慢性前列腺炎大鼠行为学及L5～S2脊段P物质和神经激肽-1受体表达的研究

目的:研究慢性前列腺炎(CP)大鼠模型行为学表现及其L5～S2脊段P物质(SP)和神经激肽-1受体(NK-1R)的表达。方法:成年雄性SD大鼠40只,随机分成对照组、45 d模型组、60 d模型组和90 d模型组,每组10只。采用开野试验和糖水消耗试验观察各组大鼠的行为学表现,测量各组大鼠前列腺指数,ELISA法测定大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-10含量,光镜观察前列腺组织形态学变化,免疫组化检测L5～S2脊髓SP及NK-1R的表达。结果:与对照组相比,45、60 d模型组大鼠水平运动评分、垂直运动评分和糖水消耗量呈下降趋势,但无显著性差异;而90 d模型组显著下降(P0.05)。与对照组相比,45、60、90 d模型组大鼠前列腺指数显著下降(P均0.05);与45 d和60 d模型组相比,90 d模型组前列腺指数显著下降(P均0.05)。光镜观察,对照组前列腺组织未见炎细胞浸润,随着造模时间的延长,前列腺组织出现明显水肿,淋巴细胞增加显著。与对照组比较,45、60、90 d模型组大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-10水平显著增加(P均0.05)。免疫组化结果显示,SP和NK-1R主要表达于脊髓背角,各模型组SP和NK-1R的表达水平显著高于对照组(P均0.05)。与45 d和60 d模型组相比,90 d模型组SP和NK-1R的表达水平显著升高(P均0.05)。结论:CP模型大鼠出现抑郁行为学表现,血清TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-10水平显著升高,L5～S2脊髓背角SP及NK-1R表达上调,且不同时段变化趋势一致,提示不同时段CP模型大鼠的行为学表现与L5～S2脊段SP及其受体表达水平存在相关性。     

星形胶质细胞活化对慢性前列腺炎大鼠模型脊髓背角P物质的影响

目的:探讨星形胶质细胞活化对慢性前列腺炎模型大鼠脊髓背角P物质的影响。方法:SD雄性大鼠60只随机分为正常组(n=20)、疼痛组(n=20)、干扰组(n=20),完全福氏佐剂和3%角叉菜胶前列腺内注射造成慢性前列腺炎疼痛模型,脊髓插管给药胶质细胞活化抑制剂干扰慢性前列腺炎疼痛模型大鼠,免疫荧光法观察正常组、疼痛组、干扰组脊髓节段(L6和S1)背角星形胶质细胞的活化和P物质的分布,并用放射免疫法观察3组脊髓背角P物质的变化。结果:与正常组比较,脊髓背角星形胶质细胞活化阳性细胞数疼痛组明显增加(P<0.01),而干扰组较疼痛组明显减少(P<0.01),P物质主要表达于脊髓背角且疼痛组明显增多(P<0.01),干扰组明显减少(P<0.01)。结论:星形胶质细胞活化是慢性前列腺炎疼痛大鼠脊髓背角P物质变化的重要原因之一。     

脊髓半切伤后胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的:研究脊髓半切伤(hSCI)后脊髓远端组织星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的意义,并探讨反应性胶质化在脊髓半切伤中的作用。方法:SD大鼠25只,随机分为5组(n=5),正常对照组、脊髓半切伤后1d、4d、7d和14d组。用免疫组化及图像分析方法观察星形胶质细胞中GFAP的表达;用大鼠综合行为评分(CBS)对各组评分。结果:hSCI后远端星形胶质细胞GFAP表达比对照组明显增高(P<0.01);1～14d呈进行性增高,损伤各组CBS1～14d呈降低趋势,两指标有显著性相关性(r=-0.05,P<0.01)。结论:hSCI后星形胶质细胞通过其反应性胶质化对脊髓再生和修复起重要作用。     

丙戊茶碱对慢性前列腺炎疼痛大鼠的作用及机制

目的:探讨丙戊茶碱对慢性前列腺炎疼痛模型大鼠脊髓神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及前列腺肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的作用及机制。方法:将30只雄性SD大鼠随机均分为3组(n=10):假手术组(A组),模型组(B组),丙戊茶碱组(C组)。C组在造模后腹腔注射丙戊茶碱2 mg/kg,A、B组注射等量的生理盐水。用免疫组化法检测各组腰骶段脊髓神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及前列腺肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。结果:A组GFAP(2.56±0.16)和TNF-α(1.34±0.05)的含量均低于B、C组;B组GFAP(16.79±0.72)和TNF-α(3.46±0.05)的含量均增加明显,与A组比较,差异有统计学意义(P<0.05);C组GFAP(8.83±0.63)和TNF-α(2.25±0.05)的含量增加幅度小,与B组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:丙戊茶碱可能通过抑制星形胶质细胞的激活及炎性介质的释放,对慢性前列腺炎疼痛大鼠模型的抑制发挥作用。     

P物质及其神经激肽-1受体在慢性非细菌性前列腺炎大鼠L5~S2脊段的表达

目的:研究慢性非细菌性前列腺炎(CNP)大鼠模型不同造模时段L5~S2脊髓背角P物质(SP)及其神经激肽-1受体(NK-1R)的表达。方法:成年雄性SD大鼠40只,随机分成对照组、模型组(45 d组、60 d组和90 d组),每组10只。另取30只大鼠提取前列腺组织蛋白,模型组腹腔注射0.5 ml百白破疫苗,同时皮内多点注射1 ml前列腺蛋白提取液和弗式完全佐剂(1∶1)混合液造模,对照组注射同体积生理盐水。分别于造模后第45、60、90天测量大鼠抬腿反应阈值(PWT),ELISA法测定前列腺组织中TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-10含量,光镜和电镜观察前列腺组织形态学变化,免疫组化检测L5~S2脊髓中SP和NK-1R的表达。结果:模型组大鼠疼痛敏感性增强,PWT 45 d组、60 d组、90 d组分别为(48.72±6.56)g、(42.16±4.3)g、(25.18±5.37)g,显著低于对照组的(73.65±6.68)g。与对照组比较,各模型组大鼠前列腺组织中TNF-α、IL-1β、IL-2和IL-10含量均显著增加(P均0.05),并且90 d组增加更显著(P均0.05)。免疫组化结果显示,SP和NK-1R主要表达于脊髓背角,呈棕黄色索状分布,其他部位不着色或呈淡黄色;SP和NK-1R的表达量各模型组显著高于对照组(P均0.05),同时90 d组也显著高于其他3组(P均0.05)。光镜下,对照组前列腺组织未见炎细胞浸润,随着造模时间的延长,前列腺组织出现明显水肿,淋巴细胞增加显著;透射电镜也显示模型组大鼠前列腺组织呈现明显的炎性改变,9 0d组管周间质水肿更加明显,管周细胞与上皮基底间隙增宽,成纤维细胞及周围胶原原纤维数量增多。结论:CNP大鼠L5~S2脊髓背角SP合成增多,受体上调。     

白屈菜红碱预先给药对神经病理性疼痛大鼠疼痛行为和脊髓星形胶质细胞活化的影响

目的观察蛋白激酶α(PKCα)抑制剂白屈菜红碱(CHE)预先给药对坐骨神经慢性结扎损伤(CCI)大鼠机械疼痛行为和脊髓星形胶质细胞活化的影响。方法健康雄性SD大鼠128只,250~300 g,采用随机数字表法,随机均分为四组:假手术组(S组)、神经病理性疼痛组(NP组)、生理盐水组(NS组)和CHE组(CH组)。CCI模型建立前给药,CH组用CHE 80 mg/kg灌胃,NS组给予等容量的生理盐水,1次/日,连续4 d,NP组不给予任何药物。灌胃结束后S组分离暴露坐骨神经不结扎,余三组制备CCI模型。观察四组大鼠CCI模型建立前(T0)及建立后1 d(T1)、4 d(T2)、7d(T3)、10 d(T4)、14 d(T5)、21 d(T6)、28 d(T7)疼痛行为学改变,并于各时点行为学观察结束时每组随机取4只大鼠,测定脊髓背角胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达和星形胶质细胞计数。结果与S组比较,T1~T7时NP、NS、CH组机械缩足反应阈值(MWT)明显降低,热缩足反射潜伏期(TWL)明显缩短,脊髓背角GFAP表达及星形胶质细胞计数明显增加(P0.05);与CH组比较,T1~T7时NP组和NS组MWT明显降低,TWL明显缩短(P0.05);T4~T7时脊髓背角GFAP表达及星形胶质细胞计数明显增加(P0.05)。结论白屈菜红碱预先给药可抑制大鼠脊髓星形胶质细胞的活化,从而减轻神经病理性疼痛行为。     

大鼠牵张性脊髓损伤后胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的分析大鼠牵张性脊髓损伤后星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的变化。方法大鼠脊髓T13～L2经牵张损伤,皮层体感诱发电位(CSEP)监测P1～N1波幅下降至术前波幅70%后,分别于术后1、4、7、14、21d处死取材。应用免疫组化染色及图像分析检测星形胶质细胞中GFAP的表达,用行为学评分及电生理检查大鼠神经功能情况。结果损伤组术后1dGFAP阳性表达开始增多,术后14d达高峰,为(263.72±16.39)个,以后下降。损伤组各时相点的阳性表达与空白对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论牵张性脊髓损伤后GFAP的大量表达对脊髓的再生修复起着重要作用。     

不同浓度氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠脊髓背角神经元和星形胶质细胞凋亡的影响

目的观察不同浓度氯胺酮对谷氨酸诱导的大鼠脊髓背角神经元和星形胶质细胞凋亡的影响。方法取出生1-3 d Wistar大鼠T11-L5脊髓背角神经元和星形胶质细胞,原代混合培养2 周。将细胞随机分为6组(n=8):对照组(C组)加入Hanks液;谷氨酸组(G组)加入谷氨酸至终浓度100μmol/L;氯胺酮组(K组)加入氯胺酮至终浓度1 mmol/L;GK1、GK2、GK3组先加入谷氨酸至终浓度100μmol/L,30min后分别加入氯胺酮至终浓度0.1、1、10mmol/L。培养48 h后取各组细胞上清液检测白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,瑞氏染色观察细胞形态变化,流式细胞仪检测神经元和星形胶质细胞凋亡。结果与C组比较,G、GK1、GK2组神经元和星形胶质细胞凋亡峰值增加,GK3组细胞几乎全部死亡,未能上机检测细胞凋亡,G、GK1、GK2、GK3组IL-1β和TNF-α浓度升高(P<0.01)。与G组比较,GK2组各指标均降低,GK,组IL-1β和TNF-α浓度升高(P<0.01)。结论1 mmol/L氯胺酮可降低谷氨酸引起大鼠脊髓背角神经元和星形胶质细胞的凋亡。     

骨癌痛大鼠吗啡耐受后脊髓胶质细胞及炎性细胞因子的变化

目的 评价骨癌痛大鼠吗啡耐受后脊髓胶质细胞及炎性细胞因子的变化.方法 雌性SD大鼠,体重180～220 g,采用MADB-106鼠源性乳腺癌细胞注入大鼠左侧胫骨建立骨癌痛模型.14d后,选择一般状况良好、体重无减轻、进食好、活动正常、热痛阈<18.5 s、机械痛阈<27.8 g的大鼠16只,随机分为2组:对照组(n=7)注射等容量生理盐水;吗啡耐受组(n=9)皮下注射吗啡3次/d,连续5 d,每天单次注射剂量按10、20、40、50、60 mg/kg递增.于造模前和造模后10 d开始隔日1次测定热痛阈和机械痛阈;造模后19 d皮下注射吗啡3 mg/ks,30 min后测定热痛阈和机械痛阈.随后处死动物,取腰段脊髓,采用RT-PCR法测定脊髓白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA和肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA的表达;采用ELISA法测定脊髓IL-1β和TNF-α的含量;采用免疫组化法测定脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞的活力.结果 与造模前比较.对照组造模后14、16、18 d时热痛阈和机械痛阈降低(P<0.05);与对照组比较,吗啡耐受组造模后14、16、18 d时热痛阈和机械痛阈升高,造模后19 d时热痛阈和机械痛阈降低,左侧脊髓IL-1β mRNA和TNF-αmRNA表达升高,脊髓IL-1β和TNF-α的含量增加,脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞的活力增强(P<0.05).结论 骨癌痛大鼠连续递增剂量腹腔注射吗啡可引起脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞进一步活化,IL-1β和TNF-α释放增加,从而发生吗啡耐受.     

脊髓半切伤后胶质纤维酸性蛋白的表达及意义

目的：研究脊髓半切伤(hSCI)后脊髓远端组织星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的意义，并探讨反应性胶质化在脊髓半切伤中的作用。方法：SD大鼠25只，随机分为5组(n＝5)正常对照组、伤后1、4、7、14d组，用免疫组化及图像分析方法观察星形胶质细胞中GFAP的表达；用大鼠综合性为评分(CBS)方法对各组评分。结果：hSCI后远端星形胶质细胞GFAP表达比对照组明显增高(P＜0．01);l-14d呈进行性增高，损伤各组CBS1—14d呈降低趋势，两指标有显著相关性(r＝—0．05，P＜0．01)。结论：hSCI后星形胶质细胞通过其反应形胶质化对脊髓再生和修复其重要作用。     

胫骨癌痛大鼠脊髓星形胶质细胞的活化

目的 观察胫骨癌痛大鼠脊髓星形胶质细胞的活化情况,探讨骨癌痛产生与维持的机制.方法 Walker 256乳腺癌细胞经大鼠体内腹水传代增殖,种植于大鼠左侧胫骨建立胫骨癌痛模型.雌性SD大鼠35只,体重150-180 g,随机分为3组:对照组(C组,n=5)、热杀死肿瘤细胞组(K组.n=15)、胫骨癌痛组(P组,n=15).C组选取5只大鼠,K组和P组于种植后第6天、第12天和第18天随机取5只大鼠测定左后足机械痛阈,随后处死大鼠,取左侧L4-6脊髓组织,采用免疫组化方法检测脊髓背角胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)表达水平.结果 与C组比较,K组大鼠左后足机械痛阈及左侧脊髓背角GFAP表达差异无统计学意义(P>0.05).与K组比较,P组于种植癌细胞后第6天、第12天及第18天时大鼠左后足机械痛阈降低,左侧脊髓背角GFAP表达升高(P<0.01).与种植癌细胞后第6天比较,种植癌细胞后第12、18天时P组大鼠左后足机械痛阈下降,左侧脊髓背角GFAP表达升高(P<0.01),而P组种植癌细胞后第12天与第18天比较,大鼠左后足机械痛阈与脊髓背角GFAP表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 脊髓星形胶质细胞的活化与胫骨癌痛的产生与维持有关.     

脊髓1型多聚ADP核糖聚合酶在大鼠神经病理性痛中的作用

目的 评价脊髓1型多聚ADP核糖聚合酶(PARP1)在大鼠神经病理性痛中的作用.方法 雄性成年Wistar大鼠180只,体重180～220 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=45):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)、小干扰RNA(siRNA)阴性对照(NC-siRNA)组(NS组)和PARP1-siRNA组(PS组).NP组、PS组和NS组采用结扎L5脊神经的方法制备大鼠神经病理性痛模型.S组仅暴露L5脊神经,但不结扎.PS组和NS组术后鞘内注射PARP1-siRNA慢病毒和NC-siRNA慢病毒10μl.于术后3、7和14 d时测定机械痛阈,然后处死大鼠,取脊髓组织,采用免疫荧光法检测PARP1和胶质纤维酸性蛋白( GFAP)的共表达情况,采用Western blot法测定PARP1和GFAP的蛋白表达,采用RT-PCR法测定PARP1和GFAP的mRNA表达.结果 与S组比较,NP组、NS组和PS组术后各时点机械痛阈下降,脊髓PARP1和GAFP的蛋白及其mRNA表达上调(P＜0.05).与NP组和NS组比较,PS组术后各时点机械痛阈升高,脊髓PARP1和GAFP蛋白及其mRNA表达下调(P＜0.05).NP组和NS组间上述各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).PARG1在脊髓星形胶质细胞存在表达.结论脊髓PARP1通过激活星形胶质细胞参与了大鼠神经病理性痛的形成与维持.     

黑皮质素4型受体在大鼠脊髓星形胶质细胞释放兴奋性氨基酸中的作用

目的 探讨黑皮质素4型受体(MC4R)在大鼠脊髓星形胶质细胞释放兴奋性氨基酸中的作用.方法 原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞,随机分为3组,每组6孔:正常白对照组(C组)、T组和TH组.C组未作任何处理,T组加入终浓度为10μg/L的TNF-α;TH组同时加入终浓度为10μg/L的TNF-α和终浓度为1 μmol/L的MC4R特异性阻断剂HS014.各组孵育3 h后采用高效液相-串联四级杆质谱法检测上清液谷氨酸(Glu)和天门冬氨酸(Asp)的浓度.结果 与C组比较,T组Glu和Asp浓度升高(P＜0.01),TH组Glu和Asp浓度差异无统计学意义(P＞0.05);与T组比较,TH组Glu和Asp浓度降低(P＜0.01).结论 MC4R介导了大鼠脊髓星形胶质细胞释放兴奋性氨基酸的作用.     

Down-regulation of glial fibrillary acidic protein and vimentin by RNA interference improves acute urinary dysfunction associated with spinal cord injury in rats

In spinal cord injury, glial scarring, a result of overexpressed intermediate filament (IF) proteins including glial fibrillary acidic protein (GFAP) and vimentin, is one of the largest obstacles in axonal regeneration. We postulated that specific suppression of IF proteins in the injured CNS might inhibit the excessive reactivity of astrocytes and thereby suppress glial scarring. siRNAs targeting GFAP and vimentin were transfected separately into C6 glioma cells and rat hippocampal astrocytes. These siRNAs suppressed both biphasic elements of each IF proteins: the ordinarily expressed elements having slow turnover and the immediately inducible elements stimulated by tumor necrosis factor-a (TNF-α). Moreover, adenovirus vectors expressing GFAP or vimentin siRNAs suppressed the proliferation of C6 glioma cells on days 3-9 after infection. Finally, each siRNA mixed with atelocollagen was applied together to the contused thoracic spines of spinal cord injury (SCI) model rats. The introduction of GFAP and vimentin siRNAs prevented the overexpression of IF proteins in the injured lesion (namely, in the white matter surrounding the long tract where the lateral funiculus exists and in the gray matter near the anterior horn neurons). Furthermore, the starting date of spontaneous voiding was significantly accelerated by application of GFAP and vimentin siRNAs. The inhibition of undesirable glial activity surrounding micturition-related pathways improved acute urinary dysfunction due to neurogenic bladder. In conclusion, the down-regulation of IF proteins by RNAi suppresses the overproliferation of reactive astrocytes and thereby might be an effective treatment for spinal cord injury.     

脊髓趋化因子配体2在大鼠胫骨癌痛中的作用

目的 探讨脊髓趋化因子配体2(CCL2)在大鼠骨癌痛中的作用.方法 健康成年雌性SD大鼠84只,体重160～ 180g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=28):正常对照组(C组)、假手术组(S组)和骨癌痛组(P组).P组胫骨骨髓腔内注射Walker-256乳腺癌细胞混悬液制备大鼠胫骨癌痛模型;S组胫骨骨髓腔内注射生理盐水;C组不作任何处理.于接种前ld、接种后l、3、7、10、14和21 d时,测定机械性刺激阈值.于接种前ld、接种后7、14和21'd时痛阈测定结束后,各组随机处死6只大鼠,取L4～6脊髓组织,采用ELISA法测定CCL2含量,反映其表达.接种后14 d时痛阈测定结束后,P组随机取4只大鼠,采用免疫荧光双标染色法观察脊髓背角CCL2与离子钙接头蛋白分子-1(小胶质细胞特异性标记物)、胶质纤维酸性蛋白(星形胶质细胞特异性标记物)和神经元特异核蛋白(神经元特异性标记物)的共表达情况.结果 与C组和S组相比,P组接种后7～21 d时机械性刺激痛阚下降,接种后7、14和21 d时脊髓CCL2表达上调(P＜0.05).骨癌痛大鼠脊髓背角CCL2在小胶质细胞和星形胶质细胞中存在表达,而在神经元中无表达.结论 脊髓小胶质细胞和星形胶质细胞中释放的CCL2参与了大鼠胫骨癌痛的发生发展.     

腹腔注射右美托咪定对糖尿病神经病理性疼痛大鼠脊髓胶质细胞活化的影响

目的 探讨腹腔注射右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠脊髓胶质细胞活化及炎症因子表达的影响. 方法 健康清洁级雄性SD大鼠32只,体重180～200 g,采用随机数字表法大鼠分为4组(每组8只):对照组(C组)、DNP组、Dex组和α2受体拮抗剂组(YOH组).采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射法建立大鼠DNP模型.从STZ注射28 d开始:Dex组连续7d腹腔注射Dex 50 μg/kg;YOH组连续7d腹腔注射育亨宾0.1 mg/kg,之后30 min腹腔注射Dex 50 μg/kg.于注射STZ后29～35 d测定各组大鼠机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT).于35 d测定MWT后处死大鼠,采用免疫荧光双标法测定各组大鼠脊髓内小胶质细胞和星形胶质细胞的活化情况,采用ELISA法检测各组大鼠脊髓内TNF-α和IL-1的含量. 结果 与C组比较,DNP组、Dex组、YOH组3组大鼠均体重下降、血糖升高(P＜0.05);DNP组、Dex组和YOH组3组大鼠组间比较,体重和血糖差异无统计学意义(P＞0.05).与C组比较,DNP组和YOH组术后各时点MWT均降低(P＜0.05);与DNP组比较,Dex组术后各时点MWT均升高(P＜0.05).与C组比较,DNP组和YOH组大鼠脊髓内小胶质细胞活化率、TNF-α和IL-1的含量均升高(P＜0.05);与DNP组比较,Dex组大鼠脊髓内小胶质细胞活化率、TNF-α和IL-1的含量均降低(P＜0.05);各组大鼠组间比较,脊髓内星形胶质细胞活化率差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 Dex能够缓解DNP大鼠的痛觉过敏,其机制可能与抑制小胶质细胞活化,从而减轻脊髓内炎症反应有关.