促红细胞生成素对MPP+诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的帕金森病细胞模型的保护作用。方法:使用MPP+处理PC12细胞,建立多巴胺能细胞损伤模型,使用不同浓度的EPO预处理细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,荧光酶标仪检测细胞内活性氧物质水平,比较各组间的差异。结果:MPP+处理后PC12细胞活力下降,250μmol/LMPP+处理24h后,细胞活性下降为对照组的39.64%,而EPO预处理组随着EPO浓度的增加,细胞活力逐渐上升,40U/mlEPO为促进细胞活力的最佳浓度。EPO预处理组细胞凋亡率明显低于单独MPP+组(P<0.01),且EPO预处理组的细胞内活性氧物质水平明显低于单独MPP+组(P<0.01)。结论:EPO对MPP+诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,这种保护作用可能与其抗氧化应激作用有关。     

促红细胞生成素对MPP+致PC12细胞损伤的影响

目的:探讨促红细胞生成素(EPO)对1-甲基-4苯基吡啶离子(MPP~+)诱导的PC12损伤的保护作用及其机制。方法:将PC12细胞分为5组,即对照组(给予PBS)、MPP~-组(给予PBS、MPP~+)、EPO低浓度组(给予10 kIU/L EPO、MPP+)、EPO中浓度组(给予20 kIU/L EPO、MPP~+)和EPO高浓度组(给予40 kIU/L EPO、MPP~+)。用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞代谢活性,测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:MPP~+组细胞活性和SOD活性降低,而在不同浓度EPO组明显升高并随EPO浓度升高而升高;MPP~+组MDA含量和细胞凋亡率增高,而在不同浓度EPO组明显降低,并随EPO浓度升高而降低。结论:EPO对MPP~+诱导的细胞损伤有保护作用,其机制可能与抑制氧化反应、提高抗氧化酶活性、减少细胞凋亡有关。     

骨髓间质干细胞分泌胶质源性神经生长因子及对1-甲基4-苯基吡啶离子诱导PC12细胞凋亡的干预

目的:收集体外培养、纯化的骨髓间质干细胞条件培养液,检测其对多巴胺能神经元有保护作用的胶质源性神经生长因子分泌情况,并观察对1-甲基4-苯基吡啶离子诱导的PC12细胞凋亡的保护作用。方法:实验于2005-05/2006-10在中国医科大学附属一院神经内科实验室完成。①PC12细胞由协和医科大学细胞培养中心提供。1-甲基4-苯基吡啶离子(Sigma,USA,批号3707312)。②选取清洁级SD大鼠20只,麻醉后取股骨和胫骨,去净肌肉取骨髓,按1010L-1接种于含体积分数为0.2胎牛血清的低糖型DMEM培养基中,通过弃悬浮细胞及换液后可得到较纯的骨髓间质干细胞。培养第10天胰蛋白酶消化传代,当第2代细胞扩增至铺满瓶底80%时,改用含体积分数为0.05胎牛血清的低糖型DMEM条件培养液,48h后收集培养液,经超滤浓缩系统(截留分子量为10000)浓缩10倍后过滤除菌。③骨髓间充质干细胞接种于24孔板内,贴壁后多聚甲醛固定,磷酸盐缓冲液漂洗,免疫荧光法鉴定骨髓间充质干细胞表面抗原的表达。骨髓间充质干细胞消化后进行细胞计数,按1×108L-1接种于75cm培养瓶,加入含体积分数为0.2胎牛血清的DMEM培养液20mL,于培养第5,10天采用ELISA法测定细胞培养上清液中的胶质源性神经生长因子含量。④PC12细胞置于RPMI1640培养液中,内含体积分数为0.1的马血清和0.05的胎牛血清,汇集至80%时进行传代接种,液氮罐中贮存备用。实验前首先置换培养液,使血清浓度降至为仅含0.01马血清和0.01胎牛血清,24h后将培养的细胞分为4组:空白对照组,在细胞培养体系中不加入任何药物;骨髓间充质干细胞上清液组,接种后24h在细胞培养体系中分别加入骨髓间充质干细胞上清液30,60,120μL;1-甲基4-苯基吡啶离子组,接种后24h分别加入1-甲基4-苯基吡啶离子,使终浓度分别为100,200,400μmol/L;联合组,接种后24h加入200μmol/L1-甲基4-苯基吡啶离子,24h后再分别给予骨髓间充质干细胞上清液30,60,120μL。⑤各组细胞于给药后24,48h,流式细胞术检测PC12细胞的凋亡率;通过免疫细胞化学法和RT-PCR法检测PC12细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白和mRNA的表达。结果:①骨髓间充质干细胞表面抗原鉴定:骨髓间充质干细胞可在体外分离扩增,其表面抗原CD45呈阴性,而CD44表达阳性。②骨髓间充质干细胞培养上清液中胶质源性神经生长因子水平检测:第5,10天培养上清液中的胶质源性神经生长因子浓度为(44.57±5.96)ng/L和(45.41±6.33)ng/L,差异无显著性意义(P>0.05)。③PC12细胞凋亡情况:联合组200μmol/L1-甲基4-苯基吡啶离子作用PC12细胞24h后,细胞凋亡率为(42.34±3.21)%;加入30,60,120μL骨髓间充质干细胞上清液处理24h后,细胞凋亡率分别降为(31.96±2.89)%,(17.89±1.78)%,(10.08±0.91)%,差异有显著性意义(P<0.05)。联合组药物作用48h与24h情况相似。④给药后各组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白及mRNA的表达:联合组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白和mRNA水平均明显低于1-甲基4-苯基吡啶离子组(t=0.05～0.32,P均<0.05)。结论:骨髓间充质干细胞能够分泌胶质源性神经生长因子,对1-甲基4-苯基吡啶离子诱导的PC12细胞凋亡产生保护作用。这种保护作用的强弱与其浓度有关,具体作用机制可能是通过抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白和mRNA水平实现的。     

二苯乙烯苷对过氧化氢诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨二苯乙烯苷(TSG)对过氧化氢(H₂O₂)所致PC12细胞损伤的保护作用。方法培养PC12细胞给予H₂O₂(100 μmol/L)诱导细胞凋亡,实验分为空白对照组、H₂O₂损伤组、高剂量组(TSG 120 μg/L+H₂O₂）、中剂量组(TSG 60 μg/L+H₂O₂)和低剂量组(TSG 30 μg/L+H₂O₂)。TSG处理2 h后,加入H₂O₂损伤细胞,4 h后取细胞测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,采用硫代巴比妥酸比色法测定丙二醛(MDA),黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,噻唑兰(MTT)法检测细胞活力,免疫组织化学方法检测bcl-2的蛋白表达。结果TSG能提高细胞活力,降低LDH漏出和细胞凋亡率(P<0-05)。0-1～1 μmol/L TSG处理后bcl-2的蛋白表达降低(P<0-05)。结论TSG能减少H₂O₂对PC12细胞的损伤。     

低强度脉冲超声保护MPP+诱导的N2a细胞损伤的实验研究

目的 观察低强度脉冲超声（LIPUS）能否减弱1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP⁺）诱导的N2a细胞毒性，对帕金森病（PD）细胞模型发挥保护作用。方法 以MPP⁺作用于N2a细胞24 h，建立PD细胞模型，并对N2a细胞进行超声辐照（1 MHz，50 mW/cm²，脉冲重复频率1 kHz，辐照10 min）。将细胞分为对照组、超声对照（LIPUS）组、MPP⁺组和超声处理（MPP⁺+LIPUS）组，并给予相应处理。采用CCK8法测定细胞活力，DCFH-DA染色法检测细胞内活性氧簇（ROS）水平，JC-1染色法检测线粒体膜电位变化，Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况；以实时荧光定量PCR检测瞬时受体电位M7（TRPM7）的mRNA表达水平。结果 与对照组相比，MPP⁺组细胞存活率及线粒体膜电位显著降低，细胞内ROS水平和细胞凋亡明显增加（P均<0.01）；LIPUS辐照后，经MPP⁺诱导的细胞存活率和线粒体膜电位显著上升，细胞内ROS水平及细胞凋亡明显降低（P均<0.01）。MPP⁺组TRPM7的mRNA表达下降，MPP⁺+LIPUS组TRPM7表达显著升高（P均<0.01）。结论 LIPUS可增加MPP⁺诱导的N2a细胞存活率，减少线粒体膜电位损伤和ROS生成，抑制细胞凋亡，对MPP⁺的神经细胞毒性具有保护作用。     

茶多酚对1-甲基-4-苯基吡啶离子诱导的PC12细胞损伤的保护作用

目的：探讨茶多酚（TP）对1-甲基-4-苯基吡啶离子（MPP^＋）诱导的帕金森病细胞模型的保护作用及机制。方法：将MPP＋或TP加入培养的PCI2细胞,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性及代谢状态,荧光法测定细胞内活性氧（ROS）水平,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测bcl-2基因mRNA表达,比较各组的差异。结果：与MPP＋组相比TP＋MPP＋组细胞存活率明显升高,凋亡率、ROS水平明显降低,bcl．2mRNA表达升高。结论：TP可通过抗氧化及抗凋亡机制保护PCI2细胞免于MPP^＋的损伤     

刺五加皂甙保护PC12细胞活性与缺氧诱导因子1α的表达

目的：观察刺五加皂甙对正常培养和缺氧条件下PC12细胞的活性和缺氧诱导因子1α表达的影响，探讨刺五加皂甙抗神经元缺氧损伤的可能机制。 方法：实验于2004—09／2005—05在南通大学医学院航海医学研究所进行。培养大鼠肾上腺嗜铬瘤PC12细胞株，加入终浓度为0．05mg／L的神经生长因子和终浓度为12.5mmol／L的氯化钻分别建立神经生长因子诱导PC12细胞分化的神经元模型和氯化钴诱导缺氧的模型；四甲基偶氮唑法检测12．5，25，50，100，150mg／L的刺五加皂甙对正常培养的和氯化钴诱导缺氧的PC12细胞活性的影响；蛋白免疫印迹检测刺五加皂甙对正常培养和氯化钴诱导缺氧的PC12细胞中缺氧诱导因子1α表达的影响，以上实验均以神经生长因子作为阳性对照。 结果：①正常培养的PC12细胞为圆形，呈簇状生长。50mg／L神经生长因子诱导3d后，细胞停止增殖，部分PC12细胞开始呈现出神经元样的形态，产生类似于神经元的突起。随着诱导时间延长神经元样的细胞逐渐增多。至第7天，PC12细胞的突起形成网络。②12.5～100mg／L的刺五加皂甙可增加正常培养PC12细胞的活性，其中50mg／L刺五加皂甙作用最强。50mg／L刺五加皂甙的预处理可降低因缺氧引起的细胞活性的下降（P〈0．01），其作用与50mg／L神经生长因子相当（P〉0.05）。③正常培养的PC12细胞不表达缺氧诱导因子1α，氯化钴引起的缺氧可诱导PC12细胞表达缺氧诱导因子1α，刺五加皂甙、神经生长因子也可诱导缺氧诱导因子14表达；刺五加皂甙和神经生长因子的预处理可以进一步增强缺氧PC12细胞中缺氧诱导因子1α的表达（P〈0．01），刺五加皂甙和神经生长因子的作用差异无显著性（P〉0．05）。 结论：50mg／L的刺五加皂甙对PC12具有明显的缺氧保护作用，其抗缺氧损伤的作用与促进缺氧诱导因子1α的表达有关。     

辅酶Q10对多巴胺损伤的PC12细胞凋亡的影响

目的：观察辅酶Q10在以PC12细胞建立的多巴胺神经元凋亡细胞模型中的作用。 方法：实验于2003-04／2004-04在锦州医学院科技试验中心进行。取体外培养的Pcl2细胞分为3组：①辅酶Q10组：加450μmol／L辅酶Q10和0．3mmol／L多巴胺。②多巴胺组：加0．3mmol／L多巴胺。③空白对照组：只加等量RPM11640。24h后进行流式细胞仪测试DNA含量，检测细胞凋亡率。 结果：多巴胺组细胞凋亡率明显高于空白对照组[（30．66&;#177;1．90）％，（0．82&;#177;0．07）％，P〈0．011，辅酶Q10组细胞凋亡率[（16．05&;#177;2．16）％1明显低于多巴胺组（P〈0．01）。 结论：辅酶Q10能显著降低多巴胺引起的PC12细胞凋亡，提示辅酶Q10作为神经保护性药物对保护多巴胺能神经元，防治帕金森病可能有实际应用价值。     

刺五加皂甙保护PC12细胞活性与缺氧诱导因子1α的表达

目的:观察刺五加皂甙对正常培养和缺氧条件下PC12细胞的活性和缺氧诱导因子1α表达的影响,探讨刺五加皂甙抗神经元缺氧损伤的可能机制。方法:实验于2004-09/2005-05在南通大学医学院航海医学研究所进行。培养大鼠肾上腺嗜铬瘤PC12细胞株,加入终浓度为0.05mg/L的神经生长因子和终浓度为125mmol/L的氯化钴分别建立神经生长因子诱导PC12细胞分化的神经元模型和氯化钴诱导缺氧的模型;四甲基偶氮唑法检测12.5,25,50,100,150mg/L的刺五加皂甙对正常培养的和氯化钴诱导缺氧的PC12细胞活性的影响;蛋白免疫印迹检测刺五加皂甙对正常培养和氯化钴诱导缺氧的PC12细胞中缺氧诱导因子1α表达的影响,以上实验均以神经生长因子作为阳性对照。结果:①正常培养的PC12细胞为圆形,呈簇状生长。50mg/L神经生长因子诱导3d后,细胞停止增殖,部分PC12细胞开始呈现出神经元样的形态,产生类似于神经元的突起。随着诱导时间延长神经元样的细胞逐渐增多,至第7天,PC12细胞的突起形成网络。②12.5～100mg/L的刺五加皂甙可增加正常培养PC12细胞的活性,其中50mg/L刺五加皂甙作用最强。50mg/L刺五加皂甙的预处理可降低因缺氧引起的细胞活性的下降(P<0.01),其作用与50mg/L神经生长因子相当(P>0.05)。③正常培养的PC12细胞不表达缺氧诱导因子1α,氯化钴引起的缺氧可诱导PC12细胞表达缺氧诱导因子1α,刺五加皂甙、神经生长因子也可诱导缺氧诱导因子1α表达;刺五加皂甙和神经生长因子的预处理可以进一步增强缺氧PC12细胞中缺氧诱导因子1α的表达(P<0.01),刺五加皂甙和神经生长因子的作用差异无显著性(P>0.05)。结论:50mg/L的刺五加皂甙对PC12具有明显的缺氧保护作用,其抗缺氧损伤的作用与促进缺氧诱导因子1α的表达有关。     

尿酸减轻6-OHDA介导PC12细胞SOD活性下降和损伤的实验研究

目的 探讨尿酸对6-羟基多巴(6-OHDA)介导的PC12细胞氧化损伤的作用.方法 采用高分化PC12细胞制作帕金森病细胞模型,实验分为对照组、6-OHDA组、尿酸(Uric acid,UA)组和6-OHDA+UA组.药物作用6 h、12 h和24 h,采用比色法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)的活性和乳酸脱氢酶(LD...     

Cordycepin protects PC12 cells against 6-hydroxydopamine induced neurotoxicity via its antioxidant properties

Parkinson’s disease (PD) is a progressive neurodegenerative disorder that is characterized by degeneration and loss of dopaminergic neurons of the substantia nigra. Increasing evidence has indicated that oxidative stress plays a pivotal role in the pathogenesis of Parkinson’s disease (PD). Therapeutic options that target the antioxidant machinery may have potential in the treatment of PD. Cordycepin, a nucleoside isolated from Cordyceps species displayed potent antioxidant, anti-inflammatory and anticancer properties. However, its neuroprotective effect against 6-OHDA neurotoxicity as well as underlying mechanisms is still unclear. In this present study, we investigated the protective effect of cordycepin against 6-hydroxydopamine (6-OHDA)-induced neurotoxicity and its underlying mechanism. We observed that cordycepin effectively inhibited 6-OHDA-induced cell death, apoptosis and mitochondrial dysfunction. Cordycepin also inhibited cell apoptosis induced by 6-OHDA as observed in the reduction of cytochrome c release from the mitochondrial as well as the inhibition of caspase-3. In addition cordycepin markedly reduced cellular malondialdehyde (MDA) content and intracellular reactive oxygen species (ROS) level. Cordycepin also significantly increased the antioxidant enzymes; superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-Px) activities in 6-OHDA-treated cells. The results obtained unambiguously demonstrated that cordycepin protects PC12 cells against 6-OHDA-induced neurotoxicity through its potent antioxidant activity.     

Neuroprotective Effect of Low-Intensity Pulsed Ultrasound Against MPP+-Induced Neurotoxicity in PC12 Cells: Involvement of K2P Channels and Stretch-Activated Ion Channels

Parkinson's disease is the second most common neurodegenerative disease. It is characterized by the loss of dopaminergic neurons in the substantia nigra pars compacta. 1-Methyl-4-phenylpyridinium (MPP⁺) is a dopaminergic neuronal toxin that is widely used in constructing Parkinson's disease models in vitro. Low-intensity pulsed ultrasound (LIPUS) is a non-invasive therapeutic approach that has neuromodulation and neuroprotective effects in the central neural system; however, whether LIPUS can provide protection for dopaminergic neurons against MPP⁺-induced neurocytotoxicity remains unknown. In this study, we found that pre-treatment with LIPUS (1 MHz, 50 mW/cm², 20% duty cycle and 100-Hz pulse repetition frequency, 10 min) inhibited MPP⁺-induced neurotoxicity and mitochondrial dysfunction in PC12 cells. LIPUS decreased MPP⁺-induced oxidative stress by modulating antioxidant proteins, including thioredoxin-1 and heme oxygenase-1, and prevented neurocytotoxicity via the phosphoinositide 3-kinase (PI3K)-Akt and ERK1/2 pathways. Furthermore, these beneficial effects were attributed to the activation of K2P channels and stretch-activated ion channels by LIPUS. These data indicate that LIPUS protects neuronal cells from MPP⁺-induced cell death through the K2P channel- and stretch-activated ion channel-mediated downstream pathways. The data also suggest that LIPUS could be a promising therapeutic method in halting or retarding the degeneration of dopaminergic neurons in Parkinson's disease in a non-invasive manner.     

低频磁刺激对PC12细胞分化的影响

目的探讨磁刺激对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞株（PC12）分化及功能的影响。方法应用Magstim220型磁刺激仪分别刺激单纯PC12细胞组（M组）和PC12＋神经生长因子（NGF）组（MN组），刺激强度为0．38T、1．14T、1．9T（总强度1．9T），频率为1Hz，每天于10s内连续刺激10次，连续刺激9d。每隔1d观察细胞增殖和突起生长的情况，于倒置显微镜下随机取20个视野拍照并计数，于第3天、第6天、第9天留取细胞培养液检测多巴胺水平。结果在1．14T刺激强度下细胞突起显著增加；多巴胺水平在刺激强度为0．38T时达高峰。结论低频磁刺激可促进PC12细胞的分化及多巴胺分泌；1．14T、1．9T刺激强度时联合应用NGF可提高PCI2细胞的分化。     

Polydatin induces bone marrow stromal cells migration by activation of ERK1/2

Bone marrow stromal cells (BMSCs) have proven to be useful for the treatment of numerous human diseases. However, the reparative ability of BMSCs is limited by their poor migration. Polydatin, widely used in traditional Chinese remedies, has proven to exert protective effects to BMSCs. However, little is known about its role in BMSCs migration. In this study, we studied the effects of polydatin on rat BMSCs migration using the scratch wound healing and transwell migration assays. Our results showed polydatin could promote BMSCs migration. Further experiments showed activation of ERK 1/2, but not JNK, was required for polydatin-induced BMSCs migration, suggesting that polydatin may promote BMSCs migration via the ERK 1/2 signaling pathways. Taken together, our results indicate that polydatin might be beneficial for stem cell replacement therapy by improving BMSCs migration.     

异丙酚预处理诱导PC12细胞缺氧耐受作用研究

目的 观察异丙酚预处理对PC12细胞缺氧损伤的影响.方法 对数生长期的PC12细胞分为四组:对照组(C组),普通培养箱内常规培养;脂肪乳剂组(F组),在细胞培养基中加入10%脂肪乳剂,置普通培养箱内常规培养;缺氧组(H组),细胞置三气培养箱内培养,设置培养条件为2% O2、5% CO2;异丙酚+缺氧组(PH组),在细胞培养基中加入终浓度为2 mmol/L的异丙酚,再置入三气培养箱培养,条件设置同H组.四组细胞均在培养4 h后行细胞活力和细胞凋亡检测.结果 C组与H组之间细胞活力和细胞凋亡率的差异有统计学意义(P<0.05);与H组相比,PH组细胞活力明显增高(P<0.05),细胞凋亡率明显降低(P<0.05).结论 异丙酚预处理改善PC12细胞活力,通过抑制细胞凋亡诱导PC12细胞缺氧耐受.