2型细胞因子白细胞介素4和白细胞介素13对慢性鼻窦炎伴鼻息肉中鼻黏膜上皮细胞自噬的影响#br#

目的　探究2 型细胞因子白细胞介素4（interleukin-4,IL-4）和IL-13对慢性鼻窦炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）中鼻黏膜上皮细胞自噬的影响。方法　收集16例CRSwNP息肉组织（其中嗜酸细胞型和非嗜酸细胞型鼻息肉组织各8例）和8例对照黏膜组织。Western blot检测自噬标志蛋白——人微管相关蛋白1A/1B轻链3B（LC3B）的表达,免疫组化染 色检测LC3B的表达和分布,免疫荧光染色实验检测LC3B的点状分布。结果　与对照黏膜组织相比,LC3BII的表达在CRSwNP的息肉组织中增加,并且LC3B在嗜酸细胞型鼻息肉上皮层分布最多。IL-4和IL-13可诱导鼻黏膜上皮细胞中LC3BII的表达和促进LC3B的点状分布。结论　与对照黏膜和非嗜酸细胞型鼻息肉组织相比,嗜酸细胞型鼻息肉组织上皮细胞中自噬体数量显著增加。IL-4和IL-13可有效诱导鼻黏膜上皮细胞自噬体增加。本研究为寻找以自噬为靶点的CRSwNP治疗新方法提供理论依据。     

白细胞介素13对人鼻息肉黏膜上皮细胞嗜酸性趋化因子3蛋白含量及mRNA影响的实验研究

目的　观察白细胞介素13（interleukin-13,IL-13）刺激鼻息肉黏膜上皮细胞后嗜酸性趋化因子3,即CCL26蛋白含量及其mRNA表达变化,探讨嗜酸性粒细胞 浸润鼻黏膜的机制。方法　以IL-13细胞因子刺激原代培养的人嗜酸性鼻息肉黏膜上皮细胞。用实时定量PCR法检测CCL26 mRNA的表达,ELISA检测CCL26蛋白表达。结果  与对照组相比,IL-13刺激组鼻息肉黏膜上皮细胞CCL26蛋白分泌增加,差异具有统计学意义（P <0.05）。其增高呈浓度依赖性。结论　IL-13可诱导鼻息肉黏膜上皮细胞分泌CCL26蛋白。     

IL-36γ通过NF-κB通路调控慢性鼻窦炎伴鼻息肉组织重塑相关因子的表达

目的　明确白细胞介素36γ（IL-36γ）在慢性鼻窦炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）中对组织重塑相关因子基质金属蛋白酶9（MMP-9）和中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL）的调控作用。方法　免疫组织化学及ELISA技术检测对照组、慢性鼻窦炎不伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRSsNP）组和CRSwNP组鼻黏膜组织中IL-36γ、MMP-9和NGAL的定位及定量表达,并分析其与各临床参数的相关性。原代培养鼻息肉黏膜上皮细胞分为对照组（PBS）、IL-36γ组及NF-κB阻断剂（BAY）组,qRT-PCR和ELISA检测各组中MMP-9和NGAL的表达。结果　IL-36γ主要表达于鼻黏膜上皮细胞中,MMP-9、NGAL主要表达于鼻黏膜上皮细胞和黏膜下炎症细胞中。IL-36γ、MMP-9 及NGAL在CRSwNP组中的表达量显著增高（P 均＜0.05）;MMP-9、NGAL与Lund-Mackay及Lund-Kennedy评分呈显著正相关（P 均＜0.05）。IL-36γ增加鼻息肉黏膜上皮中MMP-9和NGAL表达,BAY可抑制这一效应。结论　IL-36γ可能通过调控MMP-9和NGAL表达影响CRSwNP组织重塑。     

白细胞介素25、白细胞介素33和胸腺基质淋巴细胞生成素在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉中的表达及意义

目的　分析白细胞介素25（interleukin-25,IL-25）、白细胞介素33（interleukin-33,IL-33）和胸腺基质淋巴细胞生成素（thymic stromal lymphopoietin,TSLP）在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）患者中的表达及意义。方法　应用免疫组织化学技术和实时荧光定量PCR技术分别在蛋白和mRNA水平检测IL-25、IL-33和TSLP在33例嗜酸细胞性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉（eosinophilic CRSwNP,ECRSwNP）、30例非嗜酸细胞性慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉（non-ECRSwNP）和20例正常下鼻甲组织（对照组）中表达。结果　IL-25mRNA和蛋白在ECRSwNP组和non-ECRSwNP组表达均高于对照组（P＜0.05）;IL-33 mRNA和蛋白在ECRSwNP组、non-ECRSwNP组和对照组表达差异无统计学意义（P＞0.05）;TSLP mRNA和蛋白在ECRSwNP组表达高于non-ECRSwNP组和对照组（P＜0.05）。结论　IL-25、IL-33和TSLP在ECRSwNP及non-ECRSwNP均有表达;IL-25和TSLP在CRSwNP患者鼻息肉中表达显著增高,在CRSwNP患者鼻息肉发病机制中发挥重要的作用。     

金黄色葡萄球菌肠毒素B对人鼻黏膜上皮细胞的促炎作用

目的探讨金黄色葡萄球菌肠毒素B（staphylococcus aureus enterotoxin B，SEB）对原代培养的人鼻黏膜上皮细胞释放促炎因子和（或）趋化因子的作用。方法将无血清原代培养的人鼻息肉及下鼻甲上皮细胞分别在SEB1、10、100ns／ml，白细胞介素（intedeukin，IL）1β 20ng／ml及SEB 10ng／ml＋地塞米松13ng／ml等不同条件下孵育，12、24和48h后采用原位杂交方法检测鼻黏膜上皮细胞分泌的IL-5和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（granuloyte macrophagc colony stimulating factor，GM-CSF）在mRNA水平的变化。结果①SEB刺激鼻黏膜上皮时，IL-5和GM—CSF mRNA表达增加，在一定范围内呈现时间和剂量依赖性，以10ng／ml、24h时最明显（P〈0．05），且鼻息肉组的表达高于下鼻甲组，差异具有统计学意义（P〈0．05）；②IL-1β 20ng／ml组IL-5和GM-CSF mRNA表达增加不及SEB 10ng／ml组明显，差异具有统计学意义（P值均〈0．05）；③SEB 10ng/ml＋地塞米松13ng／ml组的IL-5和GM-CSF mRNA表达强度较SEB 10ng／ml组弱，差异具有统计学意义（P值均〈0．05）。结论SEB对原代培养的人鼻黏膜上皮细胞具有促炎作用。     

变应性鼻炎模型中上下呼吸道气道重塑相关细胞因子的研究

目的　研究变应性鼻炎（AR）模型中鼻黏膜及肺组织中气道重塑相关细胞因子的表达,进一步探讨上下呼吸道一致性的气道重塑病理过程。方法　20只雄性 大鼠随机分为AR模型组和正常对照组,每组10只。AR模型建立后,通过ELISA法检测鼻黏膜、肺组织匀浆及血液标本中转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）、白细胞介素4（interleukin-4,IL-4）、IL-13表达,显微镜下观察并计数鼻黏膜和肺组织中嗜酸性粒细胞和肥大细胞浸润程度。结果　AR模型组鼻黏膜及肺组织中嗜酸性粒细胞以及肥大细胞与对照组相比有统计学差异（P均<0.05）,但AR模型组肺组织中未出现明显的气道重塑病理改变。AR模型组鼻黏膜及肺组织中TGF-β1、IL-4、IL-13与对照组相比有统计学差异（P 均<0.05）,但其在血液中表达水平两组相比无统计学差异（P＞0.05）。鼻黏膜与肺组织 中TGF-β1、IL-4、IL-13表达的相关性具有统计学意义。结论　AR模型中鼻黏膜及肺组织中气道重塑相关细胞因子TGF-β1、IL-4、IL-13表达明显增高,且鼻黏膜及肺组织中具有一致性的表达,上下呼吸道可能具有类似的细胞因子发病机制。     

Toll样受体mRNA在慢性鼻窦炎患者鼻黏膜上皮细胞中的表达

目的　探讨Toll样受体 2 (Toll likereceptor 2 ,TLR 2 )及其Toll样受体 4(Toll likereceptor 4,TLR 4)mRNA在慢性鼻窦炎患者和健康成人鼻黏膜上皮细胞中的表达 ,分析TLR 2和TLR 4在鼻黏膜天然免疫中的作用。方法　应用核酸分子原位杂交技术检测 3 0例慢性鼻窦炎患者和 2 1例健康成人鼻黏膜上皮细胞中TLR 2和TLR 4mRNA的表达。结果　TLR 2和TLR 4mRNA在 3 0例慢性鼻窦炎上皮细胞中均有表达 ,且分别与对照组间差异有显著性意义 (t =8 60 5,P <0 0 0 0 5,t =9 0 50 ,P <0 0 0 0 5)。结论　鼻黏膜上皮细胞中可以产生TLR 2和TLR 4,表明鼻黏膜上皮不仅是单纯的物理屏障 ,更可以通过Toll样受体对病原微生物进行识别 ,以直接启动有效的抗感染机制。     

白细胞介素13在嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎合并鼻息肉组织中的表达及其与黏蛋白高分泌的相关性研究

目的 明确白细胞介素13(IL-13)在嗜酸粒细胞性慢性鼻-鼻窦炎(eosinophilic chronic rhinosinusitis with nasal polyps,EOS-CRSwNP)中的表达,探讨在EOS-CRSwNP中IL-13和黏蛋白5AC(mucin 5AC,MUC5AC)的相关性.方法 利用免疫组化和ELISA方法观察和测量MUC5AC在对照组鼻黏膜组织和EOS-CRSwNP组织的表达,ELISA法检测IL-13在对照组鼻黏膜组织和EOS-CRSwNP组织的表达;双变量相关性分析研究EOS-CRSwNP中IL-13和MUC5AC的相关性.IL-13与原代培养鼻黏膜上皮细胞共孵育,ELISA检测细胞上清中MUC5AC的表达.结果 免疫组化染色见MUC5AC主要表达在鼻黏膜上皮,通过ELISA检测,EOS-CRSwNP中MUC5AC和IL-13均较对照组显著升高.双变量相关性分析表明在EOS-CRSwNP中MUC5AC与IL-13存在高度相关,进一步通过IL-13与气液界面原代培养人鼻黏膜上皮细胞共孵育,MUC5AC分泌显著增加.结论 MUC5AC和IL-13在EOS-CRSwNP中表达升高,MUC5AC的高分泌与IL-13高表达密切相关.     

miR-34c对慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉上皮纤毛细胞分化的影响

目的　探讨miR-34c对慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）鼻上皮纤毛细胞分化的影响及其调控机制。方法　获取正常对照及CRSwNP患者的鼻上皮细胞,real-time PCR检测miR-34c的表达,免疫细胞化学检测纤毛细胞数量。建立鼻上皮细胞气液界面培养体系,敲低表达miR-34c后免疫荧光检测纤毛标记物β-tubulin Ⅳ的表达。采用IL-13刺激鼻上皮细胞,real-time PCR检测miR-34c和纤毛发生转录因子FOXJ1的表达。结果　与正常对照鼻上皮细胞相比,CRSwNP鼻上皮中miR-34c表达量降低（正常对照13.43±10.31 vs CRSwNP 5.53±2.56,P <0.05）,纤毛细胞百分比也有明显下调（正常对照18.20%±2.52% vs RSwNP 12.58%±2.06%,P <0.05）。在鼻上皮细胞中敲低表达miR-34c后,纤毛细胞数量明显降低。IL-13刺激可以明显降低miR-34c（刺激前5.85±4.54 vs 刺激后0.43±0.40,P <0.05）和FOXJ1（刺激前1.41±1.09 vs 刺激后0.15±0.19,P <0.05）的表达量。结论　IL-13可以通过调控miR-34c表达进而调控纤毛细胞分化,从而参与CRSwNP黏液纤毛功能障碍。     

瞬时受体电位锚蛋白1通道调节慢性鼻窦炎上皮细胞自噬及细胞间黏附分子表达的作用探究

目的　探究瞬时受体电位锚蛋白1（t ransient receptor potential ankyrin1,TRPA1）对慢性鼻窦炎（CRS）上皮细胞自噬与细胞间黏附分子（intercellular adhesion moleclar-1,ICAM-1）表达的影响。方法　通过免疫组织化学染色、实时荧光定量PCR及Western blot检测TRPA1在对照组、慢性鼻窦炎不伴鼻息肉（chronic nasal-sinusitis without nasal polyps,CRSsNP）及慢性鼻窦炎伴鼻息肉 （chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）患者鼻黏膜组织中的表达水平,并采用免疫组织化学染色和Western blot观察各组患者鼻黏膜组织内自噬水平;分离培养鼻黏膜上皮细胞,利用细胞角蛋白AE1进行免疫荧光染色鉴定上皮细胞;将鼻黏膜上皮细胞随机分为对照组、脂多糖（LPS）组、LPS+TRPA1抑制剂组,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞TRPA1在mRNA和蛋白上的表达水平,以自噬双标腺病毒mRFP-GFP-LC3感染细胞并通过荧光显微镜观察各组细胞自噬情况,并使用透射电镜观测各组细胞自噬小体形成,实时荧光定量PCR和Western blot检测各组细胞ICAM-1在mRNA和蛋白上的表达水平。结果　相较于对照组,CRSsNP与CRSwNP患者鼻黏膜上TRPA1平均光密度值升高,其mRNA相对表达量和蛋白相对表达量均上调（P<0.05）,且LC3-II平均光密度值升高,LC3-II/LC3-I比值升高,Beclin-1蛋白相对表达量上调而p62蛋白相对表达量下调（P<0.05）,组织内自噬水平升 高。成功分离到生长密集、形状为梭形或多边形以及AE1呈阳性表达的鼻黏膜上皮细胞;与LPS组比较,经过LPS与TRPA1抑制剂共处理的鼻黏膜上皮细胞TRPA1 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均下调（P <0.05）,自噬溶酶体红色荧光减弱,自噬小体也明显减少,同时,ICAM-1mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均下调（P<0.05）。结论  CRS中TRPA1表达异常增加,自噬水平也升高,靶向抑制TRPA1能够抑制CRS上皮细胞自噬以及ICAM-1表达的升高。     

慢性鼻窦炎伴鼻息肉黏膜上皮紧密连接的表达研究

目的　本研究旨在研究慢性鼻窦炎伴鼻息肉（chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP）患者中不同嗜酸性粒细胞（Eos）比例的鼻息肉黏膜上皮紧密连接（tight junctions,TJs）的表达情况。方法　在首都医科大学附属北京同仁医院鼻过敏科手术患者中,收集5例正常对照鼻黏膜和17例CRSwNP鼻息肉组织,应用实时荧光定量PCR和免疫荧光共聚焦显微镜检测TJs mRNA和蛋白的表达情况。结果　实时荧光定量PCR结果显示claudin-1、claudin-4、claudin-7、occludin、ZO-1和ZO-2 mRNA在CRSwNP组表达较正常对照组下调,并且呈现Eos越多,表达越少的趋势;免疫荧光共聚焦显微镜检测同样发现CRSwNP 中claudin-1、claudin-4、claudin-7、occludin 表达减弱与Eos浸润程度呈一定相关性。结论　CRSwNP患者鼻息肉黏膜上皮细胞多种TJs表达下降,Eos浸润程度可能对TJs的表达下降具有一定的影响。     

γδT细胞受体拮抗剂治疗过敏性鼻炎动物的实验研究

目的 探讨高迁移率族蛋白框1(high mobility group box 1,HMGB1)阻滞剂和γδT细胞受体拮抗剂治疗过敏性鼻炎（AR）动物的实验研究。方法 取SPF级大鼠24只,随机分成4组,A组：为正常组,未行干预治疗;B组：OVA组;C组：HMGB-1阻滞剂（三氯化钆,GdCl3干预组）;D组：γδT细胞受体拮抗药（UC7-13D5）干预组。观察各组大鼠的鼻部症状,鼻黏膜的炎症情况及鼻黏膜内HMGB1、白细胞介素17(IL-17)、Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)以及外周血中HMGB、IL-17、TLR4。结果 正常组大鼠未见明显喷嚏和挠鼻,而OVA组大鼠则出现明显喷嚏和挠鼻现象。应用HMGB-1阻滞剂和γδT细胞受体拮抗剂均能控制AR大鼠鼻部症状,喷嚏和挠鼻可明显减少（P<0.05）,各组大鼠鼻黏膜组织标本HE染色结果显示,在OVA AR模型中,炎症细胞（包括嗜酸性粒细胞）浸润明显。HMGB-1阻滞剂和γδT细胞受体拮抗剂对减轻鼻黏膜气道炎症作用明显炎症细胞浸润明显减少（P<0.05）;各组鼻黏膜HMGB1、IL-17...     

TLR9在人鼻黏膜上皮细胞中的表达及意义

目的:利用RT-PCR、免疫组织化学及流式细胞术检测原代培养的人鼻黏膜上皮细胞TLR9的表达水平及意义.方法:原代培养人鼻黏膜上皮细胞,设计TLR9的引物,RT-PCR检测TLR9 mRNA在鼻黏膜上皮细胞中的表达.免疫组织化学及流式细胞术检测原代培养的人鼻黏膜上皮细胞中TLR9的表达水平.结果:400倍光镜下观察结果显示,原代培养的鼻黏膜上皮细胞呈圆形或不规则形,饱满贴壁.RT-PCR结果显示,鼻黏膜上皮细胞有TLR9 mRNA的表达.通过与内参照物GAPDH进行灰度分析比较,发现鼻黏膜上皮细胞中TLR9的表达高于外周血单个核细胞阳性对照组,差异有统计学意义.结论:人鼻黏膜上皮细胞中有TLR9的表达,TLR9 mRNA在人鼻黏膜上皮细胞中的表达高于外周血单个核细胞.     

白细胞介素-1β在过敏性鼻炎小鼠的表达及其对鼻上皮细胞肿瘤坏死因子α诱导蛋白2的影响

目的　探讨白细胞介素1β（IL-1β）在过敏性鼻炎（allergic rhinitis,AR）小鼠鼻黏膜的表达及其体外对鼻上皮细胞肿瘤坏死因子α诱导蛋白2（tumor necrosis factor-α-inducible protein-2,TNFAIP2）表达的影响。方法　建立AR小鼠模型,检测鼻黏膜IL-1β基因的表达;培养小鼠鼻原代上皮细胞,用不同剂量IL-1β刺激,检测上皮细胞中TNFAIP2基因和蛋白的表达。结果　AR小鼠鼻黏膜IL-1β基因表达相对值为8.7±1.74,显著高于对照组1.21±0.26（P =0.0017）;小鼠鼻上皮细胞经25、50 ng/ml IL-1β刺激后TNFAIP2基因表达的相对值分别为15.83±1.65、26.50±4.25,均显著高于对照组2.31±0.78（P <0.0001,P =0.0002）,且50 ng/ml刺激组显著高于25 ng/ml刺激组（P =0.04）;TNFAIP2蛋白表达呈相同趋势。结论　AR小鼠鼻黏膜IL-1β表达增强,IL-1β体外能够诱导鼻上皮细胞表达TNFAIP2,提示AR中IL-1β可能通过调节TNFAIP2的表达发挥作用。     

外源性白细胞介素10抑制嗜酸性粒细胞型慢性鼻窦炎伴鼻息肉中白细胞介素33表达

目的 研究慢性鼻窦炎伴鼻息肉（CRSwNP）患者鼻息肉中白细胞介素10(IL-10)、IL-33的表达水平,及外源性IL-10刺激对嗜酸性粒细胞型CRSwNP(eosinophilicCRSwNP,ECRSwNP)中IL-33表达水平的影响。方法 手术获取ECRSwNP 12例、非嗜酸性粒细胞型CRSwNP(non-eosinophilic CRSwNP,nECRSwNP)8例及12例正常鼻黏膜组织,采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定组织中IL-10及IL-33表达水平。另收集10例ECRSwNP样本,以含或不含100 ng/ml IL-10的培养基分别培养同一患者样本24 h后,ELISA及免疫组化检测IL-33表达量。结果 IL-10在ECRSwNP组、nECRSwNP组、对照组中表达无显著差异（P>0.05）。IL-33在ECRSwNP组中的表达水平高于对照组,差异有统计学意义（P=0.0043）。在ECRSwNP组中,IL-10与IL-33表达水平呈显著负相关（r=-0.7470,P=0.0052）;在nECRSwNP组及对照组中两者无明显相关性（P>0.05）。...     

IL-9在慢性鼻-鼻窦炎合并鼻息肉患者中的检测及意义

目的探讨慢性鼻-鼻窦炎合并鼻息肉(CRSwNP)患者检测白介素9(IL-9)的临床意义。方法选取2010年12月至2013年12月收治的116例CRSwNP患者作为实验组,以109例鼻中隔偏曲或鼻腔血管瘤等鼻部非炎性疾病患者作为对照组,比较两组患者静脉血和鼻黏膜组织中的IL-9水平。结果 IL-9在CRSwNP患者血浆和鼻黏膜中的含量明显增加,且IL-9mRNA在鼻黏膜组织中的光密度值也明显增加,差异均有统计学意义(P0.01)。结论 IL-9在CRSwNP患者高表达,可作为一个潜在的临床检测指标。     

组蛋白去乙酰化酶在慢性鼻窦炎伴鼻息肉上皮中的表达研究

目的　从组织学层面对比研究慢性鼻窦炎伴鼻息肉（chronic rhino sinusitis with nasal polyps,CRSwNP）黏膜上皮和正常鼻黏膜上皮中组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylases,HDACs）的表达情况,并将鼻息肉依据组织中嗜酸性粒细胞（Eos）所占比例进一步分组对比研究。方法　在首都医科大学附属北京同仁医院鼻过敏科手术患者中,收集5例正常对照鼻黏膜和17例CRSwNP患者鼻息肉,应用实时荧光定量PCR（real-time f luorescence quantitative PCR,RT-PCR）和免疫组化染色分别检测HDAC1、HDAC9和SIRT7 mRNA和蛋白的表达情况。结果  RT-PCR结果显示HDAC1、HDAC9和SIRT7mRNA在鼻息肉中表达较正常对照组上调,并且呈现Eos比例越高,表达越多的趋势;免疫组化染色显示同样发现CRSwNP中HDAC1、HDAC9和SIRT7 表达增强,并且增强程度与Eos 所占比例呈一定相关性。结论　CRSwNP患者鼻息肉黏膜上皮多种HDACs表达上升,Eos浸润程度可能对其有一定的影响,并进一步影响黏膜上皮屏障功能。     

核因子κB信号转导通路对鼻黏膜上皮细胞的细胞因子调控

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导体外培养的鼻黏膜上皮细胞致炎后核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的活性变化对局部细胞因子的调控作用.方法 取11例经鼻蝶垂体瘤切除术患者的蝶窦黏膜,采用无血清原代培养法分离培养黏膜上皮细胞,传3到4代后,经LPS(1 mg/L)诱导以及加入NF-κB阻断剂Wedelolactone前后,应用凝胶电泳迁移率分析法检测NF-κB的DNA结合活性,采用反转录-聚合酶链反应法检测各种细胞因子如白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-5、IL-6、IL-8、粒-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)、正常T细胞活化表达和分泌调节物(regulated on activation,normal T expressed and secreted,RANTES)、嗜酸粒细胞趋化因子(eotaxin)、eotaxin-2、血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)和细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA的表达水平.应用统计软件SPSS17.0对数据进行分析.结果 LPS诱导鼻黏膜上皮细胞后平均(-x±s,以下同)NF-κB DNA结合活性相对值为2.050±0.305,对照组为1.013±0.144,差异有统计学意义(P=0.004).对照组鼻黏膜上皮细胞IL-1β、IL-8和COX-2 mRNA均未见表达,经LPS诱导后相对表达量分别为1.057±0.041、0.950±0.042、0.117±0.012,LPS诱导前后差异有统计学意义(P值均为0.000).应用NF-κB阻断剂Wedelolactone后NF-κB DNA结合活性以及IL-1β、IL-8和COX-2 mRNA的表达水平分别下调至0.917±0.188、0.180±0.008、0、0,与LPS组比较差异有统计学意义(P值分别为0.002、0.000、0.000和0.000).其他各检测指标在各组检测值均为0.结论 NF-κB通路参与了LPS体外诱导人正常鼻黏膜上皮细胞IL-1 β、IL-8和COX-2 mRNA转录水平的调控.     

人鼻黏膜上皮细胞中白细胞介素12和细胞间黏附分子1及单核细胞趋化因子3的表达研究

目的:利用RT-PCR检测原代培养的人鼻黏膜上皮细胞中IL-12、细胞间黏附分子1(ICAM-1)以及单核细胞趋化因子3(MCP-3)mRNA的表达。方法:获取人鼻黏膜组织,原代培养人鼻黏膜上皮细胞。设计IL-12 p35亚基、IL-12 p40亚基I、CAM-1以及MCP-3的引物,参照物采用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH),目标扩增片段938 bp。半定量RT-PCR检测其mRNA在鼻黏膜上皮细胞的表达。结果:×400光镜下观察结果显示原代培养的鼻黏膜上皮细胞形状呈圆形或不规则形,饱满贴壁。RT-PCR结果通过1%琼脂糖凝胶电泳显示,鼻黏膜上皮细胞有IL-12 p35I、CAM-1以及MCP-3 mRNA的表达,但无IL-12 p40亚基的表达。结论:人鼻黏膜上皮细胞中有IL-12 p35、ICAM-1以及MCP-3的mRNA表达,但无IL-12p40亚基的表达。人鼻黏膜上皮细胞不能合成完整有活性的IL-12。     

H2-Ab1基因在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中表达的研究

目的：研究H2-Ab1基因在变应性鼻炎小鼠鼻黏膜中的表达并与正常小鼠比较。方法：选取24只8周龄成熟雌性129/sv小鼠随机分成实验组、对照组,每组12只。实验组采用卵清蛋白（OVA）致敏激发,建立小鼠变应性鼻炎模型,对照组以磷酸盐缓冲液代替OVA。造模成功后取小鼠鼻腔黏膜固定后染色评估鼻黏膜嗜酸粒细胞、肥大细胞浸润等病理学变化,检测小鼠血清H2-AB1蛋白、IL-4和IFN-γ细胞因子水平和OVA特异性IgE抗体浓度。取鼻黏膜提取RNA行实时荧光定量PCR检测H2-Ab1mRNA的表达情况。结果：与对照组相比,实验组小鼠鼻腔黏膜纤毛部分脱落,黏膜下可见嗜酸粒细胞及肥大细胞浸润,血清中OVA特异性IgE、IL-4及H2-AB1浓度显著增高,IFN-γ浓度降低（P〈0.05）,H2-Ab1mRNA表达水平增高。结论：H2-Ab1mRNA及H2-AB1蛋白在变应性疾病中表达增高,提示HLA-DQB1基因对变应性鼻炎发病机制中的Th1/Th2失衡可能起到重要的调节作用。