甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗对小鼠的免疫原性观察

目的:观察国产甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗对小鼠的免疫原性.方法:将不同血凝素含量(20、30、40 μg/ml)各3批甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗分别免疫小鼠,腹腔注射0.5 ml/只,每批疫苗又分为1针组、2针组,每组10只,2针间隔1周,同时设对照组.首针免疫后21天,分别采血,分离血清,检测血凝抑制抗体效价和中和抗体效价,观察疫苗的免疫原性.结果:血凝素含量为20 μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗1针组、2针组血凝抑制抗体效价均小于1:40,中和抗体效价均小于1∶200;血凝素含量为30、40 μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗1针组、2针组的血凝抑制抗体效价均大于1∶40,中和抗体效价均大于1∶200;血凝素含量为30、40 μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗1针组和2针组的血凝抑制抗体和中和抗体效价比较,差异均无统计学意义.结论:血凝素含量为30 μg/ml的甲型H1N1流感病毒亚单位疫苗接种1针即可达到理想的免疫效果.     

新型抗蝰蛇毒血清对不同蝰蛇毒作用的实验研究

目的探讨新型抗蝰蛇毒血清对国产圆斑蝰蛇毒及缅甸蝰蛇毒的作用. 方法采用免疫电泳、SDS-聚丙烯酰胺电泳及动物实验等方法. 结果国产圆斑蝰蛇毒的LD50(腹腔注射)为0.306±0.003mg/kg,缅甸蝰蛇毒的LD50(腹腔注射)为0.290±0.003mg/kg.免疫电泳结果表明国产圆斑蝰蛇毒和缅甸蝰蛇毒均和新型抗蝰蛇毒血清产生明显的免疫沉淀线.体外中和实验表明抗蝰蛇毒血清对国产圆斑蝰蛇毒的中和抗体效价为2750μg/ml(约450LD50), 对缅甸蝰蛇毒的中和抗体效价为2490μg/ml(约430LD50).体内保护实验表明给予0.05ml抗蝰蛇毒血清可抵御254μg(约41.5LD50)国产圆斑蝰蛇毒或116μg(约20LD50)缅甸蝰蛇毒的攻击,使小鼠全部存活. 结论新型抗蝰蛇毒血清对国产圆斑蝰蛇毒及缅甸蝰蛇毒的中和抗体效价均较高,有较大的应用价值.     

HPD-红光对离体人胃癌MGC80-3细胞DNA合成和细胞杀伤作用

血卟啉衍生物(HPD)光敏作用有明确的杀伤肿瘤效应,其作用机制已有不少报导;我们在研究离体人肿瘤和正常细胞对[~3H]-HPD的摄取和存留的基础上,用液闪计数及细胞计数方法,测定HPD-红光对离体人胃癌MGC80-3细胞DNA合成和细胞杀伤作用。 MGC80-3细胞用小方瓶培养,每瓶接种1.5×10~5细胞,加2ml培养液(含15％小牛血清的Eagle液),细胞在37℃温箱培养16～18小时,以5μg/mlHPD处理30分钟、红光(波长6300A±,功率密度50mw/cm~2)照射5分钟,换含[~3H]-胸苷(1μcl/ml)培养液,继续培养,用液闪计数方法,测定5和30分钟及2、6、10、24、48、72小时标本中掺入[~3H]-胸苷的cpm值。为测定HPD-红光的细胞杀伤效应,经     

基质细胞衍化因子-1对人内皮祖细胞迁移的影响

目的 探讨基质细胞衍化因子-1对内皮祖细胞迁移的影响.方法 用流式细胞仪、RT-PCR、内皮功能实验鉴定内皮祖细胞,检测其CXCR4受体表达和迁移功能.结果 培养单个核细胞7 d,CD34阳性率为36.3%±23.8%,CD133为19.7%±10.3%,双阳性率为18.6%±10.7%,表达KDR基因,>90%的细胞吸收DiI-ac LDL和FITC-UEA-1.CXCR4表达率为74.8%,对照组、基质细胞衍化因子-1浓度为10、20和50μg/L时,细胞迁移数分别为3.5、7.4、24.9和28.0个.各组浓度的细胞迁移数均显著高于对照组(P<0.01),20μg/L组显著高于10μg/L组、50μg/L组显著高于10μg/L组(P<0.01),50μg/L组显著高于20μg/L组(P<0.05).结论 (1)从外周血途径分离、培养和扩增获得内皮祖细胞,表达CXCR4受体;(2)内皮祖细胞可在基质细胞衍化因子-1的趋化作用下迁移,且与其浓度呈正相关.     

尼古丁对大鼠气道平滑肌细胞内钙离子浓度及膜瞬时受体电位通道mRNA表达的影响

目的 观察尼古丁刺激大鼠气道平滑肌细胞(ASMC)后细胞内基础钙离子浓度的改变及平滑肌细胞膜瞬时受体电位通道(TRPC1,TPRC6)mRNA表达水平变化.方法 不同浓度尼古丁[O(对照组)、10、20、50、100μg/L]刺激大鼠气道平滑肌细胞,作用24及48 h后,采用Incyte细胞内钙浓度检测系统观察细胞内钙离子浓度的变化.提取细胞总RNA,反转录成cDNA,实时定量PCR方法检测细胞TRPC1和TRPC6 mRNA表达量变化.结果 20、50、100μg/L的尼古丁刺激大鼠气道平滑肌细24和48 h后,细胞内基础钙离子浓度均较对照组明显升高[(117.99±19.39)、(122.89±17.91)、(124.70±17.93)nmol/L比(85.85±12.60)nmol/L;(142.07±18.99)、(162.27±19.91)、(207.30±26.56)nmol/L比(98.04±2.39)nmol/L,均P＜0.05].而细胞中TRPC1和TPRC6 mRNA相对浓度也均较对照组显著升高(P＜0.05),其中,100μg/L尼古丁刺激气道平滑肌细胞48 h后,细胞内基础钙离子浓度和TRPC6 mRNA相对表达量均较刺激24 h后的明显升高(P＜0.05).结论 尼古丁可能通过上调大鼠气道平滑肌细胞膜瞬时受体电位通道TRPC1和TPRC6的表达而导致大鼠气道平滑肌细胞内基础钙离子浓度增加.     

抗人CD25嵌合抗体的稳定表达及鉴定

目的:构建抗人CD25嵌合抗体稳定细胞株,并对表达产物进行相关鉴定。方法:构建CD25嵌合抗体稳定表达质粒VEC-VTacH和3.3-VTacL并稳定转染CHO-DHFR-细胞,经选择性培养、有限稀释法克隆和MTX加压选择后扩大培养构建的工程细胞,Protein A纯化回收目的抗体后分别进行质谱分析、蛋白质N端测序和平衡解离常数(Kd)的测定。结果:CD25嵌合抗体稳定细胞株的抗体表达水平约为3.74～7.07μg/ml,质谱分析结果表明其含有鼠源成分和人源成分,蛋白质N端测序表明其与亲本抗体N端序列完全一致,其Kd为2.35×10-10mol/L,而亲本抗体的Kd为1.88×10-10mol/L。结论:抗人CD25嵌合抗体保留了亲本抗体的抗原结合活性和亲和力。     

酶联A蛋白ELISA法检测伤寒杆菌H、O抗体及其临床应用

直接用完整的伤寒杆菌包被微孔板以SPA-HRP代替第二抗体建立ELISA试验,检测伤寒杆菌H、O抗体。107名供血员O抗体(±SD)为79.9±53.8μg/ml,H抗体为130.1±117.3μg/ml,分别以≥250μg/ml和500μg/ml(+3SD)为阳性;16例伤寒病人O抗体含量为924.0±475.0μg/ml,H抗体含量为2332.9±1272.2μg/ml,阳性率100％。健康人与非伤寒病人仅H抗体有4％的阳性率,本法简便、特异、敏感性高。     

抑制Hedgehog信号通路对前列腺癌DU125细胞增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对前列腺癌Dul45细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养DU145细胞,以10、50、100μmol/L的环王巴明作用24 h,MTT法检测环王巴明对DU145细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对DU145细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对DU145细胞Gli-1 m RNA表达的变化,Westernblot检测环王巴明对DU145细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/L环王巴明组(85.01±2.61)%、50μmol/L环王巴明组(76.71±3.13)%和100μmol/L环王巴明组(69.10±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.97±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/L环王巴明组(15.12±0.21)%、50μmol/L环王巴明组(24.97±0.24)%和100μmol/L环王巴明组(31.26±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.56±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)%和100μmol/L环王巴明组(0.69±0.06)%Gli-1m RNA表达水平较空白对照组(0.92±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.79±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.59±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.41±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.94±0.11)%降低(P0.05)。结论 Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制DU145细胞增殖、诱导DU145细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

抑制Hedgehog信号通路对脑胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对脑胶质瘤U87细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养U87细胞,以10、50、100μmol/L的环王巴明作用24h,MTT法检测环王巴明对U87细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对U87细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对U87细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Western blot检测环王巴明对U87细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/L环王巴明组(85.11±2.61)%、50μmol/L环王巴明组(76.81±3.13)%和100μmol/L环王巴明组(69.20±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.87±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/L环王巴明组(15.22±0.21)%、50μmol/L环王巴明组(24.87±0.24)%和100μmol/L环王巴明组(31.36±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.66±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.68±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.48±0.06)%和100μmol/L环王巴明组(0.30±0.06)%Gli-1mRNA表达水平较空白对照组(0.92±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/L环王巴明组(0.78±0.06)%、50μmol/L环王巴明组(0.58±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.40±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.94±0.11)%降低(P0.05)。结论Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制脑胶质瘤U87细胞增殖、诱导U87细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

抗人CD86人-鼠嵌合抗体的构建及在CHO细胞的表达

从分泌鼠抗人CD86单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:1D1)中抽提总RNA,采用简并引物,经RT-PCR扩增单抗VH和VL的DNA编码区基因。通过SMART-PCR扩增VH和VL基因相应的信号肽序列。采用基因重组技术,将单抗VH、VL基因及其相应信号肽序列,与人IgG1的CH基因、Cκ链基因进行拼接,构建人-鼠嵌合抗体基因的表达质粒pIRES/1D1。转染293T细胞进行瞬时表达,采用流式细胞术分析,转染上清与L929-CD86基因转染细胞的阳性结合率为97.6%。既而转染CHO细胞,经G418筛选,获取稳定分泌嵌合抗体的基因转染细胞株(CHO-ch1D1)。收集无血清培养基的培养上清,采用Protein G亲和层析柱分离纯化,经Lowr法定量。从上清中获取的嵌合抗体蛋白的得率为3.066 mg/L。经进一步间接免疫荧光及流式细胞术分析,纯化嵌合抗体与L929-CD86基因转染细胞,及Daudi细胞膜型CD86分子的阳性结合率分别为98.5%和95.7%。将嵌合抗体(终浓度为5μg/ml)加入到Daudi细胞的培养体系中,经显微镜观察及MTT法分析,嵌合抗体对Daudi细胞的生长具有抑制作用(P<0.05)。本研究获取的嵌合抗体在CD86分子的基础和应用研究中具有重要的价值。     

抑制Hedgehog信号通路对食管癌细胞EC9706增殖及凋亡的影响

目的研究Hedgehog(Hh)信号通路阻断剂环王巴明对食管癌EC9706细胞增殖及凋亡的影响。方法体外培养食管癌EC9706细胞,以10、50、100μmol/Lol/L的环王巴明作用24 h,MTT法检测环王巴明对EC9706细胞增殖的影响,流式细胞技术检测环王巴明对EC9706细胞凋亡的影响,RT-PCR检测环王巴明对EC9706细胞Gli-1 mRNA表达的变化,Western blot检测环王巴明对EC9706细胞Gli-1蛋白表达的变化。结果 MTT检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(86.11±2.61)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(77.81±3.13)%和100μmol/Lol/L环王巴明组(70.20±4.11)%细胞活性较空白对照组(99.97±0.21)%降低(P0.05);流氏细胞技术检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(16.22±0.21)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(25.87±0.24)%和100μmol/Lol/L环王巴明组(32.36±0.26)%细胞总凋亡率较空白对照组(2.76±0.28)%升高(P0.05);RT-PCR检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(0.78±0.06)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(0.58±0.06)%和100μmol/Lol/L环王巴明组(0.40±0.06)%Gli-1mRNA表达水平较空白对照组(0.93±0.11)%降低(P0.05);Western blot检测结果表明10μmol/Lol/L环王巴明组(0.68±0.06)%、50μmol/Lol/L环王巴明组(0.48±0.05)%和100μmol/L环王巴明组(0.30±0.04)%Gli-1蛋白表达水平较空白对照组(0.75±0.11)%降低(P0.05)。结论 Hedgehog信号通路阻断剂环王巴明可以抑制食管癌EC9706细胞增殖、诱导U87细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLi-1表达有关。     

嵌合抗CD20Fab诱导Daudi细胞凋亡

为了研究嵌合抗CD20基因工程抗体Fab的抗肿瘤活性及其抗肿瘤机制,本研究采用竞争性免疫荧光抑制实验,证实抗CD20 Fab片段能竞争性抑制亲本鼠源性抗CD20单克隆抗体HI47和Daudi细胞CD20的结合。MTT法测定嵌合抗CD20 Fab对Daudi细胞生长的影响,结果显示嵌合抗CD20 Fab对Daudi细胞的生长具有抑制作用,抑制作用呈剂量依赖性,其IC50为69μg/ml;利用流式细胞仪测定嵌合抗CD20 Fab诱导细胞凋亡作用,结果显示嵌合抗CD20 Fab可诱导 Daudi细胞凋亡,其凋亡率是Rituxan的2倍。这些实验结果证实嵌合抗CD20 Fab通过诱导Daudi细胞凋亡的机制抑制Daudi细胞生长。     

尼莫地平调控IRS-1对人脑血管外膜成纤维细胞活力和凋亡的影响

目的：探讨尼莫地平对人脑血管外膜成纤维细胞活力、凋亡的影响及其对胰岛素受体底物-1(IRS-1)的调控机制。方法：体外培养人脑血管外膜成纤维细胞,分为NC组、IFN-α组和共同处理组,其中共同处理组分别采用不同浓度（50、100、200μg/ml）的尼莫地平与IFN-α共同处理人脑血管外膜成纤维细胞,分别记作IFN-α+Nimo 50μg/ml组、IFN-α+Nimo 100μg/ml组、IFN-α+Nimo 200μg/ml组;MTT检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;qRT-PCR与Western blot分别检测IRS-1表达;分别将pcDNA、pcDNA-IRS-1转染至细胞,分别将si-con、si-IRS-1转染至细胞随后采用尼莫地平处理细胞,采用上述方法检测细胞活力及凋亡率。结果：NC组、IFN-α组、IFN-α+Nimo 50μg/ml组、IFN-α+Nimo 100μg/ml组、IFN-α+Nimo 200μg/ml组72 h时细胞活力分别为1.16±0.09、0.71±0.07、0.88±0.06、0.96±0.08、1.03±0.11;细胞凋亡率分别为（3.5...     

CD4+CD25+Treg细胞对B细胞的作用机制分析

目的研究CD4 CD25 调节性T细胞对B细胞作用机制.方法用尼龙毛柱法分离B细胞,用MACS磁珠分选法从Wistar大鼠脾脏淋巴细胞中分离CD4 CD25 Treg细胞,然后将分离纯化的Wistar大鼠Treg细胞负载SD大鼠抗原.以Trans Well Millcell-PCF分隔培养槽分隔或共培养Treg细胞与不同淋巴细胞组成的反应体系,然后向共培养体系中加或不加入Anti-TGF-β1、Anti-CTLA4的阻断方法,培养5天后用ELISA法检测不同组上清中的IgA和IgG分泌水平. 结果分隔培养组上清中的IgG和IgA水平分别为(4.7±1.1)、(10.5±1.7)μg/ml,与阳性对照组中IgG的含量(5.1±1.0)μg/ml以及IgA的(11.2±1.6)μg/ml相比没有显著差异(P＞0.05).而与阳性对照组相比较,共培养组上清中的IgG和IgA水平明显降低(P＜0.01),分别达到了(2.2±0.8)μg/ml和(5.4±0.9) μg/ml.在共培养体系中加入Anti-TGF-β1后,上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.1±0.5)μg/ml和(6.9±0.8)μg/ml;加入Anti-CTLA4后,上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.2±0.6)μg/ml和(7.2±0.9)μg/ml;两种阻断剂同时加入后,上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.5±0.5)μg/ml和(7.4±0.6)μg/ml,三组分泌水平都较共培养组明显升高(P＜0.05),但仍明显低于阳性对照组的水平(P＜0.05). 结论CD4 CD25 Treg通过细胞-细胞间接触机制直接抑制B淋巴细胞反应,在这一过程中TGF-β1和CTLA4都发挥了一定作用.     

重楼皂甙抗肿瘤作用的研究

本文报告了重楼皂甙对动物移植性肿瘤的影响,供药理实验的重楼皂甙有三批样品为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。从体外实验看,样品Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ均能明显抑制3~H-TdR掺入肿瘤细胞DNA。其中对H_(22)的3~H-TdR掺入抑制IC_(50)样品Ⅰ为5.6μg/ml、Ⅱ为1.5μg/ml、Ⅲ为5μg/ml;对EACⅡ的IC_(50)<1μg/ml,对S_(180) IC_(50)>10μg/ml。选用样品Ⅰ进行了     

铜绿假单胞菌密度感应信号分子OdDHL对γδT细胞合成胰岛素样生长因子1的影响

目的探讨密度感应(QS)信号分子OdDHL在铜绿假单胞菌(PA)抑制外周血γδT细胞合成胰岛素样生长因子1(IGF-1)过程中所起的作用及其机制。方法 (1)分离纯化健康成人外周血γδT细胞,细胞同步后配成浓度为5×106个/m L的细胞悬液放入6孔培养板,每孔2 m L,按随机数字表法将培养板孔分为6组,每组设3个复孔,分别加入0、12.5、25.0、50.0、100.0、200.0μmol/L浓度OdDHL各20μL,在37℃,5%CO2培养箱中培养24 h。用WST-l细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测γδT细胞的活性,用Annexin V/PI双染检测试剂盒检测γδT细胞的凋亡。(2)分离纯化健康成人外周血γδT细胞,细胞同步后配成浓度为5×106个/m L的细胞悬液放入6孔培养板,每孔2 m L,按随机数字表法将培养板孔分为4组,阳性对照组和阴性对照组每组设3个复孔,剩余2组分为2个OdDHL浓度水平处理组,每组设5个复孔,阳性对照组加入终浓度为10 mg/L的Con A,阴性对照组加入相应体积的PBS。2个OdDHL处理组在加入终浓度为10 mg/L的Con A后分别加入25、50μmol/L的OdDHL 20μL。在37℃,5%CO2培养箱中培养48 h。用ELISA法测定培养上清中IGF-1浓度,用实时荧光定量PCR测定γδT细胞TLR4 mRNA,用Western blot法测定γδT细胞TLR4蛋白,用流式细胞仪检测γδT细胞CD80、CD86的表达。对数据行F检验和q检验。结果 (1)OdDHL浓度达到100μmol/L可明显抑制γδT细胞活性,提高细胞的凋亡,而低于50μmol/L的OdDHL却对γδT细胞活性无明显影响。(2)培养上清中IGF-1在阴性对照组为(14.32±2.34)μg/m L,在阳性对照组为(139.58±11.73)μg/m L,在25μmol/L的OdDHL处理组为(85.64±7.52)μg/m L,在50μmol/L的OdDHL处理组为(56.49±4.93)μg/m L,统计学分析显示差异有统计学意义(F=296.69,P0.05)。(3)γδT细胞TLR4 mRNA表达值在阴性对照组是0.91±0.13;在阳性对照组是5.07±0.72,在25μmol/L的OdDHL处理组是3.36±0.45,在50μmol/L的OdDHL处理组是1.56±0.21,统计学分析显示差异有统计学意义(F=107.98,P0.05)。γδT细胞TLR4蛋白表达值在阴性对照组是0.52±0.09;在阳性对照组是2.27±0.51,在25μmol/L的OdDHL处理组是1.14±0.17,在50μmol/L的OdDHL处理组是0.78±0.15,统计学分析显示差异有统计学意义(F=41.86,P0.05)。γδT细胞表面CD80表达率在阴性对照组是(3.92±0.49)%;在阳性对照组是(52.65±4.26)%,在25μmol/L的OdDHL处理组是(23.04±2.53)%,在50μmol/L的OdDHL处理组是(12.88±1.65)%,统计学分析显示差异有统计学意义(F=586.901,P0.05)。γδT细胞表面CD86表达率在阴性对照组是(1.61±0.15)%;在阳性对照组是(22.03±3.17)%,在25μmol/L的OdDHL处理组是(9.59±1.06)%,在50μmol/L的OdDHL处理组是(5.76±0.95)%,统计学分析显示差异有统计学意义(F=231.126,P0.05)。结论PA分泌的QS信号分子OdDHL可通过促进细胞凋亡或抑制细胞激活来减少γδT细胞IGF-1的合成,影响全身烧伤创面的愈合。     

干细胞因子反义寡核苷酸对小鼠成纤维细胞-肥大细胞相互作用的影响

目的探讨干细胞因子介导的成纤维细胞-肥大细胞相互作用在哮喘病理生理过程中的作用。方法以SCF反义寡核苷酸(SCF ASON)转染成纤维细胞NIH3T3,免疫组化和RT-PCR法检测SCF的表达;从小鼠骨髓中分离肥大细胞,建立与NIH3T3共育体系,加入10 mg/L SCF ASON,通过ELISA法和荧光测定法检测上清液中组织胺和Eotaxin的含量;绘制NIH3T3和肥大细胞生长曲线;丫啶橙染色、流式细胞仪检测肥大细胞的凋亡。结果SCFASON可显著抑制NIH3T3产生SCF;以SCF ASON干预共培养体系后,成纤维细胞生长受抑,肥大细胞出现凋亡(14.0%±0.81%,96 h);组胺[3.08±0.38]μg/L比较(3.83±0.4)μg/L,P<0.05]和Eotaxin的产生[(4.40±0.33)μg/L比较(5.79±0.40)μg/L,P<0.05]减少。结论SCF可能通过抑制肥大细胞凋亡,促进肥大细胞激活和成纤维细胞增殖,参与哮喘的发生、发展。     

基质细胞衍生因子-1_α/CXCR4/CXCR7轴对骨髓间充质干细胞迁移的影响

目的探讨基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)受体CXCR4、CXCR7在骨髓间充质干细胞(BMSCs)中蛋白和mRNA的表达;及SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴对BMSCs迁移作用的可能机制。方法体外培养大鼠BMSCs,流式细胞术鉴定细胞表面抗原CD29、CD44和CD34。应用CXCR4特异性拮抗剂AMD3100及CXCR7中和抗体分别阻断CXCR4及CXCR7,通过Western blotting和RT-PCR分别检测BMSCs蛋白和mRNA的表达变化;Transwell法检测细胞迁移能力。本次实验分为单纯BMSCs组(A)、AMD3100预处理BMSCs组(B)、CXCR7中和抗体预处理BMSCs组(C)及AMD3100+CXCR7中和抗体预处理BMSCs组(D)。结果经鉴定第3代大鼠BMSCs中CD29和CD44均呈阳性表达,而CD34表达阴性。BMSCs中CXCR4、CXCR7蛋白和mRNA均有表达。与A组相比,B组及D组CXCR4及CXCR7蛋白表达明显受到抑制(P0.05),C组只有CXCR7蛋白表达降低(P0.05);各组CXCR4 mRNA和CXCR7 mRNA的表达差异均无显著性。SDF-1α可以诱导BMSCs迁移,与0μg/L组相比,10μg/L组和100μg/L组穿膜细胞数均显著增多(P0.01),与10μg/L组相比,100μg/L组穿膜细胞数亦明显增多(P0.01);AMD3100和CXCR7中和抗体均能抑制BMSCs的迁移作用(P0.05),当两者同时作用时,抑制效应更为显著(P0.05)。结论 BMSCs共表达CXCR4、CXCR7蛋白及mRNA;BMSCs的迁移具有SDF-1α浓度依赖性;SDF-1α/CXCR4/CXCR7轴介导BMSCs的迁移作用,CXCR4受体和CXCR7受体对BMSCs的迁移可能具有协同促进作用。     

CD4 + CD25 + FoxP3 + regulatory T cells suppress specific cellular immune responses in active pulmonary TB patients

目的 了解结核患者外周血中CD4+ CD25+ FoxP3+调节T细胞在抑制结核患者结核特异细胞免疫反应中的作用.方法 使用细胞分离、流式细胞分析、细胞增殖和细胞因子测定等方法,比较结核患者及健康正常人群外周血中CI4+ CD25+ FoxP3+调节T细胞的量及功能特征的差异.结果 结核患者外周血中CD4+ CD25+ FoxP3+调节T细胞数占CD4+细胞总数的比例显著高于健康正常人群；在BCG及ESAT-6的刺激下,结核患者外周血单个核细胞增殖能力和产生γ-干扰素的能力比健康正常人群明显增强.在BCG刺激下,结核患者外周血CI4-细胞产生γ-干扰素[(1 289.62 +519.01)μg/L]及白介素-10[(1 045.40±534.12) μg/L]的能力比结核患者外周血PBMCs细胞产生γ-干扰素[ (624.50 +261.13) μg/L]及白介素-10[ (377.00±249.56) μg/L]的能力显著增强(P＜0.05)；在BCG及ESAT-6的刺激下,结核患者外周血CI4+ CD25+调节T细胞显著抑制结核患者外周血CD4+ CD25 -细胞产生γ-干扰素及白介素-10.结论 结核患者CD4+ CD25+ FoxP3+调节T细胞数量增多,抑制结核患者结核特异细胞免疫反应功能增强,可能与结核的发生、发展及转归有密切关系.     

IGF-1、IGFBP-3在2型糖尿病周围神经病变诊断中意义的研究

目的探讨外周血IGF-1和IGFBP-3在2型糖尿病周围神经病诊断中的意义。方法研究对象分为2型糖尿病周围神经病组、2型糖尿病无周围神经病组和健康人群组3组,以化学发光法检测血清中IGF-1和IGFBP-3水平。结果 IGF-1和IGFBP-3水平在周围神经病组[IGF-1:(132.65±50.78)ng/ml;IGFBP-3:(3.43±1.05)μg/ml]明显低于无周围神经病组[IGF-1:(160.25±66.13)ng/ml;IGFBP-3:(4.37±1.35)μg/ml)]和健康对照组[IGF-1:(174.95±64.38)ng/ml;IGFBP-3:(4.75±3.39)μg/ml](P0.05),而后两组间无统计学差异(P0.05)。结论 IGF-1和IGFBP-3水平减少与2型糖尿病周围神经病的发生相关,对两者的监测有利于2型糖尿病周围神经病的诊断。