盐酸法舒地尔对体外培养大鼠神经干细胞分化的影响

目的观察盐酸法舒地尔对体外培养神经干细胞（NSCs）分化的影响。方法体外分离培养NSCs,通过不同浓度的盐酸法舒地尔干预后,采用免疫细胞化学及流式细胞技术检测神经元特异性烯醇化酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果分离培养的NSCs具有自我复制、增殖能力,可以表达Nestin;诱导分化后的细胞可以表达NSE和GFAP。免疫细胞化学染色提示,盐酸法舒地尔干预组NSE阳性细胞显著高于对照组（P〈0．05）,但是不同浓度盐酸法舒地尔之间元统计学差异（P〉0．05）。流式细胞仪检测结果显示,盐酸法舒地尔干预组NSE阳性细胞比例明显增加,与对照组相比有统计学差异（P〈0．05）。结论盐酸法舒地尔可以促进NSCs向神经细胞方向分化。     

IFN-γ对孕期胚胎神经干细胞分化的影响

目的探讨感染因子IFN-γ对胎鼠神经系统分化的影响。方法利用IFN-γ(浓度0U/mL,20U/mL,200U/mL,2000U/mL)对大鼠体外培养的胚胎16d的神经干细胞进行刺激,观察神经干细胞生长状态和分化格局的变化。结果中等浓度的IFN-γ(200U/mL)能够促进神经干细胞的分化,使得神经干细胞向神经元和少突胶质细胞分化增加,而向星形胶质细胞的分化降低。结论严重的炎症反应会通过释放大量IFN-γ改变神经干细胞的生长和分化状态。IFN-γ能够改变神经干细胞正常发育的时间格局,从而可能对新生儿智力发育造成不利影响。     

改良型生物硅胶膜对大鼠神经干细胞增殖与分化的影响

目的观察改良型生物硅胶膜对神经干细胞（NSCs）增殖与分化的影响,为选择NSCs培养载体提供依据。方法选取孕16d胎鼠的大脑皮质作为细胞来源,建立胚胎NSCs的体外培养体系并随机分为观察组和对照组,其中观察组接种于改良型生物硅胶膜上、对照组接种于普通培养皿中。普通倒置显微镜及电镜下观察细胞生长发育形态学变化,免疫荧光染色技术对NSCs及诱导分化细胞进行鉴定,四甲基偶氮唑蓝（MTr）法检测细胞增殖情况。结果培养2d后,显微镜下两组均可见神经细胞球生成,贴壁良好,细胞球边缘有突起呈辐射状向外发出,神经球NSCs特异标志物神经巢蛋白均呈阳性;培养7d后,观察组和对照组贴壁分化的神经元烯醇化酶阳性细胞率分别为25．14％±1．98％、24．67％±2．05％,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞率分别为59．48％±2．07％．60．87％±1．08％,组间比较,P均〉0．05;两组生长曲线亦无显著差异（P〉0．05）。结论改良型生物硅胶膜对NSCs的生长、增殖及诱导分化无明显影响,但能促进细胞之间突起的增长,可作为培养载体用于研究力学因素对NSCs增殖、诱导分化的影响。     

银杏叶提取物对大鼠神经干细胞分化为神经元样细胞的影响

目的 观察银杏叶提取物(EGB)对大鼠海马神经干细胞(NSCs)增殖及分化为神经元样细胞的影响.方法 取新生24 h内的Wistar大鼠海马组织细胞进行体外培养,1 w后将其接种在培养板中,在不同时间点观察不同浓度EGB 对细胞生长的作用,并检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达.结果 各实验组NSCs生长明显好于对照组,免疫细胞化学显示:在同一时间内,不同浓度EGB诱导NSCs分化为神经元样细胞的百分率随着EGB浓度升高呈上升趋势;随着细胞培养时间的延长,相同浓度EGB诱导NSCs分化为神经元样细胞的百分率有下降趋势.结论 EGB能促进NSCs的存活、增殖并在一定时期内可促进NSCs向神经元样细胞的方向分化.     

舒芬太尼对大鼠胚胎神经干细胞增殖、凋亡及分化的影响

目的研究不同浓度舒芬太尼对大鼠胚胎神经干细胞增殖、凋亡和分化的影响。方法从孕14 d的Wistar大鼠中分离胚胎神经干细胞并培养,采用神经干细胞标记蛋白Nestin免疫荧光染色对胚胎神经干细胞进行鉴定;Brd U渗入法检测不同浓度舒芬太尼对胚胎神经干细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测不同浓度舒芬太尼对胚胎干细胞凋亡的影响;Neu N/DAPI、GFAP/DAPI双染标记神经元细胞和星形胶质细胞以检测不同浓度苏芬太尼对胚胎干细胞分化的影响。结果从孕14 d的Wistar大鼠中分离得到大鼠胚胎神经干细胞,经过不同浓度的舒芬太尼处理后,发现低浓度(0.5 nmol/L)的舒芬太尼对胚胎神经干细胞的增殖、凋亡和分化没有明显影响,而随着剂量增大至中浓度(5 nmol/L)时可以引起细胞的凋亡和分化,增加至高浓度(50 nmol/L)时可以抑制胚胎神经干细胞的增殖。结论高剂量的舒芬太尼可能通过影响中枢神经系统发育过程中神经干细胞的增殖、凋亡和分化,进而影响神经系统发育。     

神经干细胞的增殖与分化调控机制

神经干细胞(NSC)是具有高度自我更新能力并能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的神经前体细胞。从胚胎和成年哺乳动物脑内均可分离出NSC。干细胞的增殖和分化受微环境和基因的双重调控,现已发现多种细胞因子和基因可调节NSC的增殖并决定其分化方向。对NSC增殖和分化机制认识的加深将会促进NSC的临床应用。     

骨髓间充质干细胞体外诱导神经干细胞分化的观察

来源于人胚脑组织的神经干细胞及来源于16岁非造血系统疾病患者的胸骨骨髓间充质干细胞(BMSCs),采用Transwell培养板在体外共同培养(共培养组),观察神经干细胞的形态变化,在共培养第7天用免疫荧光染色检测神经干细胞中神经元细胞特异性标志物特异性烯醇化酶(NSE),并与单纯低糖DMEM培养基培养的神经干细胞(对照组)进行比较.结果显示,共培养组中的NSE阳性细胞达32.7%±11. 5%,而对照组未见NSE阳性细胞,两组相比,P＜0.05.认为BMSCs在体外可诱导神经干细胞分化为神经元.     

神经递质与神经干细胞的增殖和分化

神经干细胞的增殖和分化调控是目前神经干细胞研究的核心问题。神经递质不仅介导神经元之间和神经元与效应器之间的信息传递,而且作为细胞外微环境的一员,也参与了神经干细胞的增殖和分化。神经递质受体及其信号转导在神经干细胞增殖和分化中的作用还不完全清楚,有关神经递质及其受体在神经系统的药理作用可能随着神经干细胞研究的不断深入而重新得到审视和运用。     

氦-氖激光对大鼠骨髓间充质干细胞生长及神经分化潜能的作用

目的观察氦-氖（He-Ne）激光治疗仪对大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）生长和神经分化潜能的作用。方法采用全骨髓培养法获取Sprague-Dawley大鼠的原代BMSCs,取第3代培养的细胞,分为实验组（He-Ne激光治疗仪处理10 min）和对照组（空气暴露相同时间）。采用CCK8法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡,锥虫蓝染色测定细胞活力,并采用细胞免疫荧光技术鉴定BMSCs的神经干细胞分化潜能。结果①细胞呈纤维状贴壁生长,表型鉴定结果为CD90、CD29表达阳性,CD45表达阴性,符合BMSCs的表型特点。②实验组和对照组的细胞增殖活性比较,差异无统计学意义,P〉0.05。③实验组细胞的早期凋亡率为（1.10±0.26）%,与对照组细胞的（1.43±0.06）%比较,差异无统计学意义,P〉0.05。实验组的细胞活力为（96.2±0.6）%,与对照组的（96.2±0.7）%比较,差异亦无统计学意义,P〉0.05。④实验组和对照组的BMSCs在神经干细胞培养液中培养后,均可呈现悬浮生长的神经球;免疫荧光染色显示,神经球中细胞的Nestin染色阳性。结论 He-Ne激光治疗仪对BMSCs的增殖和活力无明显影响,未引起细胞凋亡,未改变BMSCs向神经干细胞分化的潜能。     

胚胎及成年大鼠神经干细胞体外诱导向多巴胺能神经元分化

目的对来源于胚胎和成体大鼠中脑的神经干细胞体外诱导分化成多巴胺能神经元的能力进行比较研究。方法胚胎和成年大鼠神经干细胞分别培养于含有细胞因子IL-1、IL-11、GDNF、LIF的诱导分化液中,诱导分化6d后经流式细胞仪检测比较其分化的多巴胺能神经元的比率。结果免疫细胞化学染色均显示部分分化细胞呈TH染色阳性,流式细胞仪检测其诱导分化成多巴胺能神经元的比率分别为(17.8±4.2)%、(5.6±2.8)%,两者比较有显著性差异(P<0.01)。结论来源于不同发育阶段脑组织的神经干细胞其分化特性不同,胚胎大鼠神经干细胞较成年大鼠神经干细胞更易于向多巴胺能神经元分化。     

新生大鼠海马神经干细胞的分离、培养、分化和鉴定

目的:探讨从新生大鼠海马分离神经干细胞并进一步培养、诱导分化和鉴定的可行性。方法:分离出生1d大鼠海马,吸管吹打机械分离制成单细胞悬液,采用无血清培养和胎牛血清诱导分化,应用免疫荧光技术鉴定神经干细胞及其分化的子代细胞。结果:从新生大鼠海马分离的细胞呈巢蛋白免疫阳性并能在体外传代培养和连续形成克隆;血清诱导分化后的细胞可分别表达神经元和星形胶质细胞的特异性抗原β-微管蛋白Ⅲ和神经胶质原纤维酸性蛋白。结论:分离和培养的细胞能表达神经干细胞的特异性标志物巢蛋白,并且具有很强的增殖能力和多向分化潜能,说明新生大鼠海马存在神经干细胞,并可用于进一步的实验研究。     

移植入阿尔茨海默病大鼠海马内神经干细胞的存活、迁移和分化

目的 观察新生大鼠海马齿状回的神经干细胞(NSCs)移植到阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马内的存活、迁移和分化.方法 将HoechsT_33258标记的NSCs植入AD模型大鼠海马,移植2、4和6 w后,行Y迷宫检测大鼠的学习记忆能力,结合HoechsT_33258标记和荧光免疫组化技术,分析NSCs在AD大鼠海马中的存活、迁移和分化.结果 移植的NSCs在宿主脑内能够存活至少6 w,沿海马回向两侧迁移,NSCs移植2 w后,免疫荧光检测无明显神经丝蛋白-200(NF-200)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、谷氨酸(Glu)、胆碱乙酰转移酶(ChAT)阳性反应,而移植后4、6 w,则可见免疫阳性反应细胞.Y迷宫测试结果显示移植NSCs 2、4、6 w后大鼠学习、记忆能力明显得到恢复,与AD模型组比较有统计学意义(P<0.05),与正常对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 自新生大鼠海马齿状回分离培养的NSCs在AD模型大鼠海马内能够存活、迁移并分化为胆碱能、谷氨酸能神经元及神经胶质细胞.     

刚地弓形虫感染对鼠胚胎神经干细胞的影响

目的探讨大鼠孕早期感染刚地弓形虫对鼠胚胎神经干细胞增殖、分化和迁移的影响。方法12只SD孕鼠随机分为对照组和感染组,每组6只。感染组孕鼠于妊娠第1天(E1天)腹腔注射弓形虫RH株速殖子1×105/只,对照组注射等体积生理盐水。于E5天尾静脉取血,吉氏染色查找虫体。分别于E9、E10和E11天处死孕鼠,每组每次2只,逆转录PCR(RT-PCR)检测羊水中弓形虫B1基因,确认胚胎鼠是否感染弓形虫。体外原代培养鼠胚胎神经干细胞,噻唑蓝(MTT)法检测2组细胞增殖水平。分化培养神经干细胞,免疫荧光法检测巢蛋白(nestin)、微管相关蛋白2(MAP2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,计算对照组和感染组分化为神经元和星形胶质细胞的百分率。取E9、E10和E11天的2组胚胎鼠神经组织作冰冻切片,免疫荧光法检测神经细胞黏附分子(NCAM)在胚胎不同发育时期神经组织中的表达情况。结果血涂片和RT-PCR结果证实,感染组孕鼠和胚胎鼠均感染弓形虫。体外培养神经干细胞,镜下见细胞形态符合神经干细胞特点,神经干细胞标志物nestin蛋白染色呈阳性。MTT结果显示,感染组细胞传代后增殖水平均低于对照组,其中传代后第3和第4天两组之间差异有统计学意义(P<0.05)。MAP2和GFAP荧光染色结果显示,对照组和感染组神经元分化百分率分别为15.15%(55/363)和8.73%(31/355),两者间差异有统计学意义(P<0.05)。对照组和感染组星形胶质细胞分化百分率分别为53.35%(199/374)和67.48%(249/369),两者间差异无统计学意义(P>0.05)。E9、E10和E11天2组胚胎神经组织均检测到NCAM蛋白表达,荧光随时间逐渐增强,对照组表达水平均显著高于感染组(P<0.01)。结论大鼠孕早期感染刚地弓形虫可抑制神经干细胞的增殖、分化和迁移。     

神经递质与神经干细胞的增殖和分化

神经干细胞的增殖和分化调控是目前神经干细胞研究的核心问题，神经递质不仅介导神经元之间和神经元与效应器之间的信息传递，而且作为细胞外微环境的一员，也参与了神经干细胞的增殖和分化。神经递质受体及其信号转导在神经干细胞增殖和分化中的作用还不安全清楚，有关神经递质及其受体在神经系统的药理作用可能随着神经干细胞研究的不断深入而重新得到审视和运用。     

三七总皂甙对神经干细胞诱导分化多巴胺能神经元移植帕金森病大鼠的影响研究

目的 探讨三七总皂甙对神经干细胞体外诱导分化多巴胺能神经元移植帕金森病(PD)大鼠后移植细胞的存活及移植疗效的影响.方法 大鼠胚胎中脑神经干细胞经传代扩增后,在分化液中诱导向多巴胺能神经元分化,应用6-羟基多巴胺制备的PD大鼠模型随机分为多巴胺能神经元组、多巴胺能神经元 三七总皂甙组、三七总皂甙组及手术对照组,每组8只,进行移植手术,移植后检测PD大鼠不对称旋转行为的变化及纹状体移植区酪氨酸羟化酶染色阳性细胞存活的情况.结果 与手术对照组比较,移植后20 d多巴胺能神经元组大鼠不对称旋转圈数开始明显下降(P＜0.01).移植后10～60 d,多巴胺能神经元 三七总皂甙组大鼠的不对称旋转圈数明显低于多巴胺能神经元组(P＜0.01).免疫组织化学染色显示多巴胺能神经元 三七总皂甙组大鼠纹状体移植区酪氨酸羟化酶染色阳性细胞数明显多于多巴胺能神经元组(P＜0.01).结论 三七总皂甙具有提高神经干细胞诱导分化的多巴胺能神经元移植PD大鼠后移植细胞的存活率及移植疗效的作用.     

神经干细胞诱导分化相关因素的研究现状

1992年,Reynolds和Richards最先从成年鼠的纹状体和海马中分离出能够不断增殖并具有分化潜能的细胞群落,提出了神经干细胞（neuralstemcell,NSC）的概念,改变了长期以来人们认为人脑神经元缺乏再生能力的错误观念。Watt等将NSC定义为未分化,缺乏分化标志,能自我更新,具有能分化为至少一种细胞表型的细胞。真正的NSC具有以下三个基本的生物学特征,即缺乏神经系统分化的标志,自我复制能力及多向分化潜能。在整个生命过程中NSC能自我更新．即通过对称性或非对称性有丝分裂产生新的NSC;     

shR-377联合细胞因子诱导人脂肪间充质干细胞向神经干细胞定向分化

目的探索sh R-377联合细胞因子诱导人脂肪间充质干细胞(HADMSCs)向神经干细胞(NSCs)定向分化。方法采用吸脂术获取健康青年人腹部大网膜脂肪组织,胶原酶消化法分离HADMSCs,行表型鉴定和细胞周期检测。sh R-377转染第三代HADMSCs,48 h后流式检测nestin表达率,72 h后行RT-q PCR和免疫细胞化学测定nestin和musashi,并对转化后细胞增殖培养分析。结果流式结果显示HADMSCs表面标志CD45及CD117表达呈阴性,CD29及CD44呈阳性,诱导24 h后nestin表达率为(64.6±3.2%);RT-q PCR结果表明诱导72 h后神经干样细胞球nestin、musashi表达阳性,免疫细胞化学染色可见nestin染色阳性。神经干样细胞球增殖培养7 d可见多个克隆球。神经干样细胞球进一步分化培养,可见到很明显的细长突触,双极或多极神经元样形态。结论 sh R-377联合细胞因子的诱导方法可以使HADMSCs定向分化为NSCs,诱导时间约48 h。转化时间和转化率比传统方法有较大提高,为体外大量获得NSCs提供了实验依据。     

传代和冻存对胎肺间充质干细胞生长及分化的影响

目的 观察传代和冻存对胎肺间充质干细胞（MSCs）生长及分化的影响.方法 以胶原酶消化法自流产胎儿肺组织中分离MSCs,在体外进行传代扩增、冻存、复苏;然后,以相差显微镜观察细胞形态学变化,以流式细胞仪检测表型变化,以神经分化诱导方案研究其向神经元样细胞分化的潜能.结果 经传代和冻存后,人胎肺MSCs的增殖能力、形态和表面标志物的表达均无明显变化,高表达MSCs特异性标志物,不表达造血和内皮细胞标志物,在适宜的神经诱导方案作用下可高效分化为神经元样细胞.结论 传代和冻存对人胎肺MSCs的形态、表型和向神经样细胞的分化潜能无明显影响,胎肺MSCs可作为细胞移植治疗神经系统疾病的备选来源.     

神经胶质细胞--脑内的神经干细胞

随着研究的深入,对神经胶质细胞的生物学功能有了进一步的认识.位于神经生发区的胶质细胞具有干细胞特性,在生长因子的存在下能在体外形成神经球,辐射状胶质细胞也可能是发育期的祖细胞.越来越多的证据表明,胶质细胞是脑内的一种潜在的干细胞.     

银杏内酯B促进体外分化的神经干细胞神经突起生长的研究

目的：观察银杏内酯B（GKB）对体外分化的神经干细胞（NSC）神经突起生长的影响，并初步探讨其可能的机制。方法：用含不同浓度（20mg／L、40mg／L、60mg／L）GKB的分化培养基培养NSC，在不同时间点测量细胞突起的数量和长度，在第7天时应用免疫荧光染色法检测细胞因子信号转导抑制因子-2（SOCS2）表达。结果：（1）24h和3d时各GKB组NSC神经突起长度和数量均较对照组显著增加（P〈0．01）；40mg／L和60mg／LGKB组NSC神经突起数量和平均长度较20mg／LGKB组显著增加（P〈0．01），但两者之间无显著差异。（2）各GKB组和对照组3d时NSC神经突起长度比24h时显著增加（P〈0．01）；对照组3d时NSC神经突起数量与24h时无显著差异，而相同GKB组间NSC平均神经突起数量均显著增加（P〈0．01）。（3）各GKB组SOCS2免疫反应物平均吸光度分别为1．382、1．578和1．527，均显著高于对照组（1．134，P〈0．01）；40mg／L和60mg／LGKB组SOCS2免疫反应物平均吸光度显著高于20mg／LGKB组（P〈0．01），但40mg／LGKB组与60mg／LGKB组无显著差异。结论：GKB能够促进体外分化的NSC神经突起生长，表现为神经突起数量和长度增加；其作用机制可能与SOCS2表达上调有关。