Daxx基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的:研究死亡结构域相关蛋白(Daxx)基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征,初步探讨其在生精过程中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR(q PCR)、Western印迹及免疫荧光等方法检测Daxx在不同周龄野生型小鼠睾丸组织以及成年睾丸支持细胞雄激素受体特异性敲除(SCARKO)和雄激素受体敲除(ARKO)小鼠睾丸中的表达特征。结果:q PCR、Western印迹和免疫荧光结果表明,Daxx基因在出生4周后小鼠睾丸中高表达,且主要定位于细胞核;与野生型小鼠相比,SCARKO小鼠睾丸中DAXX的表达差异不显著(0.853±0.058 vs1.000±0.015),但在生精细胞细胞核中呈极性分布;DAXX在ARKO小鼠睾丸表达显著降低(0.299±0.026 vs1.000±0.015,P0.01)。结论 :Daxx基因在小鼠睾丸发育中期时表达最高。ARKO小鼠中DAXX的表达与野生型相比显著降低,睾丸支持细胞中AR基因特异性敲除影响DAXX定位。DAXX可能参与调控小鼠的精子发生过程。     

Ccdc70基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的:探讨Ccdc70(Coiled-coil domain containing 70)基因在小鼠睾丸中的表达特征并分析其在生精过程中的潜在功能。方法:经表达谱芯片筛选出小鼠睾丸特异性基因Ccdc70,通过RT-PCR、real-time PCR、Western印迹及免疫组化检测Ccdc70基因在成年小鼠睾丸中表达特征,并对该蛋白做相关的生物信息学分析。结果:RT-PCR、real-time PCR和Western印迹结果表明Ccdc70基因在小鼠睾丸中高表达,在附睾中低表达;免疫组化结果表明Ccdc70蛋白在睾丸中主要表达于小鼠精母细胞和圆形精子胞质,在附睾中主要表达在附睾管上皮细胞。生物信息学分析显示该蛋白存在一个CCDC结构域,并在哺乳动物进化过程中高度保守。结论:Ccdc70为小鼠睾丸高表达基因,且主要表达于精母细胞、圆形精子及附睾管上皮细胞,提示其可能参与调控小鼠精子发生过程及附睾精子的进一步成熟。     

不同发育阶段Fmr1基因敲除小鼠睾丸组织iNOS的变化

目的:对不同周龄的Fmr1(fragile X mental retardation 1)基因敲除和野生型雄性小鼠睾丸组织诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)的表达进行分析比较,探讨Fmr1基因敲除小鼠睾丸组织中iNOS表达的差异,为脆性X综合征的研究提供背景资料。方法:不同周龄(4、6、8、10周)的Fmr1基因敲除型和野生型雄性小鼠各6只,先采用PCR技术对基因敲除和野生型小鼠进行基因型鉴定,之后所有小鼠麻醉取睾丸组织,采用石蜡包埋切片免疫组化染色技术对基因敲除和野生型小鼠睾丸iNOS的表达进行检测并作对比分析。结果:iNOS在4周野生型小鼠睾丸间质细胞呈弱阳性表达,在6周小鼠呈阳性表达,在8周和10周小鼠呈强阳性表达,且基因敲除小鼠睾丸的iNOS表达均弱于野生型小鼠。结论:Fmr1基因敲除小鼠在缺失FMR1蛋白(FMRP)后的睾丸组织中iNOS的表达降低。     

蛋白酶体REGγ对雄性小鼠生精功能的影响

目的研究蛋白酶体REGγ对雄性小鼠生精功能的影响。方法利用免疫蛋白印迹检测小鼠睾丸中REGγ的表达;通过组合酶消化法分离精原干细胞,流式细胞仪检测精原干细胞中c-kit及α6-integrin的表达;通过小鼠精子分析仪检测REGγ基因敲除雄鼠的精子浓度和精子活力;进行小鼠合笼实验检测正常雌鼠和REGγ基因敲除雄鼠合笼后的生育力。结果 REGγ在小鼠睾丸中高表达;应用组合酶消化法得到了纯度70%的精原干细胞;REGγ基因敲除雄鼠精原干细胞的c-kit及α6-integrin表达量均显著低于野生型组(P0.05);REGγ基因敲除型雄鼠的平均精子浓度(37.1×106/ml)和精子活力(54%)均显著低于野生型雄鼠(75.4×106/ml、74%)(P0.05);REGγ基因敲除型雄鼠与野生型雌鼠合笼后的产仔数均低于野生型雄鼠(P0.05)。结论蛋白酶体REGγ参与调节雄鼠的生精功能。     

肝细胞特异性HuR基因敲除小鼠模型的表型研究

目的 探讨肝细胞特异性敲除HuR基因对小鼠肝脏功能的影响。方法 从美国Jackson实验室引进LoxP标记的人抗原R（human antigen R,HuR）基因小鼠（HuR^fl/fl）和Alb-Cre转基因小鼠。杂交后,经数代选育配种,建立肝细胞特异性HuR基因敲除小鼠（HuR^LKO）模型。PCR技术鉴别小鼠基因型,蛋白免疫印迹和免疫荧光实验检验小鼠肝脏的HuR表达水平,同时HE染色观察肝脏结构变化。高脂喂养HuR^fl/fl/Alb-Cre和HuR^fl/fl两组小鼠,观察小鼠体重、肝重和肝体比变化,提取血清检测肝脏损伤和脂肪代谢相关指标。结果 PCR成功检测筛选子代小鼠基因型,包括HuR^fl/fl/Alb-Cre和HuR^fl/fl小鼠。蛋白免疫印迹实验和免疫荧光实验证明小鼠肝细胞特异性HuR基因敲除成功。HE染色结果提示HuR^LKO小鼠的肝细胞出现变性水肿、局部坏死。高脂喂养实验提示两组小鼠在肝重、肝体比、AST、ALT、HDL-C、血糖上的差异具有统计学意义（P＜0.05）,但在体重、TG、LDL-C的差异没有统计学意义（P＞0.05）。结论 HuR基因是维持小鼠肝细胞功能的必要基因,Cre-LoxP技术可成功构建HuR^LKO小鼠模型,且特异性高,表型明显,为研究HuR在肝脏各项疾病的发生发展中所扮演的角色,提供了一个很好的疾病模型。     

JMY蛋白在小鼠睾丸中的定位和作用研究

目的研究JMY蛋白在小鼠睾丸组织中的表达与定位,探索JMY在小鼠生精上皮中的功能。方法通过免疫荧光技术和免疫印迹技术确定JMY在小鼠睾丸中的表达和定位情况。随后,分别建立支持细胞和原始生殖细胞特异性的Jmy条件基因敲除小鼠模型,并利用形态学分析、生殖能力评估和血睾屏障功能分析探索JMY缺失对精子发生的影响。结果 JMY在睾丸支持细胞和精子细胞表达。支持细胞特异性的Jmy条件基因敲除可导致雄鼠生育力、精子运动力和精子数量显著下降(P0.05),且生精小管中细胞排列紊乱,生精细胞大量脱落,血睾屏障完整性受损;另一方面,原始生殖细胞特异性的Jmy条件基因敲除雄鼠与野生型小鼠相比,其生育力、精子质量、睾丸结构无显著差异。结论在生精小管支持细胞中,JMY参与维持血睾屏障功能,进而对生精上皮结构和精子发生具有重要作用。     

利用Cre/loxP系统构建胰岛α细胞特异性敲除血管紧张素转换酶2基因的小鼠模型

目的构建α细胞特异性血管紧张素转换酶2(ACE2)敲除小鼠模型, 为研究胰岛α细胞ACE2功能提供基础。方法利用Cre/loxP系统, 将雌性ACE2loxP/WT与雄性Gcg-cre+/-小鼠进行交配, 取鼠尾组织, 通过PCR法鉴定子代基因型。选取基因型为ACE2loxP/y Gcg-cre+/-的雄性小鼠为实验所需要构建的模型小鼠(αACE2KO小鼠)。采用免疫荧光和免疫组织化学法检测ACE2表达。采用独立样本t检验。结果免疫荧光分析提示, 在Gcg-Cre小鼠胰岛中, (55.14±25.33)%的α细胞表达ACE2, 然而αACE2KO小鼠胰岛α细胞中未检测到ACE2表达(t=14.202, P<0.01), 同时αACE2KO小鼠的肝、肾、肺、心和骨骼肌中仍然表达ACE2。结论成功利用Cre/loxP原理特异性敲除α细胞ACE2, 为研究胰岛局部α细胞ACE2功能提供动物模型和基础。     

SPAG6/SPINK2蛋白复合物在小鼠精子顶体形成中的作用初探

目的:初步探讨精子相关抗原6(SPAG6)在小鼠精子发生过程中顶体形成阶段的表达及其调控作用。方法:采用Western印迹检测出生后小鼠睾丸发育不同阶段(第8、12、16、20、24、28、30、35天)中SPAG6的表达;免疫荧光观察SPAG6在生精细胞中的定位;分别构建SPAG6和SPINK2蛋白表达质粒,以AH109和CHO细胞为对象,采用酵母双杂交及细胞内共定位实验检测SPAG6与SPINK2蛋白间相互作用;免疫荧光检测SPINK2在SPAG6基因敲除(KO)小鼠的睾丸生精细胞中的表达与定位。结果:小鼠出生后第16～28天,SPAG6表达显著升高,且定位于圆形精子细胞的顶体;酵母双杂交实验显示SPAG6/SPINK2组能在选择性培养基(SD/-Leu/-Trp/-His)中生长;CHO细胞共转染SPAG6和SPINK2表达质粒时,SPAG6与SPINK2共定位在细胞核周围;SPAG6 KO小鼠睾丸生精细胞中未检测到SPINK2表达及定位于精子顶体。结论:SPAG6与SPINK2形成蛋白复合体,并可能通过调控SPINK2的稳定表达参与精子顶体形成。     

无精子症和生精功能正常者睾丸组织中血红素加氧酶的表达与差异性研究

目的:对人类睾丸组织中表达血红素加氧酶(HO)的细胞进行定位;通过测定原发性无精子症及梗阻性无精子症患者睾丸组织中血红素加氧酶1(HO-1)的表达量与正常睾丸组织中HO-1表达量的差异性,来探讨其与无精子症发病的相关性。方法:应用免疫组化方法对人类睾丸组织中表达HO的细胞进行定位;采用逆转录-荧光定量PCR(FQ-PCR)方法定量检测无精子症患者与正常人睾丸组织HO-1及HO-2基因水平的表达量;应用W est-ern印迹检测各组之间HO蛋白水平表达量。结果:在正常睾丸组织,HO-1主要表达在支持细胞上;而HO-2在支持细胞和各级生精细胞中均有表达;FQ-PCR结果显示非梗阻性无精子症患者睾丸组织HO-1、HO-2的表达量均显著低于正常组及梗阻性无精子症组(P<0.05),差异具有统计学意义。而梗阻性无精子症患者睾丸组织表达HO-1、HO-2的量与正常组相比无显著性差异。W estern印迹结果显示HO-1蛋白水平的表达量差异与基因水平一致。而HO-2的蛋白水平在各组之间表达没有显著性差异。结论:非梗阻性无精子症患者睾丸组织中HO的表达量显著性降低,且HO-1无论是蛋白水平还是基因水平的差异一致。HO-1可以通过抗炎、抗氧化、抗凋亡的机制保护睾丸组织免受各种应激的损伤,从而维护正常的生精功能。可见,HO-1的减少可能与生精功能低下相关,这可能是非梗阻性无精子症的发病机制之一。     

异体异位发育小鼠睾丸组织中精子功能相关基因和蛋白的表达研究

目的:采用已建立的未成熟睾丸组织移植模型,研究异体异位生长发育的小鼠睾丸组织中精子功能相关基因Asrgl1,Gpx4,Asp,Prdx4和Spa17及其相关蛋白GPX-4和PRX-Ⅳ的表达,以迸一步评估该移植模型在生殖医学中应用的可行性.方法:以1～2 d小鼠睾丸组织为供体,7～12周雄性免疫缺陷小鼠为受体进行组织移植;移植8周后收取移植物组织,采用荧光定量PCR法检测移植物中Asrgl1,Opx4,Asp,Prdx4和Spa17的表达情况,并与正常小鼠睾丸组织进行对比;同时采用Western blot检测GPX-4和PRX-Ⅳ 2种蛋白的表达情况.结果:基因检测显示,5种受试基因在移植物中的表达与8周正常小鼠睾丸组织相比均有下调;蛋白分析提示,GPX-4和PRX-Ⅳ 2种蛋白在8周正常小鼠睾丸组织中表达而在小鼠睾丸组织移植物中表达缺陷.结论:几种主要在精子运动、精子顶体形成及精子的受精功能中发挥作用的基因和蛋白在移植物中表达下调及缺失提示,异体异位睾丸组织移植在临床应用的可行性还需进一步评估     

睾丸特异性基因BC051628在小鼠中的表达及生物信息学分析

目的研究睾丸特异性基因BC051628在小鼠中的表达特征。方法通过分析小鼠基因表达谱芯片,发现BC051628基因特异性表达于睾丸组织。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、实时聚合酶链反应(Real-time PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化等方法分析该基因在小鼠不同组织及睾丸不同发育阶段的表达特征。利用生物信息学软件对该基因进行相关生物信息学分析。结果 BC051628基因在小鼠各组织中呈现睾丸特异性表达并伴随明显年龄依耐性。免疫组化染色发现BC051628蛋白主要定位于精原细胞、精母细胞及圆形精子。生物信息学分析发现BC051628基因编码蛋白氨基酸序列在人和小鼠具有高度同源性,提示该基因在哺乳动物进化过程中十分保守。结论 BC051628属于睾丸特异性基因,可能在生精过程发挥重要作用。     

IQCG在人类睾丸的表达及与精子运动的相关性研究

目的:研究IQCG(IQ motif containing G)基因在人类睾丸和精子中的定位及表达,比较其在正常精子活力男性和弱精子症患者精子中的表达差异,探究其可能的作用方式及与生育力的关系。方法:采用实时定量PCR对IQCG基因在人类睾丸的表达进行研究,进而通过免疫组化和免疫荧光研究IQCG在人类睾丸和精子中的定位,另收集门诊正常精子活力和不同等级的弱精子症及AID成功助孕精子标本,从蛋白表达方面分析IQCG在精子中的表达差异。结果:免疫组化显示IQCG在人类睾丸组织中广泛表达,从精母细胞到精子细胞都有表达,且特异性地表达于精子尾部,在精原干细胞中表达很弱或不表达,精原细胞中表达强烈。精子免疫组化和免疫荧光显示IQCG在弱精子症精子中的表达较正常活力精子中的表达降低,有统计学差异(P=0.041)。Western印迹结果显示IQCG在正常精子和弱精子症及与正常生育男性精子中均有表达,且在正常精子活力和重度弱精子症组之间(P=0.032)及正常生育组和重度弱精子症组之间(P=0.027)的表达存在统计学意义差异。结论:IQCG基因和蛋白可能在精子运动方面发挥作用,其表达异常可能是导致人类精子运动能力下降和生育力下降的原因之一,研究其作用机制可能为人类弱精子症的病因和治疗提供新的方向。     

间质细胞双尾C基因条件性敲除小鼠模型建立及其表型分析

目的构建间质细胞双尾C(Bicc1)基因条件性敲除小鼠模型, 并对其表型进行分析。方法将CRISPR Cas9方法构建的Bicc1f/+小鼠子代与Pdgfra启动子驱动的Cre小鼠进行杂交, 获得子代小鼠, 饲养1～2周后提取其脚趾及鼠尾组织基因组DNA, 经PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳后, 在DNA水平检测小鼠基因型;选取经鉴定后生长至3周龄的Bicc1基因条件性敲除小鼠(实验组)、野生型小鼠(对照组)各3只进行后续实验:通过腹腔注射他莫昔芬进行诱导敲除Bicc1基因, 于1周后取小鼠肾脏、骨骼肌、皮肤及脂肪组织, 一部分组织通过实时定量PCR(RT-qPCR)鉴定其中的Bicc1 mRNA表达水平;另一部分组织以10%多聚甲醛固定, 随后进行HE染色和Masson染色, 在光镜下观察分析。应用SPSS 28.0软件对数据进行分析, 组间比较采用t检验, P<0.05表示差异有统计学意义。结果通过繁育获得间质细胞Bicc1基因条件性敲除小鼠, 基因型为Bicc1f/fCre+/-, 野生型小鼠基因型为Bicc1f/fCre-/-;RT-qPCR检测结果显示, 实验组小鼠肾脏、骨骼...     

1700008O03Rik基因在小鼠睾丸中的表达特征及生物信息学分析

目的:研究1700008O03Rik(RIKEN cDNA 1700008O03)基因在B6小鼠睾丸中从出生到性成熟过程的表达特征,并初步探讨其参与调控小鼠精子发生的作用。方法:小鼠基因表达谱芯片筛选得到睾丸特异性基因1700008O03Rik,本研究采用反转录PCR、实时定量PCR、Western印迹、免疫组化及免疫荧光等实验方法,检测1700008O03Rik基因在小鼠睾丸发育中的表达特征,并用生物信息学方法作相关分析。结果:1700008O03Rik基因在小鼠睾丸中高表达,且呈鼠龄依赖性增加;免疫组化结果表明其主要表达于长形精子胞浆。生物信息学分析结果显示人和小鼠的1700008O03Rik蛋白序列高度同源,进化树分析结果表明从低等哺乳动物到高等哺乳动物1700008O03Rik蛋白均高度保守。结论:1700008O03Rik为小鼠睾丸高表达基因,且主要表达于长形精子胞浆,其可能参与调控小鼠精子的成熟过程。     

去泛素化酶24基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征

目的:研究去泛素化酶24(USP24)基因在小鼠睾丸精子发生过程中的表达特征,初步探讨其在生精过程中的作用。方法:通过实时荧光定量PCR(qPCR)和免疫荧光等方法检测USP24在不同周龄野生型小鼠睾丸组织以及成年雄激素受体敲除(ARKO)小鼠睾丸中的表达特征;采用双荧光素酶报告基因实验检测USP24启动子转录活性。结果:qPCR和免疫荧光结果表明,USP24基因在出生1周时表达水平较低,3周时急剧升高,随后维持在相似水平至第8周;USP24主要定位于支持细胞和生精细胞的细胞质;与野生型相比,USP24在ARKO小鼠睾丸表达降低;性成熟小鼠睾丸中,USP24定位于成熟精子头部后端及中部。双荧光素酶报告基因实验结果显示,睾酮刺激后USP24启动子的转录活性升高。结论:USP24基因的表达水平的升高与小鼠的性发育相关,且其蛋白在小鼠成熟精子上表达。USP24是受雄激素受体(AR)调控的靶基因。USP24可能参与调控小鼠的精子发生过程。     

软骨细胞条件性敲除PTEN基因的FGFR3功能增强型点突变小鼠的获得及其表型初步分析

目的 获得在软骨细胞中条件性敲除PIEN基因的FGFR3增强型点突变小鼠并进行初步表型分析.方法 通过FTEN条件性基因敲除小鼠(Ptenflox/flox小鼠),与软骨细胞特异表达Cre重组酶的小鼠(Col2aCre)交配,获得在软骨细胞中特异敲除PTEN基因小鼠(Col2aCre:Ptenfolox/flox);同时,利用Ptenflox/flox小鼠与FGFR3增强型点突变小鼠(Fgfr3G369C/+小鼠,即ACH小鼠)交配,子代杂合子小鼠(Ptenflax/:ACH)之间再交配,获得Ptenflox/flox:ACH小鼠;通过Col2aCre:Ptenflox/flox和Ptenflox/flox:ACH交配即可获得在软骨细胞中特异性敲除PTEN基因的FGFB3增强型点突变小鼠((Col2aCre:Ptenflox/flox:ACH).采用PCR对小鼠基冈型进行鉴定,免疫荧光染色检测PTEN基因的敲除效率,通过X光平片摄影对小鼠的表型进行初步分析.结果 获得了在软骨细胞中敲除PTEN的FGFR3点突变小鼠,免疫荧光染色证实Col2aCre:Ptenflox/flox:ACH小鼠软骨细胞中PTEN蛋白因为基因敲除而表达很低.初步的表型分析显示:Col2aCre:Ptenflox/flox:ACH小鼠身长、尾长均较Pten flox/flox:ACH小鼠长(P＜0.05,n=5).Col2aCre:Ptenflox/flox:ACH小鼠表型,较Ptenflox/flox:ACH小鼠的侏儒表型有所缓解.结论 采用基于Cre/LoxP系统的条件性基因敲除策略,获得了在软骨细胞中敲除PTEN基因的FGFR3增强型突变小鼠,表型分析初步显示,软骨细胞特异性敲除PTEN基因可部分缓解由FGFR3增强型点突变所导致的小鼠侏儒表型.该小鼠的获得,为研究P13K/AKT信号通路在FGFR3突变介导的软骨生长抑制中的作用提供了实验动物平台.     

运动神经元生存蛋白基因敲除在顺铂致小鼠急性肾损伤中的作用

目的探讨运动神经元生存蛋白(survival motor neuron, SMN)基因敲除在顺铂诱导的急性肾损伤(acute kidney injury, AKI)小鼠中的作用。方法构建顺铂诱导的AKI小鼠(C57BL/6)模型, 将雄性8～10周龄体重22～24 gSMN+/+野生型小鼠及SMN基因敲除杂合子(SMN+/-)小鼠随机分为4组:SMN+/+生理盐水组(野生型空白对照组, n=5)、SMN+/-生理盐水组(SMN基因敲除杂合子空白对照组, n=5)、SMN+/+顺铂组(野生型顺铂组, n=5)和SMN+/-顺铂组(SMN基因敲除杂合子顺铂组, n=5)。腹腔注射20 mg/kg顺铂溶液或0.9%生理盐水, 72 h后处死小鼠, 收集血清及肾组织。采用实时荧光定量PCR和Western印迹法检测SMN mRNA和蛋白表达水平, 采用肌氨酸氧化酶法和脲酶法分别测定血清肌酐和尿素氮水平, PAS染色观察肾组织病理改变, TUNEL免疫荧光检测细胞凋亡水平, Western印迹和免疫组化法检测细胞凋亡标志蛋白多腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)和内质网应激标志蛋白CHOP的表达。结...     

CMTM2转基因小鼠的构建及其血清睾酮水平的变化

目的:建立系统性表达CMTM2的转基因小鼠模型,研究CMTM2表达对小鼠生殖系统的影响。方法:通过显微注射pRevTRE-CMTM2表达载体建立CMTM2转基因小鼠;PCR鉴定CMTM2转基因小鼠基因型;RT-PCR、Western印迹、IHC方法检测CMTM2在转基因小鼠睾丸的表达情况;放免法检测转基因小鼠血清睾酮水平。结果:成功构建高表达CMTM2蛋白的转基因小鼠,并可以稳定传代;CMTM2转基因小鼠的血清睾酮水平较野生型小鼠提高[(46.04±3.72)nmol/L vs(42.43±3.80)nmol/L,P<0.05]。结论:成功构建CMTM2高表达的转基因小鼠,初步提示CMTM2基因可能对转基因小鼠睾酮的生成和分泌有一定影响。     

BC022687基因真核表达质粒的构建及在CHO细胞内的蛋白表达和定位

目的:BC022687可能是调节纤毛形成的蛋白。本研究构建BC022687基因真核表达载体并探讨融合蛋白在细胞内表达及定位。方法:以小鼠睾丸cDNA文库为模板,PCR扩增全长BC022687编码序列,测序后亚克隆至携带绿色荧光蛋白(GFP)基因的pEGFP-C1真核表达载体中。将构建的重组质粒转染到CHO细胞中,提取细胞蛋白进行Western印迹检测。利用共聚焦激光扫描显微镜观察BC022687/GFP融合蛋白在CHO细胞内定位。结果:翻译BC022687蛋白的cDNA序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段大小950 bp。Western印迹检测到相对分子质量约为64 000的融合蛋白表达。BC022687/GFP融合蛋白在细胞内定位以细胞质为主,并在中心体、纤毛形成的模板表达。结论:成功构建BC022687全长基因真核表达载体,为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础。     

苯甲酸雌二醇诱导不育小鼠睾丸中生精细胞增殖紊乱的研究

目的:探讨外源性雌激素苯甲酸雌二醇(EB)对诱导雄性不育小鼠中生精细胞增殖紊乱的影响。方法:60只雄性昆明小鼠随机分为3组,对照组肌肉注射150μl玉米油,EB处理组注射浓度分别为5、10 mg/kg的EB,隔天1次,持续4周。实验结束后取睾丸称其质量并计算睾丸指数;睾丸、附睾尾常规石蜡切片,HE染色;附睾尾制备精子悬液进行精子计数;免疫组化检测睾丸PCNA表达;qRT-PCR分析睾丸细胞周期蛋白A1、细胞周期蛋白B1、VASA、p53的表达变化;Western印迹检测p53及磷酸化p53蛋白表达。结果:与对照组相比,EB处理组小鼠睾丸指数显著下降[(0.56±0.09)%vs(0.43±0.08)%、(0.38±0.10)%,P0.05],精子悬液镜下观察未见精子,HE染色附睾管内未见精子;生精小管中精原细胞、初级精母细胞及支持细胞数量显著下降(P0.05)。免疫组化结果显示,与对照组相比,EB处理组生精小管中细胞PCNA阳性表达细胞数量显著下降(P0.05)。qRTPCR结果表明EB处理组PCNA、细胞周期蛋白A1、细胞周期蛋白B1、VASA mRNA表达与对照组相比显著下降(P0.05);p53表达随EB剂量升高而显著升高(P0.05)。Western印迹结果显示,与对照组相比,EB处理组p53及磷酸化p53蛋白表达水平显著升高,且存在剂量依赖效应,10 mg/kg组显著高于5 mg/kg组(P0.05)。结论:EB以剂量依赖的方式下调细胞周期相关因子表达抑制生精细胞的增殖,是导致雄性不育小鼠睾丸中生精细胞增殖紊乱的重要原因。