异基因骨髓移植中T细胞表达Ly49A与移植物抗宿主病发生相关

杀伤细胞抑制性受体 (ＫｉｌｌｅｒＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙＲｅｃｅｐｔｏｒ,ＫＩＲ)是一种主要表达在ＮＫ、Ｔ细胞上的抑制性信号传递分子[1] 。鼠的ＫＩＲ分子被称为Ｌｙ4 9家族(Ｌｙ4 9Ａ Ｉ)。在细胞免疫识别阶段 ,Ｌｙ4 9分子特异地与不同的ＭＨＣＩ分子配体结合 ,传递抑制性信号 ,抑制杀伤细胞的早期活化。移植物抗宿主病(ＧＶＨＤ)主要是供者Ｔ细胞活化后对宿主细胞和组织的攻击所致。Ｌｙ4 9Ａ ＭＨＣＩ作为Ｔ细胞活化的抑制性信号传递分子 ,其在ＧＶＨＤ发生中的表达如何将有助于揭示ＫＩＲ分子参与控制ＧＶＨＤ的可能机制。本文采用…     

不同预处理方案对异基因骨髓移植物抗宿主病的影响

目的　建立大鼠异基因骨髓移植模型 ,应用不同的预处理方案 ,研究它们对移植物抗宿主病 (GVHD)严重程度的影响。方法　Wistar大鼠为供鼠 ,SD大鼠为受鼠 ,受鼠分 4组 ,分别予以不同的预处理方案 ,A、B组受鼠自移植前 4～ 1d ,腹腔注射氟达拉宾 (Fludarabine ,Flu) 1mg kg ,移植当天分别接受 2、6Gy的全身照射 ;C、D组受鼠在移植当天分别接受 2、6Gy的全身照射。制备供鼠骨髓细胞。照光 4h后 ,经尾静脉输注供鼠骨髓细胞 3.6× 10 7。观察各受鼠GVHD反应。结果　GVHD程度依次为 :Flu +2Gy组 <2Gy组 相似文献   

NK细胞在异基因造血干细胞移植中对移植物抗白血病效应及移植物抗宿主病作用的影响

白血病复发和移植物抗宿主病（GVHD）是异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）后影响病人生存的主要障碍。自然杀伤细胞（NK）独特的受体表达使其具有不同于一般免疫细胞的“同种反应性”效应,这种作用使NK细胞在增强移植物抗白血病效应（GVL）的同时抑制GVHD的发生,从而达到两者的分离。NK细胞在异基因造血干细胞移植中产生GVL及GVHD作用的机制以及影响因素的深入研究可能为探讨如何改善异基因造血干细胞移植预后提供有益的参考。     

小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病模型的建立

目的：建立稳定可靠的小鼠异基因骨髓移植急性移植物抗宿主病（GVHD）模型，为异基因骨髓移植中GVHD研究提供理想的实验参照。方法：以C57BL/6 (H-2^b) 小鼠为供鼠、BALB/c (H-2^d) 小鼠为受鼠，在移植物中混合不同比例的供鼠外周淋巴细胞以引起不同程度的GVHD。根据临床表现、存活期及病理检查等判断GVHD程度。结果：单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现急性GVHD，20%的小鼠长期存活（超过120 d），无急性GVHD表现；混合不同比例外周淋巴细胞的异基因骨髓移植小鼠出现GVHD的时间和程度均有差异，其中骨髓与外周淋巴细胞1:1混合组小鼠全部在移植后5-14 d出现典型的弓背体位，存活期6-24 d，临床和病理均可在相对集中的时间内观察到典型的急性GVHD改变。结论：以供鼠骨髓与外周淋巴细胞1:1混合进行的异基因骨髓移植，100%引出致死性的急性GVHD。     

MHC半相合骨髓移植后慢性GVHD小鼠模型的建立

目的建立MHC半相合异基因骨髓移植(allo-BMT)后慢性GVHD小鼠模型。方法以(Balb/c×C57BL/6)F1H-2d/b(CB6F1)雌性小鼠为受者,预处理条件为不同剂量的全身照射(TBI,60Co照射),输注MHC半相合Balb/cH-2d雄性小鼠骨髓细胞与不同数量脾细胞,观察移植后小鼠体质量变化,靶器官病理变化,血清抗ssDNA抗体、抗dsDNA抗体。结果在照射剂量为8Gy,输注骨髓细胞数量为8×106、脾细胞数量为4.5×107的小鼠至实验结束(移植后100d)全部存活,体质量减轻与对照组和其它实验组相比差异显著(P<0.05)。血清抗ssDNA抗体、抗dsDNA抗体较对照组和其它实验组显著升高(P<0.05)。该组皮肤、肝脏等病理改变明显。结论在照射剂量为8Gy,输注骨髓细胞数量为8×106、脾细胞数量为4.5×107的小鼠成功诱导出半相合allo-BMT慢性GVHD,为进一步研究慢性GVHD的发病机理、生物学特性、干预因素等打下了重要基础。     

干扰素-γ在异基因造血干细胞移植中的作用

干扰素-γ(IFN-γ)是最重要的Th1型细胞因子之一,可由多种类型的免疫活性细胞产生.IFN-γ具有多种生物学效应,并可能在接受了异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的患者发生移植物抗宿主病(GVHD)的过程中起了关键性的作用.IFN-γ最初被认为是急性GVHD过程中介导组织损伤的关键因素之一,且与GVHD严重...     

异基因外周血造血干细胞移植及其联合骨髓移植后造血重建及移植物抗宿主病的比较

通过比较异基因外周血造血干细胞移植(PBSCT)与其联合骨髓移植(BMT)治疗白血病过程中造血重建时间、移植物抗宿主病(GVHD)发生率及生存率,探讨二者联合移植对白血病治疗的影响。回顾性分析2003年1月至2009年1月在郑州大学第一附属医院接受全相合异基因造血干细胞移植的152例患者,其中78例单纯接受外周血造血干细胞移植,74例接受外周血造血干细胞移植联合骨髓移植。预处理方案:152例患者均应用改良Bu/CY方案预处理,环孢素A(CsA)联合甲氨蝶呤(MTX)、吗替麦考酚酯(MMF)预防GVHD,流式细胞仪测定外周及骨髓造血干细胞计数。SPSS17.0统计分析两组患者移植后造血重建时间、GVHD的发生率及2年生存率。结果:1、移植后造血重建:接受外周血造血干细胞移植与联合骨髓移植患者的白细胞及血小板重建时间无显著性差异(血小板>20×109/L时间分别为(14.18±4.713)d和(12.55±6.552)d(P>0.05),中性粒细胞>0.5×109/L的时间分别为(12.08±3.586)d和(11.64±5.540)d(P>0.05);2、GVHD:接受PBSCT及联合BMT患者Ⅲ度到Ⅳ度急性GVHD(aGVHD)发生率比较有显著性差异(P=0.05)。两者慢性GVHD(cGVHD)发病率有显著性差异(P=0.01);3、2年生存率:接受外周血干细胞移植及其联合骨髓移植患者2年无病生存率和总生存率无显著性差异(P>0.05)。提示,异基因造血干细胞移植与其联合骨髓移植比较造血重建时间及2年生存率无明显差异,但前者GVHD发生率较高,因此外周血造血干细胞移植联合骨髓移植可能减少急性及慢性GVHD的发生。     

雷公藤甲素治疗异基因骨髓移植后aGVHD的实验研究

目的：探素雷公藤甲素（TWH）对异基因HSCT中aGVHD的治疗作用及其机制，并研究雷公藤甲素对移植物抗肿瘤（GVT）作用的影响和对移植物植入的影响。方法：（1）以B6为供者，致死性照射的CB6F1为受者，建立基因半相合移植动物模型；以CB6F1为受者，皮下接种S180细胞并照射，建立基因半相合移植荷瘤aGVHD模型；BALB／c小鼠背部皮下注射S180细胞并照射，建立同基因移植荷瘤动物模型。各组动物分别给予不同剂量TWH及CsA。观察TWH对GVHD、GVT的影响。（2）MTT法测定TWH抑制脾淋巴细胞增殖作用和TWH的体外抑瘤作用。（3）ELISA法测定移植后动物血清IL-4、IFN-γ水平。（4）甲基纤维素半固体培养基检测CFU-GM生成率。结果：（1）小剂量TWH（〈1μg/d）降低aGVHD发病率，延长动物生存时间；小剂量TWH与小剂量CsA在预防GVHD方面有协同作用。（2）TWH在抑制aGVHD的同时，保留GVT作用，延长了荷瘤动物生存时间，而无GVHD的同基因移植荷瘤动物生存期缩短。（3）TWH可抑制脾细胞增殖，降低血清IFN-γ水平。（4）一定剂量TWH（〈1μg／d）不影响干细胞植入和CFU-GM的产率。结论：TWH具有抑制aGVHD保留GVT的作用，可与CsA协同作用预防异基因HSCT中aGVHD。     

NK细胞在异基因骨髓移植中作用的动物实验研究

本文探讨NK细胞在异基因小鼠骨髓移植GVHD和GVL反应中的作用。受体小鼠以60 Co照射 ,总剂量 8 0Gy;骨髓细胞经尾静脉注入受体小鼠中 ;GVHD反应指标包括 (1)弓背体位、大小便及脱毛等一般表现 ;(2 )嵌合体、体内混合淋巴细胞反应、 30d生存率为检测GVHD反应的定量指标 ;GVL作用指标包括外周血白细胞总数及白血病细胞比例 ,脾脏白血病细胞浸润比例 ,以及死亡率观察 ;病理学检查作为鉴别GVL实验中是否主要死于GVHD的指标。GVHD反应结果表明 ,异基因与后输NK细胞的异基因骨髓移植组均于 15d内死亡。而先输NK细胞组的GVHD反应明显减轻 ,30d死亡率为5 1%。同时输NK细胞组 30d内死于GVHD反应。移植后第 7天与 15d时 ,以先输NK细胞组的嵌合率高 ,第 30天时各组均未检出明显嵌合体存在。GVL作用实验方面 ,异基因、同时输NK细胞组及后输NK细胞的骨髓移植组虽然于 12d内表现出抗白血病作用 ,但在 30d内相继死于GVHD反应。先输NK细胞组于移植后 12d开始观察到较明显GVHD样反应 ,而外周血或脾细胞中L615细胞比例变化结果证实该移植途径具有较好的抗白血病作用。先输注供体NK细胞的异基因骨髓移植方式既能减轻GVHD反应 ,又能保留较好的GVL作用     

异基因造血干细胞移植CD94分子在T细胞高表达的意义初探

目的检测CD94分子在T细胞表达的水平,同时探讨在异基因造血干细胞移植(HSCT)中发生移植物抗宿主病(GVHD)患者CD94分子在T细胞表达的意义。方法HSCT治疗高危白血病和遗传性溶血性贫血成功植入的儿童患者,其中同胞脐血移植(UCBT)10例,非血缘相关UCBT1例,异基因外周血造血干细胞移植(alloPBSCT)5例,在移植前后发生GVHD时采用流式细胞仪检测和比较外周血中CD94的表达,并与正常外周血水平比较。结果CD94主要表达于CD3+CD8+T细胞,正常情况下外周血和脐血T细胞表达率低于10%,其中CD4+细胞几乎不表达,低于2%。但在UCBT或alloPBSCT后CD94在CD4+T细胞和CD8+T细胞均明显增高。3例UCBT无GVHD,其余均发生了ⅠⅣ0急性GVHD。急性GVHD发生时CD4+CD94+和CD8+CD94+T细胞表达明显升高。结论异基因造血干细胞移植后发生GVHD时,T细胞高表达CD94,可能是在同种抗原的刺激下机体自我保护的结果。     

供者源性的骨髓间质干细胞对急性移植物抗宿主病的影响

目的:采用大鼠骨髓移植模型探讨共移植供者源性的骨髓间质干细胞(MSCs)对骨髓移植后急性移植物抗宿主病(GVHD)的影响。方法:体外培养Fisher344大鼠骨髓间质干细胞,扩增至第5代用于移植。建立大鼠异基因急性GVHD模型(F344→Wistar)。受者Wistar大鼠采用致死性全身照射预处理,当天移植F344大鼠骨髓细胞和脾细胞。实验组则移植F344大鼠骨髓细胞、脾细胞和第5代的MSCs。观察各组移植后急性GVHD的发生时间、发病率和存活时间。结果:共移植MSCs推迟急性GVHD的发病时间,延长该组的存活时间,但无法完全消除急性GVHD的发生。结论:MSCs在体内具有免疫抑制功能,供者来源的MSCs在不使用免疫抑制剂情况下,可推迟急性GVHD的发病时间和延长受者的存活时间。     

Immunohistological skin alterations in allogeneic bone marrow transplantation

Summary Skin biopsies of 26 patients with leukemia and seven patients with aplastic anemia were investigated before and at different stages after allogeneic bone marrow transplantation (BMT) to establish the immunological criteria which distinguish skin alterations during normal reconstitution from dermal lesions mediated by graft-versushost disease (GvHD). Of the 33 patients studied 27 presented with clinically diagnosed acute and/or chronic GvHD, one patient died of bone marrow rejection. Immunohistological analysis of the respective skin biopsies with selected monoclonal antibodies against human leukocyte antigens (HLA) and differentiation antigens of the lympho-hematopoietic cells revealed low dermal mononuclear cell counts with phenotypically normal constituents in five cases with uncomplicated reconstitution post-grafting. In contrast, increased dermal cellular infiltrates predominantly consisting of Lyt 3⁺, OKT 8⁺ T-lymphocytes, as well as of a large number of Ia-like (immune response associated = HLA-D) determinant⁺ monocytes/macrophages were observed in all patients with active acute/chronic GvH reactivity. As sign of activation simultaneous expression of HLA-D region products was also found on a subset of the invading OKT 8⁺ T-lymphocytes. Progression of GvHD was associated with additional surface staining of keratinocytes for Ia-like determinants. Loss of Ia-like determinant⁺, OKT 6⁺ dentritic epithelial cells in all leukemic patients, as well as in patients with aplastic anemia with or without GvHD suggested damage of Langerhans cells due to the previous radiotherapy and/or specific immunological destruction. In patients with fatal outcome of GvHD prolonged reduction of these dentritic epithelial cells seemed to be indicative of impaired immune reconstitution or bone marrow dysfunction. Thus immunopathological features of skin GvHR may enable early recognition and prognostic evaluation of this disease possibly allowing more effective therapy.Abbreviations GvHD graft-versus-host disease - GvHR graft-versus-host reactivity - SAA severe aplastic anemia - TBI total body irradiation - BMT bone marrow transplantation - HLA human leukocyte antigens - Ia-like antigens Immune-response-associated antigens - PBS phosphate buffered saline - FITC fluorescein isothiocyanate - TRITC tetramethylrhodamine isothiocyanate Supported by DFG Sonderforschungsbereich 120, Projekt A 2 and B 1Dedicated to Prof. Dr. Dr. h.c. H.E. Bock on the occasion of his 80^th birthday     

Acute folic acid deficiency after bone marrow transplantation

Summary After bone marrow transplantation (BMT), megaloblastic bone marrow changes are often observed that can only be partially explained by drug effects. Our goal was to find out whether folic acid deficiency represented an additional factor. The serum folic acid concentrations of 41 patients were determined regularly before and after BMT. A 2nd degree polynomial regression analysis revealed a clear and acute drop in folic acid concentrations within 7–9 days after BMT. In 19 patients the level fell below 3.0 ng/ml, the range of folic acid deficiency. The mean folic acid values without oral administration of folic acid after BMT lay significantly below the mean values with substitution (P<0.001). If a case of acute graft versus host disease (GvHD) was more severe than grade I, the mean folic acid levels were significantly lower (P<0.01). Patients with megaloblastic bone marrow changes after BMT had significantly lower folic acid values than those without such changes (P<0.01). The 18 patients with folic acid deficiency had a significantly higher rate of megaloblasts, binucleate erythropoietic precursors, Howell-Jolly bodies, giant myelocytes, and giant metamyelocytes in bone marrow smears than the remaining 23 patients (P<0.05). Folic acid deficiency did not slow down the increase in leukocytes, granulocytes, thrombocytes, or reticulocytes after BMT. There were 8.2%–9.7% hypersegmented neutrophils in the blood (normal 5%) after BMT both with and without folic acid deficiency. Folic acid deficiency after BMT was caused by insufficient intake combined with simultaneous decreased intestinal resorption and increased requirements for the regeneration of bone marrow and intestinal mucosa.Abbreviations BMT Bone Marrow Transplantation - DNA Deoxyribosenucleic Acid - GvHD Graft versus Host Disease - MTX Methotrexate     

异基因骨髓移植小鼠免疫功能缺损机制的探讨

异基因骨髓移植(Allogeneic Bone Marrow Transplantation,ABMT)后,受体的免疫功能长期缺损,是患者术后极易感染死亡的重要原因之一.本文对ABMT小鼠(C57BL/6→BALB/c)免疫功能缺损的机制进行了探讨,发现ABMT小鼠IL-2产生明显受损;其脾细胞与(C57BL/6小鼠脾细胞一起过继转移到致死量照射的BALB/C小鼠体内,能抑制移植物抗宿主病(GVHD)的发生.去除其脾T细胞后,这种抑制作用丧失,ABMT小鼠脾细胞上清中发现一种非特异的抑制因子,能抑制正常小鼠脾细胞产生混合淋巴细胞反应的能力;能抑制正常小鼠的脾细胞产生IL-2;抑制正常小鼠脾细胞毒T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性.用抗Thy-1.2单抗和补体去除ABMT小鼠脾T细胞后,其脾细胞培养上(?)的上述抑制活性丧失.这说明ABMT小鼠脾T(?)细胞活性增强是其免疫功能缺损的重要原因之一,它通过释放非特异的抑制因子执行其免疫抑制功能.     

骨髓间质干细胞降低大鼠移植物抗宿主反应的实验研究

目的 探讨MSCs对GVHD的作用及其机制.方法 建立大鼠同种异体骨髓移植模型,同时输入供者的T淋巴细胞诱导出移植物抗宿主反应,联合或不联合移植供体来源的MSCs,观察受鼠的生存时间,同时利用RT-PCR法研究Th1/Th2淋巴细胞亚群的比例,用ELISA法检测移植后体内IL-4细胞因子的浓度.结果 GVHD组的平均生存时间为(17.30±2.33)天,实验组的平均生存时间为(24.10±2.36)天 , 与单独移植HSCs相比,MSCs与HSCs共移植明显延长的受鼠的生存时间.同时,GVHD组Th1/Th 2 细胞比值为1.29±0.06,IL-4因子的浓度平均为(14.84±2.59) pg/mL,实验组Th1/Th 2细胞比值为(0.77±0.14),IL-4因子的浓度平均为(40.09±13.99) pg/mL.MSCs与 HSCs 共移植降低了体内Th1/Th2淋巴细胞亚群的比例,提高了体内IL-4细胞因子的浓度.结论 MSCs与HSCs共移植能有效抑制HSCs移植后致死性GVHD的发生,延长生存时间,同时MSCs 可能通过作用于体内Th1/Th2淋巴细胞亚群的比例,促进体内IL-4细胞因子的分泌从而间接发挥了抑制GVHD的作用.     

慢病毒载体介导的鼠基因工程调节性T细胞对小鼠移植物抗宿主病的作用研究

目的 通过慢病毒载体介导的鼠叉状头螺旋转录因子(Foxp3)基因表达构建鼠基因工程调节性T细胞(Tr),探讨输注基因工程Tr细胞对小鼠异基因骨髓移植后移植物抗宿主病(GVHD)的影响.方法 利用慢病毒载体介导,将鼠Foxp3基因转导入BALB/c小鼠的CD4+CD25-T淋巴细胞,即为基因工程Tr细胞.建立小鼠异基因骨髓移植模型,在移植时联合输注基因工程Tr,通过受鼠移植后生存期、组织病理学改变、炎性细胞因子浓度等指标评价其防治GVHD的作用.并与单纯照射组、移植对照组、空载体对照组相比较.结果 单纯照射组、移植对照组、工程Tr组和空载体对照组小鼠存活时间分别为(8.8±0.6)d、(36.7±2.5)d、(51.6±4.0)d和(34.1±2.3)d,工程Tr组小鼠存活时间明显长于其他各组(P＜0.05).移植对照组及空载体对照组小鼠肝脏、皮肤和小肠病理切片均存在GVHD病理改变,工程Tr组长期存活小鼠的肝脏、皮肤和小肠常规病理切片结构基本正常,未见GVHD病理表现.移植后移植对照组、工程Tr组、空载体对照组受鼠血清IFN-γ、IL-2和TNF-α浓度在21～28 d时达高峰,工程Tr组在21 d时IFN-γ、IL-2和TNF-α浓度高峰较其他两组为低(P＜0.05).结论 小鼠异基因骨髓移植时联合输注基因工程Tr细胞可通过减少受鼠移植后炎性细胞因子的分泌有效减少GVHD的发生,减轻其严重程度.     

异基因骨髓细胞在致敏模型体内归巢示踪与植入分析

目的: 探讨异基因供者骨髓细胞在致敏模型体内的归巢示踪与植入分析。方法: 以异基因脾细胞输注方法建立致敏的BALB/c小鼠模型,同时取正常BABL/c小鼠作为非致敏模型。致敏或非致敏模型经8 Gy 照射后分别经尾静脉移植1×10⁷ C57BL/6小鼠骨髓细胞。用绿色荧光染料CFSE标记供者骨髓细胞,并分别在移植后不同时点(2 h、12 h及48 h),通过组织细胞悬液动态示踪供者细胞在致敏受者各组织的分布。移植后记录各组的生存情况,每周监测造血重建与骨髓恢复情况。予H-2D^b进行标记移植后受者骨髓细胞,检测供者嵌合百分比。结果: CFSE能标记供者骨髓细胞并用于体内示踪实验。动物体内归巢示踪实验表明,与非致敏组相比,异基因供者骨髓细胞在致敏受者体内的外周血、脾脏及股骨的分布均明显减少。植入分析结果发现,非致敏受者于移植后能长期存活,外周血及骨髓细胞均能迅速恢复;而致敏组中,小鼠均于移植后2周左右全部死亡,生存中位数为13 d,外周血及骨髓细胞均随时间推移呈进行性减少。嵌合分析显示移植后第7 d,非致敏受者与致敏受者的供者骨髓细胞百分比分别为(48.07±4.70)％和(0.77±0.11)％,两者差异显著(P<0.01)。结论: 异基因供者骨髓细胞在致敏受者体内脾脏及股骨等部位被清除,不能有效植入。