角质细胞生长因子在白血病小鼠异基因脐带血移植中的作用

目的 探讨角质细胞生长因子(KGF)在白血病小鼠异基因脐带血移植(UCBT)中的作用及机制.方法 C57BL/6胎鼠外周血作为脐带血移植物.BALB/c小鼠随机数字表法分为7组,每组12只.对照1组:单纯接种白血病;对照2组:全身辐射(TBI)前第4天(-4d)接种白血病,单纯TBI处理;对照3组:不接种白血病,TBI处理后输注2×106个脐带血总有核细胞数(TNC);对照4组:不接种白血病,自TBI-3 d起每日皮下注射磷酸盐缓冲液(PBS)连用7d,TBI后输注脐带血TNC,移植后第8天(+8 d)予输血小板支持;对照5组:TBI-4 d接种白血病,自TBI-3 d起每日皮下注射PBS连用7d,TBI后输注2×106个脐带血TNC,移植+8d予输血小板支持;实验1组:不接种白血病,自TBI-3 d起每日皮下注射KGF 1 mg/kg连用7d,TBI后输注脐带血TNC,移植+8d予输血小板支持;实验2组:接种白血病,自移植-3d起每日皮下注射KGF 1 mg/kg连用7d,TBI后输注脐带血TNC,移植+8d予输血小板支持.以生存期、病理组织学变化、脾脏淋巴细胞亚群、胸腺输出功能为观察指标并作组间比较.结果 对照1组,12只小鼠全部死于白血病,小鼠生存时间为(11.1±1.5)d;对照2组,小鼠单纯TBI处理后12只全部死于造血衰竭,生存时间为(11.5±2.5)d;对照3组,5只(5/12)小鼠生存期超过100 d,7只小鼠20 d内死于内脏出血;对照5组,白血病小鼠脐带血移植后4只(4/12)生存期超过100 d;实验2组,白血病小鼠9只(9/12)生存期超过100d.实验2组与对照5组白血病小鼠生存时间比较差异有统计学意义(Log-rank检验,x2=4.996,P=0.0254).移植后对照4组小鼠脾脏T、NK和B细胞数分别为(9.32 ±0.48)×106、(1.59 ±0.11)×106、(18.74±2.01)×106个;实验1组小鼠脾脏T、NK和B细胞数分别为(13.20±1.14)×106、(1.75±0.12)×106、(20.36±0.86)×106个,实验1组T细胞、NK细胞数均高于对照4组(均P＜0.05).实验1组信号结合T细胞受体删除DNA环(sjTREC)水平明显高于对照4组[(228±24)拷贝/105脾细胞比(167±17)拷贝/105脾细胞,P =0.002].结论 足月胎鼠外周血富含造血干祖细胞.KGF输注减少小鼠异基因脐带血移植后白血病复发,其机制为促进胸腺输出功能恢复.     

Ly49C基因SiRNA对小鼠NK细胞抗白血病活性的影响

目的:观察SiRNA转染小鼠KIR(Ly49C)基因对NK细胞抗白血病活性的影响。方法:应用免疫磁珠分选法纯化C57BL/6小鼠脾细胞中的NK细胞,体外化学合成以Ly49C基因为靶标的SiRNA,联合用脂质体转染小鼠NK细胞,以未处理组为对照,流式细胞仪检测在SiRNA转染后淋巴细胞表面Ly49C分子的表达率。以空转染和未转染的NK细胞作对照,LDH法检测转染后NK细胞对红白血病细胞FBL-3的的杀伤活性。结果:免疫磁珠分选后NK细胞纯度可达90%以上。Ly49C基因SiRNA转染小鼠NK细胞48 h后Ly49C分子表达率为(30.28±1.41)%,未转染对照组为(58.45±3.32)%。相同效靶比时,转染组NK细胞杀伤活性较未转染组显著提高,二者之间差异有显著统计学意义(P<0.05)。结论:转染Ly49C SiRNA的C57 BL/6小鼠NK细胞对FBL-3细胞的杀伤活性明显增强,为提高异基因骨髓移植后移植物抗白血病作用提供了实验依据。     

T739系小鼠可移植性胸腹水型淋巴细胞白血病观察

可移植性胸腹水型淋巴细胞白血病Ｌ８４５模型，系将一只Ｔ７３９系小鼠自发性白血病的瘤细胞经在同系小鼠腹腔移植成功而获得。抽取其腹水或胸水移植于同系小鼠腹脏内，瘤细胞１００％成活且产生腹水；瘤细胞能通过腹膜及肠系膜淋巴结向纵隔及其淋巴结扩散，从而１００％产生瘤性胸水，无自然消退现象。应用该模型对１８种抗癌药物的反应作了试验，结果发现均比较敏感。     

大蒜油在小鼠体内抗流感病毒作用

目的 探讨大蒜油在小鼠体内抗流感病毒的作用。 方法 小鼠经口给予低、中、高3个剂量［25、50、100 mg/(kg·d)］的大蒜油,之后接种流感病毒,分别为低、中、高剂量大蒜油组;同时设空白对照组、病毒对照组、溶剂对照组和阳性药对照组。观察大蒜油对小鼠流感模型的一般活动状态、体质量、肺脏、死亡率和平均存活时间的影响。 结果 与病毒对照组相比,低、中、高剂量大蒜油组和阳性药对照组的小鼠一般状态较好,体质量增加,肺部病变较轻,死亡率较低;与溶剂对照组比较,低、中、高剂量大蒜油组和阳性药对照组的小鼠平均存活时间较长(P<0.05)。 结论 大蒜油在小鼠体内有一定抗流感病毒作用。     

异基因淋巴细胞过继性输注抗白血病作用研究进展

<正>异基因骨髓移植（allo-BMT）目前已成为治愈恶性血液病的重要手段,但所面临的主要障碍是GVHD和移植后复发,而复发的根源又与缺乏GVL效应有关,这种受者体内异基因供者淋巴细胞诱导的GVL效应,可以消除宿主体内残留的白血病细胞,对于防止allo-BMT复发至关重要。自从Kolb1990年报道首例allo-BMT后复发慢性髓性白血病（CML）患者,采用供者白细胞输注诱导再次细胞学完全缓解后,人们对DLI诱     

免疫缺陷小鼠在白血病研究中的新进展

免疫缺陷动物（immunodeficient animal）是指由于先天性遗传缺陷或用人工方法造成一种或多种免疫系统组成成分缺陷的动物。它源于1962年苏格兰医师Issacson等首先发现的无胸腺裸小鼠。1969年,丹麦学者Rygaard首次成功的将人类恶性肿瘤移植于裸小鼠体内,在裸小鼠体内存活并生长,开创了免疫缺陷动物研究和应用的新里程碑。近三十多年来对免疫缺陷小鼠有了深入的研究,相关品系因此建立,并广泛应用于医学生物学研究,尤其在肿瘤学、免疫学中的应用。笔者综述了免疫缺陷动物的发展现状以及其在白血病研究中的应用新进展。     

新型氨基甾体对小鼠粒单白血病动物模型的作用

应用不同剂量的新型氨基甾体处理小鼠急性粒 单核细胞性白血病动物模型 ,测定外周血白细胞计数及分类、骨髓未分化细胞百分率及脾重的变化。结果表明 :新型氨基甾体能明显降低小鼠粒单白血病动物模型的上述指标 (P <0 .0 1) ,且随着药物剂量的加大 ,后者明显降低 (P <0 .0 1)。提示新型氨基甾体对小鼠粒单白血病动物模型具有治疗作用 ,加大剂量可提高治疗效果。     

转染IL-18基因慢性粒细胞白血病树突状细胞的抗白血病作用

目的：探讨转染IL-18基因慢性粒细胞白血病（CML）树突状细胞（DCs）抗白血病免疫作用。方法：以脂质体介导法将pVAX1-IL-18真核表达质粒转染CML DCs,检测转染IL-18 DCs的IL-18表达,通过流式细胞仪检测转染IL-18 DCs的CD80⁺、CD86⁺细胞百分率,并检测IL-18基因修饰DCs刺激T细胞增殖能力、特异性CTL杀伤作用及诱导的NK细胞的杀伤活性。结果：转染IL-18 DCs上清中IL-18的含量为（596±34.1）pg/2×10⁶cells/48 h,而在转染空质粒DCs和DCs上清中未检测到IL-18,且转染IL-18 DCs的CD80⁺、CD86⁺细胞百分率高于转染空质粒的DCs（P<0.05）。转染IL-18的DCs刺激T细胞增殖能力、特异性CTL杀伤作用及诱导的NK细胞的杀伤活性明显高于转染空质粒的DCs（P<0.05）,且随着S/R或R/T增加,其多种免疫反应逐渐增强。结论：IL-18与DCs抗肿瘤作用具有协同性。     

传统急救中成药对白血病小鼠L＿（7212）NK细胞活性的影响

应用简易自然杀伤试验──ＬＤＨ释放改良法，对用药组及对照组实验性白血病小鼠Ｌ＿（７２１２）ＮＫ细胞的活性进行了测试，发现当效靶比（Ｅ／Ｔ）分别为２００∶１及１００∶１时，用药各组ＮＫ细胞活性均较对照组高，尤以清开灵组差异明显，提示该药可试用于临床白血病的治疗。     

子宫内膜异位症患者红细胞免疫功能与NK细胞活性的相关性

目的: 探讨红细胞免疫功能及自然杀伤(NK)细胞活性在子宫内膜异位症(内异症)发病中的作用,以及两者之间的相关性。方法:采用红细胞C3b受体花环试验（RC3bR）及红细胞免疫复合物花环试验(RIcR)测定44例内异症患者(内异症组)红细胞免疫功能变化,采用4-甲基偶氮唑盐(MTT)法检测患者外周血NK细胞活性,并与正常妇女(对照组)进行比较。结果:内异症组RC3bR及NK细胞活性低于对照组(P<0.05),其值随内异症病情加重有逐渐下降趋势;内异症组Ⅲ,Ⅳ期患者RIcR较对照组明显升高(P<0.05)。44 例内异症患者RC3bR值与NK细胞活性的降低程度呈直线正相关(r=0.6659,P<0.01)。结论：内异症患者红细胞免疫功能及NK细胞活性的降低可能与该病的发生与发展有关。     

Graves病人外周血NK活性的初步研究

本文应用~(126)I-UdR 释放法检测43例 Graves 病人外周血自然杀伤细胞(NK)活性,结果为66.50±10.66%,明显高于正常对照组(51.20±9.34%).治疗12～18个月的病人 NK 活性(59.04±8.84%)虽低于治疗前(67.60±9.44%)。但仍高于正常对照组.NK 活性与 T_3,T_4水平无关.本文提示 Graves 病人存在 NK 活性异常可能原发于该病的免疫功能紊乱.治疗后 NK 活性未完全恢复正常,可能是停药后复发的原因之一.     

NK细胞与CIK细胞体外诱导扩增及其活性比较

目的：探讨体外诱导和扩增NK细胞和CIK细胞的方法,比较二者的增殖能力及其对肿瘤细胞的杀伤活性。方法：提取肿瘤患者外周血单个核细胞（PBMCs）,在细胞因子诱导下培养NK细胞和CIK细胞。观察2种细胞的形态学变化,采用流式细胞术检测CD3－CD56+NK细胞和CD3+CD56+ CIK细胞比例,计算细胞扩增倍数;采用ELISA法检测NK细胞和CIK细胞分泌干扰素-γ(IFN-γ)的水平;采用CCK-8法检测NK和CIK细胞对K562细胞株的杀伤活性。结果：经过14 d体外诱导培养后,NK细胞扩增（160.00±12.15）倍,CIK细胞扩增（110.00±15.48）倍,NK细胞的扩增能力强于CIK细胞（P<0.05）;NK和CIK细胞分泌IFN-γ量分别为（4 227.75±731.94）和（525.96±304.84） μg/L,NK细胞分泌IFN-γ的能力强于CIK细胞（P<0.01）;诱导扩增后NK和CIK细胞对K562细胞株具有较强的杀伤活性,随着效靶比的升高杀伤活性增强。在效靶比为25∶1时,NK细胞和CIK细胞对K562细胞的杀伤率分别为65.35%和57.68%,NK细胞的杀伤活性强于CIK细胞（P<0.01）。结论：在体外成功建立了NK细胞和CIK细胞的诱导扩增体系,NK细胞的扩增能力、IFN-γ分泌水平以及其对K562细胞株的杀伤作用均强于CIK细胞。     

NK细胞活性与裸鼠体内移植肿瘤生长的关系

为研究NK细胞活性与裸鼠体内移植肿瘤生长的关系,观察了注射环磷酰胺后裸鼠NK细胞活性的变化,及其对移植肿瘤生长的影响。结果发现:注射环磷酰胺后裸鼠NK细胞活性从(26.67±6.23)％降至(15.00±3.80)％(P<0.01),环磷酰胺组肿瘤生长速度明显快于对照组〔分别为(33.92±10.21)mm/周,(20.03±8.31)mm/周,P<0.05〕,且成瘤率高而潜伏期短。表明NK细胞活性在裸鼠抗肿瘤免疫中具有重要的作用。     

供者NK细胞诱导小鼠MHC半相合骨髓移植的免疫耐受

目的：探讨纯化的供鼠NK细胞加入预处理方案与MHC半相合骨髓移植后免疫耐受的关系。 方法：制备（BALB/c^H-2d×C57BL／6^H-2b）CB6F₁^H-2d/b小鼠为受者,C57BL／6^H-2b的小鼠为供者。70只受者小鼠经致死剂量（9.0 Gy）照射后随机分为7组,每组10只。对照组：分别为单纯照射组、MHC半相合GVHD对照组、MHC半相合骨髓细胞移植组、同基因骨髓细胞移植组。实验组：CB6F₁^H-2d/b小鼠在完成照射后1 h内首先经静脉输注纯化后的MHC半相合供者NK细胞,分为1×106、5×105和2×105／只3个组,在照射后4 h移植MHC半相合骨髓细胞。以血像、体重、生存期和病理组织学等变化为观察指标并做组间比较。结果：①生存期：单纯照射对照组为(5.15±0.66)d,GVHD对照组为(15.80±1.93)d,其他组小鼠生存期均大于30 d。②病理学结果,MHC半相合GVHD对照组出现典型的GVHD病理表现,其他各组均无GVHD病理表现。 结论：在MHC半相合骨髓移植模型上证实,移植前将供鼠的纯化NK细胞加入移植预处理方案,能诱导免疫耐受。     

NK细胞对小鼠H-2单倍体相合骨髓移植后GVHD及造血重建的影响

目的:研究自然杀伤(NK)细胞在单倍体相合骨髓移植中对移植物抗宿主病(GVHD)及造血重建的影响. 方法: 以近交系Balb/c(H-2d)×C57BL/6(H-2b)杂交F1代小鼠(H-2d/b)为供鼠、Balb/c(H-2d)为受鼠,在移植物中增加供者的外周T细胞和(或)NK细胞进行半相合骨髓移植,根据临床表现、病理检查及外周血白细胞(WBC)数,比较不同移植组GVHD发生及造血重建情况. 结果: 骨髓 T细胞组中90%的小鼠出现GVHD,外周血WBC平均在移植后4 wk恢复正常;而骨髓 T 低浓度NK细胞组中20%小鼠出现GVHD, 外周血WBC平均在移植后3 wk恢复正常;骨髓 T 高浓度NK细胞组中仅10%出现GVHD,外周血WBC也平均在移植后3 wk恢复正常. 后两组较骨髓 T细胞组GVHD发生率显著下降(P＜0.01),外周血WBC恢复时间显著提前(P＜0.01). 结论:在小鼠单倍体相合骨髓移植中,同种反应性NK细胞可降低GVHD发生率,促进造血重建.     

NKp46-Cre介导的YFP报告基因系统标记小鼠NK细胞的特异性和效率检测

目的: 检测NKp46-Cre介导的黄色荧光蛋白（YFP）报告基因系统在小鼠体内自然杀伤细胞的效率以及特异性。方法: 通过ROSA26R-YFP与NKp46-Cre小鼠杂交产生后代并且利用基因型鉴定的方法筛选出双阳性的基因型小鼠,流式细胞术检测小鼠体内免疫器官淋巴结,脾脏以及骨髓中的YFP的表达效率,然后用细胞表面抗体标记脾脏的淋巴细胞,分析淋巴细胞群体中YFP阳性细胞的百分比。结果:选取ROSA26R-YFP与NKp46-Cre小鼠杂交后代中基因型为ROSA26R-YFP（+/+）Cre（+/-）的小鼠为实验组,ROSA26R-YFP（-/-）Cre（-/-）的小鼠为对照组;流式细胞术分析免疫器官（淋巴结、骨髓、脾脏）YFP的阳性细胞的比例分别为0.589%±1.02%、1.89%±1.28%、4.53%±1.54%,对照组YFP的阳性细胞的比例分别为0.008%±0.003%、0.126%±0.08%、0.12%±0.004%;两种小鼠的非免疫器官（心脏）无明显YFP阳性的细胞0.009%±0.0002%、0.03%±0.012%;脾脏淋巴细胞系中各免疫细胞（T细胞、B细胞、NK细胞）YFP阳性百分比为89.4%±1.08%、0.89%±0.56%、0.82%±0.82%。结论:NKp46-cre介导的YFP报告基因系统标记NK细胞具有明显的特异性。     

肝癌患者外周血NK和LAK活性及T细胞亚群的变化

采用３ＨＴｄＲ释放法测定了２０例肝癌患者的外周血自然杀伤细胞（ＮＫ）活性及淋巴因子激活的杀伤细胞（ＬＡＫ）活性，同时用ＡＢＣ法检测其外周血Ｔ细胞亚群变化。结果显示，肝癌患者的外周血ＮＫ和ＬＡＫ活性显著低于正常人（Ｐ＜０．０１），Ｔ细胞亚群ＣＤ３及ＣＤ４细胞减少（Ｐ＜０．０１），ＣＤ８细胞增多（Ｐ＜０．０１），ＣＤ４／ＣＤ８比值显著降低（Ｐ＜０．０１）且出现倒置。上述结果提示肝癌患者细胞免疫功能出现紊乱及免疫活性细胞功能有缺陷。     

多病毒感染时T细胞亚群、NK与LAK细胞活性的变化及其意义

目的：探讨多病毒感染时细胞免疫和ＮＫ,ＬＡＫ细胞活性的变化及其意义。方法：以１种或多种病毒抗原,或ＩｇＭ抗体阳性的住院患儿６１例为观察对象,其中单病毒组３８例,多病毒组２３例,另设对照组３０例,采用ＥＬＩＳＡ法测定柯萨奇病毒（ＣＶＢ）抗原和ＩｇＭ抗体、ＥＢ病毒（ＥＢＶ）ＩｇＭ,巨细胞病毒（ＣＶＭ）ＩｇＭ、乙肝病毒（ＨＢＶ）血清标志物５项,单克隆抗体的间接ＡＢＣ免疫组化法测定Ｔ细胞亚群;＾３Ｈ－Ｔｄ     

NK细胞特性及在系统性红斑狼疮中的作用

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种以多种淋巴细胞异常活化、多种自身抗体产生和多器官受累为特征的自身免疫性疾病.自然杀伤(natural killer,NK)细胞是固有免疫系统的重要组成部分,在感染免疫、肿瘤免疫以及自身免疫中发挥十分重要的作用.本文就NK细胞在SLE...