大鼠上皮性卵巢癌动物模型CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化

目的:为明确CD4+CD25+调节性T细胞与上皮性卵巢癌的关系,探讨上皮性卵巢癌中CD4+CD25+调节性T细胞的变化、来源以及CD4+CD25+调节性T细胞对上皮性卵巢癌免疫功能的影响。方法:应用Fischer 344大鼠建立上皮性卵巢癌动物模型,应用流式细胞仪和RT-PCR方法检测大鼠胸腺和脾脏中CD4+CD25+调节性T细胞的变化。结果:上皮性卵巢癌大鼠动物模型脾脏T淋巴细胞功能增强,CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞比例及FOXP3 mRNA表达较正常大鼠均明显增加,而胸腺无明显改变。结论:提示上皮性卵巢癌由外周诱导导致CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞比例增加,表达增强。     

原发性垂体促性腺功能低下闭经患者CD8~+CD28~+/CD8~+CD28~- T细胞平衡及其与性激素的关系

目的从免疫学角度及性激素分泌角度探讨CD8+CD28+/CD8+CD28-T(杀伤性/抑制性)T细胞平衡与原发性垂体促性腺功能低下闭经患者的关系。方法收集原发性垂体促性腺功能低下导致原发性闭经患者32例,选取同龄段健康女性32例作为对照组,采用流式细胞术检测外周血CD8+CD28+及CD8+CD28-T细胞及其胞内细胞因子γ干扰素(IFN-γ)及白介素2(IL-2)的百分含量;采用放射免疫法检测血浆雌二醇(E2)、睾酮(Tor)、卵泡刺激素(FSH)及黄体生成素(LH)含量并分析以上几者的相关性。结果 1性激素指标:与健康组比较,原发性闭经组患者的E2显著降低(P=0.000),而Tor及LH则显著高于健康组(P=0.008及0.010),但两组的FSH无统计学差异(P=0.066)。2T细胞平衡:原发性闭经者的CD8+CD28+T细胞及IFN-γ显著低于健康组,但CD8+CD28-T细胞及IL-4显著高于健康组,以上差异均具有统计学意义(p<0.05)。3相关性分析:CD8+CD28+T细胞与CD8+CD28-T细胞呈显著负相关性(P=0.000);CD8+CD28-T细胞与Tor及LH呈正相关性(P=0.023,0.016)。结论原发性垂体促性腺功能低下闭经患者的免疫平衡向CD8+CD28-抑制T细胞倾斜(导致过度免疫抑制),该细胞数量的升高与睾酮及促黄体生成素含量增加有关。     

趋化因子受体CCR7在结肠癌患者外周血CD3~+CD8~+T细胞上的表达及其临床意义

目的检测结肠癌患者外周血中CD3+CD8+T细胞上趋化因子受体CCR7的表达,分析CCR7的表达与结肠癌的病理分化程度、肿瘤大小和临床分期的相关性。方法利用流式细胞仪检测44例患者外周血,以CELLQuest软件分析获取CD3+CD8+T细胞,检测CCR7的阳性表达率。比较结肠癌患者与正常人外周血CD3+CD8+T细胞上CCR7的表达情况;比较患者术前、术后外周血CD3+CD8+T细胞上CCR7表达阳性率变化;比较CD3+CD8+T细胞亚群上CCR7表达在术前、术后的变化。结果结肠癌患者外周血CD3+CD8+T细胞上CCR7阳性表达率比正常人低,差异有统计学意义(P<0.05);术后组外周血CD3+CD8+T细胞上CCR7阳性表达率比术前组高,差异有统计学意义(P<0.05)。外周血CCR7的表达与结肠癌肿瘤的大小、肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移等具有显著相关(P<0.05)。结论CCR7在结肠癌患者外周血CD3+CD8+T细胞上高度表达,并与结肠癌的病理分化程度、肿瘤大小和临床分期的密切相关。CCR7的表达可能与促细胞凋亡和抗细胞凋亡蛋白质有关。     

Graves病中调节性T细胞功能的改变

目的探讨Graves病发生的免疫机制,了解调节性T细胞在其发病中的作用。方法流式细胞术检测32例Graves病(GD组)和20例正常人(正常对照组)中CD4+CD25+T细胞的比例。免疫磁珠法(MACS)分离CD4+CD25+细胞,酶联免疫吸附(ELISA)法检测IL-10的水平,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测FOXP3的表达。结果与正常对照组相比,GD组CD4+CD25+T细胞数量无明显改变(P=0.804),而FOXP3表达减少(24 h和48 h P均<0.01),IL-10分泌减少(24 h和48 hP均<0.01)。结论GD患者调节性T细胞在外周血淋巴细胞中的比例虽无明显改变,但其功能明显减弱,可能是导致其发病的原因之一。     

删除CD4~+CD25~+T细胞对OVA诱导的小鼠体液免疫应答的影响

目的观察删除CD4+CD25+T细胞对OVA免疫小鼠体液免疫应答的影响。方法小鼠腹腔注射抗CD25单克隆抗体,分别于3天、10天、27天采血流式检测外周血中CD4+CD25+T细胞的比例;注射抗CD25单克隆抗体3天后,OVA加铝佐剂免疫未删除和删除CD4+CD25+T细胞小鼠,7天后加强免疫一次,分别于初次免疫后7天,加强免疫后14天采血制备血清,ELISA法检测血清中OVA特异性IgE和IgG1的浓度。结果注射抗CD25单克隆抗体3天和10天,外周血中无CD4+CD25+T细胞;27天后CD4+CD25+T细胞的比例部分恢复。初次免疫7天后,删除CD4+CD25+T细胞小鼠总IgE、OVA特异性IgE和IgG1浓度较未删除组升高;加强免疫14天后,删除CD4+CD25+T细胞小鼠OVA特异性IgE较未删除组升高。结论删除CD4+CD25+T细胞能够影响小鼠OVA特异性体液免疫应答。     

系统性红斑狼疮患者自体外周血造血干细胞移植前后外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞的变化

目的观察SLE患者自体外周血造血干细胞移植(APBSCT)前后CD4+CD25+调节性T淋巴细胞及Th1、Th2细胞亚群的变化。方法对4例行APBSCT的重症SLE病人分别采集不同时间段的外周血,分别用流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+细胞、T淋巴细胞亚群(CD4+、CD8+、CD69+、CD95+细胞)及用ELISA方法检测细胞因子IL-2、INF-γ、IL-4、IL-10、TGF-β以判断患者免疫功能的变化。结果病人症状明显改善,自身抗体转阴。IL-4、IL-10在移植后明显低于动员前水平,"Th2优势"得到纠正。移植后CD4+细胞回升缓慢,CD4+/CD8+持续降低;CD4+CD25+/CD4+在移植后降低。结论初步观察APBSCT后重症SLE病人"Th2优势"得到纠正,CD4+CD25+/CD4+降低。     

化疗对乳腺癌患者外周血CD4~+CD25~+CD127~-调节性T细胞的影响

目的观察化疗对乳腺癌患者外周血免疫指标的变化并探讨其影响。方法采用流式细胞术分析129例乳腺癌患者化疗前后CD4+CD25+CD127-调节性T细胞占CD4+T细胞的比率及T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8;B淋巴细胞CD19;NK细胞(CD16+CD56)和CD4/CD8比值的动态变化。结果化疗后的乳腺癌患者CD4+CD25+CD127-调节性T细胞占CD4+细胞比率较化疗前降低,T淋巴细胞亚群中CD3、CD4、CD4/CD8增高,CD8、NK和CD19降低;乳腺癌患者外周血调节性T细胞的数量与临床分期和组织分化程度相关。结论乳腺癌患者化疗后调节性T细胞的数量降低,免疫调节抑制功能下降,免疫功能得到提高,但体液免疫及NK功能未见提高。     

自身免疫性糖尿病患者CD_4~+CD_(25)~+T细胞的变化

目的通过观察自身免疫性糖尿病患者外周血CD4+CD25+T细胞的变化,探讨其在发病中的可能作用。方法流式细胞仪检测20例LADA、20例T1DM、20例T2DM及21例正常对照外周血CD4+CD25+、CD3+CD8+T细胞。结果①LADA、T1DM组外周血CD4+CD25+T细胞低于T2DM、正常对照组(p均<0.05)。②LADA、T1DM患者外周血CD3+CD8+T细胞较T2DM、正常对照组增高(LADAvs正常对照p<0.01,其余p<0.05)。结论自身免疫性糖尿病患者免疫调节性CD4+CD25+T细胞减少,不能有效维持对胰岛自身抗原的耐受;外周细胞毒性CD3+CD8+T细胞增多进而破坏胰岛β细胞,导致自身免疫性糖尿病的发生和发展。     

CD8~+T淋巴细胞非溶细胞功能抑制HepG2.2.15细胞表达HBV的实验研究

目的 观察慢性乙肝患者病毒特异性CD8+T细胞体外非溶细胞功能抑制HepG2.2.15细胞表达乙型肝炎病毒的作用.方法 选择低溶细胞活性的HBcAg肽特异性CD8+T细胞克隆(效应细胞)与HepG2.2.15细胞(靶细胞)以1:10共同培养,于24 h、48 h和72 h收集培养上清,通过检测其中细胞因子及HBV产物的变化,观察CD8+T克隆对HBV的抑制作用.用抗体中和法观察CD8+T细胞分泌的细胞因子被封闭后HBV抑制的变化.结果 HBV特异性CD8+T克隆与靶细胞共育后,培养上清可检出高水平IFN-γ和少量TNF-α.共育后对HBsAg、HBeAg和HBV-DNA的最高抑制率分别为71.2%、68.5%和78.3%,均在72 h.IFN-γ和TNF-α单独和同时被抗体封闭后,对HBV-DNA的抑制率显著下降.对靶细胞的最大细胞毒活性是7.2%(24 h).结论 IFN-γ和TNF-α是CD8+T细胞非溶细胞机制清除病毒的主要效应分子.     

妊娠期高血压疾病子痫前期患者外周血中调节性T细胞及其细胞因子的变化

目的:探讨CD4+CD25+调节性T细胞在妊娠期高血压疾病可能发挥的作用。方法:采用流式细胞术检测妊娠期高血压疾病患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞数量变化,应用ELISA方法测定上皮性卵巢癌患者外周血清TGF-β1及IL-10浓度。结果:妊娠期高血压疾病患者外周血中CD4+CD25+T细胞比例明显低于正常妊娠妇女,外周血中IL-10的浓度明显降低,TGF-β1的浓度明显增高。结论:CD4+CD25+调节性T细胞可能在妊娠期高血压疾病的发病机制中发挥重要作用。     

手术前后卵巢癌患者外周血T细胞亚群及CD4~+CD25~+调节性T细胞表达及临床意义

目的:探讨手术前后卵巢癌患者外周血T细胞亚群及CD4+CD25+调节性T细胞的变化及其临床意义。方法:采用流式细胞术检测80例卵巢癌患者外周血T淋巴细胞亚群、NK细胞及CD4+CD25+调节性T细胞水平。结果:与对照组相比,卵巢癌患者外周血中CD3+,CD4+,CD4+/CD8+比值及NK细胞含量均降低(P0.05),CD8+升高(P0.05);随着疾病进展Ⅲ期+Ⅳ期与Ⅰ期+Ⅱ期比较CD3+,CD4+,CD4+/CD8+比值及NK细胞含量均降低(P0.05),CD8+升高(P0.05)。卵巢癌患者外周血CD4+CD25+细胞比例高于正常对照组(P0.05);手术后卵巢癌患者T细胞亚群比例与术前比较并未明显恢复(P0.05),但CD4+CD25+调节性T细胞水平有所恢复(P0.05)。结论:卵巢癌患者免疫功能低下,术后短期并不能恢复,CD4+CD25+调节性T细胞水平升高,术后明显恢复,提示其在免疫耐受中起重要作用。     

CD4~+ CD25~+调节性T细胞与卵巢癌的相关性研究

目的:探讨卵巢癌患者病灶间质中及上皮内CD3+TILs、CD4+TILs、CD8+TILs、Treg的分布特点。方法:采用免疫组织化学方法检测40例卵巢癌患者病灶间质中及上皮内CD3+TILs、CD4+TILs、CD8+TILs、Treg的表达情况及10例正常卵巢组织中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、Treg的表达情况。结果:卵巢癌组织中CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞数量与正常卵巢组织中相比显著增加,且卵巢癌组织上皮内Treg数量增加。结论:卵巢癌局部微环境中机体对肿瘤抗原可以产生免疫反应,但Treg的存在而抑制了肿瘤的特异性免疫。     

免疫性血小板减少症患者T细胞亚群及相关细胞因子的临床意义

目的 探讨T细胞亚群及相关细胞因子水平在免疫性血小板减少症(Immunethrombocytopenia ITP)患者中的临床意义.方法 分别采用流式细胞术与双抗体夹心酶联免疫吸附法检测HP患者和健康体检者的外周血T细胞亚群及相关细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17)水平.结果 入院时,观察组CD8 +/CD3+细胞水平高于对照组,CD4+/CD3+、CD4+ CD25、CD4 +/CD8+细胞水平低于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05);观察组治疗后,CD8/CD3+、CD4 +/CD3、CD4+ CD25+、CD4 +/CD8水平均无明显变化(P＞0.05).入院时,观察组IFN-γ、IL-17水平高于对照组,IL-4水平低于对照组,差异均具有统计学意义(P＜0.05);观察组治疗后,IFN-γ、IL-17水平明显降低,IL-4水平明显升高(P＜0.05).结论 免疫性血小板减少症患者T细胞亚群发生失衡,同时出现细胞因子紊乱,ITP患者血液中T细胞亚群及相关因子水平变化可作为评估预后的参考指标.     

煤工尘肺壹期患者周围血CD4+ CD25+调节性T细胞与CD4+ 、CD8+T细胞表达及意义

目的 探讨周围血CD4+ CD25+调节性T细胞(CD4+ CD25+ Treg)与CD4+、CD8+T细胞在煤工尘肺(CWP)壹期中的水平变化及临床意义.方法 采用流式细胞术检测103例CWP壹期患者(CWP组)、45例具有与CWP组相同接尘条件的健康井下接尘矿工(接尘对照组)及48例井上健康检查人员(正常对照组)周围血CD4+ CD25+ Treg及其CD4+、CD8+T细胞水平.结果 与接尘对照组和正常对照组比较,CWP组CD4+ CD25+ Treg、CD4+T细胞水平及CD4+CD25 +/CD4+、CD4+ CD25 +/CD8+比值明显升高,差异具有统计学意义(均P＜0.01),CD8+T细胞则无明显改变(P＞0.05),但接尘对照组CD8+T细胞水平明显低于正常对照组(P＜0.05).CWP组吸烟患者CD4+ CD25+ Treg水平和CD4+ CD25 +/CD4+比值均明显高于非吸烟患者,差异有统计学意义(均P＜0.01).CWP组CD4+ CD25+ Treg与CD4+T细胞呈正相关[相关系数(r) =0.627,P＜0.01],与CD8+T细胞呈负相关(r=-0.362,P＜0.01),CD4+T细胞与CD8+T细胞呈负相关(r=-0.436,P＜0.01).结论 CWP壹期患者周围血CD4+ CD25+ Treg表达增加,可能影响CD4+T细胞和CD8+T细胞的分布平衡,导致细胞免疫功能紊乱;吸烟可加重T细胞亚群分布失衡.     

CD4~+ CD25~+调节性T细胞在上皮性卵巢癌患者外周血中的表达及临床意义

目的:研究上皮性卵巢癌患者外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞数量及其相关基因Foxp3 mRNA的表达特点,探讨CD4+CD25+调节性T细胞在诱导肿瘤免疫耐受中的作用。方法:采用流式细胞术检测卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌患者外周血中CD4+ CD25+调节性T细胞数量变化;采用半定量RT-PCR方法检测卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌患者外周血PBMC中Foxp3 mRNA表达水平。结果:卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞数量均明显升高(P<0.05);Foxp3 mRNA在卵巢浆液性囊腺癌和粘液性囊腺癌患者外周血PBMC中表达明显增高(P<0.05)。结论:CD4+ CD25+调节性T细胞可能在卵巢癌免疫耐受中发挥重要作用。     

慢性乙型肝炎患者Foxo3a表达水平对外周血CD8+T细胞凋亡的影响

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者体内转录因子Foxo3a表达水平与外周血CD8+T细胞亚群凋亡的关系.方法 选取就诊同济大学附属第十人民医院的42例CHB患者及24例正常对照,分离外周血PBMC细胞,流式细胞仪检测CD8+T细胞内的细胞因子,采用Annexin V-FITC,PI及抗CD8抗体三标法检测CD8+T细胞的凋亡比率,采用流式APC,FITC抗CD8及二抗检测CD8+T细胞Foxo3a表达水平,定量PCR检测PBMC细胞Foxo3a表达水平,Western印迹法检测Foxo3a蛋白水平.对CD8+T细胞凋亡率、细胞内Foxo3a表达水平以及Foxo3a水平与CD8+T细胞凋亡的关系等进行分析.结果 CHB患者CD8+T细胞亚群凋亡比例[(21.18±2.48)％]高于正常对照组[(7.52±0.42)％](t=18.34,P＜0.05),CD8+T细胞Foxo3a水平为(0.55±0.09),高于正常对照组的(0.14±0.03)(t=4.54,P＜0.05).多元回归分析显示:CD8+T细胞凋亡率与Foxo3a表达水平有线性回归关系(F=141.451,P＜0.01).结论 CHB患者外周血CD8+T细胞凋亡增强及功能缺陷使细胞免疫功能减弱可能与患者体内Foxo3a表达水平相关.     

Graves病中调节性T细胞功能的改变

目的探讨Graves病发生的免疫机制，了解调节性T细胞在其发病中的作用。方法流式细胞术检测32例Graves病（GD组）和20例正常人（正常对照组）中CD4^＋CD25^＋T细胞的比例。免疫磁珠法（MACS）分离CD4^＋CD25^＋T细胞，酶联免疫吸附（ELISA）法检测IL-10的水平，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测FOXP3的表达。结果与正常对照组相比，GD组CD4^＋CD25^＋T细胞数量无明显改变（P=0．804），而FOXP3表达减少（24h和48hP均〈0．01），IL-10分泌减少（24h和48hP均〈0．01）。结论GD患者调节性T细胞在外周血淋巴细胞中的比例虽无明显改变，但其功能明显减弱，可能是导致其发病的原因之一。     

抑制性寡脱氧核苷酸对小鼠CD4+T细胞T bet、STAT4及STAT6表达的影响

目的探讨体外实验中,抑制性寡脱氧核苷酸(Sup ODN)对小鼠脾脏CD4+T细胞转录因子T细胞表达的T盒(T bet)、信号转导子和转录激动子(STAT) 4及STAT6表达的影响。方法分离小鼠脾脏淋巴细胞,免疫磁珠阳选法纯化CD4+T细胞,流式细胞仪分析分选纯度,在抗 CD3ε抗体、抗 CD28抗体、白细胞介素（IL） 12作用下,加入Sup ODN或对照寡脱氧核苷酸(Con ODN)培养72 h后,常规提取核蛋白。Western blot测定核蛋白中磷酸化的STAT (pSTAT) 4、pSTAT6 和T bet蛋白表达。结果与Con ODN 组和PBS组比较,Sup ODN组中T bet 和pSTAT4的表达水平明显降低（P＜0.05）,而pSTAT6表达水平明显升高（P＜0.05）。结论Sup ODN可能通过下调pSTAT4和T bet的表达,体外抑制小鼠CD4+T细胞向Th1细胞的功能性分化,上调pSTAT6的表达,促进Th2细胞的分化。     

肺癌患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞检测及其临床意义

目的了解肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的比例和其临床意义,探讨CD4+CD25+调节性T细胞与临床分期的相关性。方法流式细胞分析仪检测外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的比例。结果肺癌患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T淋巴细胞的百分比为(15.7±1.6)%,明显高于健康对照者(7.1±1.5)(p<0.05),且外周血中CD4+CD25+调节性T细胞水平与患者病情分期呈显著正相关。结论肺癌患者外周血中具有免疫抑制活性的CD4+CD25+调节性T细胞比例较高,对肺癌患者具有免疫抑制功能。     

胃癌围手术期血清IL-10、IL-12浓度的变化及其对CIK细胞的影响

目的检测胃癌患者围手术期血清白细胞介素(IL)-10、IL-12的浓度变化及其对细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)表型和活性的影响,并探讨其意义。方法用ELISA法检测22例胃癌患者(胃癌组)围手术期血清IL-10、IL-12的浓度;用MTT法测定其围手术期血清对CIK细胞活性的影响;用流式细胞术对其围手术期血清培养的CIK细胞表型(CD3、CD56分子)进行分析,以16例健康人作为对照组。结果胃癌组患者血清IL-10浓度升高,术后血清IL-10浓度逐渐下降,但仍高于对照组;血清IL-12浓度降低,术后血清IL-12浓度逐渐升高,但仍低于对照组;其血清培养的CIK细胞活性及CD3+CD5+6CIK细胞表型平均百分率术后高于术前,均低于对照组。结论胃癌细胞可分泌IL-10,抑制IL-12,进而对CIK细胞表型的表达产生影响,活性产生抑制。术后血清IL-10浓度逐渐下降,IL-12浓度逐渐上升,CIK细胞活性逐渐增高。