免疫PCR

将抗原抗体反应与ＰＣＲ技术结合在一起建立了一种新的检测微量抗原的技术，这种技术称之为免疫ＰＣＲ，其具有非常高的敏感性，比ＥＬＩＳＡ敏感１０＾５倍，在理论上可以检测到一个分子的抗原，因此，免疫ＰＣＲ具有非常广泛的应用前景。     

免疫PCR方法的研究进展

免疫ＰＣＲ方法（Ｉｍｍｕｎｏ－ＰＣＲ）是Ｔａｋｅｓｈｉ等１９９２年将免疫学反应和ＰＣＲ技术相结合而创建的一种新的检测技术。因此具有抗原、抗体反应的特异性和ＰＣＲ技术的高效性。免疫ＰＣＲ方法的创建，拓宽了免疫学技术的应用范围，但还存在着稳定性差和本底高等问题。     

单纯表达CD38抗原难分类急性白血病细胞起源的研究

采用单克隆抗体免疫酶和聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，研究７例单纯表达ＣＤ３８抗原难分类急性白血病（ＵＡＬ）化疗前后免疫表型和免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）和Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）γ基因重排，结果表明：化疗前３例检测到ＴＣＲγ基因重排，化疗后４例表达Ｔ细胞分化抗原，并伴ＴＣＲγ基因重排；１例化疗后表达髓细胞抗原，无ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排；２例化疗前后仅表达ＣＤ３８抗原，亦无ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排。提示动态     

应用逆转录PCR技术检测细胞因子基因表达

逆转录ＰＯＲ（ＲＴ－ＰＵＲ）可以快速、灵敏地检测表达很低或只有几个细胞表达的细胞因子ｍＲＮＡ。这项技术又叫细胞因子ｍＲＮＡ扩增测定技术（即ＭＡｐｐｉｎｇ）。可同时测定各种细胞中多种细胞因子ｍＲＮＡ。操作过程包括ＫＮＡ，分离、ｍＫＮＡ逆转录为ｃＤＮＡ，ＰＣＲ扩增、产物检测等。根据定量细胞因子ｍＲＮＡ原理和方法的不同，可分为半定量ＰＣＲ法、竞争性定量ＰＣＲ法、内参标定量ＰＣＲ法、ＨＰＬ－ＰＣＲ法以及酶联免疫定量ＰＣＲ５种方法。该法由于非常敏感，易产生假阳性结果，一般实验中常设置阴性对照，本文拟就有关问题作一综述。     

乳头瘤病毒16型E6,P53,RB,PCNA在宫颈癌中的表达…

应用核酸原位杂交和免疫组织化学技术，检测人子宫颈癌中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６型Ｅ６ＲＦ与抑癌基因产物Ｐ５３，ＲＢ和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）。在４４例宫颈癌石蜡切片中，原位杂交检测出ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ阳性２７例（６１．３６％），其中免疫组化检测出Ｐ５３、ＲＢ、ＰＣＮＡ一分别为８例（２９．６３＃），１４例（５２．８５％）、２０例（７４．０７％），而在１７例ＨＰＶ１６Ｅ６阴性 本中Ｐ５３、ＲＢ、Ｐ     

间接法原位PCR检测喉鳞癌组织HPV感染

建立稳定的原位ＰＣＲ方法，并探讨ＨＰＶ感染与喉鳞癌发生的关系。方法采用免疫组化、原位杂变、ＰＣＲ和间接原位ＰＣＲ技术，检测了５０例喉鳞癌中的ＨＰＶ感染情况。结果免疫组化衣壳抗原阳性者６例（１２％），原位杂交阳性者１３例（２６％），ＰＣＲ阳性者１０例（２０％），原位ＰＣＲ阳性者１７例（３４％），综合上述方法的检出率为４２％（２１例）。结论ＨＰＶ感染与喉癌有着明显的关系，间接原位ＰＣＲ在检测ＨＰＶ感染     

自身抗原Ro 52 kd多肽分子cDNA表达克隆的构建及其融合蛋白在大肠杆菌中的表达

采用ＰＣＲ法克隆自身抗原Ｒｏ５２ｋｄ多肽分子的ｃＤＮＡ，定向插入表达载体ＰＧＥＸ－４Ｔ－１，并导入大肠杆菌中表达重组融合蛋白，经免疫印迹法表明，重组融合蛋白具有Ｒｏ５２ｋｄ的抗原性。这为今后对Ｒｏ５２ｋｄ抗原表位的精确定位，分析特定抗原表位与疾病的相关性及制备重组抗原用于临床检测奠定了基础。     

器官移植术后外周血巨细胞病毒及其抗原和DNA的检测

目的　探讨及时诊断器官移植受者术后活动性巨细胞病毒（ 简称ＣＭＶ） 感染。方法　采集３２ 例器官移植受者术后８９ 份血标本,同时用酶免疫组织化学作抗原血症和病毒分离培养作病毒血症的检测。再以原位杂交（ＩＳＨ） 和聚合酶链反应（ＰＣＲ） 作ＤＮＡ 血症的检测。结果　８９ 份血标本中,抗原血症阳性３５ 份（３９－３％ ）,病毒血症阳性２５ 份（２８－１ ％） ,ＤＮＡ 血症的位杂交检测阳性３７ 份（４１－６ ％） 及ＤＮＡ血症ＰＣＲ 检测阳性５１ 份（５７－３％ ）。结论　ＤＮＡ血症原位杂交和ＰＣＲ 技术及抗原血症的检测方法,具有检测率高且时间早的优点,能作为临床快速检测ＣＭＶ的方法。本结果与移植受者的临床症状相关,可作为监视器官移植受者术后ＣＭＶ感染和指导抗病毒治疗的依据     

自身抗原Ro52kd多肽分子cDNA表达克隆的构建及其融合蛋白在大 …

采用ＰＣＲ法克隆自身抗原Ｒｏ５２ｋｄ多肽分子的ＣＤＮＡ，定向插入表达载体ＰＧＥＸ－４Ｔ－１，并导入大肠杆菌中组融合蛋白，经免疫印迹法表明，重组融合蛋白具有Ｒｏ５２ｋｄ的抗原性，这为今后对Ｒｏ５２ｋｄ抗原表位的精确定位地分析特定抗原表位与疾病的相关性及制备重组抗原用于临床检测奠定了基础。     

成人原发性肾病综合征HLA-DR基因频率

原发性肾病综合征 (ｎｅｐｈｒｏｔｉｃｓｙｎｄｒｏｍ ,ＮＳ)是肾小球疾病的一种主要临床表现 ,其症状为高度水肿、大量蛋白尿、高脂血症和低蛋白血症。其发病机理尚不清楚。为了探讨人类白细胞抗原 (ＨＬＡ) ,尤其是ＤＲ抗原与本病的免疫遗传机制有否关联 ,以往的学者多采用血清学技术或特异性寡核苷酸探针杂交及聚合酶链反应 (ＰＣＲ ＳＳＯ)技术检测ＮＳ患者的ＨＬＡ ＤＲ基因频率。本研究利用序列特异性引物 聚合酶链反应 (ＰＣＲ ＳＳＰ)技术 ,检测成人原发ＮＳ患者的ＨＬＡ ＤＲ基因频率 ,试图发现与本病关系最密切的ＨＬＡ ＤＲ等…     

THE ANALYSIS OF GENE REARRANGEMENT OF ACUTE LEUKEMIAS IN DIFFERENT CLASSIFICATION BETWEEN MORPHOLOGY AND IMMMUNOLOGY

为探讨形态学和免疫学分型不一致的急性白血病细胞起源，采用ＰＣＲ技术分析１４例形态学和免疫学分型不一致急性白血病的ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因重排。结果发现在９例分别表达Ｂ或Ｔ细胞分化抗原的白血病中，有７例检测到相应的ＩｇＨ或ＴＣＲγ基因重排，２例具有ＩｇＨ和ＴＣＲγ基因双重排；在５例缺乏细胞系限抗原表达的白血病中，有４例检测到ＴＣＲγ基因重排，１例未检测到ＩｇＨ或ＴＣＲγ基因重排，其白血病细胞分别起源于Ｔ细胞和髓细胞。表明基因重排分析在白血病分型中具有重要参考价值     

一种检测肿瘤癌基因扩增的新技术一差别PCR技术

一种检测肿瘤癌基因扩增的新技术一差别ＰＣＲ技术方刚，于泽平，刘复坤（南京军区总医院肿瘤室，南京２１０００２）差别ＰＣＲ技术，快速、敏感无同位素污染，该技术的检测原理是在一定的ＰＣＲ反应条件下，ＰＣＲ产物的量与ＰＣＲ模板的拷贝数是正相关，反映了模板拷贝...     

免疫组织化学在淋巴瘤诊断和鉴别诊断中的应用

免疫组织化学在淋巴瘤诊断和鉴别诊断中的应用李甘地近年来，免疫组化技术有了长足的进步，如抗原恢复技术（ａｎｔｉｔｇｅｎｒｅｔｒｉｅｖａｌ，包括微波，高压锅处理等），ＬＳＡＢ法，以及新的单克隆抗体等等。加上原位杂交技术，ＰＣＲ技术等分子生物学技术在病理学...     

白血病患儿巨细胞病毒感染的PCR与抗原检测方法比较

目的 对不同种类标本应用ＰＣＲ检测巨细胞病毒（ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ,ＣＭＶ）ＤＮＡ,并与外周血白细胞ＣＭＶ抗体检测比较,以了解ＰＣＲ方法在诊断白血病患儿活动性ＣＭＶ感染时的意义。方法 实验组为３１例白血病患儿,对照组为３１例免疫功能正常儿童,两组儿童的年龄、性别无差异。应用ＰＣＲ方法检测血清、尿液和脑脊液ＣＭＶ ＤＮＡ,间接免疫荧光方法检测外周血白细胞ＣＭＶ抗原,ＥＬＩＳＡ方法检测血清抗     

用基因工程表达的抗原早期诊断鼻咽癌

目的为了建立鼻咽癌（ＮＰＣ）早期诊断方法。方法以基因工程表达的、经纯化的ＥＢ病毒（Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｖｉｒｕｓ，ＥＢＶ）早期抗原（ＥＡ）成分ＥＡ－Ｄ和ＥＡ－Ｒ作为诊断抗原，建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），检查３０例ＮＰＣ病人及４９例正常人血清中的ＥＡ／ＩｇＡ抗体。结果用ＥＬＩＳＡ检测抗体较用细胞涂片免疫酶方法（ＩＥ）敏感。ＥＬＩＳＡ检测ＮＰＣ病人血清中ＥＡ／ｌｇＡ抗体，阳性率为１００％，ＥＡ／ｌｇＡ抗体效价均≥１∶１００。而用ＩＥ法，平行检测３０例ＮＰＣ病人血清中ＥＡ／ｌｇＡ抗体效价，结果６例为阴性（＜１∶１０），抗体阳性率为７０％。ＥＬＩＳＡ明显地提高了ＮＰＣ的检出率。以ｐ１３８（ＥＡ－Ｒ）和ｐ５４（ＥＡ－Ｄ）分别或混合包被，检测对ＥＢＶ特异的ＥＡ－Ｄ和ＥＡ－Ｒ的抗体。结论表明在ＮＰＣ病人血清中存在对ＥＡ两种抗原的抗体，对ＥＡ－Ｄ的抗体滴度高于对ＥＡ－Ｒ的抗体。因此，以两种抗原混合包被作为诊断抗原建立的ＥＬＩＳＡ方法，为ＮＰＣ的早期诊断提供更敏感、特异和简便的手段。     

PCR与单克隆抗体ELISA夹心法快速诊断结核病的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术建立的扩增结核杆菌复合体特异重复序列ＩＳ９８６基因的方法和用单克隆抗体ＴＢ１５－Ｃ３经ＥＬＩＳＡ夹心法检测结核杆菌特异性抗原决定簇，对１０种抗酸杆菌，２种普通菌进行了检测。ＰＣＲ仅对结核杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＥＬＩＳＡ检测除人型结核杆菌、ＢＣＧ阳性外，还与鸟型及瘰疬分枝杆菌反应阳性。ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性为１ｐｇ，相当于１３个左右细菌，ＥＬＩＳ     

PCR与单克隆抗体ELESA夹心法快速诊断结核病的研究

应用聚合酶性反应（ＰＣＲ）技术建立的扩增结核杆菌复合体特异重复序列ＩＳ９８６基因的方法和用单克隆抗体ＴＢ１５－Ｃ３经ＥＬＩＳＡ夹心法检测结核杆菌特异性抗原决定簇，对１０种抗酸杆菌，２种普通菌进行了检测．ＰＣＲ仅对结核杆菌复合体扩增出２４５ｈｐ特异性条带，ＥＬＩＳＡ检测除人型结核杆菌、ＢＣＧ阳性外，还与鸟型及瘰疬分枝杆菌反应阳性．ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性为１ｐｇ，相当于１３个左右细菌，ＥＬＩＳＡ检测的被感性为１５ｎｇ／ｍｌ．应用ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ检测了９６份结核临床标本．ＰＣＲ的检出率高于抗酸染色涂片的阳性率（Ｐ＜０．０５），ＰＣＲ的检出率虽高于细菌培养的阳性率，但相差不显著（Ｐ＞０．０５）．ＥＬＩＳＡ检测阳性率明显高于抗酸染色涂片、细菌培养和ＰＣＲ的阳性率（Ｐ＜０．００１）．ＥＬＩＳＡ的假阳性率高于ＰＣＲ的假阳性率，但相差不显著（Ｐ＞０．０５）．研究表明，ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ均是特异、敏感、快速的诊断结核病的方法．但在使用中又各自有其特点．     

用抗原捕捉PCR法检测环境样本中HAV

用抗原捕捉ＰＣＲ法检测环境样本中ＨＡＶ［英］／／Ｄｅｎｇ－ＭＹ…／／Ａｐｐｌ－Ｅｎｖｉ－ｒｏｎ－Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．－１９９４，Ｊｕｎ；６０（６）．－１９２７～１９３３本文研究了检测环境样本中ＨＡＶ的抗原捕捉ＰＣＲ法（Ａｃ－ＰＣＲ）。从增殖后废液和具...     

乳头瘤病毒16型E6,P53,RB,PCNA在宫颈癌中的表达状态及相关性

应用核酸原位杂交和免疫组织化学技术，检测人子宫颈癌中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６型Ｅ６ＯＲＦ与抑癌基因产物Ｐ５３，ＲＢ和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）。在４４例宫颈癌石蜡切片中，原位杂交检测出ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ阳性２７例（６１．３６％），其中免疫组化检测出Ｐ５３、ＲＢ、ＰＣＮＡ阳性分别为８例（２９．６３％），１４例（５２．８５％）、２０例（７４．０７％），而在１７例ＨＰＶ１６Ｅ６阴性标本中Ｐ５３、ＲＢ、ＰＣＮＡ阳性分别为７例（４１．１７％），９例（５２．９４％）、１２例（７０．５８％）。而在５例正常宫颈组织中未测出ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ，ＰＣＮＡ只在宫颈组织上皮基底层细胞中表达。统计学分析表明，ＨＰＶ１６Ｅ６与宫颈癌密切相关（Ｐ＜０．０５），ＰＣＮＡ在宫颈癌与正常宫颈组织中有显著性差异（Ｐ＜０．０５）。未能发现宫颈癌组织中ＨＰＶ１６Ｅ６ＯＲＦ与Ｐ５３蛋白相关性（Ｐ＞０．０５）。     

应用多重等位基因特异PCR技术进行β地中海贫血的…

在等位基因特异ＰＣＲ及多重ＰＣＲ的基础上建立了多重等位基因特异ＰＣＲ技术（ＭＡＳ－ＰＣＲ），对中国人常见的２８Ａ→Ｇ，ＣＤ１７→０，ＣＤ４１－４２（－４ｂｐ）和ＣＤ７１－７２（＋Ａ）等β地中海贫血基因突变进行检测。应用该技术对２１例β地中海贫血患者或携带者进行诊断和２例高风险胎儿进行产前诊断，诊断结果与ＰＣＲ／ＡＳＯ探针点杂交或ＤＮＡ测序的结果完全一致，证实多重等位基因特异ＰＣＲ技术具有简便、快速