贝加尔唐松草内生真菌的分离及抗氧化活性研究

目的分离和鉴定贝加尔唐松草内生真菌,并检测其次级代谢产物的抗氧化活性。方法采用组织分离法从其根、茎、叶和种子中分离内生真菌,根据形态进行初步鉴定;用DPPH自由基清除法评价贝加尔唐松草内生真菌发酵产物的抗氧化活性。结果从贝加尔唐松草中共分离得到18株内生真菌,它们分属于曲霉属、顶孢霉属、镰刀菌属、香柱菌属、链格孢菌属、匍柄霉属。菌株发酵液的乙酸乙酯部位普遍具有抗氧化活性,其中Y-3对DPPH自由基清除活性较强,达到91.04%,仅次于Vc。结论贝加尔唐松草内生真菌的次级代谢产物具有抗氧化活性,是一种较好的天然抗氧化剂。     

青钱柳内生真菌次生代谢产物抗氧化活性研究

目的:分析广西产濒危药用植物青钱柳内生真菌次生代谢产物的抗氧化活性,筛选具有抗氧化活性较强的内生真菌菌株。方法:以课题组前期已分离培养的131株青钱柳内生真菌的发酵粗提取物为研究对象,对发酵产物的DPPH·、·OH~-、 O_2~-·、 NO_2~-能力和Fe~(2+)螯合能力进行检测。结果:结果表明,青钱柳内生真菌表现出具有一定清除DPPH·、·OH~-、 O_2~-·、 NO_2~-能力和Fe~(2+)螯合能力,对DPPH·、·OH~-、 O2~-·、 NO_2~-最大清除率和对Fe~(2+)最大螯合率分别为81.32%、 87.83%、 49.7%、 43.5%、 82.24%;菌株824F、 894F、 907F、 885F、 890F、 876F、 912F清除·OH~-自由基能力较强,清除率均大于阳性对照V_C。结论:结果表明青钱柳内生真菌代谢产物具有良好的抗氧化活性,可作为寻找新型天然抗氧化剂的潜在资源。     

乌拉尔甘草内生真菌分离及活性初探

目的分离纯化乌拉尔甘草内生真菌,及筛选其次生代谢产物具有较好抑菌活性、抗氧化活性(DPPH·自由基清除率、总还原力测定、羟基自由基清除率)、抗α-葡萄糖苷酶活性的特异性菌株。方法采用组织切块法对乌拉尔甘草分离纯化内生真菌;以正丁醇、醋酸乙酯和乙醇为有机相萃取菌株发酵液及菌丝体;采用滤纸片法进行抑菌活性检测;3种检测方法表征抗氧化活性;PNPG法检测抗α-糖苷酶活性。结果从乌拉尔甘草中分离得到36株内生真菌,发酵液萃取浓缩得到108个样品。实验共分离得到7个属,其中木霉属是优势种。实验结果显示,43.52%的样品具有不同程度的抑菌作用,其中8.33%表现较好;萃取物均具有不同程度的抗氧化活性,其中4.63%～10.12%的样品分别在3种方法中表现较好;99.07%的样品具有不同程度的抗α-葡萄糖苷酶活性,其中5.56%的样品表现较好。结论从乌拉尔甘草中分离出具备较好的抑菌活性、抗氧化活性、抗α-葡萄糖苷酶活性代谢产物的菌株,有待进一步研究深入。     

药用植物刺五加内生真菌的分离及其抑菌活性研究

 目的研究药用植物刺五加内生真菌及其次生代谢产物的抑菌活性,旨在获得有良好抑菌活性的菌株,以寻找新型抗菌物质。方法以枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、屎肠球菌、单增李斯特菌、酿脓链球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌、鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和白假丝酵母为实验菌株,用菌饼法及纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行了抑菌实验。结果从药用植物刺五加中分离到42株内生真菌,其中有37株真菌对至少1种实验菌株有抑菌活性,占总分离菌株的88.10%;有12株内生真菌次生代谢产物对至少1种指示菌有抑菌活性,占总分离菌株的28.57%。结论药用植物刺五加的内生真菌及其次生代谢产物中存在着丰富的抑菌天然活性物质,这可为寻找新型抗菌物质提供资源。     

药用植物五味子内生真菌的分离及其抑菌活性研究

 目的研究药用植物五味子内生真菌及其次生代谢产物的抑菌活性,旨在获得有良好抑菌活性的菌株,以寻找新型抗菌物质。方法以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单孢菌、单增李斯特菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、酿脓链球菌、屎肠球菌、粪肠球菌和白假丝酵母为试验菌株,用菌饼法及纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行了抑菌实验。结果从药用植物五味子中分离到36株内生真菌,其中有33株内生真菌对指示菌均表现出不同的抑菌活性,占总分离菌株的91.67%;有30株内生真菌的发酵液对指示菌株也有一定的抑制作用,占总分离菌株的83.33%。结论药用植物五味子的内生真菌及其次生代谢产物中存在着丰富的抑菌天然活性物质,这可为寻找新型抗菌物质提供资源。     

银杏内生真菌的分离鉴定及其生物活性研究

目的:探讨银杏内生真菌的分离方法、菌种鉴定及其代谢产物粗提物的体外抗真菌、抗氧化活性,为进一步深入研究银杏内生真菌及其代谢产物的活性提供依据。方法:首次对天目山地区野生银杏植株树皮、枝条、树叶进行了内生真菌的分离;采用微量稀释法测试银杏内生真菌粗提物抗病原真菌活性。采用DPPH法测试银杏内生真菌粗提物抗氧化活性。同时采用分子生物学方法对筛选出的活性内生真菌进行鉴定。结果:研究发现,共计9株(16.1%)内生真菌粗提物的抗白色念珠菌Candida albicans、新生隐球菌Cryptococcus neoformans、红色毛癣菌Trichophyton rubrum、薰烟曲霉菌Aspergillus fumigatus活性较好。其中以天目山野生银杏树皮中分离得到的青霉属T-1-2-1菌株粗提物抗真菌活性最佳,对4种供试真菌均具有一定的抗菌活性,其抗红色毛癣菌的MIC80为4 mg.L-1,与阳性对照氟康唑的抗菌活性相当;共计5株(8.9%)内生真菌的抗氧化活性较好,其中,以毛壳属T-3-2-2、炭角菌属T-6-5-7菌株抗氧化活性最好。结论:银杏内生真菌是一个潜在的、丰富的抗菌、抗氧化新药资源库,值得进一步研究和开发。     

产酸模素苷及白藜芦醇苷的毛脉酸模内生真菌筛选

目的:在前期的研究工作中已从不同产地分离得到毛脉酸模内生真菌278株,以这些内生真菌为研究对象,寻找能够通过自身发酵产生酸模素苷、白藜芦醇苷的内生真菌。方法:通过HPLC检测内生真菌的次生代谢产物,以酸模素苷、白藜芦醇苷为参照,筛选能够产生酸模素苷、白藜芦醇苷的内生真菌,并测定其含量。结果:发现其中的11株内生真菌的次生代谢产物中含有酸模素苷,5株次生代谢产物中含有白藜芦醇苷,其中内生真菌tq-s1的次生代谢产物中酸模素苷的质量分数最高(530μg·g-1),且白藜芦醇苷的质量分数也最高(224μg·g-1)。结论:内生真菌的种类和其次生代谢产物的形成受到地理位置的影响,对于酸模素苷和白藜芦醇苷的高产菌种tq-s1,可以进行开发利用的研究。     

药用植物三尖杉内生真菌的分离鉴定及抗菌活性

目的：研究药用植物三尖杉Cephalotaxus fortunei内生真菌的分离鉴定及抗菌活性。方法：用组织培养方法从野生三尖杉的根、茎、叶中分离内生真菌,采用滤纸片扩散法对分离得到的内生真菌的代谢产物做抑菌活性研究。结果：分别从三尖杉根、茎、叶中共分离得到30株内生真菌;抑菌活性研究显示,有20株内生真菌的代谢产物至少对1种靶标菌有抑制活性,占总分离菌株的66.7%,其中菌株CFEF013对所有靶标菌均有抑制作用;经形态学和分子生物学鉴定,对7株具有较强抑菌活性的菌株分属镰孢菌属Fusarium 4株,壳囊孢属Cytospora 1株,拟盘多毛孢属Pestalotiopsis 1株,毛霉菌属Mucor 1株。结论：药用植物三尖杉内生真菌种类具有一定的多样性,内生真菌代谢产物抑菌活性良好。     

药用植物广藿香内生真菌的生物活性研究

目的:研究40株广藿香内生真菌的生物活性,为进一步发掘活性代谢产物提供理论依据。方法:采用SRB、PNPG和DPPH法分别测定内生真菌提取物的细胞毒、抑制α-葡萄糖苷酶和清除DPPH自由基等活性。结果:21株内生真菌对肿瘤细胞SF-268、MCF-7、NCI-H460、Hep G-2中的至少3种细胞具有抑制活性,IC_(50)值在0.03~20.30μg/mL之间,其中菌株A616的抑制活性最为显著,对4种肿瘤细胞的IC_(50)值分别为0.044、0.031、0.030、0.032μg/mL;13株内生真菌具有抑制α-葡萄糖苷酶活性,其中菌株A598的活性最为显著,其IC_(50)值为184.38μg/mL;15株内生真菌具有DPPH自由基清除活性,其中菌株A594、A598、A630显示出较强的DPPH自由基清除能力,IC_(50)值分别为36.33、20.63、59.93μg/mL。结论:广藿香内生真菌具有多种生物活性,值得进一步深入研究。     

白及内生真菌的分离鉴定及其胞外多糖的抗氧化活性分析

目的:缓解白及药用资源压力,分离鉴定白及内生真菌并进行内生真菌胞外多糖活性强弱研究。方法:分离鉴定白及内生真菌,进行液体发酵培养获得胞外多糖,通过建立铁氰化钾法,2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)法,水杨酸法,2-联氨-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)法4种体外模型研究白及内生真菌胞外多糖的抗氧化活性。结果:从白及新鲜根中分离得到10株内生真菌,鉴定合并菌株后得到6株不同的菌株,其中10号菌株胞外多糖(0.1 g·L-1)总还原力最强,其维生素C(VC)当量高达12.01 mg·L-1,其次为6号菌株;清除DPPH自由基活性最强的为1号和6号菌株为16.6%;6号菌株清除羟基自由基活性最强为21.6%,最弱的为10号菌株仅为11.0%;测定其清除ABTS自由基活性时则发现,10号菌株活性最强为13.6%,其次为6号菌株,最弱的为5号仅为1.8%。结论:白及内生真菌胞外多糖具有一定的抗氧化活性,其中6号菌株胞外多糖总还原力,清除DPPH自由基活性,清除羟基自由基活性、清除ABTS自由基均较好,可以加以开发和利用。     

宁夏枸杞内生真菌的分离及抗氧化活性的测定

目的 分离和鉴定宁夏枸杞茎、叶和果实中的内生真菌,并检测其抗氧化活性.方法 以宁夏枸杞为试验材料,采用组织分离法从其茎、叶、果实中分离内生真菌,依据形态进行初步鉴定;随机选择4株内生真菌,采用Fenton反应清除测定羟自由基(·OH)活性.结果 从宁夏枸杞表面消毒的茎、叶和果组织块中,共分离出内生真菌104株,茎中分离出42株,占40.3%,叶中分离出36株,占34.6%,果实中分离出26株,占25%.对产孢的67株进行初步鉴定,分类为2纲3目5科7属,其中青霉属(Penicillium)12株,占17.9%;黑葱花霉属(Periconia)5株,占7.5%;链格孢属(Alternaria)26株,占38.8%;镰孢霉属(Fusarium)5株,占7.5%;曲霉属(Aspergillus)13株,占19.4%;枝梗茎点霉属(Dendrophoma)3株,占4.5%;根霉属(Rhizopus)3株,占4.5%;其中链格孢属(Alternaria)为优势菌群.4株枸杞内生真菌发酵产物都对·OH自由基有清除作用.结论 内生真菌普遍存在于宁夏枸杞组织内,是一大类具有抗氧化活性的生物资源.     

恒山黄芪内生真菌Rhizopus sp.次生代谢产物的分离和鉴定

目的:研究恒山黄芪内生真菌Rhizopus sp.的次生代谢产物的类别。方法:通过组织学的方法从恒山黄芪中分离到AR02,真菌的鉴定采用形态学法结合分子生物学法,内生真菌大量发酵采用固体培养的方法,次生代谢产物的分离采用硅胶柱色谱法,Sephadex LH-20凝胶色谱法结合HPLC进行分离纯化,分离到的代谢产物的化学结构通过理化分析测定结合光谱分析进行鉴定。结果:从黄芪根部分离到的内生真菌AR02被鉴定为根霉属Rhizopus sp.,从该菌株的固体发酵产物中分离得到7个化合物,经结构鉴定,分别为色胺酮(1),lawsaritol A(2),曲菌酸(3),trypacidin(4),monomethylsulochrin(5),emodin 8-Omethylether(6)和cannabifolactone A(7)。结论:化合物1~3,6和7均为首次从恒山黄芪内生真菌中分离得到,且黄芪内生真菌Rhizopus sp.的次生代谢产物呈现出多个类别,可以作为活性物质的新来源。     

铁皮石斛内生真菌的分离及其体外抑菌和抗肿瘤活性初步研究

目的分离铁皮石斛Dendrobium officinale内生真菌,研究内生真菌的分布并初步探讨和筛选具有抑菌和抗肿瘤活性的特异菌株。方法利用组织分离法和分子生物学方法分离、鉴定内生真菌;以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌作为受试对象,采用对峙法和管碟法分别对内生真菌及其发酵代谢产物的醋酸乙酯萃取相进行抑菌实验;采用MTT法对内生真菌代谢产物醋酸乙酯萃取相进行体外抗肿瘤活性检测。结果从铁皮石斛中分离得到28株内生真菌,分子鉴定结果显示,分离的内生真菌归属于10个属,其中镰刀菌属为优势属。抑菌实验结果显示28株内生真菌中,有7株至少能对1种指示菌有抑菌作用,其代谢产物的醋酸乙酯萃取相对3种指示菌和Hep G2细胞具有不同程度的抑制作用。结论铁皮石斛内生真菌种群丰富,从中分离得到的内生真菌具有潜在的抑菌和抗肿瘤活性,为进一步开发抑菌、抗肿瘤候选药物奠定基础。     

藏药黑果枸杞内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

 目的 从藏药黑果枸杞中分离和鉴定内生真菌,并对其抑菌活性进行研究,旨在从该植物中获得强抑菌活性的菌株,为寻找新型抑菌活性物质提供新的资源。方法 以新鲜黑果枸杞为材料,采用组织分离法从其根、茎、叶中分离内生真菌,依据形态进行初步鉴定;采用滤纸片法测定黑果枸杞内生真菌次生代谢产物的抑菌活性。结果 从黑果枸杞的根、茎、叶中,共分离得到内生真菌81株,其中常态下分离得到60株,高盐条件下分离得到21株。81株内生真菌经鉴定属于7目,10科,13属,抑菌活性测试表明,高盐条件下得到的内生真菌代谢产物活性明显高于一般条件下的,特别是E21菌株平均抑菌圈直径为26～31 mm。结论 采用模拟植物生长环境的方法分离内生真菌,对于特异性菌株的分离具有十分重要的意义。     

一株猫爪草内生真菌的鉴定、抑菌及抗氧化活性研究

目的对从药用植物猫爪草茎中分离的一株内生真菌RRT-P2进行分类鉴定,并对其抑菌、抗氧化活性进行初步分析。方法利用形态学观察结合ITS序列分析进行分类鉴定,平板对峙法和滤纸圆片扩散法测定抑菌活性,DPPH法测定抗氧化活性。结果该菌鉴定为刺盘孢属真菌Colletotrichum destructivum,显著抑制真菌核盘菌Sclerotinia sclerotiorum、灰葡萄孢菌Botrvtis cinerea、球黑孢菌Nigrospora sphaerica及细菌金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的活性,发酵液提取物对DPPH自由基的清除率高达70%左右。结论该内生真菌菌株具有开发生防菌及抗氧化活性物质的潜力。     

三尖杉内生真菌分离鉴定及其抗菌活性研究

 目的 分离和鉴定药用植物三尖杉（Cephalotaxus fortunei）内生真菌,并对其进行抗菌活性研究,以期获得活性较好的菌株,为寻找新型抗菌物质提供资源。 方法 采用组织分离法分离出三尖杉内生真菌;利用形态学方法对其进行初步鉴定;以6种细菌为测试菌,选用菌饼法和纸片法进行抗菌活性研究。 结果 从三尖杉的茎、叶、种皮中共分离出61株内生真菌。经形态鉴定,其中产孢的52株初步鉴定属于3目,5科,9属。抗菌实验表明,有50株内生真菌对至少一种测试菌有抗菌活性,占总分离菌株的81.97%。40株内生真菌的次生代谢产物对至少一种测试菌有抗菌活性,占总分离菌株的65.57%。 结论 三尖杉内生真菌丰富多样,其中广泛分布着有抗菌活性的菌株。     

真菌诱导子对怀地黄组培苗生长及次生代谢产物合成的影响

目的:研究分离自地黄不同部位的内生真菌诱导子对怀地黄组培苗生长及其次生代谢产物含量的影响,初步探究其促生作用。方法:以2株Alternaria属内生真菌A.alternata,Penicillium属内生真菌P.axalicum制备不同类型的诱导子,发酵液滤液和菌丝降解液,分别考察其对地黄组培苗株高、鲜重、叶绿素含量、梓醇及毛蕊花糖苷含量的影响,并用SPSS 17.0进行数据分析。高效液相色谱法测定梓醇及毛蕊花糖苷含量。结果:不同菌株制备的真菌诱导子促生作用差异明显,以Penicillium属内生真菌P.axalicum制备的真菌诱导子对怀地黄组培苗促生效果较佳,且以其发酵液滤液促生效果最好。在该培养条件下,怀地黄组培苗株高、鲜重、根长、总叶绿素、梓醇及毛蕊花糖苷含量增加率分别为27.80%,29.49%,22.08%,15.05%,35.98%和68.18%。结论:内生真菌诱导子可促进怀地黄组培苗生长,并提高其次生代谢产物含量,在今后地黄内生真菌应用中可做进一步探究。     

野生大豆内生真菌及发酵液中高质量分数次生代谢产物菌株筛选

目的以分离纯化的42株野生大豆内生真菌为材料,分析内生真菌菌丝及发酵液中次生代谢产物的积累,筛选高产次生代谢产物内生菌株。方法采用液体发酵摇瓶培养法及紫外分光光度法对不同内生真菌菌丝及发酵液中的总三萜、黄酮、多糖、多酚与总酚的量进行检测。结果 42株野生大豆内生真菌菌丝中,筛选获得高质量分数多糖菌株为Y2S9、WDL3和WDL2,质量分数最高可达85.51 mg/g;高质量分数黄酮菌株为Y1S9和Y6S8,质量分数分别为2.99和2.24 mg/g;高质量分数三萜菌株为Y6S8、Y2R1、Y6R2,质量分数分别为25.55、17.89、15.96 mg/g;而WDS7总酚量最高,为22.65 mg/g。内生真菌发酵液中,黄酮量较高菌株为Y1S8和SYS4,其质量浓度分别为3.11和4.81 mg/L;总三萜质量浓度较高的菌株为YSYL2、Y1S8、WDL3,质量浓度分别为17.46、35.00、42.98 mg/L。结论不同生境可能是导致次生代谢产物量差异的主要原因,本研究筛选出高产次生代谢产物野生大豆内生真菌菌株11株,为野生大豆内生真菌功能挖掘及新药筛选奠定了基础。     

一株半夏内生青霉属真菌次级代谢产物及生物活性的研究

目的:对半夏中分离的一株内生真菌BX-9(青霉属)次级代谢产物进行分离鉴定及生物活性研究。方法:将一株半夏内生真菌(BX-9)用PDB培养基进行发酵培养,菌丝体用甲醇回流提取2次,菌液用乙酸乙酯萃取两次,通过各种柱色谱分离得到次级代谢化合物。采用MTT法和改良的Ellman法测定化合物抗肿瘤和抗乙酰胆碱酯酶活性。结果:分离得到7个化合物,分别为2-Hydroxy-14-tricosenvic acid(1)、4,6,8,22-tetraen-3-one-ergostane(2)、Ergosterol(3)、Ergosterol peroxide(4)、(+)-Brefeldin A(5)、7-oxobrefeldin A(6)、4-epi-Brefeldin A(7)。化合物3~6对Hela、7721、HL60三株肿瘤细胞均有显著活性。这7个化合物均无乙酰胆碱酯酶抑制活性。结论:从半夏内生菌BX-9中能分离出具有抗肿瘤活性的次生代谢产物,其中Brefeldin A含量较高。     

贵州白苞蒿抗肿瘤、抗氧化内生真菌的筛选与鉴定

白苞蒿Artemisia lactiflora是一种重要的药用植物。对已分离获得的54株白苞蒿内生真菌粗提物分别采用MTT法和DPPH法进行体外抗肿瘤和抗氧化活性筛选,并采用分子生物学方法对筛选出的活性内生真菌进行鉴定。结果显示,共计10株（18.5%）白苞蒿内生真菌粗提物对人骨髓白血病细胞系（HL-60）、人乳腺癌细胞系（MCF-7）和人前列腺癌细胞系（PC-3）生长的抑制活性较好,其中以链格孢属GYBH47菌株粗提物的抗肿瘤活性最佳,对3种肿瘤细胞株的生长均有抑制作用;共计2株（3.7%）白苞蒿内生真菌粗提物的抗氧化活性较好,其中,拟茎点霉属GYBH42菌株粗提物同时具有抗氧化活性和细胞毒活性。表明贵州白苞蒿内生真菌是寻找有价值的生物活性成分的潜在资源,其生物活性成分值得进一步研究和开发。