胶原-纤维蛋白混合凝胶对关节软骨细胞合成Ⅱ型胶原的影响

目的：以胶原蛋白和人血纤维蛋白混合物为载体在体外进行关节软骨细胞三维立体培养,构建人工软骨组织,研究载体对软骨细胞在其中的表达及合成Ⅱ型胶原的影响。方法：取2周龄的新生兔关节软骨,经消化,将获得的软骨细胞与牛Ⅰ型胶原、人血冻干纤维蛋白原、凝血酶按一定比例混合,制成软骨培养物并在体外培养。培养第3周时,取材进行Masson染色、Ⅱ型胶原寡核苷酸探针原位杂交和Ⅱ型胶原的免疫组化观察。 结果：体外培养3周,培养物内细胞大部分存活, Masson染色形成软骨陷窝,同源性细胞簇出现,细胞周围有蓝色物质环绕存在,原位杂交证实其软骨细胞表达Ⅱ型胶原mRNA,免疫组化证实软骨细胞分泌Ⅱ型胶原。 结论：用胶原蛋白和人血纤维蛋白为载体支架体外培养软骨细胞,可促进关节软骨细胞合成分泌Ⅱ型胶原,Ⅱ型胶原是软骨组织最主要的细胞外基质成分。     

高选择性非甾体抗炎药塞来昔布对大鼠骨关节炎关节软骨的影响

目的探讨长期应用高选择性NSAIDs（塞来昔布）对大鼠骨关节炎关节软骨代谢的影响。方法采用左侧跟腱切除术诱发wistar大鼠同侧膝关节骨关节炎（OA），分4组，每日给赛来昔布24mg／kg（CE组）、布洛芬72mg／kg（IBP组）、吲哚美辛9mg／kg（IN组）及生理盐水（NS组）。观察3、6及9个月后关节软骨组织学、蛋白多糖（PG）含量、Ⅱ型胶原表达及软骨细胞超微结构的变化。结果CE、NS组软骨表现为OA的渐进过程，CE组改变较NS组轻；IN组软骨损害明显重于NS组；IBP组介于两者之间。CE明显增加OA软骨基质PG含量；IBP的短、中期应用对PG的含量无明显影响，其长期应用减少PG含量；IN明显减少PG含量。CE、IBP促进OA软骨细胞Ⅱ型胶原的表达，IN抑制Ⅱ型胶原的表达。电镜观察：CE组、NS组的软骨细胞表现类似，但CE组可见发达的粗面内质网、高尔基复合体；IBP组：细胞周晕逐渐消失，核染色质结构模糊；IN组：软骨细胞的电子密度明显增加、溶解性坏死多见。结论塞来昔布可抑制大鼠OA关节软骨的退变，对退变的关节软骨可能有一定的修复作用。     

黄芪甲苷对人膝骨关节炎退变软骨细胞Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达的影响

目的:观察黄芪甲苷对原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞的Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达影响,初步探讨黄芪甲苷防治膝骨关节软骨退变的作用机制。方法:原代培养骨关节炎患者的膝关节软骨细胞,用第三代细胞进行试验。将5个不同浓度的黄芪甲苷,分别作用于关节软骨细胞4、8、24、48、72h后,采用Real Time-PCR法检测细胞中Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)、蛋白多糖基因(ACAN)的mRNA表达。结果:黄芪甲苷浓度为25~75mmol/L,作用于退变关节软骨细胞24~72h时,软骨细胞Col Ⅱ和ACAN mRNA的表达量均较对照组显著增加。结论:黄芪甲苷可延缓膝骨关节炎关节软骨细胞的退变,促进软骨细胞ColⅡ及ACAN mRNA的表达可能是其作用机制之一。     

骨性关节炎关节软骨内Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原表型的实验研究

目的对骨性关节炎（OA）关节软骨内Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原进行动态观察. 方法采用兔膝关节伸直位制动的OA动物模型,对不同制动时间动物的右侧股骨内髁关节软骨进行Mankin评分,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原的免疫组化测定. 结果 OA早期Ⅱ型胶原量增加,但随着OA病变的发展从切线层向深层逐渐丧失.OA关节软骨内无Ⅰ型胶原的分泌,但出现Ⅲ型胶原,其量随着病变发展有呈增加趋势,同时在病变中也受到破坏. 结论 OA关节软骨的胶原类型以Ⅱ型胶原为主,但出现Ⅲ型胶原.     

软骨细胞培养过程中细胞反分化的研究

软骨细胞化生与反分化是关节软骨损伤病理及修复过程中的重要现象,本文主要是研究培养软骨细胞的反分化现象。结果显示:(1)培养的软骨细胞有反分化,传至4代时多数细胞由园形变为棱形,硫酸软骨素丧失。(2)反分化为一渐进过程,传代时,以Ⅱ型胶cDNA探针与培养细胞mRNA原位杂交证明细胞内Ⅱ型前胶原渐减少;Ⅲ型胶原单抗荧光染色显示Ⅲ型胶相反渐增多。(3)Ⅱ、Ⅲ型胶原抗体对培养的软骨细胞有抑制合成DNA、粘多糖及胶原的作用。     

连接蛋白43在骨关节炎发病机制中的研究进展

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是常见的关节疾病,也是导致残疾的主要原因之一,给患者及家庭带来巨大的经济生活负担。虽然OA的发病机制至今尚未完全明确,但关节软骨代谢平衡的破坏被认为与骨关节炎的发生息息相关。研究发现连接蛋白43(connexin43)在维持关节软骨代谢平衡的稳态中发挥着至关重要的作用,它所参与形成的半通道(hemichannels)和缝隙连接(gap junctions)在细胞与细胞外基质,以及细胞之间建立起直接的物质信号交换通道。同时,连接蛋白43的高表达和(或)分布的变化都将影响软骨细胞结构和功能的完整性。因此,连接蛋白43被认为与骨关节炎的发生有着密切关系。本文就连接蛋白43与骨关节炎发病机制的研究进展做一综述。     

转化生长因子β1在骨赘发生过程中的基因表达

目的探讨转化生长因子β1在骨关节炎骨赘发生过程中的基因表达及作用特点。方法选取接受全膝关节置换术的原发性骨关节炎骨赘标本25例,制备石蜡切片,行HE和甲苯胺蓝染色及I型、Ⅱ型(Ⅱa和Ⅱb)和Ⅹ型胶原分子的免疫组织化学染色。根据骨赘中主要组织的细胞数量与间质含量等组织学特征、蛋白多糖含量及Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb和Ⅹ型胶原分子的表达特点将骨赘进行分类。每类组织分别进行转化生长因子β1的免疫组织化学和原位杂交染色。结果共获得5种不同类型的骨赘,分别标记为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型骨赘。转化生长因子β1mRNA主要在Ⅱ和Ⅲ类骨赘的软骨细胞显著表达,在其他类型骨赘的软骨细胞内表达较少(P<0.05,P<0.01)。结论转化生长因子β1mRNA在骨赘形成的早期和中期显著表达,其主要作用可能在骨赘早期的软骨发育阶段促进软骨细胞的增殖和分化成熟。     

沉默信息调节因子2在人骨关节炎软骨组织及细胞中的表达

目的 检测沉默信息调节因子2(SIRT2)在人软骨中的表达,探讨其在骨关节炎(OA)与正常软骨组织及细胞中表达的差异性.方法 选取临床20例骨关节炎关节软骨,为OA组;另取10例正常关节软骨,为对照组.免疫荧光染色法检测SIRT2在两组软骨组织的表达分布及表达情况.分离软骨细胞并进行细胞传代培养,甲苯胺蓝染色进行细胞鉴定,Western blot法检测软骨组织及细胞中SIRT2的表达情况.结果 免疫荧光染色结果显示SIRT2表达于软骨组织中,分布在细胞核与细胞质中,OA组SIRT2阳性细胞率较对照组明显降低(P<0.01);Western blot结果显示OA组软骨组织中SIRT2表达显著低于对照组(P<0.01),软骨细胞中SIRT2的表达亦显著低于对照组(P<0.01).结论 SIRT2在人类软骨组织中有表达,具体表达在细胞核与细胞质中,SIRT2表达降低可能导致骨关节炎的发生及进展.     

环状RNA在骨关节炎调控的研究进展

骨关节炎(osteoarthritis,OA)是常见的关节退行性病变,常表现为关节疼痛及活动受限。不可逆的软骨退变与软骨下骨骨质破坏是其最主要的病理改变。OA早期诊断困难,大多数晚期患者因此接受关节置换。环状RNA(circRNAs)是一类特殊的非编码RNAs,由碱基组成闭环结构,广泛存在真核生物中。作为调节细胞代谢的重要分子,circRNAs近年来被发现在骨关节炎中异常表达,参与软骨破坏及关节无菌性炎症等生物学行为。同时,circRNAs的环状结构使其能在血液中稳定存在,具有骨关节炎早期诊断、疗效评估及治疗的潜力。现就circRNAs及其在骨关节炎调控的研究进展展开论述。     

下颌牵张成骨中髁突软骨Ⅲ型胶原的变化

目的：观察下颌牵张成骨中髁状突胶原的变化特征，探讨牵张成骨对关节软骨的影响．方法：采用SABC免疫组化方法检测犬在下颌双侧牵张成骨固定期的不同阶段(0，2，4和8wk)Ⅲ型胶原分布及含量的变化．结果：Ⅲ型胶原的表达随时问的延长逐渐增加，至4wk达到顶峰，随后逐渐减弱．结论：在下颌双侧牵张成骨中，颞下颌关节软骨发生适应性改建，软骨细胞合成及分泌胶原的能力发生改变．     

骨关节炎的可溶性生物标志物研究进展

近年来,骨关节炎(OA)标志物的研究主要集中在软骨基质的结构成分上.测量软骨基质中胶原Ⅲ和Ⅹ的降解情况对Ⅱ型胶原的降解十分重要.然而,由于缺乏临床数据的支撑,尚不清楚它们是否可以作为一种替代或比目前更成熟的生物标志物联合使用来评估骨关节炎患者.现就骨关节炎可溶性生物标志物及其对OA诊治及预后的影响作一综述.     

骨关节炎基质金属蛋白酶1、2、3及其抑制物的表达与软骨退变的关系

目的　探讨骨关节炎关节软骨中基质金属蛋白酶 (MMPs) 1、2、3及其抑制物 (TIMPs) 1、2的免疫组化表达及与软骨退变的关系。方法　 2 2例因骨关节炎行关节置换的软骨组织常规HE染色观察其组织学变化 ,ABC免疫组化法观察关节软骨MMP 1、2、3和TIMP 1、2的表达 ,经图像分析研究MMP 1、2、3和TIMP 1、2与软骨组织学退变的关系 ,5例因股骨颈骨折行关节置换的软骨标本为正常对照。结果　骨关节炎关节软骨出现纤维化、裂隙、变薄 ,软骨细胞数量减少 ;MMP 1、3和TIMP 1在正常软骨无表达 ,在中度退变软骨中表达明显升高 ,在重度退变软骨中表达降低 ,TIMP 1与MMP 1表达升高不平行 ;MMP 2和TIMP 2在正常软骨低表达 ,在中度退变软骨中表达升高 ,在重度退变软骨表达降低 ,但TIMP 2表达升高。结论　在骨关节炎中MMP 1、2、3和TIMP 1、2表达异常 ,引起细胞外基质异常降解 ,是导致关节软骨发生组织学退变的原因之一     

程序化死亡基因5(PDCD5)在骨关节炎软骨中的表达及意义

目的：研究程序化死亡基因5(PDCD5)在正常及骨关节炎关节软骨中的表达规律，探讨PDCD5在骨关节炎发病中的作用。方法：取20例骨关节炎及10例股骨颈骨折行关节置换术时切除的关节软骨，分离软骨细胞，留取组织块制作石蜡切片。分别用流式细胞术、直接免疫荧光、激光共聚焦显微镜及RT-PCR检测PDCD5在正常及骨关节炎软骨细胞内的表达水平及部位，免疫组织化学检测PDCD5在关节软骨内的表达特征。结果：在骨关节炎软骨细胞中PDCD5表达上调，以细胞核内增强为主；在骨关节炎的组织切片中PDCD5表达增强，阳性细胞主要分布在表层及深层，而在股骨颈骨折中PDCD5阳性细胞主要分布在表层及中层。结论：PDCD5可能参与了骨关节炎软骨细胞的凋亡过程，在骨关节炎的发病中发挥作用。     

补肾活血方对骨关节炎关节软骨保护作用的临床研究

为探讨补肾活血方对骨关节炎关节软骨的保护作用,选取膝关节炎患者60例,随机分为补肾活血方组和西乐葆组各30例,单盲给药,用平均Womac关节炎指数评分和平均OA严重程度指数评定2组用药前后临床症状的改善情况,采用夹心酶联免疫吸附法测定血清蛋白聚糖与Ⅱ型胶原表达.结果:6个月后补肾活血方组的改善明显优于西乐葆组(P＜0.01);蛋白聚糖和Ⅱ型胶原表达变化治疗前后比较,有显著性差异(P＜0.01).说明补肾活血方对骨关节炎的关节软骨有保护和促进修复的作用.     

骨关节炎关节软骨退变机制的研究进展

近年来研究表明,关节软骨退变在骨关节炎的发病中起着重要作用。软骨退变是多因素综合作用的结果 ,如关节所处的力学环境、自身激素代谢的水平、软骨细胞的凋亡、相关细胞因子及基质金属蛋白酶的作用等。阐明这些因素在关节软骨退变中的机制,将有利于提高对骨关节炎的认识,从而为临床治疗骨关节炎提供新的理论依据。     

TGF－β1和bFGF在膝骨关节炎患者关节软骨和骨赘中表达分布的分析研究

目的：探讨TGF－β1和bFGF在膝骨关节炎患者骨赘中和关节软骨表达和分布的情况。方法：取12例诊断为膝骨关节炎且在影像学上可有明显的骨赘形成并行全膝置换患者的膝关节软骨以及骨赘,采用免疫组化对TGF－β1和bFGF表达以及分布情况进行分析。结果：免疫组化链菌素亲生物素蛋白－过氧化酶连接法证实在12例标本的关节软骨和骨赘中TGF－β1和bFGF均有表达;TGF－β1在骨赘的浅层有高强度阳性表达,在深层未有表达;而在退变软骨的浅层只有弱强度阳性表达,深层为阴性表达;而且TGF－β1在骨赘中的表达强度要强于关节软骨。而bFGF在骨赘和软骨的整个层面均有阳性表达。结论：TGF－β1和bFGF参与了骨赘的形成和软骨退变,对骨关节炎的进展有着重要的影响,TGF－β1和bFGF这种表达的差异性,表明这2种生长因子在骨关节炎患者骨赘形成中对骨与软骨代谢起着不同的作用,TGF－β1相比bFGF似乎与骨赘的形成更加相关。     

软骨下骨作为骨关节炎治疗靶点的研究进展

骨关节炎是关节疾病的主要类型之一,严重影响人群的生活质量。长期以来关节软骨的修复障碍一直被认为是关节退化的主要原因,现在人们逐步认识到软骨下骨及其分子代谢在骨关节炎的发生发展中发挥了重要作用,但关节软骨与软骨下骨在骨关节炎中产生相关分子代谢之间的联系尚不明确,对于软骨下骨的分子水平改变的阐述对于骨关节炎的早期诊断以及寻找有效的治疗手段都会有重要意义。     

转化生长因子β1/结缔组织生长因子通路在强直性脊柱炎中的表达

目的:了解强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)骶髂关节中转化生长因子β1(transforming growthfactor beta 1,TGF-β1)/结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)通路的主要分子表达情况,探讨TGF-β1/CTGF通路与AS关节纤维化的关系。方法:30例AS患者均通过酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosor-bent assay,ELISA)法检测血清TGF-β1、CTGF水平,通过免疫组织化学方法检测TGF-β1、p-smad3、smad7、CTGF、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的表达。结果:与正常对照相比,AS骶髂关节组织可见TGF-β1、CTGF高表达,主要在骨髓及血管翳中炎症细胞的胞浆中表达;smad7明显低表达,p-smad3则主要表达于骨髓及血管翳中炎症细胞的细胞核中,提示smad3已被激活;Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原大量沉积,但血清中的TGF-β1和CTGF的水平与正常对照组间差异无统计学意义。结论:AS骶髂关节存在TGF-β1的过高表达,smad信号通路的激活,samd7的低表达,导致CTGF高表达,Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原大量沉积。     

iPSC-MSCs体外对骨关节炎患者关节软骨组织的基质保护作用全文替换

目的 研究多能诱导干细胞来源的间充质干细胞(iPSC-MSCs)体外对膝骨关节炎(KOA)患者关节软骨组织的基质保护作用及部分机制。方法 经知情同意,收集KOA患者关节软骨,剪碎处理后加入IL-1β(10 ng/ml)刺激96 h,再分别加入不同数量的iPSC-MSCs(1×10~5、1×10~6、1×10~7)细胞,在37℃、5% CO₂培养箱内培养3 d。另设IL-1β(10 ng/ml)诱导组和培养液对照组。硫酸软骨素含量测定法检测软骨组织中糖胺聚糖含量,免疫组化法检测组织中Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原表达,ELISA法检测共培养上清液中MMP13、IL-6、IL-10水平,HE染色检测离体软骨组织的病理改变。结果 与对照组比较,IL-1β可诱导KOA软骨组织中软骨细胞肿胀死亡,炎性细胞比例升高,Ⅰ型胶原水平升高、Ⅱ型胶原水平降低,培养上清液中MMP-13、IL-6水平升高(P<0.01),IL-10和糖胺聚糖含量减少(P<0.01);与IL-1β诱导组比较,iPSC-MSCs不同细胞数共培养可降低上清液中MMP-13、IL-6水平和Ⅰ型胶原水平,促进Ⅱ型...