3C蛋白酶及抑制剂研究进展

3C蛋白酶是催化小RNA病毒前体蛋白中非结构蛋白部分裂解的关键蛋白酶,对病毒的复制有着重要作用,是当前抗病毒研究的一个重要靶点.本文简要概述了3C蛋白酶的结构、功能和抑制剂的研究进展,对该酶的抑制研究和相关病毒的治疗有积极意义.     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3的研究进展

丙型肝炎病毒（HCV）非结构蛋白NS3共有631个氨基酸组成，具有线氨酸蛋白酶和三磷酸核苷酶（NTPase）和螺旋酶（Helicase）的功能，在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥重要作用。非结构蛋白NS3具有较强的免疫原性和抗原性，是检测HCV感染的主要抗原之一。近年的研究发现NS3内部的裂解产物更具有致癌潜能。此外，NS53蛋白还参与NS5A的超磷酸化修饰过程等。     

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶及抑制剂研究进展

丙型肝炎病毒(heptitis cvirus，HCV)丝氨酸蛋白酶(serine protease)是催化病毒前体蛋白中非结构蛋白部分裂解的关键蛋白酶。对病毒复制和宿主细胞都有重要作用，是当前抗病毒研究的一个重要靶点。本文从丝氨酸蛋白酶结构、功能和抑制剂等三方面，介绍丝氨酸蛋白酶的研究进展，这对该酶抑制研究和丙型肝炎的治疗研究会有积极意义。     

黄病毒多功能酶NS3研究进展

黄病毒非结构蛋白NS3是一个具有多种酶活性的蛋白,其N端为丝氨酸蛋白酶结构域,C端为RNA解旋酶／核苷三磷酸酶／RNA 5’三磷酸酶结构域。NS3在病毒前体蛋白的加工和病毒基因组的复制过程中发挥重要功能。对NS3的研究有助于新型疫苗和抗病毒药物的设计。本文试图对近年来NS3研究的进展情况进行一简要的回顾。     

黄病毒多功能酶NS3研究进展

黄病毒非结构蛋白NS3是一个具有多种酶活性的蛋白,其N端为丝氨酸蛋白酶结构域,C端为RNA解旋酶/核苷三磷酸酶/RNA 5′三磷酸酶结构域。NS3在病毒前体蛋白的加工和病毒基因组的复制过程中发挥重要功能。对NS3的研究有助于新型疫苗和抗病毒药物的设计。本文试图对近年来NS3研究的进展情况进行一简要的回顾。     

p7蛋白--丙型肝炎病毒潜在抑制靶点

丙型肝炎（hepatitisc）是严重的慢性传染病之一，全世界病毒感染者约1．7～2亿。HCV为单链RNA病毒，一个开放读码框编码了3010个氨基酸的前体蛋白，在细胞和病毒蛋白酶共同作用下，前体蛋白被降解成结构蛋白和非结构蛋白两部分。结构蛋白包括核心蛋白（C）和膜蛋白（E1、E2）以及p7蛋白，非结构蛋白包括NS2、NS3、NS4A、NS4B、NSSA和NSSB。p7蛋白结构、功能仍然了解甚少。最近有研究发现p7蛋白可能是一个重要的病毒抑制靶点。     

含3C蛋白酶切位点的人CD226胞膜外区Ig融合蛋白的真核表达及应用

目的：构建含3C蛋白酶酶切位点的人CD226(PTA1)分子胞膜外区Ig融合蛋白编码基因的真核表达载体，并进行表达和初步鉴定。方法：将人CD226分子的胞膜外区基因，克隆入含3C蛋白酶靶序列的Ig真核表达载体p-3c—Ig中。测序证实后，转染COS7细胞并进行瞬时表达。表达产物经亲和层析件纯化，并通过免疫荧光染色及3C蛋白酶酶切反应进行鉴定结果：经表达和纯化获得CD226胞膜外区的Ig融合蛋白。该融合蛋白可与表达于ECV304细胞表面的CD226配体有效结合。同时，融合蛋白的Fc段亦经3C蛋白酶切除，从而获得CD226胞膜外区的真核表达分子。结论：成功地获得了含有3C蛋白酶酶切位点的人CD226分子胞膜外区Ig真核表达产物，为进一步对CD226分子进行结构和功能研究，以及X线结晶衍射提供了重要条件。     

丙型肝炎病毒丝氨酸蛋白酶及抑制剂研究进展

丙型肝炎病毒(heptitis cvirus,HCV)丝氨酸蛋白酶(serine protease)是催化病毒前体蛋白中非结构蛋白部分裂解的关键蛋白酶.对病毒复制和宿主细胞都有重要作用,是当前抗病毒研究的一个重要靶点.本文从丝氨酸蛋白酶结构、功能和抑制剂等三方面,介绍丝氨酸蛋白酶的研究进展,这对该酶抑制研究和丙型肝炎的治疗研究会有积极意义.     

HRV 14 3C蛋白酶在大肠杆菌的融合表达及活性检测

目的人鼻病毒3C蛋白酶具有酶切物异性强且在低温下仍保持较强酶活性的特点而被用作工具酶。为大量获得3C蛋白酶,以融合形式在大肠杆菌中高效表达3C蛋白酶。方法将编码HRV143C蛋白酶的cDNA克隆到pGEX4T-1载体,在大肠杆菌B121（DE3）中表达,经一步GST亲和层析纯化获得GST-3C,再通过体外酶切实验对GST-3C和Thrombin的酶切活性进行比较。结果每升培养产物可获得纯度≥90％的重组融合蛋白约50mg,重组GST-3C在4℃低温下具有比Thrombin更高的酶活性。结论GST-3C蛋白酶不仅可以应用于融合蛋白的酶切,而且为引入3C蛋白酶识别位点的串联亲和纯化（TAP）系统提供又一种酶切工具。     

TBE病毒E蛋白分子生物学研究的进展

森林脑炎（ＴＢＥ）病毒是黄病毒科中的成员，象其它的黄病毒一样，成熟的ＴＢＥ病毒含有单链正股ＲＮＡ、３个结构蛋白即衣壳蛋白（Ｃ）、膜蛋白（Ｍ）、包膜（Ｅ）蛋白和七个非结构蛋白。病毒的蛋白开始以一个聚蛋白的形式合成，然后通过病毒和细胞编码的蛋白酶裂解产生病毒的单个蛋白，裂解后的蛋白和病毒的基因组ＲＮＡ首先组装成含有ＰｒＭ蛋白（Ｍ蛋白的前体）的未成熟的病毒，ＰｒＭ通过细胞编码的蛋白酶裂解成Ｍ蛋白成为成熟的病毒。在３个结构蛋白中Ｅ蛋白是病毒最重要的结构蛋白，决定着病毒的组织的嗜性，介导病毒与细胞受体的结合，诱导保护性的免疫反应。Ｅ蛋白内单个氨基酸的改变可导致病毒的组织嗜性、病毒的毒力、血凝活性和融合活性的改变。因此对ＴＢＥ病毒Ｅ蛋白结构和功能的研究有助于了解病毒与宿主细胞相互作用、病毒致病性以及病毒毒力改变的机理，从而，为病毒感染的特异性诊断、疫苗的研制和抗病毒药物的设计、进而为病毒的预防、控制和治疗提供理论依据，     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS3的研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS3共有631个氨基酸组成,具有丝氨酸蛋白酶和三磷酸核苷酶(NTPase)和螺旋酶(Helicase)的功能,在HCV多聚蛋白的成熟和病毒复制过程中发挥重要作用.非结构蛋白NS3具有较强的免疫原性和抗原性,是检测HCV感染的主要抗原之一.近年的研究发现NS3内部的裂解产物更具有致癌潜能.此外,NS3蛋白还参与NS5A的超磷酸化修饰过程等.     

辛德毕斯病毒nsP2蛋白研究进展

nsP2是辛德毕斯病毒一种重要的非结构蛋白,具有蛋白酶活性、三磷酸激酶活性、RNA解旋酶等活性.nsP2蛋白与该病毒基因组复制、多聚蛋白水解等过程有关,更为重要的是该蛋白在调节宿主细胞对病毒感染反应的过程中起重要作用.本文就辛德毕斯病毒nsP2蛋白的结构、功能及相关进展作一综述.     

柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒的构建

目的：构建柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒。方法：用RT-PCR技术，从柯萨奇B4病毒中钓取非结构蛋白P2C cDNA片段，克隆入PUCan-T载体，转化大肠杆菌DH5α，构建重组质粒。结果：以柯萨奇B4病毒的总RNA为模板，扩增出987bp大小的片段，克隆入PUCan-T载体，用BamHⅠ、HindⅢ双酶切鉴定，与非结构蛋白P2C的PCR扩增产物片段大小一致。结论：成功地构建了柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒。     

柯萨奇病毒B组5型非结构蛋白3C表达纯化及多克隆抗体的制备

目的 表达和纯化柯萨奇病毒(CVB5)非结构蛋白3C,免疫雄性大鼠制备多克隆抗体.方法 通过酶切质粒获取3C基因序列,构建到原核表达系统大肠埃希菌中诱导表达重组的3C蛋白,使用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白,十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和考马斯亮蓝染色法(BSA)对重组蛋白的纯度与浓度进行分析,重组的3C蛋白作为抗原,免疫雄性SPF级大鼠获得多抗血清,用ELISA测定抗体效价并Western印迹检测抗体特异性,用该抗体检测病毒在细胞内的复制.结果 构建了重组表达载体命名为3C-pET-28a,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达重组3C蛋白.ELISA测定制备的多抗血清效价为1:500 000,Western印迹检测在EV71、CVA16中都有交叉反应,并确定病毒感染细胞后24 h开始复制.结论 实验成功地利用原核表达系统表达柯萨奇病毒非结构蛋白3C,为进一步研究柯萨奇病毒的感染机理以及疫苗制备提供了基础.     

HCV NS3丝氨酸蛋白酶及以其为靶位的抗感染研究进展

丙型肝炎病毒感染最显著的特征是慢性化，已经成为严重的社会公共卫生问题。目前治疗方法仅限于干扰素-利巴韦林联合使用，持续疗效有限而且副作用大，因此迫切需要寻找特异有效的抗病毒药物。HCV NS3基因编码的NS3蛋白具有丝氨酸蛋白水解酶、解旋酶和磷酸核苷酶活性，在病毒RNA复制和多聚蛋白前体的加工成熟中有着重要作用。因此，NS3丝氨酸蛋白酶的抑制剂是抗病毒的理想药物。本文就HCV NS3丝氨酸蛋白酶及以其为靶位的抗感染研究综述如下。     

SARS冠状病毒基因组编码蛋白的研究进展

SARS冠状病毒是一种新的病毒，能够引起人体以急性肺损伤为主要表现的传染病，对这种病毒的研究引起全世界的高度关注。本文就SARS冠状病毒的基因组所编码的结构蛋白和酶的研究现状和预测加以综述，为SARS的诊断、治疗和研究提供理论依据。     

登革病毒衣壳蛋白研究进展

登革病毒衣壳蛋白是病毒的结构蛋白之一，可与病毒基因组RNA结合构成病毒的核衣壳。同时，衣壳蛋白可进入细胞核，与多种蛋白质结合，并有可能参与对宿主细胞的调控，在病毒的感染过程中具有重要的作用。本文综述了近年来登革病毒衣壳蛋白的结构与功能等方面的研究进展情况。     

微管蛋白的甘氨酸化修饰及功能研究进展*

微管是真核细胞骨架的基本成分，由alpha/beta 微管蛋白二聚体组成。其二聚体的结构在进化上高度保守， 却可承担多种功能，主要原因是其结构和性质可以受多种机制的调控，特别是微管蛋白翻译后修饰。目前已发现 多种微管蛋白翻译后修饰，其中甘氨酸化是一种重要的修饰方式，它与谷氨酸化修饰的位点均为微管蛋白的C端 谷氨酸残基。但与谷氨酸化不同的是，甘氨酸是中性氨基酸，不会增加微管蛋白C末端的净负电荷。这种修饰主 要由微管蛋白酪氨酸连接酶类似酶系（TTLL）催化，其中在甘氨酸化起始过程中发挥重要作用的酶为TTLL3和 TTLL8，延伸过程中起重要作用的酶是TTLL10。这种翻译后修饰可通过改变微管蛋白C端的空间构像，进而改 变C端的旋转半径和结合结构，提高微管的稳定性，从而维持纤毛的结构稳定和功能正常。在中枢神经中，甘氨 酸化对谷氨酸化有竞争抑制作用，可能是神经退行性改变的保护机制之一；在视网膜中，抑制小鼠微管蛋白甘氨 酸化，导致连接纤毛的数量下降，导致视网膜退行性改变；在结直肠癌的发生发展中，抑制甘氨酸化会增加结直 肠癌的发病风险；在精子中，抑制甘氨酸化会阻碍精子的直线游动，导致雄性不育。在其他微管蛋白翻译后修饰 丰富的组织或生命活动中，如血小板、肌细胞、细胞有丝分裂等，微管蛋白甘氨酸化的功能及其调控机制还有待 深入研究。     

登革2型病毒NS3蛋白NTPase/RNA解旋酶结构域的原核表达及活性研究

目的 表达登革病毒非结构蛋白NS3 NTPase／RNA解旋酶结构域（dNS3），纯化表达产物并对其活性作初步研究。方法提取感染登革2型病毒的BHK-21细胞总RNA，RT-PCR扩增目的基因，经NcoⅠ、HindⅢ双酶切后连入表达载体pET28a，转化宿主菌BL21（DE3），优化诱导表达条件，SDS-PAGE和免疫印迹鉴定表达蛋白。表达产物经亲和层析纯化，超滤浓缩脱盐，孔雀绿钼酸铵法检测NTPase活性。结果成功构建重组表达载体pET28a-dNS3并在大肠杆菌中获得可溶性表达，纯化产物经测定具有良好的NTease活性及抗原性。体外条件下证实登革2型病毒非结构蛋白NS5（RDRP）对dNS3的ATPase活性有促进作用，提示在病毒复制时NS3与NS5间的相互作用对NS3的生物活性及对病毒复制过程可能具有调控作用。结论本研究为基于抑制NS3 NTPase／RNA解旋酶活性的抗病毒药物的筛选提供了实验依据。     

病毒孔蛋白的基本结构和功能

病毒孔蛋白（ viroporins）是由病毒编码的小分子量的疏水性蛋白,参与了病毒生命周期的不同阶段,对病毒的复制至关重要。文章主要对甲型流感病毒基质蛋白2（M2）、人类免疫缺陷病毒1型病毒蛋白U （Vpu）、丙型肝炎病毒蛋白P7、轮状病毒非结构蛋白4（NSP4）、严重急性呼吸系统综合征冠状病毒的结构蛋白（ORF?3a）和中东呼吸综合征冠状病毒小包膜蛋白E,对这几种核糖核酸病毒的病毒孔蛋白基本结构和功能方面进行总结,可以为病毒孔蛋白的基础研究以及相关抗病毒药物的筛选提供参考。