铅暴露对雄性仔鼠海马锌离子转运体3表达的影响

目的探讨铅暴露对雄性仔鼠海马锌离子转运体3(zinc transporter 3,ZNT3)表达的影响。方法将12只健康SPF级雌性SD大鼠随机分为3组,分别为对照(去离子水)组和低(0.5 g/L乙酸铅)、高(2.0 g/L乙酸铅)剂量铅染毒组,每组4只。采取自由饮水方式进行染毒,自妊娠前10 d至仔鼠断乳(出生后21 d)。采用等离子体发射光谱(ICP-AES)法检测雄性仔鼠全血及海马组织中铅、锌的含量;采用RT-PCR法检测其海马组织中ZNT3 m RNA的表达水平;采用Western blot法检测其海马组织中ZNT3蛋白的表达。结果与对照组比较,各剂量铅染毒组雄性仔鼠全血与海马组织中的铅含量均较高,锌含量均较低,差异有统计学意义(P0.05);且随着铅染毒剂量的升高,雄性仔鼠全血和海马组织中铅的含量呈上升趋势,锌含量呈下降趋势。与对照组比较,各剂量铅染毒组雄性仔鼠海马组织中ZNT3 m RNA及蛋白的表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);但高、低剂量铅染毒组雄性仔鼠海马组织中ZNT3 m RNA及蛋白的表达水平间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论铅暴露上调了大鼠海马组织中ZNT3的表达水平,这可能与铅暴露使海马锌含量的降低有关。     

蛋氨酸胆碱对铅染毒大鼠CaMKⅡ和CREBmRNA及蛋白表达的影响

目的 研究蛋氨酸胆碱对铅暴露大鼠海马CaMKⅡ和CREB mRNA和蛋白表达的影响.方法 将断乳健康SPF级雄性SD大鼠分为空白对照组、染铅组(0.4 g/L乙酸铅饮水染毒)、蛋氨酸胆碱组(1:1,400 mg/kg)、铅+低剂量蛋氨酸胆碱组和铅+高剂量蛋氨酸胆碱组.铅+低、高剂量蛋氨酸胆碱组在染铅的同时,经灌胃分别给予低、高剂量(100、400 mg/kg)蛋氨酸胆碱混合溶液(1:1),8周后取大鼠海马组织,用实时聚合酶链反应(PCR)法测定CaMKⅡ和CREB mRNA的表达水平,免疫印迹(Western blot)法测定CaMKⅡ、CREB和pCREB蛋白含量.结果 染铅组大鼠海马CaMKⅡI和CREB mRNA的表达水平(0.743±0.185,0.729±0.199)均明显低于空白对照组(0.950±0.238,0.901±0.232),CREB和pCREB蛋白表达量( 0.271±0.045,0.212±0.058)低于空白对照组(0.319±0.058,0.506±0.125),差异均有统计学意义(P＜0.05);给予低、高剂量蛋氨酸胆碱后染铅大鼠海马CaMKⅡ mRNA表达水平(1.014±0.210,1.126±0.379)和CREB mRNA表达水平(1.029±0.335,0.932±0.251)均明显高于染铅组,差异有统计学意义(P＜0.05),铅+高剂量蛋氨酸胆碱组CREB和pCREB蛋白表达量(0.407±0.951,0.563±0.178)明显高于染铅组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 蛋氨酸胆碱可以拮抗铅对海马CaMKⅡ和CREB mRNA和蛋白表达的抑制作用.     

高碘致发育期大鼠学习记忆能力及海马神经组织凋亡的影响

目的探讨饮用水高碘对大鼠学习能力及海马神经组织凋亡功能的影响。方法将24只SPF级成年SD孕鼠随机分为4组,分别为对照组(饮用自来水)及500、2 500、5 000μg/L碘酸钾暴露组,采用自由饮水方式进行高碘暴露,连续暴露21 d。随机从各剂量组选择断乳雌、雄仔鼠各10只,延用相同剂量进行暴露直至第4个月末。应用Morris水迷宫实验评价大鼠学习记忆能力,采用RT-PCR法检测大鼠海马组织Bcl-2、Caspase-3和Cyt C mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测大鼠海马神经组织Bcl-2、Caspase-3和Cyt C蛋白的表达水平。结果与对照组相比,5 000μg/L碘酸钾暴露组雄性大鼠训练不同时间内的平台潜伏期均延长,而2 500μg/L碘酸钾暴露组雌性大鼠仅训练第2天时的平台潜伏期延长,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,各浓度碘酸钾暴露组大鼠穿越平台的次数均下降,差异有统计学意义(P0.05);而空间探索时间、路径比例均无明显变化。随着碘酸钾暴露浓度的升高,雄性大鼠穿越平台次数呈下降趋势。与对照组相比,2 500μg/L碘酸钾暴露组大鼠海马神经细胞Caspase-3基因表达水平升高,差异有统计学意义(P0.05);而各浓度碘酸钾暴露组大鼠海马神经细胞Bcl-2、Cyt C基因的表达水平均无明显改变。与对照组相比,2 500、5 000μg/L碘酸钾暴露组大鼠海马神经细胞Cyt C和Caspase-3蛋白的表达水平均升高,Bcl-2蛋白的表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05);与500μg/L碘酸钾暴露组相比,5 000μg/L碘酸钾暴露组雄性大鼠海马神经细胞Cyt C和Caspase-3蛋白的表达水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论高碘暴露可造成4月龄大鼠空间学习和记忆能力的下降,可能与海马神经细胞发生凋亡有关。     

铅对小鼠学习记忆能力及β-淀粉样前体蛋白表达的影响

目的探讨铅暴露对小鼠学习记忆能力及海马组织中β-淀粉样前体蛋白(β-Amyloid Precursor Protein,β-APP)表达的影响。方法采用自由饮水模式建立铅暴露动物模型,将40只21日龄小鼠随机分为低、中、高剂量染毒组和对照组,分别饲以2 g/L,4 g/L,6 g/L的乙酸铅水溶液和去离子水。3个月后,Morris水迷宫试验测定小鼠学习记忆能力,石墨炉原子吸收光谱仪测定血液和海马中铅含量,wstern blot技术检测各组小鼠海马组织中APP蛋白的表达情况。结果与对照组相比,各剂量铅暴露组小鼠逃避潜伏期差异有统计学意义(P0.05),随暴露剂量的增大而延长。与对照组相比,中、高剂量组穿越平台的次数明显减少(P0.05),差异有统计学意义;各剂量铅暴露组血铅及海马铅含量与对照组相比,差异均有统计学意义(P0.05),其中高剂量暴露组血铅和海马铅含量均高于其他各剂量暴露组,差异具有统计学意义(P0.05);各剂量铅暴露组APP蛋白的表达量明显高于对照组,差异具有统计学意义(P0.05),并随染毒剂量增加,表达量增高。结论铅可能诱导APP蛋白的过度表达造成神经系统损伤,从而影响小鼠学习记忆能力,这可能是铅致小鼠认知功能障碍的机制之一。     

亚慢性砷暴露对大鼠学习记忆能力及对海马C-Jun表达的影响

目的观察砷暴露对大鼠学习记忆能力和海马C-Jun表达影响,探讨砷致学习记忆损害机制。方法采用40只清洁级SD大鼠(体重:100±20 g),随机分为4组,每组10只,雌雄各半。以自由饮水方式染砷100 d,染砷组分别为:2.4,12和60 mg/L亚砷酸钠水溶液,对照组饮蒸馏水。采用Morris水迷宫实验评估大鼠学习和记忆能力,电感耦合等离子体发射光谱法(ICP-AES)测定脑总砷含量,实时荧光定量(q RT-PCR)测定海马C-Jun mRNA表达,免疫组化法检测Jun蛋白水平。结果染砷组脑砷含量高于对照组(P0.05)。定位航行实验:染砷组与对照组比较,染砷组大鼠逃逸潜伏期延长,从游泳训练第三天结果发现,高剂量组大鼠潜伏期与对照组和低剂量组差异有统计学意义(P0.05),该差异延续到第四天。空间探索实验:随着染砷浓度增加,染砷组大鼠在原平台象限停留时间缩短(P0.05)、游泳距离减少(P0.05),穿越平台次数依次减少(P0.05)。C-Jun蛋白表达随染砷剂量增加而增加(P0.05),而C-Jun mRNA表达染砷组较对照组下降(P0.05)。结论亚慢性砷暴露可引起Jun蛋白过度表达,C-Jun mRNA表达下调,学习记忆能力降低,C-Jun表达异常是长期砷暴露致学习记忆能力下降重要中间环节之一。     

孕哺期铅暴露对小鼠脑组织8-羟基脱氧鸟苷和沉默信息调节因子1表达的影响

目的研究孕哺期铅暴露对成年仔鼠脑组织中DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy deoxy guanosine,8-OHd G)、沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)表达及学习记忆能力的影响。方法通过饮用2 g/L乙酸铅水溶液建立C57BL/6小鼠孕期染铅模型,并对哺乳期母鼠持续铅暴露至子代小鼠断乳,分娩3周后将仔鼠分笼以无铅去离子水饲养至12周龄,同时设立无染铅对照组。于仔鼠12周龄时以Morris水迷宫实验检测其学习记忆能力,以免疫组化方法检测8-OHd G在两组仔鼠脑组织中的表达和分布,采用Western blot测定其脑组织中SIRT1蛋白的表达水平。结果水迷宫实验结果显示,第3~5天铅暴露组成年仔鼠在定位航行实验中的平均逃避潜伏期长于对照组,最后一天穿越平台次数及在目标象限停留时间低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。铅暴露组仔鼠海马组织CA1区8-OHd G表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),但大脑皮层8-OHd G表达水平无明显差异(P0.05)。铅暴露仔鼠脑组织胞核内SIRT1水平低于对照组,胞浆内SIRT1水平高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论孕哺期铅暴露对成年仔鼠学习记忆能力的影响可能与脑组织(特别是海马组织)DNA氧化损伤有关;铅暴露使成年仔鼠脑组织中SIRT1发生核质转移,该现象可能与SIRT1对铅暴露小鼠的神经保护作用有关。     

铅和高脂饮食暴露对大鼠脑皮质氧化损伤的影响

目的探讨铅与高脂饮食暴露对大鼠脑皮质的氧化损伤的影响。方法将40只健康成年SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、高脂饮食组、铅暴露组、铅+高脂饮食组,每组10只;其中,对照组、铅暴露组饲喂普通饲料(脂肪≥4%,碳水化化合物≤8%);高脂饮食组及铅+高脂饮食组饲喂高脂饲料(脂肪:45.65%,碳水化合物:37.89%)。对照组及高脂饮食组大鼠自由饮用800 mg/L的乙酸钠溶液,铅暴露组及铅+高脂饮食组大鼠自由饮用800 mg/L的乙酸铅溶液,连续染毒9周。采用Morris水迷宫对大鼠进行学习记忆能力测试;利用电感耦合等离子质谱仪(ICP-MS)测定大鼠脑皮质铅含量;测定血清中甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)的含量以及脑皮质中抑制羟自由基能力、谷胱甘肽-S转移酶(GSH-ST)活力和过氧化氢、微量还原性谷胱甘肽(GSH)、晚期糖基化终末产物(AGEs)的含量。结果与对照组比较,铅暴露组与铅+高脂饮食组大鼠第2天逃避潜伏期延长,高脂饮食组、铅暴露组及铅+高脂饮食组大鼠第3天逃避潜伏期延长,差异均有统计学意义(P0.05);铅+高脂饮食组大鼠第2、3天逃避潜伏期大于高脂饮食组且差异有统计学意义(P0.05);此外,与铅暴露组相比,铅+高脂饮食组大鼠逃避潜伏期虽有改变但差异无统计学意义(P0.05)。铅暴露组与铅+高脂饮食组大鼠皮质中的铅含量均增加,差异有统计学意义(P0.05);与高脂饮食组比较,铅+高脂饮食组大鼠皮质中的铅含量增加,差异有统计学意义(P0.05)。铅+高脂饮食组大鼠皮质中的铅含量仅略高于铅暴露组,差异无统计学意义(P0.05)。与对照组相比,高脂饮食组与铅+高脂饮食组大鼠血清中TG、LDL的含量均增加,HDL的含量降低,差异均有统计学意义(P0.05);而铅暴露组大鼠血清中TG、LDL、HDL的含量均无明显改变。与铅暴露组相比,铅+高脂饮食组大鼠血清中TG、LDL的含量均增加,HDL的含量降低,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,高脂饮食组、铅暴露组和铅+高脂饮食组大鼠皮质中AGEs的含量均升高,差异有统计学意义(P0.05);与铅+高脂饮食组比较,高脂饮食组、铅暴露组大鼠皮质中AGEs的含量均较低,差异有统计学意义(P0.05)。与高脂饮食组、铅暴露组比较,铅+高脂饮食组大鼠皮质中AGEs的含量增加,差异有统计学意义(P0.05)。各组大鼠皮质中过氧化氢的含量间比较,差异无统计学意义(P0.05)。与对照组比较,高脂饮食组、铅暴露组、铅+高脂饮食组大鼠皮质中抑制羟自由基能力、GSH-ST活力、GSH含量均降低,除高脂饮食组抑制羟自由基能力外,差异均有统计学意义(P0.05)。与铅+高脂饮食组比较,高脂饮食组和铅暴露组大鼠皮质中抑制羟自由基能力和GSH含量均较高,差异有统计学意义(P0.05),而GSH-ST活力均无明显改变。结论铅和高脂饮食暴露可损伤皮质抗氧化能力,导致氧化损伤的程度加重;铅和高脂饮食联合暴露后大鼠皮质的氧化损伤程度更加严重,提示铅可促进高脂饮食人群的中枢神经系统损伤。     

铅暴露对仔鼠学习记忆能力及发育早期海马组织中N-甲基-D天门冬氨酸受体亚单位表达的影响

目的探讨铅暴露对仔鼠学习记忆能力及发育早期各阶段海马组织中N-甲基-D天门冬氨酸(NMDA)亚单位表达的影响。方法将24只清洁级妊娠昆明小鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组及0.5、1.0、2.0 g/L铅暴露组,每组6只。采用自由饮水方式进行染毒,母鼠从妊娠第1天起开始饮用含铅水,仔鼠于出生后(PND)21天断乳,继续饮含铅水至实验结束。水迷宫测定PND 40仔鼠学习记忆能力;并分别于PND10、PND20和PND40,测定海马组织中NMDA各受体亚单位(NR1、NR2A、NR2B)蛋白和m RNA的表达水平。结果与对照组比较,各剂量乙酸铅暴露组仔鼠海马组织中NR1和NR2A蛋白及m RNA的表达水平均较低,除PND 10的0.5 g/L乙酸铅暴露组外,差异有统计学意义(P0.05);且随着乙酸铅暴露剂量的升高,仔鼠海马组织中NR1和NR2A蛋白及m RNA的表达水平呈下降趋势。与对照组比较,PND 10时各剂量乙酸铅暴露组及PND 20时1.0、2.0 g/L乙酸铅暴露组仔鼠海马组织中NR2B蛋白的表达水平均较低,差异有统计学意义(P0.05);而PND 40时各剂量乙酸铅暴露组仔鼠海马组织中NR2B蛋白的表达水平均无明显改变。且随着乙酸铅暴露剂量的升高,PND 10、PND 20时仔鼠海马组织中NR2A蛋白的表达水平均呈下降趋势。各剂量乙酸铅暴露不同发育阶段仔鼠海马组织中NR2B m RNA的表达水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P0.05)。结论发育早期铅暴露可损伤仔鼠的学习记忆能力,并且抑制仔鼠海马组织中NMDA受体各亚单位的表达。     

慢性铝暴露对雄性大鼠海马组织中TLR2蛋白及其mRNA表达的影响

目的 研究慢性铝暴露对大鼠记忆能力及海马组织中天然免疫关键蛋白Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)蛋白及其mRNA表达的影响.方法 将80只断乳后21 d清洁级雄性Wistar大鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和暴露于2、4和6 mg/ml氯化铝的染毒组,每组20只.采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒3个月.采用Morris水迷宫试验测定大鼠的记忆能力,采用Western Blot法和逆转录PCR(RT-PCR)法分别检测海马组织中TLR2蛋白及其mRNA的表达水平.结果 与对照组比较,各浓度氯化铝染毒组大鼠穿越平台次数和在原平台象限搜索距离占总距离的百分比均下降,差异有统计学意义(P<0.05);与2mg/ml组比较,6mg/ml氯化铝染毒组大鼠穿越平台次数和在原平台象限搜索距离占总距离的百分比均下降,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,各浓度氯化铝染毒组大鼠海马组织中TLR2蛋白及其mRNA表达水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05);与2 mg/ml组比较,4和6 mg/ml氯化铝染毒组大鼠海马组织中TLR2蛋白及其mRNA表达水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05);随着氯化铝染毒浓度的升高,大鼠海马组织中TLR2蛋白及其mRNA表达水平呈先升高后降低的趋势.结论 慢性铝暴露可损伤大鼠的记忆能力,这可能与海马组织中TLR2蛋白及其mRNA的表达增高有关.     

CaMK Ⅱ在大鼠海马急性铅中毒中作用

目的 探讨Ca~(2+)/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)在大鼠海马急性铅中毒的作用机制.方法 正常30 d大鼠,取海马制成350 μm脑片,人工脑脊液(ACSF)液中稳定培养2 h后,分为4组,对照组(仍为普通ACSF液)、谷氨酸组、KN-93(CaMKⅡ抑制剂)组、谷氨酸加醋酸铅组.培养30 min后收集脑片,用蛋白免疫印迹(Western blot)法检测谷氨酸、抑制剂KN-93和铅对下游信号分子细胞外信号调节激酶2(ERK2)的活性及总量表达的影响.结果 大鼠海马脑片培养中,谷氨酸能提高ERK2活性,与对照组比较增加42%,差异有统计学意义(P＜0.05).KN-93及铅能抑制ERK2活性,与对照组比较降低23%,28%,差异有统计学意义(P＜0.05).对总量ERK2表达无明显影响.结论 急性铅中毒可能通过抑制CaMK Ⅱ活性影响下游信号分子,造成神经系统损伤.     

1-溴丙烷暴露对大鼠认知功能的影响

目的 观察1-溴丙烷(1-bromopropane,1-BP)对大鼠学习记忆功能及对胆碱能神经系统的影响.方法 雄性Wistar大鼠40只,随机分为4组:1-BP低剂量组(200mg/kg1-BP)、中剂量组(400mg/kg1-BP)、高剂量组(800mg/kg 1-BP)和对照组,每组10只.各组动物分别经灌胃给予相应受试物7 d后,采用Morris水迷宫定位航行试验和空间探索试验检测大鼠学习和记忆功能.水迷宫试验结束后次日断头处死大鼠,迅速剥离大鼠大脑和海马,冰浴中制备匀浆,取上清液,测定乙酰胆碱酯酶(AChE)、乙酰胆碱转移酶(ChAT)的活力.结果 定位航行试验中,1-BP染毒后,与对照组相比,中、高剂基组的逃避潜伏期、游泳路程明显延长,搜索效能降低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).空间探索试验中,低、中、高剂量组穿越平台次数(分别为4.30±2.6、3.78±2.0、2.50±2.1)呈降低趋势,与对照组(7.20±2.8)比较,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),高剂量组的平台周边时间/总时间比值(0.55±0.14)明显低于对照组(0.76±0.15)和低剂量组(0.69±0.18),差异有统计学意义(P＜0.01).中、高剂量组大鼠大脑皮层AChE活力[分别为(1.246±0.423)、(1.397±0.503)U/mgpro]明显升高,与对照组[(0.918±0.276)U/mg pro]的差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01),高剂量组海马组织中AChE活力[(0.583±0.118)U/mgpro]也明显高于对照组[(0.491±0.075)U/mgpro],差异有统计学意义(P＜0.05).1-BP染毒后,大脑皮层ChAT活力有降低趋势,但与对照组相比,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 1-BP暴露能明显损伤大鼠学习记忆能力,可能与AChE活力升高相关.     

孕哺期铅暴露对雄性子代大鼠海马组织中沉默信息调节因子表达的影响

目的探讨大鼠孕期及哺乳期铅暴露对雄性仔鼠海马组织中沉默信息调节因子(silent information regulator1,SIRT1)表达的影响。方法将12只健康SPF级雌性SD孕鼠随机分为3组,分别为对照组(去离子水)、低剂量铅暴露组(0.5 g/L乙酸铅)和高剂量铅暴露组(2.0 g/L乙酸铅),每组4只。采取自由饮水的方式进行染毒,自妊娠第1天开始至仔鼠21 d断乳为止。在仔鼠断乳后,采用电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)检测6只雄性仔鼠全血和海马组织中铅的含量,采用RT-PCR检测6只雄性仔鼠海马组织SIRT1 mRNA水平的变化,采用Western blot和免疫荧光组织化学法检测6只雄性仔鼠海马组织SIRT1蛋白水平的变化。结果孕哺期不同剂量铅暴露后,雄性仔鼠血铅和海马组织中铅含量均高于对照组,海马中SIRT1 mRNA和蛋白水平的表达均低于对照组,且高剂量铅暴露组仔鼠海马中SIRT1mRNA和蛋白水平低于低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论孕哺期铅暴露可下调仔鼠海马中SIRT1基因表达,从而可能影响海马神经元功能及仔鼠学习记忆能力。     

果糖和双酚A联合暴露对发育早期雄性大鼠摄食饮水和体重的影响

目的探讨双酚A(bisphenol A,BPA)和果糖单独或联合暴露对发育早期雄性大鼠摄食量、饮水量和体重的影响。方法将50只清洁级初断乳的Wistar雄性大鼠按体重随机分为5组,分别为对照组、13%果糖组、20%果糖组、BPA(1μg/ml)组和BPA(1μg/ml)+果糖(13%)组,每组10只,每笼3~4只饲养。采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒8周,每天新鲜配制饮水。测定各组大鼠摄食量、饮水量和体重,并计算能量和蛋白质摄入量。结果与对照组比较,13%果糖组和20%果糖组大鼠的摄食量和蛋白质摄入量均明显减少,差异均有统计学意义(P0.05);13%果糖组和BPA+果糖组大鼠的饮水量明显增加,总热能摄入量也明显增高,差异均有统计学意义(P0.05);20%果糖组和BPA组大鼠的饮水量和总热能摄入量间比较,差异无统计学意义(P0.05);BPA+果糖组大鼠的饮水量和总能量摄入均明显高于BPA组,差异均有统计学意义(P0.05)。实验期间,各实验组大鼠体重与对照组比较,没有明显差异(P0.05)。结论 1μg/ml BPA和13%果糖单独或联合暴露对发育期雄性大鼠的体重没有明显影响;联合暴露组大鼠的摄食量和饮水量与13%果糖组一致,没有受到BPA的影响。     

铅对仔鼠海马酸敏感离子通道表达的影响

目的 研究慢性铅染毒对仔鼠海马酸敏感离子通道(ASm)la、2a、2b mRNA和蛋白表达的影响.方法 孕鼠随机分为蒸馏水对照组及0.2%、1.0%醋酸铅组,每组5只,从妊娠第0天起开始通过自由饮水染铅.幼鼠出生后,先经哺乳染铅,断乳后则自由饮用与其母鼠浓度相同的含铅水.分别于出生后第8、50天处死仔鼠,测定其脑铅含量,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blotting)法分别观察各组仔鼠海马ASIC1a、ASIC2a、ASIC2bmRNA及蛋白的表达情况.结果 同一发育时期的染铅组仔鼠脑铅含量高于对照组,同一剂量染铅组出生后50 d仔鼠脑铅含量高于生后8 d的仔鼠,差异均有统计学意义(P＜0.01).与相应的对照组相比.1.0%醋酸铅组不同发育时期仔鼠海马ASIC1a mRNA表达升高,差异有统计学意义(P＜0.01).染铅组不同发育时期仔鼠海马ASIC1a蛋白表达降低,差异有统计学意义(P＜0.05).染铅组ASIC2a、ASIC2b的mRNA和蛋白表达与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 慢性铅染毒可对仔鼠海马ASIC1a mRNA和蛋白表达产生影响.     

咽后壁滴注柴油机尾气颗粒物对雌性小鼠生殖功能的影响

目的 观察柴油机尾气颗粒物(DEP)亚急性暴露对雌性小鼠生殖功能的影响.方法 将168只ICR( Institute of Cancer Research)雌性小鼠按数字表法随机分为低(B)、中(C)、高(D)剂量DEP暴露组和对照组(A),每组42只,分别向B、C、D组小鼠咽后壁滴注0.8、3.0、12.0 μg/μl DEP混悬液及PBS各30μl,每3天重复滴注1次,共4次.测量小鼠体重及卵巢重量,计算卵巢重量/体重,检测卵母细胞的存活率、胚泡破裂百分率、第一极体释放百分率、受精率、线粒体DNA含量和超微结构的变化.结果 A、B、C、D组卵巢重量/体重分别为(15.4±7.3) ×10-5、(14.1±6.8) ×10-5、(8.2±0.7) ×10-5和(7.2±2.5)×10-5 (F=3.841,P＜0.05).A、B、C、D组加入精子后第48小时,卵母细胞存活率分别为64.3％、56.8％、39.5％、32.9％(x2=21.575,P＜0.05),第一极体释放率分别为75.5％、65.3％、37.0％、27.1％ (x2 =52.772,P＜0.05),2细胞胚胎率分别为27.9％、39.1％、17.6％、12.5％(x2=20.148,P＜0.05),2细胞以上胚胎率分别为45.3％、32.2％、12.5％、13.9％ (x2 =32.135,P＜0.05).A、B、C、D组卵母细胞线粒体DNA的拷贝数对数值分别为6.54±0.13、6.48±0.09、5.57±0.15和5.41±0.07(F =89.241,P＜0.05).C、D组卵母细胞许多线粒体肿胀、空泡化,A、B组卵母细胞结构无明显改变.结论 DEP具有雌性生殖毒性.亚急性DEP暴露可对卵巢及卵母细胞造成不同程度损伤,降低卵巢功能和卵母细胞受精能力.     

长期噪声暴露对大鼠海马CRF系统的影响

目的 探讨长期噪声暴露对大鼠海马组织中促肾上腺皮质激素释放激素(CRF)信号系统的影响。方法 选择Wistar雄性大鼠64只,随机分为对照组和暴露组,每组32只,暴露组暴露条件为95 dB白噪声,4 h/d×30 d,停止噪声暴露分别恢复0、3、7、14 d;对照组动物除不接受噪声暴露外,其他条件与暴露组相同。采用逆转录-聚合酶链反应(RTPCR)和免疫印迹(Western blot)法检测海马组织中促肾上腺皮质激素释放激素及其受体(CRF、CRFR1、CRFR2)的mRNA及蛋白表达水平。结果 暴露组大鼠海马CRF、CRFR1 mRNA及蛋白表达水平在停止噪声暴露后恢复0、3、7 d明显高于对照组差异有统计学意义(P0.05),到14 d时恢复到正常水平;暴露组CRFR2 mRNA及蛋白表达水平在恢复0 d无明显变化,恢复3、7 d时明显升高差异有统计学意义(P0.05),到14 d时其蛋白表达恢复到正常水平,mRNA水平依然明显高于对照组。结论 长期噪声暴露可引发大鼠海马CRF及其受体系统持续异常改变,其可能参与了噪声暴露致阿尔茨海默病症(AD)样变的进程。     

铅对仔鼠海马蛋白激酶C和钙调蛋白表达的影响

目的 研究慢性铅染毒对不同发育时期仔鼠海马蛋白激酶C(PKC)、钙调蛋白(CaM)表达的影响.方法 孕鼠随机分为蒸馏水对照组、0.2%醋酸铅和1.0%醋酸铅组,从怀孕第0灭起开始通过自由饮水染毒.幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与其母鼠浓度相同的含铅水.分别于出生后8、50 d处死仔鼠,原子吸收光谱法测定脑铅含量,Western-blotting法观察各组仔鼠海马PKC、CaM的蛋白表达情况.结果 同一发育时期的染铅组仔鼠脑铅含量明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).同一剂量染铅组出生后50 d仔鼠脑铅含最明显高于出生后8 d,差异有统计学意义(P＜0.01).不同发育时期的染铅组仔鼠海马的PKC、CaM的蛋白表达均相应地下降,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 仔鼠海马PKC、CaM的蛋白表达降低可能是铅致仔鼠学习记忆功能损害的分子机制之一.     

亚慢性染毒苯并[a]芘对大鼠海马热休克蛋白70表达的影响

目的 研究亚慢性染毒苯并[a]芘(B[a]P)对大鼠海马热休克蛋白70( Hsp70)的影响。方法 选择48只健康雄性SD大鼠,饲养1周后将动物随机分为空白对照组、溶剂对照组及0.5、1.5、4.5、10.0 mg/kg B[a]P染毒组,隔日腹腔注射染毒90d,Morris水迷宫试验进行行为学测试。免疫印迹(Westem-blot)法和反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法分别检测大鼠海马Hsp70蛋白和Hsp70 mRNA的表达水平,免疫组织化学法观察大鼠海马各区Hsp70表达情况,图像分析系统测定Hsp70平均灰度值。结果 Morris水迷宫结果显示,4.5、10.0 mg/kg B[a]P组大鼠平均潜伏期和平均总路程明显高于空白对照组、溶剂对照组、0.5、1.5 mg/kg B[a]P组,差异有统计学意义(P＜0.05);10.0 mg/kg B[a]P组平台象限滞留时间明显低于空白对照组、溶剂对照组和0.5mg/kg B[a]P组,差异有统计学意义(P＜0.05)。B[a]P染毒组大鼠海马hsp70蛋白和hsp70 mRNA的表达水平均随染毒剂量增高而下降。其中,4.5、10.0 mg/kgB[a]P组Hsp70蛋白表达水平明显低于空白对照组、溶剂对照组和0.5mg/kg B[a]P组,差异有统计学意义( P＜0.01,P＜O.05);0.5、4.5、10.0 mg/kg B[a]P组hsp70 mRNA表达水平明显低于空白对照组、溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.01),10.0 mg/kg B[a]P组hsp70 mRNA表达水平明显低于其他染毒组。免疫组化结果显示,海马CA1、CA2、CA3、DG区Hsp70表达平均灰度值均随着B[a]P染毒剂量的增高而呈下降趋势。Pearson相关性分析结果显示,大鼠海马Hsp70表达水平与平均潜伏期呈负相关（r=-0.428,P＜O.05）;大鼠海马hsp70 mRNA表达水平与平均潜伏期、平均总路程呈负相关(r值分别为-0.677、-0.594,P＜0.01),与平台象限滞留时间呈明显正相关(r=0.597,P＜O.01)。结论 亚慢性染毒B[a]P可抑制大鼠海马Hsp70的表达,与大鼠学习记忆和空间探索能力损害相关,该抑制作用无区域特异性。     

维生素B_(12)影响同型半胱氨酸对大鼠认知能力的作用

目的:观察同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对大鼠空间认知能力的影响及维生素B12(VB12)的干预作用。方法:大鼠随机分为对照组,实验组及VB12干预组。测定各组血浆Hcy,血清VB12水平和Y迷宫学习记忆情况,并对大鼠海马区进行乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)免疫组化分析。结果:实验组血浆Hcy水平比对照组升高,并出现空间认知障碍,且两组差异有显著性;实验组海马区AChE阳性纤维减少,呈弱阳性(+)。VB12干预组血浆Hcy水平与对照组比无明显变化,但VB12升高,无空间认知障碍发生;VB12干预组海马区有大量的AChE纤维,呈强阳性(+++)。结论:高同型半胱氨酸可引起大鼠空间认知障碍,而VB12可降低Hcy水平并干预空间认知障碍的发生。