抗原-F(ab’)_2抗体复合物引起的免疫抑制

<正> 本文探讨多克隆B细胞激活后,抗原-抗体免疫复合物对抗原特异性和非特异性B细胞的抑制能力,并用水解法去除Fc段或用蛋白A阻断Fc段等方法研究Fc段的作用。 材料和方法 一、动物:2～3月龄的(A×5M)F_1雌性小鼠。 二、抗马红细胞(HRBC)血清:用100%HRBC经静脉免疫(A×5 M)F_1小鼠而得。     

嵌合抗CD20抗体片段F(ab'')2的表达及活性

目的 :为了简化生产步骤 ,提高抗体蛋白的生物活性 ,探索在工程菌体内直接进行抗CD2 0F(ab’) 2 的高效率分泌性表达。方法 :采用单因素考察法优化培养条件 ,使蛋白G柱和S2 0 0 HR分子筛柱分离纯化目的蛋白 ,用MTT法检测抗CD2 0F(ab’) 2 抑制Daudi细胞体外生长的活性。结果 :发现用论文所选定的最适培养条件 ,抗CD2 0F(ab’) 2 的产量有了明显提高 ,从1 9～ 2 .2mg L达到了 3 7～ 4 3mg L ,F(ab’) 2 在表达产物中所占的比例也从 9 7%～ 13 2 %提高到了 38 1%～ 4 6 8% ;使用S2 0 0 HR分子筛柱对蛋白G柱亲和纯化后的产物进一步分离纯化 ,可以使F(ab’) 2 的纯度达到 85 %以上 ;MTT法检测结果证明F(ab’) 2 抑制Daudi细胞生长的IC50 值为 14 6 μg ml,而Fab’为 39 5 μg ml。 结论 :实现了抗CD2 0F(ab’) 2 在工程菌体内的高效率分泌性表达 ,而且所表达的抗CD2 0F(ab’) 2 比抗CD2 0Fab’具有更强的抑制Daudi细胞体外生长的能力     

FPLC纯化单克隆抗体（Fab＇）_2片段

作者采用ＤＥＡＥ－４０ＨＲ阴离子交换色谱柱，在Ｗａｔｅｒｓ６５０Ｅ快速蛋白液相色谱系统（ＦＰＬＣ）建立了抗肝癌单克隆抗体（ＨＡｂ１８）Ｆ（ａｂ＇）２片段的快速纯化方法。该法是将ＭｃＡｂ用胃蛋白酶消化１８ｈ后，上阴离子交换色谱柱纯化，用ｐＨ７．５１０ｍｍｏｌ／ＬＰＢ洗脱，即得到纯化的Ｆ（ａｂ＇）２．一次纯化周期仅需２５ｍｉｎ，一次上样量１２０～１６０ｎｇ蛋白，Ｆ（ａｂ＇）２得率为３４％，回收率为５１％。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定纯度大于９５％，免疫荧光法测定活性为１：４０００．该法操作简单、快速、实用性强，不需要高档次的色谱仪，只要有一台核酸／蛋白检测仪便可进行纯化，是实验室纯化Ｆ（ａｂ＇）２的理想方法．     

疏水层析法和凝胶过滤法分离HI47抗CD20 F(ab'''')2之比较

目的　比较疏水层析和凝胶过滤两种方法分离纯化HI4 7抗CD2 0F(ab’) 2 的优缺点。方法　采用亲和层析柱protein G对发酵菌体裂解液进行粗纯化,分别采用疏水层析法和凝胶过滤法进行抗CD2 0F(ab’) 2 的分离纯化:疏水层析采用梯度洗脱,80 %B液洗脱2 0min ,10 0 %B液洗脱30min ;凝胶过滤以5 0mmol LPB缓冲液(pH 7.0 ) ,0 .8mL min洗脱4h。结果　粗纯化产物主要含F(ab’) 2 、Fab’,含量分别为19.6 %、5 9.7%。采用疏水层析法1h即可完成分离,F(ab’) 2 回收率为6 7% ,纯度为89.3% ;凝胶过滤4h完成分离,F(ab’) 2 回收率为6 5 % ,纯度为90 .5 %。FACS结果表明,两者结合Raji细胞的阳性率分别为99.93%和99.97%。结论　疏水层析分离纯化抗CD2 0F(ab’) 2 简单、快速、回收率高、纯度高,适用于大规模的工业化生产。     

疏水层析法和凝胶过滤法分离H147抗CD20F（ab’）2之比较

目的比较疏水层析和凝胶过滤两种方法分离纯化H147抗CD20F(ab’)2的优缺点。方法采用亲和层析柱protein-G对发酵菌体裂解液进行粗纯化，分别采用疏水层析法和凝胶过滤法进行抗CD20F(ab’)2的分离纯化：疏水层析采用梯度洗脱，80％B液洗脱20min，100％B液洗脱30min；凝胶过滤以50mmol／L PB缓冲液(pH7．0)，0．8ml/min洗脱4h。结果粗纯化产物主要含F(ab’)2、Fab’，含量分别为19．6％、59．7％。采用疏水层析法1h即可完成分离，F(ab’)2回收率为67％，纯度为89．3％；凝胶过滤4h完成分离，F(ab’)2回收率为65％，纯度为90．5％。FACS结果表明，两者结合Raji细胞的阳性率分别为99．93％和99．97％。结论疏水层析分离纯化抗CD20 F(ab’)2简单、快速、回收率高、纯度高，适用于大规模的工业化生产。     

单抗TIGTC—Ⅲ片段F(ab')2的制备及其放射免疫显像研究

目的:将抗人原发性肝癌(PLC)单抗TIGTC-Ⅲ,用胃蛋白酶法消化成F(ab′)2片段,标记131I后进行裸鼠人肝癌移植瘤的体内定位研究.方法:采用胃蛋白酶消化法,进行裸鼠体内核素显像.结果:消化产率为31.7%±2.4%,经细胞结合实验证明F(ab′)2具有良好的免疫活性,抗体片段进入裸鼠体内后,与完整抗体比,进入肿瘤的速度快,生物学分布特异性高,定位指数上升,血清本底下降迅速,生物半衰期明显缩短.结论:F(ab′)2与全抗体比较可使成像时间提前,定位清晰.     

抗汉坦病毒单克隆抗体F（ab‘）2的制备及其纯度和活性鉴定

利用木瓜蛋白酶分别制备了抗汉坦病毒鼠源性单克隆抗体（ｍＡｂ）３Ｇ１和３Ｄ８Ｆ（ａｂ′）２片段。通过ＷａｔｅｒＤＥＡＥ４０ＨＲ阴离子交换色谱柱纯化后，非还原型ＳＤＳＰＡＧＥ呈现单一条带，相对分子质量（Ｍｒ）约１０００００。两种Ｆ（ａｂ′）２片段均具有良好的血凝抑制活性、病毒中和活性及对汉坦病毒感染乳鼠的保护作用     

人单核细胞趋化因子受体5(CCR5)N-端膜外第一襻特异抗体F(ab′)2的制备及鉴定

目的 :研究人 β趋化因子受体 5 (huCCR5 )NH2 端膜外第一襻特异抗体F(ab′) 2 的制备及鉴定方法。方法 :计算机分析定位超基因家族中同源顺序最低的结构域NH2 端膜外第一襻 ,PCR扩增出该基因片段后克隆到原核表达载体pGEX 1N中 ,经测序鉴定正确后 ,在E coli中表达 ,纯化后免疫新西兰白兔。经A蛋白 SepharoseCL 4B亲和层析纯化后 ,用胃蛋白酶消化IgG ,经S 2 0 0凝胶过滤柱分离制备F(ab′) 2 。结果 :经还原和非还原聚丙烯酰胺凝胶电泳和ELISA阻断实验分析证明得到抗huCCR5NH2 端的特异性抗体。结论 :这一简捷快速的特定功能结构域抗体F(ab′) 2 的制备方法 ,对研究该基因在体内的表达及生物学功能提供了重要的实验材料 ,同时也对超基因家族中亚家族特异抗体研制提供了一种研究思路和方法。     

单抗TIGTC-Ⅲ片段F(ab′)_2的制备及其放射免疫显像研究

目的：将抗人原发性肝癌（ＰＬＣ）单抗ＴＩＧＴＣⅢ,用胃蛋白酶法消化成Ｆ（ａｂ′）２片段,标记１３１Ｉ后进行裸鼠人肝癌移植瘤的体内定位研究。方法：采用胃蛋白酶消化法,进行裸鼠体内核素显像。结果：消化产率为３１７％±２４％,经细胞结合实验证明Ｆ（ａｂ′）２具有良好的免疫活性,抗体片段进入裸鼠体内后,与完整抗体比,进入肿瘤的速度快,生物学分布特异性高,定位指数上升,血清本底下降迅速,生物半衰期明显缩短。结论：Ｆ（ａｂ′）２与全抗体比较可使成像时间提前,定位清晰     

抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备高特异性和高亲和力的抗人肝细胞肝癌(HCC)的单克隆抗体(MAb),为肝癌的靶向诊断及治疗提供依据.方法 用人肝细胞肝癌细胞株HepG-2经"尾静脉.脾脏联合方法"免疫BALB/c小鼠.取其脾脏细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14融合,经ABC免疫组化初筛抗体、有限稀释法亚克隆化、染色体分析、免疫组化鉴定抗体特异性、共聚焦显微镜扫描技术(LSCM)进行组织定位、ELISA分析鉴定抗体的亚型及荷人肝癌裸鼠牛物分布等进一步鉴定其生物学特性.结果 (1)获得一株分泌抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的杂交瘤;该抗体与肝癌组织结合的特异性高达98.5%(67/68);(2)注射131I-MAb后瘤部位放射性分布有逐渐增加的趋势,血液、肝脏、肾脏和肺脏放射性有逐渐减低的趋势,72 h肿瘤/血液和肿瘤,肝脏比值分别为15.76±3.28和7.23±1.70.结论 成功制备抗人肝细胞肝癌的单克隆抗体,具有较好的肝癌特异性、靶向性,对原发性肝癌有潜在的诊断及治疗作用.     

抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

目的 制备高特异性和高亲和力的抗人肝细胞肝癌（HCC）的单克隆抗体（MAb）,为肝癌的靶向诊断及治疗提供依据.方法 用人肝细胞肝癌细胞株HepG-2经＂尾静脉.脾脏联合方法＂免疫BALB/c小鼠.取其脾脏细胞与同源小鼠骨髓瘤细胞SP2/0-Ag14融合,经ABC免疫组化初筛抗体、有限稀释法亚克隆化、染色体分析、免疫组化鉴定抗体特异性、共聚焦显微镜扫描技术（LSCM）进行组织定位、ELISA分析鉴定抗体的亚型及荷人肝癌裸鼠牛物分布等进一步鉴定其生物学特性.结果 （1）获得一株分泌抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的杂交瘤;该抗体与肝癌组织结合的特异性高达98.5%（67/68）;（2）注射131I-MAb后瘤部位放射性分布有逐渐增加的趋势,血液、肝脏、肾脏和肺脏放射性有逐渐减低的趋势,72 h肿瘤/血液和肿瘤,肝脏比值分别为15.76±3.28和7.23±1.70.结论 成功制备抗人肝细胞肝癌的单克隆抗体,具有较好的肝癌特异性、靶向性,对原发性肝癌有潜在的诊断及治疗作用.     

抗SARS-CoV免疫球蛋白F(ab'''')2治疗性抗体对SARS-CoVBJ-01株的中和作用

目的观察马抗SARS-CoV免疫球蛋白F（ab’）2治疗性抗体对SARS-CoVBJ-01毒株的中和作用。方法采用细胞病变（cytopathiceffect，CPE）、四甲基偶氮唑盐（nlethylthiazolyl tetrazolium assay，MTT）测定马抗SARS-CoV免疫球蛋白F（ab’）2对SARS-CoVBJ-01株的中和作用。结果三批马抗SARS-CoV免疫球蛋白F（ab’）2对SARS-CoVBJ-01株有很好的中和作用，CPE和MTT法测得中和效价分别为1：6400、1：6400、1：12800。结论研制的马抗SARS-CoV免疫球蛋白F（ab’）2对SARS-CoV BJ-0l1株有很好的中和作用，并且两种方法结果一致，为SARS的治疗提供了可靠的依据。     

肝癌单克隆抗体HAb18及其F（ab′）_2、Fab片段在小鼠体内的药代动力学研究

作者对１３１Ｉ标记的抗人肝细胞癌单克隆抗体ＨＡｂ１８及Ｆ（ａｂ′）２、Ｆａｂ片段在小鼠体内的药代动力学进行研究。结果表明：（１）３种标记物的药代动力学模式有很大差异，完整抗体ＨＡｂ１８的清除过程符合开放一空模型，清除速率与注射剂量有关。按照剂量从高至低，其Ｔ１／２（整体排泄）分别为４８．０８ｈ、４２．６５ｈ、４０．５４ｈ；Ｔ１／２（血液清除）依次为６１．４２ｈ、４８．０７ｈ、４１．０３ｈ。（２）抗体片段的清除速率明显快于完整抗体，清除过程呈双相下降，符合二室模型。Ｆ（ａｂ′）。整体排泄的Ｔ１／２ａ为５．２９ｈ，Ｔ１／２β为３９．３７ｈ；血液清除的Ｔ１／２ａ为４．２０ｈ，Ｔ１／２β为３４．６１ｈ。Ｆａｂ片段整体排泄的Ｔ１／２ａ为３．５１ｈ，Ｔ１／２β为２０．２２ｈ；血液清除的Ｔ１／２ａ为１．３９ｈ，Ｔ１／２β为２４．３９ｈ。提示：完整抗体适用于肿瘤导向治疗，显像诊断则以抗体片段为佳。     

抗人肝细胞肝癌单克隆抗体的制备及鉴定

Objective To establish and identify a new monoclonal antibody (MAb) against human hepatoceilular carcinoma (HCC) with high specificity and to provide evidence for targeted diagnosis and treatment of liver cancers. Methods Human HCC cell line HepG-2 was used to immunize BALB/c mice using the tail vein injection combined with intrasplenic injection. The sensitized splenic cells were fused with isogenic rat myeloma cells SP2/0-Ag14. The supernatant of the fused cells was detected by ABC immunohistochemistry (IHC) for primary antibody screening. The positive clones were subcloned using the limiting dilution method, and the chromosome of hybridoma was analyzed. The specificity of obtained MAb against HCC was identified by IHC. The epitope of the antigen was detected with laser confocal scanning microscope (LSCM). The subclass of the MAb was analyzed by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). The biodistribution of the MAb was detected in HCC-bearing nude mice to identify its biological characteristics. Results (1) One strain of hybridoma was obtained which produced antihuman HCC MAb with up to 98.5% (67/68) specificity in binding with liver cancer tissues. (2) After injection of 131I-MAb, radioactivity appeared increasingly stronger at the site of tumor and gradually weaker in the blood, liver, kidney and lungs. At 72 h, the ratio of radioactivity in tumor over blood and in tumor over liver was 15.76±3.28 and 7.23±1.70, respectively. Conclusions A novel MAb targeting well at HCC with high specificity is obtained. The MAb may be of potential use in diagnosis and treatment of primary HCC.     

抗精脒单克隆抗体的制备及其特性鉴定

本文用鼠×鼠细胞杂交瘤技术首次建立了抗多胺（精脒）单克隆抗体的杂交瘤细胞系。以此杂交瘤经体外组织培养扩大，并注入同系小鼠腹腔，产生的腹水中抗体滴度达１：１０６。单抗的类别是ＩｇＧ１。单价抗体是由分子量５２ｋＤ和２７ｋＤ组成的复合体。这个单克隆抗体可用于癌症的快速诊断和预后随访。     

抗人黑(素)瘤单克隆抗体免疫组化的研究

本文应用3种小鼠抗黑色素瘤单克隆抗体(McAbs)Leo Me13、HB 59、HB60和APAAP免疫组化染色对5种黑(素)瘤细胞系、7种其它肿瘤细胞系以及黑(素)瘤和各种皮肤色素痣的病理标本进行了研究。结果表明,黑(素)瘤细胞系均呈阳性反应,其它肿瘤细胞系仅1种呈弱阳性反应;黑(素)瘤病理标本的阳性率为93％,皮肤色素痣的阳性率为11％。提示这3种McAbs特异性较高。本文所获结果可为黑(素)瘤抗原的基础研究和临床病理诊断提供实验依据。