多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶基因的克隆及序列分析

从自然感染的羊脑内采集脑多头蚴原头节,提取总RNA。根据亚洲牛带绦虫的TaHc2-D11 mRNA序列设计特异引物,采用RT-PCR技术扩增多头带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TmTPx)基因。PCR产物连接到pMD18-T载体构建重组质粒pMD-TmTPx,转化大肠埃希菌DH5α后筛选阳性克隆,经限制性酶切及测序鉴定后进行序列分析。扩增获得大小为614bp的TmTPx基因cDNA,该基因的完整开放阅读框架(ORF,591bp)编码196个氨基酸,编码蛋白的相对分子质量为Mr 21690,等电点为7.61。生物信息学分析结果表明TmTPx具有一个典型的2-Cys Prx保守功能结构域。绦虫已知TPx的分子进化分析发现,多头带绦虫与亚洲牛带绦虫的亲缘关系最近,与猪带绦虫和肥头绦虫的亲缘关系次之,与细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫的亲缘关系最远。     

多头带绦虫Tm18抗原基因的克隆、表达与免疫原性分析

目的为分析多头带绦虫Tm18重组蛋白的免疫原性。方法利用RT-PCR技术从激活的多头带绦虫六钩蚴中扩增Tm18基因,将扩增产物亚克隆入pGEX-4T-1载体中,构建pGEX-4T-rTm18表达载体,转化至大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导表达融合蛋白;表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析后,将纯化的Tm18重组蛋白免疫小鼠,用ELISA检测其血清抗体。结果多头带绦虫Tm18基因序列长为552 bp,包括1个396 bp的开放性阅读框。表达的重组蛋白大小约为39.4 kDa,与脑包虫患羊血清的免疫印迹分析呈阳性反应;小鼠免疫1周后血清中即可检测到抗Tm18蛋白的特异性抗体,并于免疫后第5周达到高峰。结论 Tm18重组蛋白具有较好的免疫原性,可作为脑包虫疫苗的候选抗原。     

绵羊肝脏、肺脏细粒棘球蚴原头节差异蛋白质表达分析

目的 探讨绵羊肝脏和肺脏细粒棘球蚴原头节差异蛋白质表达谱,为虫体生长、发育调控特异性蛋白筛选奠定基础。方法 提取寄生于绵羊肝脏与肺脏棘球蚴原头节蛋白质样本进行 SDS-PAGE 分析后,利用iTRAQ和液相色谱法以及串联质谱分析(LC-MS/MS)寄生于绵羊肝脏和肺脏细粒棘球蚴原头节蛋白质表达谱,通过Mascot软件和GO软件分析寄生于绵羊肝脏和肺脏棘球蚴原头节的差异表达蛋白质。结果 本研究共鉴定了1 229个有意义的蛋白质点,通过肝脏与肺脏比较有无差异性(肝脏原头节 VS肺脏原头节)和调节趋势后获得217个差异表达蛋白质,在肝脏上调蛋白74个(脂肪酸绑定蛋白、ɑ纤维蛋白原、环氧化物酶、过氧化氢酶、酰基COA合成酶、载脂蛋白A4、磷酸化酶、6-磷酸葡萄糖内脂酶、乙酰辅酶酰基转移酶、还有一些未鉴定的蛋白等);下调蛋白143个(乳酸脱氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、内质网氧化还原酶、肌动蛋白、肌球蛋白、天冬酰胺酶、铁蛋白、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶、热休克蛋白90、胶原纤维I,胶原纤维IV、波形蛋白、玻连蛋白、磷脂转运蛋白、磷酸甘油酸激酶)。结论 本研究发现寄生于绵羊肝脏和肺脏棘球蚴原头节蛋白质表达存在差异。     

多房棘球绦虫成虫的超微结构

本文报告了多房棘球绦虫成虫的超微结构。特别对微毛、精子和虫卵进行了观察。按照微毛分布的不同部位,其形态可分为3种类型。成熟节片中,睾丸内之精子具有9 ‘1’的单鞭毛形式。此外,还观察到虫卵胚膜及幼胚的超微结构,并对其相应的功能做了讨论。     

西伯利亚棘球绦虫和多房棘球绦虫泡状蚴在长爪沙鼠体内发育的比较

从内蒙古呼伦贝尔草原捕获的沙狐（Vulpes corsac)小肠中收集到的西伯利亚棘球绦虫（Echinococcus sibiricensis)和多房棘球绦虫（Echinococcus multilocularis）的成虫,经人工感染实验小白鼠,用在小白鼠体内发育的两种泡状蚴（Alveolar echinococcus)的微量物质,分别经腹腔接种到实验室饲养的长爪沙鼠（Meriomes unguiculatus),结果再次证实此两种棘球绦虫具有完全不同发生形式的泡状蚴和不同的宿主反应以及西伯利亚棘球绦虫种的独立性。     

瓣膜性心脏病伴慢性心房颤动患者心房组织呼吸链相关蛋白质定量蛋白质组学分析

目的 从蛋白质组学角度分析心房颤动（房颤）患者心房能量代谢状态,揭示房颤的发生基质.方法 2011年1月至8月于中南大学湘雅二医院获取患二尖瓣疾病需行外科换瓣手术的窦性心律患者（n=6）和房颤患者（n=8）左心耳组织.分离蛋白质,行同重元素标记的相对和绝对定量（iTRAQ）标记及质谱分析,通过分析软件行蛋白质鉴定和定量分析,运用蛋白印迹法分析确定结果准确性.结果 发现1 023个蛋白质,517个差异表达蛋白质,122个能量代谢相关,46个参与呼吸链过程.下调蛋白质在慢性房颤患者左心耳组织的能量代谢中占据主导优势.蛋白印迹分析证实了结果的可靠性.结论 瓣膜性心脏病患者慢性房颤过程心房肌细胞产能状态受损.     

抗多房棘球绦虫原头节单克隆抗体的制备

ˎ̥,Verdana,Arial'; mso-hansi-font-family: 'ˎ̥,Verdana,Arial'; mso-bidi-font-family: 宋体">目的 制备抗泡球蚴组织单克隆抗体,并鉴定其特异性。 方法 运用泡球蚴组织粗抗原免疫小鼠制备免疫脾细胞,运用淋巴细胞杂交瘤技术将其与小鼠骨髓细胞SP2/0融合。采用ELISA和免疫组化方法筛选抗泡球蚴原头节单克隆抗体的杂交瘤细胞株。检测所获细胞株的染色体数目,采用ELISA和免疫组化法鉴定所获抗体的特异性。 结果 获得了一株能稳定分泌的抗泡球蚴原头节单克隆抗体的杂交瘤细胞株6G2A7F7。染色体数目为98条,为明显的融合细胞核型。所分泌的抗体McAb P325能与泡球蚴中的生发层和原头节特异结合,特别对原头节上的小钩和吸盘表现出很强的结合反应。但与棘球蚴（人源）和水泡带绦虫幼虫（细颈囊尾蚴）组织无特异性结合反应。 结论 制备的杂交瘤细胞能稳定分泌McAb P325,为泡球蚴的细胞分类、免疫组化和抗原研究提供工具和基础。     

旋毛虫和伪旋毛虫肌幼虫时期排泄分泌产物iTRAQ法蛋白质组学分析

目的探究旋毛虫和伪旋毛虫肌幼虫时期排泄分泌产物(ESP)中的差异蛋白,分析两者免疫抑制差异的原因和参与包囊形成的潜在功能蛋白。方法收集旋毛虫和伪旋毛虫ESP,采用二喹啉甲酸检测法测定旋毛虫、伪旋毛虫ESP蛋白浓度,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测蛋白质量,对经过超滤管酶解法酶解后的ESP多肽段采用同位素相对定量和绝对定量标记技术(iTRAQ)标记,混合标记后的样品进行液相分离高pH反相色谱和液相串联质谱检测。检测完成后,搜索UniProt数据库中的旋毛虫(Trichinella spiralis)和伪旋毛虫(Trichinella pseiudospiralis)数据库,在可信蛋白(得分80以上)的基础上筛选同源蛋白,比较同源蛋白的差异表达情况。利用QuickGO对差异蛋白进行标准化描述。选取9个差异明显的重要蛋白进行实时荧光定量PCR验证,采用△△Ct法验证基因表达水平。采用SPSS 19.0软件进行统计学分析结果经iTRAQ标记鉴定出旋毛虫可信蛋白492个,伪旋毛虫535个,可用于定量分析的旋毛虫蛋白193个,伪旋毛虫蛋白164个。旋毛虫/伪旋毛虫同源比对结果显示,表达蛋白上调162个,下调31个。GO分析结果显示,分子功能主要富集在离子结合功能、肽酶活性、氧化还原酶活性和核酸酶活性,分别为45、18、12和8个。在生物过程中,涉及最多的是小分子代谢过程(15个),碳水化合物代谢过程(12个),生物合成过程(12个),DNA代谢过程过程(8个)。差异蛋白涉及的细胞组成成分主要为细胞质和含蛋白质的复合物。KECG分析显示,与硫胺素代谢,鞘糖脂生物合成,苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成相关的蛋白大部分上调。plancitoxin-1(E5SXW8)、胰蛋白酶(E5SPA7)、胱抑素(E5S387)、丝氨酸蛋白酶抑制剂(E5SJH4)、5’-核苷酸酶(E5S554)、烯醇酶(E5SQX1)、L-天冬酰胺酶(E5SBA6)蛋白表达和基因转录水平在旋毛虫肌幼虫时期均高于伪旋毛虫(P<0.05);热休克蛋白β-1 (E5RZQ6)、组蛋白H2B (E5S7K8)蛋白表达和基因表达水平在旋毛虫肌幼虫时期低于伪旋毛虫(P<0.05)。结论旋毛虫和伪旋毛虫肌幼虫时期ESP差异蛋白生物信息学分析提示丝氨酸蛋白酶、胱抑素、plancitoxin-1和14-3-3蛋白等可食能与包嚢形成和免疫调节相关。     

iTRAQ联合LC-MS/MS技术在肺腺癌血浆生物标志物筛选中的应用

目的应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)联合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术检测正常者及肺腺癌患者血浆中的差异蛋白,从而筛选出潜在的肺腺癌血浆生物标志物,并探讨其临床意义。方法收集10例健康体检者血浆(正常组),10例肺腺癌患者血浆(腺癌组),应用iTRAQ标记联合LC-MS/MS技术对两组血浆进行差异蛋白组学分析。结果质谱共鉴定到蛋白369种,其中差异表达的蛋白有35种;腺癌组较正常组上调的蛋白有21种、下调的蛋白有14种,其中SCGB3A2、SFTPB蛋白表达显著上调。结论筛选出多种与肺腺癌相关的差异蛋白,其中SCGB3A2、SFTPB有望成为潜在的肺腺癌血浆生物标志物,提示iTRAQ联合LC-MS/MS技术可用于肺腺癌血浆肿瘤标志物的筛选。     

多头绦虫膜蛋白（45M）对羊脑多头蚴病的免疫保护效果

目的 观察多头绦虫膜蛋白（45M）对羊脑多头蚴病的免疫保护效果。 方法 12只新疆哈萨克羊随机均分为免疫组和对照组,免疫组用重组多头绦虫膜蛋白（45M）与佐剂乳化后颈部皮下2点免疫,抗原免疫剂量为50 µg/只,注射体积为1 ml,共免疫4次,每次间隔3周。对照组以谷胱甘肽硫转移酶（GST）表达物代替免疫抗原同法免疫。定时采集羊血,分离血清。ELISA法检测血清中IgG和IgM的抗体水平。于末次免疫后105 d,免疫组和对照组每羊经口攻击感染5 000个多头绦虫虫卵,感染2周后剖检羊脑多头蚴囊数,计算减囊率。将经孵化激活的六钩蚴分别置于含10%两组免疫攻击感染羊血清的RPMI 1640培养液中培养,观察两组羊血清对多头绦虫六钩蚴的杀伤情况。 结果 免疫组有3只羊感染多头蚴包囊,平均囊荷数为1.5个,囊平均直径为2.2 mm,免疫组减囊率为68.9%。六钩蚴与免疫组羊血清共培养72 h后,90%死亡,被杀伤的六钩蚴出现萎缩,或膨胀致使内部结构模糊。ELISA检测结果显示,在第4次免疫后（第9周）,免疫组IgG抗体水平达到最高（2.32±0.76）,与对照组（0.70±0.42）间的差异有统计学意义（t=4.47,P＜0.01）。经口感染六钩蚴后（第24周）,免疫组IgG和IgM抗体水平（1.53±0.81, 0.90±0.26）仍显著高于对照组（0.64±0.43, 0.43±0.15）（P＜0.01）。 结论 重组蛋白45M可引起机体较强的体液免疫反应。     

Taking the stock of granule cargo: Platelet releasate proteomics

Human platelets are key players in a multitude of physiological and pathological processes. Upon activation they release cargo from different types of granules as well as microparticles in an apparently well-regulated and orchestrated manner. The resulting specific platelet releasates create microenvironments of biologically active compounds and proteins during platelet aggregation and thrombus formation, allowing efficient delivery of growth factors and immune modulators to their sites of effect and enhancing the coagulative response in a positive feedback loop. Thus, platelet releasates play a central role in the regulation of platelet homeostasis and heterotypic cell interaction. Additionally, it recently emerged that both the qualitative and quantitative composition of the releasate as well as release dynamics may be stimulus dependent and therefore more complex than expected. Mass spectrometry-based proteomics is an important asset for studying platelet releasates in vitro, as it allows not only (i) identifying released proteins, but moreover (ii) determining their quantities and the dynamics of release as well as (iii) differentially comparing releasates across a variety of conditions. Though owing to the high sensitivity and comprehensiveness of modern proteomic techniques, a thorough experimental design and a standardized and robust sample preparation are essential to obtain highly confident and reliable insights into platelet biology and pathology. Here, we review releasate proteome studies and crucial sample preparation strategies to summarize possible achievements of state-of-the-art technologies and furthermore discuss potential pitfalls and limitations. We provide a future perspective of platelet releasate proteomics including targeted analyses, post-translational modifications and multi-omics approaches that should be adopted by platelet releasate researchers due to their tremendous depth and comprehensiveness.     

都匀亚洲带绦虫与牛带绦虫比较的Meta分析

本文采用Meta分析方法对文献报道的都匀亚洲带绦虫研究结果进行了综合分析，得出的结果支持“都匀牛带绦虫”为都匀亚洲带绦虫的结论。     

猪带绦虫囊尾蚴与亚洲带绦虫囊尾蚴蛋白双向电泳图谱分析

将2头20日龄三元杂交乳猪分别感染猪带绦虫虫卵和亚洲带绦虫虫卵,8×104个/头。感染后40 d分别收集寄生在肝脏的未成熟猪带绦虫囊尾蚴(简称猪囊尾蚴)和亚洲带绦虫囊尾蚴,制备囊尾蚴蛋白,并进行蛋白双向电泳分析,用ImageMaster 2D Plantinum 6.0软件分析差异表达蛋白。结果显示,感染后40 d肝脏寄生的未成熟猪囊尾蚴和亚洲带绦虫囊尾蚴蛋白的双向电泳凝胶上分别有(236±12)和(231±14)个蛋白斑点,差异表达2倍以上的蛋白共10个,其中猪囊尾蚴表达上调的蛋白3个,下调的蛋白7个。     

The inflammatory reaction surrounding Taenia solium larvae in pig muscle: ultrastructural and light microscopic observations

Summary An inflammatory reaction with the general characteristics of a chronic granuloma surrounding Taenia solium larvae in pig muscle is described. Larvae with an inflammatory capsule were obtained at slaughter from pigs 6–8 months-of-age and were processed for light and electron microscopy. Eosinophils (granulocytes with orange staining and peroxidase-positive granules) were found to be degranulated and in close contact with the parasite surface. Histiocytes, epithelioid cells, macrophages and lymphocytes were also evident, as well as large numbers of plasma cells in the outer areas of the well-circumscribed reaction. The parasites were ultrastructurally intact, with a normal tegument and only occasional changes in the microvesicles. The results are discussed with reference to parasite survival in the host.