表达水平.采用脂质体转染技术沉默A549细胞中T...     

SIRT1作为调控软骨细胞自噬潜在靶点治疗骨关节炎的研究进展

目前骨关节炎的治疗主要以缓解疼痛和延缓病情发展的对症治疗为主.近年来研究表明,Sirtuin1(SIRT1)是骨相关疾病的潜在治疗靶点,可通过促进自噬来保护软骨细胞.本文就SIRT1通过调控自噬来保护软骨细胞以及SIRT1作为治疗骨关节炎等骨退行性疾病潜在靶点的研究进展做一综述.     

miR-9-5p通过抑制SIRT1调控骨关节炎发病进程中软骨细胞的凋亡

为研究miR-9-5p靶向沉默信息调节因子2相关酶1(silent information regulator factor 2-related enzyme 1, SIRT1)对骨关节炎(osteoarthritis, OA)软骨细胞凋亡的影响及相关机制,对小鼠的原代软骨细胞进行分离、培养并构建OA细胞模型(加入IL-1β)和OA小鼠模型,检测miR-9-5p的表达、Caspase-3活性、细胞活性及凋亡。确定miR-9-5p和SIRT1存在靶向关系后检测SIRT1活性和上述指标。用番红O-固绿对OA小鼠组织进行染色并分析,在OA小鼠模型中再次验证miR-9-5p通过抑制SIRT1对软骨细胞凋亡的影响。结果显示,miR-9-5p mRNA在OA组织及IL-1β处理的软骨细胞中表达显著升高(P<0.001), miR-9-5p可抑制OA软骨细胞活性(P<0.001)并促进其凋亡(P<0.01)。miR-9-5p靶向作用于SIRT1,并通过抑制SIRT1抑制OA软骨细胞活性(P<0.001),促进其凋亡(P<0.05)。在OA动物模型的验证中得到相同的结果。...     

人羊膜上皮细胞激活EGFR/ERK1信号轴调节关节软骨细胞增殖、凋亡和细胞外基质的合成

背景:以往研究发现,人羊膜上皮细胞具有促进骨关节炎修复的作用,但人羊膜上皮细胞对软骨再生的作用机制尚未明确.目的:探讨人羊膜上皮细胞对软骨细胞增殖、凋亡及细胞外基质合成能力的影响及其机制.方法:酶消化法分离人羊膜上皮细胞.将人羊膜上皮细胞、关节软骨细胞以及表皮生长因子受体信号通路抑制剂AG1478在Transwell小...     

桑寄生提取物联合miR-375对骨关节炎软骨细胞活力和凋亡的影响

目的:研究桑寄生提取物(SJS)联合微小RNA-375(miR-375)对骨关节炎软骨细胞活力和凋亡的影响及其作用机制。方法:将人原代骨性关节软骨细胞RPOC分为对照组(control)组、白细胞介素1β(IL-1β)组、IL-1β+SJS低剂量(SJS-L)组、IL-1β+SJS中剂量(SJS-M)组、IL-1β+SJS高剂量(SJS-H)组、IL-1β+anti-miR-NC组、IL-1β+anti-miR-375组、IL-1β+SJS-H+miR-NC组、IL-1β+SJS-H+miR-375组。MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,qPCR检测miR-375的表达,Western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、P21、Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的水平。结果:与control组比较,IL-1β组的RPOC活力(24 h、48 h和72 h)及cyclin D1和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0. 05),而P21、Bax和caspase-3蛋白的水平、细胞凋亡率及miR-375表达量均显著升高(P<0. 05)。与IL-1...     

针刀调控软骨细胞自噬维持骨关节炎软骨细胞的稳态

背景：针刀是治疗骨关节炎的有效方法,临床疗效肯定,但具体机制尚未明确。目的：探讨针刀调控软骨细胞自噬维持骨关节炎软骨细胞稳态的作用。方法：采用随机数字表法将28只新西兰兔分为对照组、骨关节炎组、针刀组和透明质酸组,每组7只,后3组保持左后肢过伸位采用石膏绷带固定6周建立膝骨关节炎模型,建模成功后,对照组与骨关节炎组不进行任何治疗,针刀组给予针刀治疗(15 min/次,1次/周),透明质酸组膝关节腔内注射透明质酸钠溶液(1次/周),均连续治疗5周。末次治疗后第2天,采用DR片观察兔膝关节宏观结构,透射电镜观察软骨细胞超微结构,Tunel染色检测软骨细胞凋亡,Western blot检测PI3K/Akt/mTOR通路及自噬相关蛋白表达。结果与结论：(1)DR片显示,骨关节炎组兔膝关节间隙变窄、周围骨赘形成;相较于骨关节炎组,透明质酸组、针刀组兔膝关节间隙增宽,周围骨赘减少;(2)透射电镜下可见骨关节炎组兔膝关节软骨细胞内自噬体数量减少,细胞核皱缩、核膜破裂,细胞器形态不完整、细胞呈现明显死亡趋向;相较于骨关节炎组,透明质酸组与针刀组自噬体明显增加,细胞核核膜完整,细胞生存状态良好;(3)T...     

青藤碱对T淋巴细胞活化及TH1类细胞内细胞因子表达的影响

目的：深入研究青藤碱对T淋巴细胞Thl类细胞因子表达的影响。方法：分离小鼠淋巴结细胞，加入不同浓度的青藤碱作用1小时后，加多克隆刺激剂PDB和离子霉素，继续培养4小时后收获细胞，进行细胞内细胞因子染色，以流式细胞术对T细胞Th1类细胞因子TNF-γ、炎症性细胞因子TNF-α分子表达情况进行分析；同时，观察药物对T细胞活化早期标志CD59表达的影响；结果：1000μmol／L(329．24μg/ml)青藤碱能够抑制CD69表达，200μmol/L青藤碱对CD69表达无影响；200、1000、2000μmol／L青藤碱能够剂量依赖性地显著降低T细胞内细胞因子TNF-γ、TNF-α分子表达。结论：抑制T细胞活化异常可能是青藤碱治疗类风湿关节炎免疫药理机制之一，此抑制效应可能主要不是通过影响PKC而是与影响钙离子依赖的T细胞活化信号传导途径相关。     

自体富血小板血浆对骨关节炎模型兔软骨细胞凋亡及NLRP3/IL-1β通路的影响

目的:探究富血小板血浆(PRP)对兔骨关节炎的作用及可能的机制。方法:制备膝骨关节炎兔模型,分为模型组、玻璃酸钠(SH)组和PRP组,另设假手术组,每组6只兔。观察兔软骨大体形态,进行半定量评分;HE染色观察软骨病理形态并进行半定量评分;TUNEL染色观察软骨组织细胞凋亡情况;免疫组化法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/白细胞介素1β(IL-1β)通路相关蛋白的表达;Western blot法检测caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达情况;分离软骨细胞,分组处理后采用ELISA测定细胞NLRP3和IL-1β水平。结果:与假手术组相比,模型组的Pelletier评分,Mankin评分,软骨细胞凋亡率,NLRP3、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、caspase-1和IL-1β蛋白阳性表达率,以及caspase-3和Bax蛋白水平均显著升高(P<0. 05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0. 05)。与模型组相比,SH组和PRP组的Pelletier评分,Mankin评分,软骨细胞凋亡率,NLRP3、ASC、caspase...     

中成药无敌丹对骨关节炎软骨细胞活力和软骨细胞凋亡的影响

背景：研究发现,无敌丹能够抑制病变关节局部的炎症反应,保护关节软骨。 目的：验证无敌丹对家兔软骨细胞活力和软骨细胞凋亡的影响及对家兔骨关节炎病变的治疗效果。 方法：用含无敌丹的血清培养基培养大鼠软骨细胞,通过与溶剂对照组对比,观察无敌丹对软骨细胞活力及凋亡的影响;采用改良Hulth法构建兔膝骨关节炎模型,无敌丹给药组给予无敌丹;溶剂对照组给予生理盐水,2次/d,连续给药4周。观察无敌丹对兔膝骨关节炎的治疗作用;镜下观察关节局部的软骨细胞情况;用免疫组织化学的方法检测软骨中白细胞介素1、基质金属蛋白酶3的水平。 结果与结论：无敌丹血清培养的软骨细胞凋亡率显著低于对照组;兔膝关节病理检查显示溶剂对照组软骨破坏程度较高,无敌丹组软骨破坏程度低;免疫组织化学染色显示无敌丹给药组胞质和胞外基质着色浅,阳性细胞数量少,白细胞介素1表达低;无敌丹给药组阳性表达的细胞数量少,着色浅,基质金属蛋白酶3表达被抑制。结果表明,无敌丹能够有效保护家兔骨关节炎病变部位关节软骨,减少炎症反应,对于骨关节炎有很好的治疗作用,其机制可能与抑制软骨细胞凋亡、减少细胞因子的生成及抑制基质金属蛋白酶的蛋白表达有关。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

粉防己碱减轻IL-1β诱导的体外人关节软骨细胞损伤

目的 粉防己碱(Tet)对白细胞介素1β(IL-1β)诱导原代人关节软骨细胞损伤的影响。方法 将人关节软骨细胞分为对照组、IL-1β组、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)抑制剂[二甲氧基雌二醇(2-ME2)]组、Tet低、中、高浓度组,每组设置6个重复。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;ELISA检测细胞中炎性相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶3(MMP-3)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶-2(COX-2)的水平以及抗氧化因子超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)的活性;Western blot检测细胞中HIF-1α、VEGF蛋白的表达。结果 与对照组相比,IL-1β组细胞的凋亡率、TNF-α、MMP-3、iNOS、COX-2的水平以及HIF-1α、VEGF蛋白表达均升高,细胞存活率、SOD和GPx活性均降低,差异有统计学意义(P<0.05);与IL-1β组相比,2-ME2组和Tet低、中、高浓度组细胞的凋亡率、TNF-α、MMP-3、iNOS、COX-2的水平以及HIF-1α、VEGF蛋白表达均降低,细胞存活率、SOD...     

PDZ结构域蛋白1缺失促进骨关节炎软骨细胞衰老

背景:骨关节炎以关节软骨的退变为主要病理特征,作为软骨中唯一的细胞,软骨细胞的衰老是骨关节炎发病的重要机制之一。但是骨关节炎的具体发病机制目前仍未清楚,因此探索疾病过程中的分子机制和信号通路变化,希望为骨关节炎的诊断与治疗提供新的生物靶点和研究方向。目的:探讨在骨关节炎进程中软骨PDZ结构域蛋白1(PDZ Domain Containing 1,PDZK1)对软骨细胞衰老的影响。方法:(1)8周龄C57/BL6小鼠随机分为实验组和假手术组,实验组又随机分为4,8周2个亚组。实验组小鼠行右侧膝关节内侧半月板胫骨韧带切除,游离内侧半月板,诱导骨关节炎;假手术组小鼠则仅切开关节囊而不行内侧韧带切除和半月板游离,检测PDZK1表达量。(2)用Ⅱ型胶原酶消化法分离新生C57/BL6乳鼠软骨细胞并培养,用10μg/L白细胞介素1β构建骨关节炎体外细胞模型,并利用siRNA-PDZK1敲低PDZK1,共分为未处理组、白细胞介素1β处理组(白细胞介素1β组)、siRNA-PDZK1组(si-PD组)、白细胞介素1β与siRNA-PDZK1共同刺激组(si-PD+白细胞介素1β组)。检测软骨细胞PDZK...     

甲基莲心碱可抑制白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡

背景：细胞凋亡参与了关节退行性疾病的形成过程,因此抗软骨细胞凋亡可能是治疗骨关节炎的有效途径。甲基莲心碱具有抗炎、抗肿瘤、抗凋亡等广泛的药理活性,其对软骨细胞凋亡的影响尚不明确。目的：探讨甲基莲心碱对白细胞介素1β诱导的软骨细胞凋亡的影响,阐明可能的作用机制。方法：(1)取对数生长期大鼠软骨细胞,分5组干预：对照组常规培养,模型组加入白细胞介素1β处理2 h后常规培养24 h,低、中、高浓度药物组加入白细胞介素1β处理2 h后分别加入5,10,20μmol/L甲基莲心碱培养24 h。培养结束后,检测细胞凋亡、细胞上清中软骨糖蛋白39及Ⅱ型胶原水平、凋亡相关蛋白的m RNA与蛋白表达、PERK/ATF4信号通路相关蛋白的m RNA与蛋白表达。(2)取对数生长期大鼠软骨细胞,分4组干预：对照组与模型组干预同上,药物组加入白细胞介素1β处理2 h后再加入20μmol/L甲基莲心碱培养24 h,激活剂组加入白细胞介素1β处理2 h后再加入20μmol/L甲基莲心碱、PERK/ATF4信号通路激活剂CCT020312培养24 h。培养结束后,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,...