嗅鞘细胞条件培养液中神经生长因子的保护作用

背景:近年研究证实嗅鞘细胞具有支持和促进多种神经元存活和轴突再生的作用,与其分泌的神经营养活性物质相关,如神经生长因子、脑源性神经营养因子等.神经营养活性物质在维持神经元存活、生长以及损伤后修复与再生方面的作用值得关注.目的:探讨神经生长因子是否在嗅鞘细胞条件培养液的神经保护中发挥重要作用.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2006-0112007-03在解放军南京军区南京总医院神经内科实验室完成.材料:成年SD大鼠30只用于嗅鞘细胞培养,出生24 h内的SD乳鼠60只用于脑海马神经元培养.方法:采用差速贴壁法纯化大鼠嗅鞘细胞,添加Forskolin和碱性成纤维细胞生长因子促进细胞增殖,培养至10 d,取生长状态良好的细胞,按1 × 109L-1密度接种,待细胞贴壁后加入含B27的Neurobasal培养基,48 h后收集上清液.待所有嗅鞘细胞条件培养液收集完毕后,将其混合,低温离心后收集浓缩的嗅鞘细胞条件培养液,-80℃保存备用.取体外分离 培养的乳鼠脑海马神经元,设立正常组、谷氨酸损伤模型组、嗅鞘细胞条件培养液组、抗神经生长因子抗体+嗅鞘细胞条件培养液组.主要观察指标:海马神经元活性,上清液中乳酸脱氢酶浓度,神经元凋亡率.结果:与正常组比较,其余3组神经元活性均明显下降(P<0.05或0.01);与谷氨酸损伤模型组比较,嗅鞘细胞条件培养液组、抗神经生长因子抗体+嗅鞘细胞条件培养液组神经元活性均明显增高(P<0.01或0.05),且前者升高幅度大于后者(F=5.85,P<0.05).与正常组比较.其余3组乳酸脱氢酶浓度及神经元凋亡率均明最增高(P<0.05或0.01);与谷氨酸损伤模型组比较,嗅鞘细胞条件培养液组、抗神经生长因子抗体+嗅鞘细胞条件培养液组乳酸脱氢酶浓度及神经元凋亡率均明显下降(P<0.01或0.05),且前者下降幅度大于后者(F=5.04,F=5.16,P<0.05).结论:嗅鞘细胞条件培养液可提高损伤海马神经元活性,抑制上清液中乳酸脱氢酶释放和神经元凋亡;消除神经生长因子后,以上保护作用减弱,提示嗅鞘细胞条件培养液中存在多种营养物质共同发挥神经保护作用,尤以神经生长因子为重.     

微波辐射对大鼠海马神经元的损伤效应及其机制研究

目的 观察微波辐射对海马神经元的损伤效应及其对细胞膜和[Ca^2＋]的影响，以探讨微波致海马损伤的机制。方法 采用10mW／cm^2微波辐射源辐射原代培养的海马神经元，采用MTT法测定细胞活力；流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死率；Fluo232AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度；原子力显微镜观察细胞膜的改变。结果 辐射后6h，海马神经元生长活力下降（P〈0．01）；辐射后1d，细胞凋亡和坏死率增加（P〈0．01）；辐射后即刻，神经元内[Ca^2＋]荧光强度增加（P〈0．01），细胞膜穿孔。结论 微波辐射后海马神经元生长活力下降，凋亡和坏死率增加；神经元膜穿孔及胞内[Ca^2＋]增加是其损伤重要机制。     

缺血预处理星形胶质细胞GDNF抑制p38MAPK信号通路减轻神经元凋亡

目的研究缺血预处理星形胶质细胞分泌GDNF抑制p38MAPK信号通路发挥脑保护作用。方法原代培养神经元及星形胶质细胞,给予缺血预处理,将星形胶质细胞培养基制备成条件培养基,沉默GDNF基因的培养基作为另一种条件培养基,将神经元分为对照组、预处理组、预处理+缺血组、缺血组,应用不同条件培养基孵育神经元,流式细胞术检测神经元凋亡,Western Blot法检测神经元p38MAPK及p-p38MAPK的表达。结果预处理+缺血组和缺血组神经元凋亡率明显增高(P<0.05),加入ACM2后凋亡率较ACM1和ACM3两组均减低(P<0.05)。每组神经元的p38MAPK蛋白表达均无明显变化(P>0.05);预处理+缺血组及缺血组p-p38MAPK的蛋白表达均明显高于对照组和预处理组(P<0.05),预处理+缺血组p-p38MAPK的蛋白表达均较缺血组低(P<0.05),加入ACM2组的p-p38MAPK蛋白表达低于ACM1和ACM3两组(P<0.05)。结论缺血预处理后星形胶质细胞分泌GDNF抑制p38MAPK信号通路的激活从而减少神经元凋亡,起到脑保护作用。     

电磁脉冲对海马神经元的损伤效应及其对［Ca2+］i的影响

目的观察电磁脉冲(EMP)对海马神经元的损伤效应及其对[Ca2+]i的影响,以深入探讨EMP致脑损伤的机制. 方法 EMP辐射条件为6×104V/m,脉冲上升时间为20 ns,脉宽为30 μs,频率为2.5脉冲/min,作用2 min.原代培养的海马神经元经EMP辐射后,采用MTT法对细胞活力进行测定;FACS法检测细胞凋亡和坏死;Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度,即[Ca2+]i. 结果细胞被EMP辐射后0～6 h活力明显下降(P<0.05),12 h开始回升,24 h基本接近正常水平;EMP辐射后0～12 h细胞凋亡率显著升高,坏死也有增加;EMP辐射后即刻引起神经元内的Ca2+荧光强度明显增加. 结论 EMP致海马神经元活力下降、凋亡增加、胞内钙超载.     

电磁脉冲对海马神经元的损伤及其对[Ca2+]i的影响

背景:电磁脉冲照射可影响实验大鼠的学习记忆功能,并造成大鼠海马组织损伤和超微结构改变。目的:观察电磁脉冲对离体培养的海马神经元的损伤效应及其对[Ca2 ]i的影响,以深入分析电磁脉冲致脑损伤的可能机制。设计:随机对照动物实验。单位:承德医学院病理教研室。材料:Wistar乳鼠若干只,雌雄各半。电磁脉冲辐射源:高场强电磁脉冲模拟源。方法:实验于2004-03/12分别在军事医学科学院和承德医学院完成。Wistar乳鼠若干只,麻醉下断头取脑,分离海马组织,调整细胞悬液浓度至5×108L-1接种。分组:①培养细胞分为对照组和照射组,于照射后即刻(0h)收集细胞进行形态学观察和胞内游离钙离子浓度测定;②另培养细胞分为对照组和照射后0h组和12h组,进行细胞凋亡和坏死率的测定。(培养细胞用量:每项检查每组1个培养瓶,重复3次。)电磁脉冲辐射条件为6×104V/m,脉冲上升时间为20ns,脉宽为30μs,频率为2.5脉冲/min,作用2min。原代培养的海马神经元经电磁脉冲辐射后,倒置相差显微镜下观察照射前后神经元形态学变化;FACS法检测细胞凋亡和坏死;Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i。主要观察指标:神经元形态学变化;细胞凋亡率和坏死率;胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i。结果:①电磁脉冲辐射后即刻,神经细胞逐渐发生液化,神经元突起回缩、变性。②电磁脉冲辐射后12h凋亡率较辐射后即刻有所恢复,但与对照组相比均显著增加[(59.27±1.27)%,(72.17±6.21)%,(17.45±5.63)%,P<0.05]。③在辐射后即刻和12h坏死率比对照组升高,但差异无统计学意义[(13.71±2.31)%,(11.96±1.04)%,(8.45±0.67)%,P>0.05]。④电磁脉冲辐射后即刻[Ca2 ]i荧光强度显著高于对照组(107.34±26.14,54.93±16.08,P<0.05)。结论:电磁脉冲致海马神经元形态学损伤、坏死与凋亡率增加,神经元内的Ca2 荧光强度明显增加。     

咪唑安定对谷氨酸诱导大鼠PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨咪唑安定对谷氨酸诱导大鼠神经元样PC12细胞凋亡的影响.方法:诱导分化4 d的神经元样PCI2细胞随机分成空白对照(C组),加入20 mM谷氨酸(G组),加人20 mM谷氨酸和10 uM咪唑安定(M组),各组细胞继续培养24 h后观察细胞的活力(MTY法)及细胞凋亡率(Hoechst33258核染色法联合Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术).结果:与C组比较,G组细胞活力度明显降低,而细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与G组比较,M组细胞活力度明显升高,而细胞凋亡率明显降低(P<0.05).结论:咪唑安定可抑制谷氨酸诱导体外培养的大鼠神经元样PC12细胞凋亡,发挥保护作用.     

海马神经元条件培养液体外诱导大鼠骨髓间质干细胞向神经元样细胞和神经胶质样细胞的分化:与含b-FGF培养基和无血清培养基的比较(英文)

背景:目前关于骨髓间质干细胞能否向神经元方向分化的报道不多,且争论多集中在分化后的神经元是否仅具有神经元形态而不具有神经元功能.目的:探讨海马神经元条件培养液诱导大鼠骨髓间质干细胞向神经元样细胞和神经胶质样细胞分化的可能性.方法:将第5代大鼠骨髓间质干细胞分为4组:条件培养基组加入海马神经元和胶质细胞的培养液;b-FGF组加入含b-FGF的DMEM培养基;无血清培养组加入含Neurobasal和B27的无血清培养基;阴性对照组加入含胎牛血清的DMEM.各组诱导12,24 h后,应用免疫细胞化学染色行神经元特异性烯醇化酶、微管相关蛋白2、胶质纤维酸性蛋白的鉴定,Western-blot法检测细胞神经元特异性烯醇化酶、微管相关蛋白2和胶质纤维酸性蛋白的表达.结果与结论:诱导12,24 h后,条件培养基组、b-FGF组、无血清培养组骨髓间质充干细胞微管相关蛋白2、胶质纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶均呈阳性表达,阴性对照组未见表达.与阴性对照组比较,诱导后24 h,条件培养基组、b-FGF组、无血清培养组微管相关蛋白2表达均明显增强(P < 0.05),且条件培养基组增强幅度显著高于另两组(P < 0.05);条件培养基组、b-FGF组、无血清培养组神经元特异性烯醇化酶及胶质纤维酸性蛋白表达无明显差异.结果证实海马神经元条件培养液可体外诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞和神经胶质样细胞,与含b-FGF的培养基和无血清培养基相比,海马神经元条件培养基诱导的神经元和神经胶质细胞阳性率最高.     

谷氨酸对SW1990胰腺癌细胞系体外增殖的影响

目的:研究谷氨酸对SW1990胰腺癌细胞系的增殖、凋亡及细胞毒性的影响及其可能的作用机制.方法:在体外用不同浓度的谷氨酸与人SW1990胰腺癌细胞作用后,用MTT比色法、BrdUrd渗入法和LDH法检测SW1990胰腺癌细胞的增殖能力、细胞分裂和死亡情况,并用激光共聚焦显微镜测定胞浆内游离钙离子浓度.结果:谷氨酸可以呈剂量依赖性地促进SW1990胰腺癌细胞的增殖(P<0.01),谷氨酸可以促进胰腺癌肿瘤细胞的分裂,减少其死亡(P<0.01),并且可以呈剂量依赖性地增加胞浆内游离钙离子浓度(P<0.01).结论:谷氨酸可以促进肿瘤细胞的增殖,此作用可能是通过促进细胞的分裂、减少其死亡而实现的,且可能是通过增加胞浆内游离钙离子浓度介导的.     

栝楼桂枝颗粒抗缺血性脑卒中大鼠神经元及原代海马神经元凋亡研究

目的:观察栝楼桂枝颗粒(GLGZG)抗缺血性脑卒中大鼠神经元及原代海马神经元凋亡的作用,探讨其作用机制,为其治疗脑卒中提供依据。方法:建立谷氨酸诱导原代海马神经元兴奋性毒性损伤模型、大鼠脑缺血再灌注损伤模型,采用MTT、LDH法测定GLGZG对原代海马神经元细胞活性和LDH活性的影响,采用Western Blot、Real-time PCR检测GLGZG对原代海马神经元及大鼠海马组织中Caspase-3、Bcl-2、Bax m RNA及蛋白表达水平的影响。结果:用不同浓度(100μg/m L、200μg/m L、300μg/m L)的GLGZG分别作用于原代海马神经元24 h,3个剂量组细胞存活率较谷氨酸组细胞存活率升高,其中GLGZG 200μg/m L、300μg/m L 2组细胞活力显著升高(P0.05,P0.01);3个剂量组LDH活力较谷氨酸组显著降低,其中GLGZG 200μg/m L、300μg/m L 2组可显著抑制谷氨酸损伤神经元LDH的释放(P0.05,P0.01)。GLGZG 200μg/m L、300μg/m L 2组干预后,与谷氨酸组比较可显著降低原代海马神经元Caspase-3 m RNA、Bax m RNA的表达(P0.05,P0.01),升高Bcl-2 m RNA的表达(P0.05),蛋白表达的趋势与m RNA相似;GLGZG组与模型组比较,可降低大鼠海马组织Caspase-3、Bax蛋白的表达(P0.05或P0.01),升高Bcl-2蛋白的表达(P0.01)。结论:GLGZG对缺血性脑卒中大鼠及原代海马神经元有一定的保护作用,其保护作用与其抗细胞凋亡作用有关。     

电磁脉冲对海马神经元的损伤及其对[Ca^2＋]i的影响

背景：电磁脉冲照射可影响实验大鼠的学习记忆功能，并造成大鼠海马组织损伤和超微结构改变。 目的：观察电磁脉冲对离体培养的海马神经元的损伤效应及其对[Ca^2＋]i的影响，以深入分析电磁脉冲致脑损伤的可能机制。 设计：随机对照动物实验。 单位：承德医学院病理教研室。 材料：Wistar乳鼠若干只，雌雄各半。电磁脉冲辐射源：高场强电磁脉冲模拟源。 方法：实验于2004—03／12分别在军事医学科学院和承德医学院完成。Wistar乳鼠若干只，麻醉下断头取脑，分离海马组织，调整细胞悬液浓度至5&;#215;10^8L^-1接种。分组：①培养细胞分为对照组和照射组，于照射后即刻（0h）收集细胞进行形态学观察和胞内游离钙离子浓度测定；②另培养细胞分为对照组和照射后0h组和12h组，进行细胞凋亡和坏死率的测定。（培养细胞用量：每项检查每组1个培养瓶，重复3次。）电磁脉冲辐射条件为6&;#215;10^4V／m，脉冲上升时间为20ns，脉宽为30μs，频率为2．5脉冲／min，作用2min。原代培养的海马神经元经电磁脉冲辐射后，倒置相差显微镜下观察照射前后神经元形态学变化；FACS法检测细胞凋亡和坏死；Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca^2＋]i。 主要观察指标：神经元形态学变化；细胞凋亡率和坏死率；胞内游离钙离子浓度[Ca^2＋]。 结果：①电磁脉冲辐射后即刻，神经细胞逐渐发生液化，神经元突起回缩、变性。②电磁脉冲辐射后12h凋亡率较辐射后即刻有所恢复，但与对照组相比均显著增加[（59．27&;#177;1．27）％，（72．17&;#177;6．21）％，（17．45&;#177;5．63）％，P〈0．051。③在辐射后即刻和12h坏死率比对照组升高，但差异无统计学意义[（13．71&;#177;2．31）％，（11．96&;#177;1．04）％，（8．45&;#177;0．67）％，P〉0．05]。④电磁脉冲辐射后即刻[Ca^2＋]i荧光强度显著高于对照组（107．34&;#177;26．14，54．93&;#177;16．08，P〈0．05）。 结论：电磁脉冲致海马神经元形态学损伤、坏死与凋亡率增加，神经元内的Ca^2＋荧光强度明显增加。     

三七总皂甙对大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的:以原代培养的大鼠海马神经细胞缺氧/缺糖再给氧为模型,观察三七总皂甙对神经细胞凋亡的抑制作用。方法:流式细胞术检测凋亡细胞百分率,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内Ca2 浓度,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死细胞百分率,同时,测定细胞LDH的释放。结果:神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧3h时,细胞凋亡百分率明显增高,为19.06%(P<0.01),细胞坏死百分率为6.83%(P<0.01),细胞内Ca2 浓度为169.32nmol/LCa2 浓度(P<0.01),LDH的释放率为27.63%(P<0.01);神经细胞缺氧/缺糖5h后再给氧24h时,细胞凋亡百分率为49.85%(P<0.01),细胞坏死百分率为11.49%(P<0.01),细胞内Ca2 浓度为298.11nmol/L(P<0.01),LDH的释放率为60.35%(P<0.01)。三七总皂甙(25,50mg/L)能降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,降低细胞内Ca2 浓度,减少LDH的释放,三七总皂甙的作用随剂量增加而作用增加。结论:三七总皂甙对缺血再灌注损伤后海马神经元的凋亡过程具有抑制作用,这种作用可能与其能降低细胞内Ca2 浓度有关。     

腰神经根慢性损伤后背根神经节电生理与细胞内钙离子浓度变化的研究

目的　探讨受损背根神经节 (DRG)神经元异位自发放电与细胞内Ca2 浓度改变的关系。方法　纯种成年新西兰大白兔 3 2只 ,随机分为正常组、损伤 10d组、损伤 3 0d组、损伤 90d组 ,建立模拟腰椎间盘突出的兔腰神经根慢性损伤模型 ,于损伤后 10d、3 0d、90d应用在体电生理技术记录损伤DRG异位电活动的改变 ,应用激光共聚焦扫描显微镜技术结合荧光染色法检测受损DRG神经元细胞内Ca2 荧光强度变化。结果　①兔腰神经根慢性损伤后 ,受损DRG神经元异位自发放电频率和幅度随损伤时间延长而逐渐下降 ,损伤各组与正常组相比 ,DRG放电频率、放电幅度均显著增高 (P <0 .0 5 ) ;②兔腰神经根慢性损伤后受损DRG细胞内Ca2 浓度呈现不同程度的增高 ,随着损伤时间的延长 ,Ca2 浓度有下降趋势。结论　Ca2 与受损神经元的异位电活动的发生及变化相关 ,Ca2 浓度升高可导致受损神经元异位电活动的发生及传播。     

药物防护电磁脉冲所致海马神经元损伤的可能性

背景:电磁脉冲照射可引起实验大鼠学习记忆能力下降,并可造成离体海马神经元的胞内钙超载,进而发生坏死和凋亡,物理屏蔽可减轻电磁辐射对实验动物的损伤,但缺乏在细胞模型上进行的药物防护研究。目的:观察药物防护电磁脉冲致离体海马神经元损伤的可能性。设计:随机对照动物实验。单位:承德医学院基础部。材料:实验于2004-01/2005-01分别在军事医学科学院和承德医学院完成。实验动物选用Wistar乳鼠若干只。方法:断头取脑分离海马组织,进行海马神经元原代培养与鉴定,原代培养的海马神经元经MK801(N-甲基-D-天冬氨酸受体拮抗剂)和尼非地平(L型钙离子通道阻断剂)预处理后进行电磁脉冲照射。电磁脉冲照射条件为6×104V/m,脉冲上升时间20ns,脉宽30μs,频率2.5脉冲/min,作用2min。将培养在特殊培养皿的细胞分为正常对照组、电磁脉冲照射组、MK80120μmol/L组和MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组。采用MTT法对细胞活力进行测定;FACS法检测细胞凋亡率;Fluo-3-AM荧光探针负载、激光共聚焦显微镜扫描测定神经元胞内游离钙离子浓度[Ca2 ]i。主要观察指标:各组细胞内钙超载、细胞活力、细胞调亡的情况比较。结果:①电磁脉冲组在照射后即刻的[Ca2 ]i荧光强度显著高于正常对照组,差异有显著性意义([107.34±26.14),(54.93±16.08),P<0.05];MK80120μmol/L组比电磁脉冲照射组的[Ca2 ]i荧光强度有所下降(81.29±19.96,P<0.05),而MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组的[Ca2 ]i荧光强度呈进一步下降趋势(69.82±25.54,P<0.05)。但两个给药组的[Ca2 ]i荧光强度仍高于正常对照(P<0.05)。②MK80120μmol/L组和MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组反映细胞增殖活力的吸光度值分别为0.25±0.06和0.27±0.07,明显高于电磁脉冲照射组(0.17±0.08,P<0.05),但仍低于正常对照组(0.33±0.08,P<0.05)。③电磁脉冲照射组在照后即刻的细胞凋亡率显著高于正常对照组,差异有显著性意义([68.63±9.04)%,(20.14±4.34)%,P<0.01];MK80120μmol/L组比电磁脉冲照射组的细胞凋亡率有所下降(62.12±11.08)%,MK80120μmol/L 尼非地平1μmol/L组的细胞凋亡率呈进一步下降趋势([53.69±13.60)%,P<0.05)],但两个给药组的细胞凋亡率仍高于正常对照组(P<0.01)。结论:MK801和尼非地平预处理可部分阻断电磁脉冲所致的海马神经元损伤;细胞内钙超载在电磁脉冲损伤机制中发挥重要作用。     

Expression of the endoplasmic reticulum molecular chaperone (ORP150) rescues hippocampal neurons from glutamate toxicity

A series of events initiated by glutamate-receptor interaction perturbs cellular homeostasis resulting in elevation of intracellular free calcium and cell death. Cells subject to such environmental change express stress proteins, which contribute importantly to maintenance of metabolic homeostasis and viability. We show that an inducible chaperone present in endoplasmic reticulum (ER), the 150-kDa oxygen-regulated protein (ORP150), is expressed both in the human brain after seizure attack and in mouse hippocampus after kainate administration. Using mice heterozygous for ORP150 deficiency, exposure to excitatory stimuli caused hippocampal neurons to display exaggerated elevation of cytosolic calcium accompanied by activation of mu-calpain and cathepsin B, as well as increased vulnerability to glutamate-induced cell death in vitro and decreased survival to kainate in vivo. In contrast, targeted neuronal overexpression of ORP150 suppressed each of these events and enhanced neuronal and animal survival in parallel with diminished seizure intensity. Studies using cultured hippocampal neurons showed that ORP150 regulates cytosolic free calcium and activation of proteolytic pathways causing cell death in neurons subject to excitatory stress. Our data underscore a possible role for ER stress in glutamate toxicity and pinpoint a key ER chaperone, ORP150, which contributes to the stress response critical for neuronal survival.     

人参皂甙Rgl对脑缺血后神经元型一氧化氮合酶的影响

目的：观察人参皂甙Rgl对大鼠海马神经元缺糖氧／复糖氧后钙内流和神经元型一氧化氮合酶（nNOS）的影响,并探讨其可能的脑保护机制。方法：建立大鼠海马神经元缺糖氧／复糖氧模型,随机分为正常对照组、模型组和人参皂甙Rgl干预组（5、20、60μmol／L）。复糖氧后24h以Fluo-3AM荧光染色法观察各组海马神经元细胞内钙离子浓度变化,以生物化学法观察nNOS活性的变化,并以Hochest染色法检测细胞凋亡。结果：与模型组相比,人参皂甙Rgl中、高剂量组海马神经元细胞内钙离子浓度和nNOS活性均降低,凋亡细胞减少,人参皂甙Rgl低剂量组变化不明显。结论：人参皂甙Rgl可通过减少缺糖氧神经元细胞内钙内流,进而抑制nNOS活性,发挥脑保护作用。     

参麦注射液对大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的以缺氧/缺糖再给氧为模型,观察参麦注射液对神经细胞凋亡的抑制作用。方法流式细胞术检测凋亡细胞百分率,激光共聚焦扫描显微镜检测细胞内Ca2+浓度,荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死百分率。结果缺氧/缺糖5h后再给氧可诱导神经细胞凋亡和细胞坏死,并显著增加细胞内Ca2+浓度和LDH的释放。与对照组相比有显著性差异(P<0.01)参麦注射液能显著降低神经细胞凋亡及坏死的百分率,降低细胞内Ca2+浓度,减少LDH的释放,其作用随剂量增加而增加。结论参麦注射液具有拮抗海马神经细胞凋亡的作用,这种作用可能与其能降低细胞内Ca2+浓度有关。     

骨髓间充质干细胞神经营养因子的表达及对脊髓神经元的保护作用

研究骨髓间充质干细胞（BMSC）表达脑源性神经营养因子（BDNF）和神经生长因子（NGF），以及BMSC条件培养液对脊髓神经元的保护作用，探讨BMSC冶疗脊髓损伤的机制，为BMSC的临床应用提供依据和指导。方法：取大鼠骨髓培养BMSC，用CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色进行鉴定。提取BMSC mRNA，RT-PCR检测BDNF和NGF表达．ELISA检测BMSC培养液中BDNF和NGF的含量。原代取材培养大鼠脊髓神经元，10d后用不同比例的BMSC条件培养液培养24h，热休克诱导神经元凋亡，流式细胞仪检测凋亡细胞比率。结果：BMSC贴壁生长，免疫细胞化学染色CD44（＋）、CD45（-）和CD71（＋）。BMSC表达BDNF和NGF mRNA，BMSC培养液中含有BDNF和NGF，随培养时间的延长培养液中BDNF和NGF的含量增加。BMSC条件培养液可以减少热休克诱导的脊髓神经元凋亡的比率．并且BMSC条件培养液含量高者有更好的保护作用。结论：BMSC表达神经营养因子BDNF和NGF．对损伤脊髓神经元有保护作用。     

吡咯喹啉醌对NMDA诱发大鼠海马神经元损伤的影响

目的探讨吡咯喹啉醌（PQQ）对N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）诱发海马神经元损伤的影响。方法体外原代培养新生大鼠海马神经元，毒性剂量的NMDA诱致海马神经元损伤，预加PQQ，镜下观察神经元的形态变化，琼脂糖凝胶电泳观察细胞的死亡情况，激光共聚焦显微镜观察细胞内Ca^2＋浓度的变化。结果体外培养8d的海马神经用0．1mmol／LNMDA处理后，细胞内Ca^2＋快速增加，细胞以坏死和凋亡两种形式死亡，细胞的存活率降低；预先给予PQQ可明显减少细胞内Ca^2＋的增加，减少细胞死亡。结论PQQ对NMDA诱发的海马神经元损伤具有保护作用。