miR-339-3p和miR-339-5p在体外胃癌细胞中的表达和意义

目的观察人胃癌细胞株及正常人胃黏膜上皮细胞株中miR-339-3p和miR-339-5p的表达水平,通过功能获得型（gain of function）实验验证miR-339-3p和miR-339-5p与胃癌的相关性,并阐明二者在肿瘤发生中的意义。方法采用SYBR GreenI嵌合荧光法实时定量PCR技术分别检测人正常胃黏膜上皮细胞GES-1,胃癌MKN．45、SGC．7901及BGC-823细胞株中miR-339-3p和miR-339-5p的表达水平;将外源性miR-339-3pmimics和miR-339-5p mimics转染胃癌MKN．45细胞株,采用RT-PCR法检测其转染率,并应用流式细胞术和CCK-8法分别检测转染72h后MKN．45细胞的凋亡及增殖能力的变化。结果miR-339-3p和miR-339-5p在胃癌MKN-45、SGC一7901及BGC-823细胞株中的表达均下调;与对照组相比,转染miR-339-3pmimics及miR-339-5pmimics后,MKN-45细胞株的凋亡率明显增高P〈0．05）,而增殖能力明显减弱（P〈0．01）。结论miR-339-3p和miR-339-5p在3种胃癌细胞株中均呈低表达。miR-339-3p和miR-339-5p可能参与了胃癌细胞的增殖与凋亡机理。     

血清miR-196a-5p和miR-339-5p表达水平在乳腺癌诊断中的应用价值

背景与目的:研究显示,miR-196a-5p在乳腺癌细胞中呈显高表达,而miR-339-5p呈低表达,两者可能是乳腺癌潜在治疗靶点和诊断标志物.因此,本研究探讨血清miR-196a-5p和miR-339-5p表达水平在乳腺癌诊断中的应用价值.方法:选择2016年1月-2017年6月收治的乳腺癌患者107例(乳腺癌组),...     

miR-187-5p通过RANKL/NFκB信号通路抑制骨质疏松症中的破骨细胞活性

目的:探讨miR-187-5p通过RANKL/NFκB信号通路对骨质疏松症中破骨细胞活性的影响及机制分析。方法:使用小鼠巨噬细胞264.7细胞株（RAW246.7）,设置正常组（con）、核因子κB配体的受体激活子（receptor activator of nuclear factor-κBligand,RANKL）...     

miR-483-5p通过下调CDK15促进肾上腺皮质癌增殖和侵袭

目的探讨miR-483-5p在肾上腺皮质癌中的作用及其可能的作用机制。方法荧光定量PCR法检测miR-483-5p和CDK15在肾上腺皮质癌组织和细胞系中的表达,CCK-8增殖试验测定miR-483-5p对细胞增殖的影响,Transwell法检测ACC细胞侵袭性的变化。荧光素酶试验和挽救实验验证miR-483-5p与CDK15相关的分子机制。结果miR-483-5p在肾上腺皮质癌组织中高表达(2.36±1.02 vs 1.09±0.43),CDK15在肾上腺皮质癌组织中低表达(0.57±0.26 vs 1.06±0.32)。荧光素酶检测证实CDK15是miR-483-5p的直接靶点。过表达miR-483-5p可通过下调CDK15的表达促进ACC细胞的增殖(24 h:0.26±0.03 vs 0.23±0.04,48 h:0.56±0.05 vs 0.41±0.03,72 h:0.73±0.04 vs 0.59±0.03)和侵袭能力(95.78±4.66 vs 23.89±2.52)。结论miR-483-5p可通过下调CDK15的表达促进肾上腺皮质癌的发生发展,其可作为肾上腺皮质癌的潜在生物标志物及治疗肾上腺皮质癌的新的作用靶点。     

大黄素甲醚通过miR-380-3p调控前列腺癌细胞周期和增殖

目的:探讨大黄素甲醚通过调节miR-380-3p表达影响前列腺癌DU145细胞株的细胞周期和增殖的作用机制。方法:采用50 μg/mL的大黄素甲醚处理前列腺癌DU145细胞,将其作为大黄素甲醚组;以不做任何处理的正常培养的DU145细胞作为对照组。流式细胞术检测DU145细胞的周期变化,MTT法检测DU145细胞的增殖...     

LncRNA ZBED3-AS1/miR-339-5p/Notch 1轴调控骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化

目的:探究LncRNA ZBED3-AS1调控miR-339-5p/Notch 1在骨质疏松大鼠成骨细胞增殖分化中的作用。方法:构建假手术（Sham）组和模型（Model）组大鼠模型,对大鼠的骨密度进行检查观测大鼠建模情况。分离大鼠成骨细胞,qRT-PCR检测细胞中ZBED3-AS1、miR-339-5p的表达。对Sh...     

微小核糖核酸miR-370-5p对前列腺癌细胞增殖影响的研究

目的 探讨微小核糖核酸miR-370-5p对前列腺癌细胞系PC3和DU145细胞增殖的影响.方法 将前列腺癌细胞系PC3和DU145分为2组:阴性对照组-转染随机序列(dsCon-trol);实验组-转染miR-370-5p或miR-370-5p+siP21.实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测各组细胞中p21 mRNA的表达及前列腺癌细胞系中miR-370-5p的基础表达情况;蛋白质印迹法检测p21蛋白的表达;集落形成实验检测各组单个细胞克隆增殖情况;细胞增殖实验检测转染后各组细胞的增殖能力.结果 与正常前列腺上皮细胞(RWPE-1)比较,前列腺癌细胞系PC3和DU145中miR-370-5p表达下降;与阴性对照组相比,实验组PC3和DU145细胞中p21 mRNA的相对表达量分别提高了(2.457±0.392)倍和(1.844±0.295)倍.实验组PC3和DU145细胞中p21蛋白的相对表达分别为(0.52±0.09)和(0.63±0.14),阴性对照组为(0.18±0.06)和(0.24±0.05),两组比较,差异有统计学意义(P<0.05).阴性对照组和实验组中PC3和DU145细胞的集落形成数目分别为(0.281±0.024)、(0.084±0.016)、(0.293±0.017)和(0.310±0.041)、(0.088±0.019)、(0.300±0.032),实验组在转染miR-370-5p后,细胞集落形成数目均较阴性对照组少;而在miR-370-5p+siP21共转染后,与转染miR-370-5p组相比较,PC3和DU145细胞集落形成数目均显著恢复,差异均有统计学意义(P<0.05).细胞增殖实验结果显示,实验组转染miR-370-5p后,PC3和DU145细胞在48、72、96 h的存活情况(用吸光度OD值表示)分别为(0.395±0.040)、(0.691±0.042)、(0.874±0.045)和(0.437±0.044)、(0.700±0.051)、(0.875±0.052),与阴性对照组相比,实验组细胞增殖能力明显下降(P<0.05);miR-370-5p+siP21共转染后48、72、96 h,PC3和DU145细胞的OD值分别为(0.675±0.041)、(1.072±0.124)、(1.323±0.136)和(0.633±0.106)、(1.072±0.167)、(1.337±0.102),与转染miR-370-5p比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miR-370-5p能够通过上调p21蛋白的表达抑制前列腺癌细胞的增殖.     

ITGB1通过激活MAPK/ERK通路促进前列腺癌细胞侵袭

目的 研究ITGB1基因在前列腺癌中的表达情况及对前列腺癌细胞侵袭行为的影响和可能作用机制.方法 实时荧光定量PCR检测ITGB1在前列腺癌标本和前列腺癌细胞株PC3和LNCaP中的表达水平.设计小干扰RNA干扰ITGB1的表达,观察干扰效率以及干扰后对前列腺癌PC3和LNCaP细胞的迁移和侵袭能力的影响.结果 ITGB1 mRNA在前列腺癌标本中表达水平上调(t =5.12,P＜0.05),在前列腺癌细胞株LNCaP和PC3中表达水平也较正常前列腺上皮高(P＜0.01).siRNA成功干扰ITGB1表达后,划痕实验显示,前列腺癌Lncap和PC3细胞迁移能力显著下降.Transwell侵袭实验显示干扰ITGB1后,前列腺癌细胞的侵袭能力较对照组也显著下降.GCBI基因网络分析显示,ITGB1与MAPK通路具有显著相关性.进一步行蛋白质免疫印迹杂交实验显示,干扰ITGB1后,MAPK通路中ERK蛋白和磷酸化的ERK的蛋白表达下降,并且下游MMP9蛋白水平也呈现下降.结论 ITGB1通过激活MAPK信号通路,促进前列腺癌细胞迁移和侵袭.     

PCAT4通过海绵化miR-508-5p上调URGCP表达驱动乳腺癌进展

目的研究前列腺癌相关转录因子4(PCAT4)通过海绵化miR-508-5p上调细胞增殖上调节因子(URGCP)表达对乳腺癌进展的驱动作用。方法通过癌症基因组图谱分析乳腺癌组织中具有差异表达的lncRNA和miRNA的微阵列数据。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)评估乳腺癌中PCAT4表达。MTT和集落形成实验测定细胞增殖能力,TUNEL法分析细胞凋亡情况,Transwell实验分析细胞迁移和侵袭变化。RNA下拉和双荧光素酶测定分析PCAT4与miR-508-5p,以及miR-508-5p与URGCP的相关性。肿瘤异种移植研究分析PCAT4/miR-508-5p/URGCP轴与体内乳腺癌细胞生长的相关性。计量资料以均数±标准差(x±s)表示,两组间比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。Pearson相关性分析评价PCAT4和URGCP与miR-508-5p表达的相关性。结果乳腺癌组织和细胞中PCAT4的表达水平上调。敲除PCAT4能够抑制细胞增殖和转移,促进细胞凋亡。miR-508-5p是PCAT4的靶点,且与PCAT4呈负相关。乳腺癌中miR-508-5p过度表达可抑制细胞生长、迁移和侵袭,促进细胞凋亡。URGCP是miR-508-5p的靶点,可诱导乳腺癌的进展。肿瘤异种移植研究显示,PCAT4通过影响miR-508-5p/URGCP驱动乳腺癌进展。结论乳腺癌组织和细胞中PCAT4表达升高,PCAT4可以作为miR-508-5p的分子海绵,并通过激活URGCP蛋白表达显著促进乳腺癌进展。     

miR-129-5p、p62和STAT3在结肠癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨结肠癌组织中m i R-129-5p、p62和信号转导与转录激活因子3(STAT3)表达水平与结肠癌进展及预后的关系。方法:选取2013年6月—2016年6月本院收治的113例结肠癌患者为研究对象,术中收集结肠癌组织及癌旁组织(距癌组织≥5 cm)。实时荧光定量(qRT-PCR)法检测结肠癌组织中mi R-129-5p、p62 m RNA、STAT3 m RNA表达水平,免疫组织化学染色法检测p62及STAT3蛋白表达水平。分析三者表达与结肠癌患者临床病理特征及预后关系。结果:结肠癌组织中mi R-129-5p表达水平显著低于癌旁组织(P0.05),p62和STAT3的m RNA表达水平及蛋白高表达率均显著高于癌旁组织(P均0.05)。mi R-129-5p和p62蛋白表达水平与分化程度、浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关(P均0.05),STAT3蛋白表达水平与浸润深度、TNM分期及淋巴结转移有关(P均0.05)。m i R-129-5p高表达组3年累积生存率显著高于m i R-129-5p低表达组(P0.05)。p62及STAT3蛋白高表达组患者3年累积生存率显著低于p62及STAT3蛋白低表达组(P0.05)。结肠癌组织中m i R-129-5p与STAT3 m RNA表达水平呈负相关(r=-0.390,P0.05),p62 m RNA与STAT3 m RNA表达水平呈正相关(r=0.402,P0.05)。结论:在结肠癌组织中mi R-129-5p表达下调,p62、STAT3m RNA水平及蛋白高表达率均上调,三者表达水平均与浸润深度、TNM分期、淋巴结转移及3年累积生存率有关,可能成为结肠癌预后标志物,为结肠癌临床治疗提供指导。     

hsa_circ_0005105靶向miR-508-3p对关节炎软骨细胞的影响

目的 探讨hsa_circ_0005105对关节炎软骨细胞增殖、凋亡及炎症因子分泌的影响及机制。方法 实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测软骨细胞中hsa_circ_0005105和miR-508-3p的表达水平;将软骨细胞分为NC组、IL-1β组、IL-1β+si-NC组、IL-1β+si-hsa_circ_0005105组、IL-1β+miR-NC组、IL-1β+miR-508-3p组、IL-1β+si-hsa_circ_0005105+anti-miR-NC组、IL-1β+si-hsa_circ_0005105+anti-miR-508-3p组;蛋白质印迹法检测凋亡蛋白表达;流式细胞术检测凋亡;CCK-8与平板克隆形成能力检测细胞增殖能力;酶联免疫吸附法检测TNF-α、IL-6水平;双荧光素酶报告实验检测hsa_circ_0005105和miR-508-3p的靶向关系。结果 IL-1β诱导的软骨细胞中hsa_circ_0005105表达水平升高,miR-508-3p表达水平降低（P<0.05）。低表达hsa_circ_0005105或过表达miR-508-3p可降低IL-1β诱导的软骨细胞Bax、Cleaved-caspase-9、Cleaved-caspase-3相对表达水平、细胞凋亡率,升高Bcl-2蛋白水平、细胞活性,细胞克隆形成数增多,TNF-α和IL-6水平降低（P<0.05）。hsa_circ_0005105靶向调控miR-508-3p;低表达miR-508-3p可以逆转hsa_circ_0005105低表达对IL-1β诱导的软骨细胞损伤及炎症因子分泌的影响。结论 低表达hsa_circ_0005105通过靶向上调miR-508-3p抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡及炎症因子分泌,促进细胞增殖。     

重楼皂苷Ⅰ通过调控LncRNA CEBPA-AS1/miR-195-5p通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及促进细胞凋亡的初步研究

目的:探讨重楼皂苷Ⅰ(PPⅠ)是否通过调控长链非编码RNA CEBPA-AS1(LncRNA CEBPA-AS1)/微小RNA-195-5p(miR-195-5p)通路影响瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及凋亡.方法:原代培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,使用不同浓度的PPⅠ处理细胞,si-CEBPA-AS1、pcDNA-CEBPA-A...     

丹酚酸A调控miR-940与miR-576-5p促进退变终板软骨细胞修复的作用研究

目的:观察丹酚酸A (salvianolic acid A,SAA)对退变终板软骨细胞(cartilaginous endplates cells,CEPCs)的干预作用,及其调控的潜在非编码RNA(micro-RNA,miRNA)作用靶点。方法:从腰椎间盘手术标本中分离CEPCs,用不同浓度SAA(2、5、10μM处理24、48、72 h,利用CCK-8检测细胞活性确定SAA的最适剂量和干预时间。通过阿利新蓝染色和对血小板反应蛋白解整合素金属肽酶-5 (A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin-5,ADAMTS-5)、基质金属肽酶3(matrix metallopepridase 3,MMP-3)、Ⅱ型胶原a1 (clollagen typeⅡa1,Col2a1)的蛋白表达检测,分析SAA对IL-1β诱导的退变CEPCs的干预作用。进一步结合生信分析,以及实时荧光定量PCR(quantitative real-time,qRT-PCR)与Western blot检测,并应用miRNA模拟物(miR-mimics)与...     

过表达miR-664a-5p激活Wnt/β-catenin信号通路促进骨质疏松大鼠骨重建

目的 探究过表达miR-664a-5p的脂肪间充质干细胞（miR-664a-5p-ADSCs）通过激活Wnt/β-catenin信号通路对骨质疏松（OP）大鼠骨重建的促进作用。方法 将大鼠分为Sham组、OVX组、ADSCs组和miR-664a-5p-ADSCs组。切除卵巢建立OP大鼠模型,Sham组仅切除脂肪组织。3个月后,ADSCs组和miR-664a-5p-ADSCs组分别尾静脉注射miR-664a-5p-ADSCs及其阴性对照ADSCs;Sham组和OVX组注射等量生理盐水。1个月后进行指标检测。micro-CT、HE染色、TRAP染色检测OP大鼠骨重建情况;免疫组化染色、RT-qPCR、Western blot检测Runx2、ALP、OCN、Wnt、β-catenin mRNA和蛋白的表达。结果 Sham组骨小梁完整,破骨细胞较少;与Sham组相比,OVX组骨小梁稀疏且变薄,破骨细胞较多;Runx2、ALP、OCN、Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平明显降低（P<0.05）;与OVX组相比,ADSCs组、miR-664a-5p-ADSCs组骨小梁增加且增厚,破骨细胞较少;Runx2、ALP、OCN、Wnt、β-catenin mRNA和蛋白水平明显升高,且miR-664a-5p-ADSCs组上述效果强于ADSCs组（P<0.05）。结论 过表达miR-664a-5p的ADSCs通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进OP大鼠骨重建。     

循环miR-222-3p和miR-136-5p与转移性去势抵抗性前列腺癌患者多西他赛化疗疗效的相关性

目的:本研究旨在探讨循环miR-222-3p、miR-136-5p和miR-34c-5p作为转移性去势抵抗性前列腺癌(mCRPC)多西他赛化疗早期治疗反应的生物标志物的潜能,并通过生物信息学分析探讨miR-136-5p潜在靶基因在前列腺癌中的相互作用。方法:我们运用实时荧光定量PCR测量30例患者多西他赛治疗前后血清中3种microRNA的水平。综合分析miRWalk 3.0、TargetScan和miRDB三大数据库的检索结果,以预测miR-136-5p靶基因,将筛选出的基因输入到"DAVID v6.8"数据库中,以进行KEGG信号通路分析。结果:血清miR-222-3p和miR-136-5p水平与多西他赛治疗显著相关(P0.05),对多西他赛无反应患者治疗前miR-222-3p水平较高(P0.05)。AUC为0.76(95%CI:0.55～0.97),是对多西他赛无反应患者的有效预测因子。多西他赛化疗后miR-34c-5p高表达患者的总生存期较短(log-rank P0.05)。miRWalk预测出17 138个基因与miR-136-5p相关,进一步分析发现936个基因可能是miR-136-5p的潜在靶点,KEGG信号通路分析表明这些基因主要分布在7个信号通路中。其中Rap1信号通路与前列腺癌细胞的转移密切相关。结论:我们的研究表明,循环miR-222-3p是多西他赛早期治疗反应的生物标志物,值得临床进一步研究。miR-136-5p可能在前列腺癌中起抑癌作用。     

miR-576靶向ALK4调控JAK/STAT通路传导对前列腺癌细胞增殖和迁移的影响

目的:前列腺癌进展的分子机制目前尚不明确,本研究拟探讨miR-576/ALK4轴在前列腺癌进展过程中的作用机制.方法:生物信息学分析得到可能调控ALK4表达并影响前列腺癌进展的miR-576,通过miR-576 mimics/inhibitor转染前列腺癌细胞,MTT实验检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移距离,双荧...     

miR-584-5p通过下调MMP-14抑制乳腺癌细胞生物学行为

目的 探讨微小RNA-584-5p(miR-584-5p)对乳腺癌细胞生物学行为（增殖、迁移和侵袭）的影响及其作用机制。方法 选择人正常乳腺上皮细胞MCF10A及乳腺癌细胞MDA-MB-231、SK-BR-3和MCF-7;取对数生长期的MCF-7细胞,应用Lipofectamine TM 2000转染试剂盒对其进行转染,并分为7组：空白组（未转染的MCF-7细胞）、模拟物-阴性对照组（mimic-negative control,mimic-NC,mimic-NC组;转染mimic-NC）、miR-584-5p mimic组（转染miR-584-5p mimic）、pcDNA组[转染过表达基质金属蛋白酶-14(MMP-14)的pcDNA3.1质粒阴性对照（pcDNA3.1）]、MMP-14组[转染过表达MMP-14的pcDNA3.1质粒（pcDNA3.1-MMP-14）]、mimicNC+MMP-14组（共转染mimic-NC和pcDNA3.1-MMP-14）及miR-584-5p mimic+MMP-14组（共转染miR-584-5p mimic和pcDNA3.1-MMP-14）。荧...     

circ0092516通过靶向调控miR-337-3p/PTEN通路调控促进原发性腺性膀胱炎细胞的存活率和迁移率

目的:探讨circ0092516对腺性膀胱炎(CG)细胞存活和迁移的影响及其调控微小RNA(miR)-337-3p和同源性磷酸酶(PTEN)介导的机制.方法:从手术切除的10例CG样本中原代分离CG细胞(pCG),并从正常组织中分离正常对照组细胞(pCON).qRT-PCR用于检测circ0092516和miR-337...     

miR-9-5p调控雄激素受体的表达促进卵巢颗粒细胞增殖

目的 分析微小RNA-9-5p(miR-9-5p)在多囊卵巢综合征(PCOS)中的诊断价值,并探讨对卵巢颗粒细胞(KGN)增殖的作用机制.方法 采用荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析miR-9-5p在50例PCOS患者(实验组)及50例健康女性(对照组)血清中的表达特征.采用受试者工作特征曲线(ROC)评估miR...