EB病毒潜伏膜蛋白对人鼻咽癌细胞系CNE1生长分化的影响

目的 研究ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＥＢＶ－ＬＭＰ）对人高分化鼻咽癌细胞生长分化的影响。方法 以人高分化鼻咽癌细胞株（ＣＮＥ１）为对象,采用电穿孔基因转染技术,将重组ＥＢＶ－ＬＭＰ表达质粒转染ＣＮＥ１细胞。以载体质粒转染及ＣＮＥ１细胞为对照,用细胞体外增殖实验、流式细胞信（ＦＣＭ）和裸鼠体内丰瘤实验等,观察细胞生长分化的变化。结果 ＥＢＶ－ＬＭＰ在体外可明显促进ＣＮＥ１细胞地增殖,实验组平均吸光度（Ａ）     

下调整合素连接激酶表达抑制鼻咽癌细胞系CNE1和5-8f的增殖

目的探讨整合素连接激酶(ILK)在鼻咽癌细胞系CNE1和5-8f中的表达水平。用下调ILK表达水平和使用ILK特异性小分子抑制剂方法,研究ILK表达对鼻咽癌细胞增殖的影响及意义。方法用免疫组化法检测鼻咽癌组织和普通鼻咽组织中ILK的表达情况,用qRT-PCR和Western blot检测ILK在鼻咽癌细胞系CNE1和5-8f中RNA和蛋白表达水平,用MTT法检测对鼻咽癌细胞增殖的影响。结果 ILK的表达水平在NPC组织中呈阳性或弱阳性,普通鼻咽组织中呈阴性。在鼻咽癌细胞系CNE1和5-8f细胞中siILK能显著降低ILK的表达水平(P0.05),siRNA下调ILK表达能抑制鼻咽癌细胞增殖能力(P0.05),ILK特异性小分子抑制剂(Cdp22)能够显著抑制鼻咽癌细胞系增殖能力(P0.05)。结论下调ILK表达可抑制鼻咽癌细胞的增殖,为鼻咽癌患者提供新的治疗靶点。     

NP9对鼻咽癌细胞系CNE1基因表达谱的影响

目的： 确定NP9表达对鼻咽癌CNE1细胞基因表达谱的影响。方法: 稳定表达NP9基因和稳定转染空载体的CNE1细胞分别作为基因芯片分析的实验组和对照组，用高通量的基因芯片筛选实验组细胞的差异表达基因，荧光定量逆转录PCR验证部分基因表达差异。结果: 所分析的14 500个基因中，266个检测出有表达差异，其中82个基因呈现表达上调（RA＞1），184个基因显示表达下调（RA＜1）。显著上调和下调的基因分别为34个（RA＞1.5）和75个（RA＜1.5）。结论: NP9基因的表达导致了CNE1细胞中与细胞周期调控、细胞增殖和分化、细胞信号转导、细胞黏附相关基因表达的改变，为NP9的功能及分子机制研究提供了新的线索。     

LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1癌基因微小RNA表达谱的影响

目的:比较鼻咽癌细胞系CNE1与其EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)稳定转染细胞系CNE1-LMP1的癌基因微小RNA(oncomiRs)表达谱的差异,探讨LMP1对鼻咽癌细胞系CNE1 oncomiRs表达的影响。方法:采用包含132个oncomiRs分子的microRNA芯片分析CNE1与CNE1-LMP1的表达差异,并采用荧光定量PCR验证差异表达明显的oncomiRs分子。结果:二者共检出30个miRNA分子,CNE1中检出miRNA分子19个;其中11个为CNE1-LMP1特异性表达。在共同表达的19个miRNA分子中,在CNE1-LMP1中表达升高2倍以上的miRNA分子有6个:hsa-miR-19b、hsa-miR-17-3p、hsa-miR-22、hsa-miR-149、hsa-miR-150和hsa-miR-188。没有表达降低2倍以上的分子。在CNE1-LMP1特异性表达的11个miRNA中,hsa-miR-122a呈高水平表达,其表达水平超过内对照。通过荧光定量PCR验证6个差异分子的表达,发现改变倍数与芯片结果一致(P0.01)。结论:LMP1能影响oncomiRs表达谱,可能是LMP1作为病毒癌基因发挥作用的另一重要途径。     

Lnc RNA-XIST对鼻咽癌细胞CNE-1增殖、侵袭的影响

目的研究Lnc RNA-XIST对鼻咽癌CNE-1细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法选择对数生长期的鼻咽癌CNE-1细胞,采用脂质体转染法进行XIST、si-XIST瞬时转染,通过实时荧光定量PCR技术确认Lnc RNA-XIST在细胞中表达水平,分别采用CCK8、平板克隆检测Lnc RNA-XIST转染后CNE-1细胞增殖能力的变化,Western blot法检测CNE-1细胞中Notch1的蛋白含量,侵袭小室实验检测侵袭能力的变化。结果鼻咽癌CNE-1细胞转染XIST后,si-XIST组CNE-1细胞内的Lnc RNA-XIST mRNA表达降低,XIST组CNE-1细胞内的Lnc RNA-XIST mRNA表达升高。与对照组相比,Lnc RNA-XIST高表达显著增加肿瘤细胞的增殖能力,激活Notch1通路,显著增加肿瘤细胞的侵袭能力(P0.05)。结论 Lnc RNA-XIST通过激活Notch1通路显著增加鼻咽癌CNE-1细胞增殖、迁移及侵袭能力。     

汉防己甲素对人鼻咽癌CNE1和CNE2细胞株的放疗增敏作用

目的:探讨最大非毒性剂量汉防己甲素(tetrandrine,Tet)对人鼻咽癌细胞株CNE1和CNE2的放疗增敏机制。方法:分别采用最大非毒性剂量Tet(对CNE1细胞为1.5μmol/L;对CNE2细胞为1.8μmol/L)、4 Gy放疗和最大非毒性剂量Tet联合放疗处理CNE1和CNE2细胞;流式细胞术检测各组细胞周期分布,Western blot检测各组细胞γ-H2AX、cleaved caspase-3、p-CDC25C、CDK1、p-CDK1、cyclin B1、ERK和p-ERK的蛋白水平。结果:最大非毒性剂量Tet联合放疗后可上调CNE1和CNE2细胞中γ-H2AX的表达。放疗组CNE1和CNE2细胞G_2/M期的比例分别为(18.09±0.42)%和(18.48±1.32)%,联合处理组CNE1和CNE2细胞G_2/M期的比例降为(15.88±1.04)%和(13.80±0.82)%,与放疗组比较差异有统计学意义(P0.05)。联合处理可增加放疗所致的cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05)。不同浓度Tet处理CNE1和CNE2细胞后,p-CDC25C和p-CDK1的蛋白水平随Tet浓度增加而升高(P0.05),CDK1的表达无明显改变;最大非毒性剂量Tet不影响p-CDC25C、p-CDK1和CDK1的蛋白水平。在CNE1和CNE2细胞中,联合处理可明显降低放疗引起的p-CDC25C和p-CDK1的蛋白水平(P0.05),上调放疗后cyclin B1的表达,而对总CDK1的表达无明显调节作用;联合处理可显著抑制放疗所致的pERK蛋白水平(P0.05)。结论:最大非毒性剂量Tet可以增加放疗引起的CNE1和CNE2细胞的DNA断裂及细胞凋亡,其放疗增敏的机制可能与Tet调控ERK/CDC25C/CDK1/cyclin B1通路、去除放疗导致的G2/M期阻滞有关。     

华蟾素抑制人鼻咽癌细胞系CNE2和HONE1增殖

目的 评估华蟾素(Cin)对人鼻咽癌(NPC)细胞系(CNE2和HONE1)的生物学作用以及发挥功效的机制.方法 用不同浓度梯度(0、5、15和45 mg/L)Cin分别处理CNE2和HONE1细胞24、48和72 h后,用CCK-8法检测细胞活性.48 h后,用相差显微镜观察细胞形态;TUNEL荧光染色法检测细胞凋亡...     

PKC—α、PKA—I反义核酸对鼻咽癌CNE—2Z细胞生长增殖的影响

目的：探讨PKC—α和PKA—I反义核酸(asODN)对鼻咽癌CNE—2Z细胞生长增殖的影响。方法：分别用脂质体(lipofectin,LP)介导asODN转染鼻咽癌CNE—2Z细胞。实验组：①0．01—1．00μmol/L PKC-α asODN；②0．01—1．00μmol/L PKA-I asODN；③0．50μmol/L PKC-α asODN。对照组：相应浓度的随机序列(rODN)。用免疫组化法检测CNE—2Z细胞PKC-α和PKA-I的表达，MTT法检测其生长指数(growth in-dex,GI)，软琼脂克隆形成串检测其体外增殖能力。结果：PKC-α asODN或/和PKA-I asODN均可阻断其相应PKC-α或PKA-I的表达(P＜0．05)。PKC-α asODN或PKA-I asODN均能显著降低CNE—2Z细胞GI和软琼脂克隆形成率(P＜0．05)，且具有量效依赖关系。PKC-α asODN PKA-I asODN共同作用可使其GI和软琼脂克隆形成率非常显著降低(P＜0．01)，无明显量效依赖关系，两者对CNE—2Z生长抑制作用强于PKC-α asODN或PKA-I a-sODN(P＜0．05)，对其软琼脂克隆形成率的抑制作用与PKC-α asODN或PKA-I asODN无显著差异(P＞0．05)。结论：PKC-α asODN和PKA-I asODN均可抑制CNE—2Z细胞体外生长和增殖，两者具有协同作用。     

XIAP在鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2和5-8F中的表达与研究

目的比较CNE1、CNE2及5-8F鼻咽癌细胞株中X链锁调亡抑制蛋白(XIAP)的表达差异。方法体外培养鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2及5-8F,采用RT-PCR法检测CNE1、CNE2及5-8F细胞株中XIAP基因表达情况。结果 XIAP基因在CNE1低表达,而在CNE2和5-8F高表达。结论 XIAP与NPC的恶性程度和转移潜能有关。     

NEDD8 共价修饰抑制因子MLN4924 对人卵巢癌细胞株SKOV3 增殖和凋亡的影响

目的:探讨神经前体细胞发育相关受控表达分子8(NEDD8)共价修饰抑制因子MLN4924 对人卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响,并分析其可能机制。方法:使用不同浓度MLN4924(0、0.125、0.25、0.5 μmol/ L) 处理人卵巢癌细胞株SKOV3 4 h,免疫印迹法检测PAR3、HER2、Neddylated-cullins、P鄄I资B琢的表达水平;同时取细胞培养上清用ELISA 检测IL-6 的分泌。不同浓度MLN4924 处理SKOV3 细胞72 h,CCK8 法检测细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率。结果:MLN4924 作用4 h 时,能够使Neddylated-cullins 下降、P-κBα积聚,IL-6 分泌减少,而PAR3、HER2 表达水平变化不显著。MLN4924 在0.125、0.25 和0.5 μmol/ L 的浓度下处理SKOV3 细胞72 h 时,对细胞增殖有明显的抑制作用,并且随着剂量的加大,抑制效果也显著提高;同时加药组S 期细胞百分率相较于对照组明显升高,且形成大量四倍体,使之没有完整的细胞周期;细胞凋亡率也随MLN4924 剂量增大而升高。结论:NEDD8 修饰特异性抑制剂MLN4924 能够明显抑制人卵巢癌细胞株SKOV3 的增殖,诱导细胞周期阻滞和凋亡。上述效应可能与NF-κB 通路活性受到抑制和IL-6 表达下降有关。     

吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨吗啡对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响及可能的机制.方法 以含0.1、1、10、100、1000mg/L吗啡的培养液作用于体外培养的鼻咽癌CNE-2细胞,等体积培养基作为对照组.MTT法检测吗啡作用24、48和72 h的细胞增殖抑制率,并在不同浓度吗啡作用细胞48 h后,用Hoechst33258荧光染色、流式细胞仪检测细胞凋亡,Western免疫印迹检测Bc1-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达.结果 相同作用时间点0.1～100 mg/L吗啡并不影响CNE-2细胞的增殖.而在1000 mg/L吗啡作用下细胞增殖受到明显的抑制,在24、48、72 h CNE-2细胞增殖抑制率随作用时间延长而增加,分别达到(15.0±4.4)%、(30.7±4.9)%和(50.0±4.4)%.48 h后,荧光显微镜下对照组CNE-2细胞未见明显凋亡,0.1～100mg/L吗啡组仅见少量凋亡,而在1000mg/L吗啡组,可见到大量细胞出现典型的凋亡形态学改变.流式细胞仪检测结果显示0.1～100 mg/L吗啡组细胞凋亡率与对照组差异并无统计学意义(P>0.05),而1000mg/L吗啡组细胞凋亡率则明显增加[(39.33±6.03)%比(9.36±1.57)%,P<0.05].Western免疫印迹检测显示在1000 mg/L吗啡作用CNE-2细胞48 h后,Bcl-2蛋白的表达量较对照组明显下降,Bax表达增多,caspase-3活性升高,cleaved-caspase-3表达增多.而其他浓度作用下CNE-2细胞Bcl-2、Bax和caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白表达未见明显变化.结论 大剂量吗啡可诱导鼻咽癌CNE-2细胞的凋亡,其机制可能与吗啡上调CNE-2细胞Bax蛋白表达,下调其Bcl-2蛋白表达,引起caspase-3活化有关.     

三氧化二砷对肝细胞癌组织ezrin基因表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对肝细胞癌（HCC）组织ezrin基因表达及血清甲胎蛋白（AFP）水平的影响。方法 24例可切除HCC患者,其中男性20例,女性4例;年龄42～74岁,平均年龄为58.6岁。术前接受As2O3治疗14d（10mg/d,静脉滴注）。取治疗前的病灶活组织检查标本和治疗后手术切除标本,采用免疫组织化学方法均行ezrin表达检测,同时比较治疗前、后血清AFP水平的变化,并分析血清AFP水平与ezrin基因表达的相关性。结果治疗前ezrin表达强阳性、弱阳性和阴性例数分别为6例、7例和11例,而As2O3治疗后分别为2例、5例和17例,两组比较差异有统计学意义（χ2=5.619,P〈0.05）。治疗前血清AFP为325.5ng/L,治疗后AFP为278.6ng/L,前后比较差异有统计学意义（Z=-2.360,P〈0.05）。结论 As2O3可明显下调HCC肿瘤细胞ezrin表达,有抑制HCC细胞生长、抑制复发转移的作用。     

肝细胞癌组织中端粒酶逆转录酶基因hTERT的表达不依赖PCNA和P53

目的 :研究肝细胞癌 (HCC)中端粒酶逆转录酶基因hTERT的表达及其与增殖细胞核抗原 (PCNA)和P5 3基因的关系 ,探讨其在HCC发生、发展及预后复发中的意义。方法 :采用免疫组化染色法检测 4 2例HCC组织中hTERT、增殖细胞核抗原(PCNA)和P5 3蛋白的表达 ,并对hTERT与HCC的临床病理特征以及PCNA、P5 3蛋白表达的关系进行分析。结果 :HCC中hTERT、PCNA和P5 3蛋白的阳性率 ,分别为 71.4 % (30 / 4 2 )、76 .2 % (32 / 4 2 )、73.8% (31/ 4 2 ) ;而hTERT在正常肝脏组织中不表达。hTERT在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级HCC组织中的表达率 ,分别为 4 0 .0 % (4 / 10 )、70 .0 % (14 / 2 0 )及 10 0 % (12 / 12 )。HTERT的表达率与疾病复发有显著相关性 (P <0 .0 5 )。结论 :hTERT表达的异常可能与肝癌的发生、发展有关。hTERT与PCNA和P5 3无明显的相关性。检测hTERT的表达可作为预测肝癌预后复发的潜在指标 ,并提示HCC为由多基因参与的疾病     

口虾蛄提取物对人鼻咽癌细胞端粒酶活性的影响

目的:研究口虾蛄提取物(EOS)对人低分化鼻咽癌细胞系(CNE-2Z)端粒酶活性的抑制作用及其可能机制。方法:MTT法检测不同浓度的EOS对CNE-2Z细胞增殖能力的影响;端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附法(TRAP-ELISA)检测各组细胞端粒酶活性,RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达,Western blotting检测c-Myc蛋白表达。结果:EOS对CNE-2Z细胞增殖具有抑制作用,且呈剂量依赖性(P0.01);EOS处理组CNE-2Z细胞端粒酶的活性、hTERT mRNA和c-Myc蛋白的表达水平均低于对照组(P0.01),也呈剂量依赖性,并且hTERT mRNA的下调与c-Myc的抑制存在相关性(P0.05)。结论:EOS可能通过下调细胞c-Myc表达而抑制了hTERT mRNA的转录,以致端粒酶的活性降低而抑制CNE-2Z细胞增殖。     

三氧化二砷提高多发性骨髓瘤ARH-77细胞对NK细胞杀伤敏感性的研究

目的 研究三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)前后人多发性骨髓瘤ARH-77对NK细胞杀伤细胞敏感性的变化,并初步探讨其机制.方法 分别应用CCK-8法和台盼蓝染色法测算ATO对ARH-77细胞株的50%抑制量(IC50)和细胞活性;乳酸脱氢酶释放法检测ATO作用前后ARH-77细胞对NK细胞的杀伤敏感性.流式细胞仪检测ARH-77细胞表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULBP2、ULBP3)和HLA-Ⅰ类分子表达以及ATO作用前后的细胞周期变化.结果 ATO对ARH-77细胞的IG50为5.0μmol/L.NK 细胞杀伤ATO作用前后ARH-77细胞的活性有显著差异(P＜0.05).ATO作用后,ARH-77细胞发生G1/S期阻滞,同时其表面MICA/B、ULBP1、ULBP3表达显著升高,二者之间差异有统计学意义(P＜0.05).ULBP2和HLA-Ⅰ类分子无明显变化(P＞0.05).结论 ATO能提高ARH-77细胞NKG2D配体(MICA/B、ULBP1、ULIBP3)表达;从而使其对NK细胞的杀伤敏感性增强.     

6A8α-甘露糖苷酶表达对人鼻咽癌细胞CNE-2L2端粒酶活性和端粒长度的影响

探讨端粒长度与端粒酶活性在人鼻咽癌细胞CNE-2L2恶性行为改变前后的变化，建立研究恶性行为改变与端粒长度与端粒酶活性间关系的细胞模型。与6A8α-甘露糖苷酶表达正常的CNE-2L2细胞(野生型细胞W，转导空载体的细胞M及转导无关DNA片段的细胞S)相比，6A8α-甘露糖苷酶表达低下的细胞(AS)接种裸鼠皮下后的肿瘤性生长受抑。用Telo TAGGG Telomere Length Assay Kit及Telomerase PCR ELISA Kit分别测定端粒长度及端粒酶活性，用RT-PCR方法分析端粒重复序列结合因子(TRF)的转录水平。见AS细胞的端粒明显缩短(6．78Kb，W细胞为8．40Kb，M细胞为8．34kb，S细胞为9．56kb)，但端粒酶活性及端粒重复序列结合因子l和2(TRFl和2)的转录水平未见改变。实验表明，恶性行为降低的CNE-2L2细胞的端粒变短，但与端粒酶活性及TRF1／2无关，提示在CNE-2L2细胞中可能存在着端粒酶及TRF1／2以外的调节端粒长度的机制。这为研究肿瘤细胞恶性行为改变与端粒长度与端粒酶活性间关系提供了一个模型。     

鼻咽癌中hTERT和p53的表达及其相关性

目的　研究人端粒酶逆转录酶 (hTERT)和 p5 3在鼻咽癌中的表达及其对预后的影响 ,并分析hTERT与抑癌基因p5 3的相关性。 方法　用免疫组化S P法分别检测hTERT及 p5 3在 84例鼻咽癌组织、8例癌旁黏膜上皮非典型增生组织和16例鼻咽黏膜慢性炎组织中的表达。结果　 (1)hTERT在鼻咽癌组织 癌旁黏膜上皮非典型增生组织和鼻咽黏膜慢性炎组织中的阳性表达率分别为 83 4 % (70 / 84 )、0 (0 / 8)和 0 (0 / 16 ) ;p5 3在上述 3种组织中的阳性表达率分别为 5 6 % (4 7/ 84 )、5 0 %(4 / 8)和 0 (0 / 16 ) ;两种基因表达在癌与非癌组间差异均有显著性 (P <0 0 0 1)。 (2 )hTERT阳性表达患者的平均生存期、5年生存率和中位生存期均低于hTERT阴性者 ,且差异有显著性 (P <0 0 5 )。p5 3阳性和阴性表达患者的预后组间差异无显著性 (P >0 0 5 )。 (3)鼻咽癌组织中hTERT与 p5 3的表达一致率为 6 3% (5 3/ 84 ) ,存在显著相关性 (P <0 0 5 )。 结论　hTERT可作为临床诊断鼻咽癌的一个潜在指标 ,且对临床判断预后有重要意义。p5 3的表达对鼻咽癌的临床诊断具有一定价值 ,但其特异性不强 ,对判断预后也无显著意义 ;p5 3很可能参与了对hTERT表达的调控 ,但可能以不同方式出现     

Raf激酶抑制蛋白对鼻咽癌细胞增殖的影响

目的：探讨Raf激酶抑制蛋白（RKIP）对鼻咽癌细胞增殖的影响。 方法：采用脂质体转染方法将反义RKIP核酸表达质粒pcDNA3.1(-)-asRKIP及空白载体pcDNA3.1(-)分别转染鼻咽癌细胞系6-10B细胞,用Western 印迹检测RKIP表达,建立RKIP表达下调的稳定转染细胞和对照细胞系。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、流式细胞术和软琼脂集落形成实验检测RKIP表达下调对鼻咽癌细胞增殖、细胞周期分布和停泊非依赖性生长的影响。结果：建立了RKIP表达下调的6-10B鼻咽癌细胞系;RKIP表达下调促进6-10B细胞增殖和停泊非依赖性生长,并加速其越过G0/G1期。结论：RKIP具有抑制鼻咽癌细胞增殖和停泊非依赖性生长的作用,可能在鼻咽癌发病中具有重要作用。     

星形细胞瘤端粒酶反转录酶及其mRNA的原位表达

目的 :观察端粒酶反转录酶 (TRT)及其mRNA在各级星形细胞瘤中的原位表达 ,分析其与病理分级和患者预后的关系。方法 :收集解放军总医院各级星形细胞瘤 47例 ,选取尸检正常脑组织 2例、脱髓鞘病变 7例作为对照。应用免疫组织化学方法检测石蜡包埋标本中TRT蛋白 (端粒酶反转录酶 )及Ki6 7的表达并用原位杂交方法检测TRTmRNA在石蜡切片及体外培养的人胶质母细胞株中的表达 ,对结果用计算机图像分析系统进行量化分析。结果 :端粒酶反转录酶蛋白在正常胶质细胞中呈阴性 ,在增生病例和 1、2、3、4级肿瘤病变中呈现阳性率和阳性强度递增的现象。相关分析显示它与Ki6 7的表达密切相关 (P <0 0 1) ,同时它与分级和预后相关 (P <0 0 1) ;端粒酶反转录酶mRNA的表达明显低于TRT蛋白水平的表达 ,但与TRT蛋白显著相关 (P <0 0 1) ,多形胶质母细胞瘤细胞株TRTmRNA呈中度阳性。结论 :TRT蛋白和TRTmRNA的表达与肿瘤的Ki6 7表达和病理分级密切相关 ,TRT蛋白还与预后相关 ,提示端粒酶TRT基因及其蛋白表达的水平可能与肿瘤的演进一致 ,TRTmRNA的表达与端粒酶活性是一致的