培养大鼠星形胶质细胞牵张损伤后超微结构的变化

目的：研究体外培养星形细胞牵张损伤后超微结构的变化。方法：取新生1－2d大鼠的皮层细胞原代培养，经纯化后传代培养于乳胶膜培养皿中，采用计算机控制的牵张损伤装置，分别以50，150，250kPa压力牵张损伤培养于乳胶膜上的大鼠皮层星形胶质细胞，用3％戊二醛固定后，行扫描电镜和透射电镜观察，结果：当用50kPa驱动压力进行牵张损伤时，细胞结构即有明显破坏，表现为细胞间隙增宽，部分胞体和突起被撕裂。以50kPa牵张损伤后1h，透射电镜下可见线粒体肿胀，嵴减少，损伤后6h可见线粒体致密，细胞器减少等，当牵引应力增大，星形细胞损伤程度加重，细胞器明显减少，线粒体空泡化，微丝，微管明显减少，直至水样胞质或致密胞体，结论：较小的应力即可致星形细胞紧密连接的破坏和超微结构的改变，可能与脑外伤后产生广泛的脑水肿有关。     

针灸效应学体外实验方法观察星形胶质细胞超微结构

目的 探讨电针治疗大鼠脊髓损伤（spinal cord injury,SCI)血清对离体培养星形胶质细胞超微结构的影响。方法 采用针灸效应学体外实验方法对离体培养星形胶质细胞用透射电镜观察其超微结构的变化。结果 电针治疗组的星形胶质细胞其溶酶体较造模组少,而高尔基复合、内质网、微管、微丝较造模组明显增多。结论 电针可减轻损伤对星形胶质细胞中溶酶体的刺激,增强细胞器的蛋白合成和分泌功能。     

镉对雄性大鼠颌下腺超微结构的影响及丙酸睾酮的保护作用

目的 探讨氯化镉对雄性大鼠颌下腺超微结构的影响及丙酸睾酮的保护作用.方法 35只雄性Wistar大鼠分为3组:对照(C)组、镉(Cd)组和镉加丙酸睾酮(Cd+T)组.利用透射电镜作颌下腺组织颗粒曲管(GCT)细胞的超微结构观察.结果 镉注射后24 h,GCT细胞内出现不同程度的线粒体肿胀和(或)空泡化,胞质和线粒体内可见髓样结构,CCT周围毛细血管内皮细胞线粒体肿胀.7~15 d后上述改变明显加重,部分GCT细胞见胞质广泛肿胀和轻度核溶解,30 d后细胞形态仍未恢复正常.Cd+T组的超微结构损伤较相应Cd组轻.结论 镉对GC了细胞的超微结构有早期直接损伤作用,后期雄激素减少加重此损伤,补充雄激素对上述损伤有一定的保护效果.     

脂氢过氧化物对巨噬细胞亚超微结构损伤及云芝多糖的保护作用

通过叔丁基脂氢过氧化物(tbooh)对巨噬细胞亚超微结构损伤的研究,探讨了活性氧在动脉粥样硬化发生中的作用。扫描电镜下可见Tbooh引起培养24h后的巨噬细胞表面微绒毛缩短,48h时部分微绒毛脱落,72h时微绒毛呈散在点状,大部分细胞膜失去微绒毛。在透射电镜下可见细胞器明显减少,脂滴增多.云芝多糖(PSK)保护组培养72h后,其胞浆仍可见线粒体、粗面内质网。可见PSK可减轻tbooh引起的巨噬细胞结构损伤、脂类堆积和细胞泡沫样变化。     

局灶性脑缺血再灌注后海马CA1区超微结构改变及川芎嗪的保护作用

目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后各时相点海马CAI区超微结构以及中药川芎嗪对该区影响，、方法采用闭塞大鼠大脑中动脉建立局灶性脑缺血再灌注模型，透射电镜下观察海马CAI区超微结构改变、结果实验组海马CAI区超微结构的改变总体较对照组明显减轻，表现为：再灌注6h(B1组)的星形胶质细胞，突起稍肿胀，线粒体结构无明显变化；神经细胞内仅部分线粒体肿胀，内质网扩张?再灌注12h(B2组)的星形胶质细胞，突起肿胀，线粒体结构无明显变化；未与星形胶质细胞相连的神经细胞，胞浆内线粒体肿胀、轴突内线粒体空泡化；与星形胶质细胞相连的神经细胞，内质网脱颗粒，线粒体无明显改变，结论川芎嗪不仅直接保护脑神经元，而且通过保护星形胶质细胞而间接起到保护和修复受损神经细胞的作用。     

低氧对体外培养小鼠星形胶质细胞超微结构的影响

目的 探讨低氧后体外培养星形胶质细胞超微结构的变化。方法 通过胶原酶消化、尼龙网过筛、差速粘附等技术对新生小鼠星形胶质细胞进行体外培养，待细胞铺满瓶底时，在培养液表面覆以液体石蜡形成低氧环境，常规培养作为对照，电镜下观察细胞超微结构的变化。结果 正常星形胶质细胞线粒体丰富，可见少量高尔基复合体和粗面内质网。低氧星形胶质细胞表面伸出许多微绒毛样突起，线粒体肿胀，大量溶酶体形成。结论 低氧时星形胶质细胞损伤和修复并存。     

胚胎大鼠脑室下区神经干细胞透射电镜超微结构

目的探寻用透射电镜显示超微结构识别胚胎大鼠脑室下区神经干细胞的新方法．方法将培养了24h已贴壁生长的胎鼠脑室下区神经干细胞（已经免疫组化方法鉴定证实）经0．125％胰蛋白酶消化,待光镜下见细胞回缩,胞体变圆,细胞间隙变大时,立即加入胎牛血清终止消化,经1000r／min×10min离心沉淀,收集细胞于离心管内,弃上清后,经3．5％戊二醛、1％锇酸双固定、丙酮酸逐级脱水、618环氧树脂包埋、超薄切片后柠檬酸铅、醋酸铀双染色后透射电镜观察、摄片．结果原代培养24h的脑室下区神经细胞标本透射电镜下观察、摄片,见部分细胞体积较小,胞核大,核染色质丰富,胞质少,胞质内见大量游离核糖体,线粒体多见,其它细胞器少见．根据其细胞器幼稚,尚未发育成熟的特点,提示该类细胞为幼稚细胞,结合免疫组化实验,确定为胚胎大鼠脑室下区神经干细胞．结论透射电镜显示胚胎大鼠脑室下区神经细胞超微结构是除免疫组化外识别该神经细胞的另一种新方法,值得借鉴和推广．     

华支睾吸虫的体壁和肠支的透射电镜观察

本文观察了华支睾吸虫的体壁和肠支的超微结构。体壁皮层表面形成许多突起,突起上有长丝状的微绒毛。基质内含小圆形、圆盘状的分泌颗粒和线粒体,表皮细胞含线粒体,粗面内质网等细胞器,并向皮层发出许多胞质小管。肠上皮的微绒毛为双层片样结构,偶可见分支或汇合成环,肠上皮胞质内可见线粒体,分泌颗粒和内质网。核质内偶可见晶状包涵体。     

脑穿刺损伤并局部注药大鼠模型的构建初探

目的建立脑穿刺损伤并局部注药大鼠模型,为进一步研究奠定基础。方法成熟的wistar雌性大鼠20只,按随机数字表法分为正常对照组和脑穿刺损伤组,每组10只。脑穿刺损伤组大鼠麻醉后,微型钻钻孔、将针刺入颅内,经顶叶皮层插入脑组织中4 mm,伤及皮层,刺入位置为中线旁开3 mm,额状缝前3 mm,留针2 min,并用X线侧位片和正位片检查刺入位置和深度后退出。正常对照组仅开颅,不致伤。Wistar大鼠脑穿刺后,消毒断头取大鼠皮层细胞原代培养,经纯化后星形细胞传代培养,取第3代星形胶质细胞进行GFPA的免疫组织化学检查鉴定细胞形态,观察脑穿刺损伤组与正常对照组星形胶质细胞的光密度OD值、数密度值。结果经原代及传代培养,获得大量几乎为单一种类细胞,其特点为胞体较大,形状不规则,胞质较丰富,细胞核圆形或卵圆形,常偏于胞体一侧,细胞突起较多较长,符合星形胶质细胞形态。免疫荧光检测显示GFAP阳性细胞为97%,脑穿刺损伤组原代培养细胞数量增多,脑穿刺损伤组与正常对照组星形胶质细胞的数密度分别为73.41±6.53和51.37±5.36,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。脑穿刺损伤组与正常对照组星形胶质细胞的光密度值分...     

胎儿主动脉肾神经节小强荧光(SIF)细胞超微结构研究

目的 :研究人小强荧光细胞超微结构 ;方法 :荧光组化法和透射电镜技术 ;结果 :小强荧光细胞的超微结构与主神经元有较大区别 ,其胞核可见较多异染色质团块 ,胞质中有丰富的线粒体 ,并有大量膜被致密芯小泡 ,直径约为 5 0～ 2 0 0nm。小泡为圆形椭圆形和长杆状 ;结论 :小强荧光细胞胞质中含有的致密芯小泡可能为分泌颗粒     

Ultrastructural features of cultured rat cortical astrocytes with stretch-induced injury]

OBJECTIVE: To investigate the changes of ultrastructural features of cultured rat cortical astrocytes after stretch-induced injury. METHODS: Rat cortical astrocytes isolated from 1- to 2-day-old rats were cultured till confluency, and then plated in tissue culture wells with flexible silastic bottom after purification. A computer-controlled device was used to produce stretch-induced injury in the astrocytes with the imposed pressure of 50, 150, and 250 kPa respectively, followed by observation of the ultrastructural changes in the astrocytes with light and electron microscopy. RESULTS: Obvious ultrastructural destruction of the astrocytes occurred when the imposed stretch pressure was 50 kPa, and scanning electron microscopy demonstrated increased intercellular space and laceration of the cell body and its processes. Transmission electron microscopy revealed mitochondria swelling 1 h after stretch-induced injury and 6 h after the injury, vacuolar degeneration of the mitochondria occurred. Increased stretch pressure caused further decrease in the amount of glial filaments and densification of astrocytes. CONCLUSIONS: Stress, even at a relatively small scale, can cause disruption of intercellular juncture and ultrastructural change of the cultured astrocyte, which may be related with extensive brain edema after traumatic brain injury.     

白藜芦醇对体外培养的星形胶质细胞牵拉损伤后Glu和Gln释放的影响

目的 研究白藜芦醇对体外培养的星形胶质细胞牵拉损伤后氨基酸释放的影响;探索其对中枢神经保护作用的可能机制.方法 采用不同剂量白藜芦醇与星形胶质细胞共同培养12h后,进行牵拉损伤,检测不同实验组培养基上清中的谷氨酸(Glu)和谷氨酰胺(Gln)含量,并进行乳酸脱氢酶(LDH)漏出量的测定.结果 高效液相色谱结果 显示,牵拉损伤使星形胶质细胞分泌Glu明显增加(P<0.05);1 μmol白藜芦醇能够使星形胶质细胞损伤时Glu分泌进一步增加(P<0.05);而100 μmol白藜芦醇能减少损伤时Glu分泌(19<0.05).对细胞进行LDH漏出量的检测发现牵拉损伤能够使星形胶质细胞的LDH漏出量增加(P<0.05),1μmoI白藜芦醇进一步加剧了LDH漏出(P<0.05),100 μmol白藜芦醇能够有效减少星形胶质细胞的LDH漏出(P<0.05).结论 星形胶质细胞受到牵拉损伤后白藜芦醇能够减少其Glu,且能够减少LDH漏出,进而对星形胶质细胞起到保护作用.     

培养细胞牵张损伤装置及测试系统的研制与应用

目的为从细胞水平直接观察应力、应变作用后细胞形态和功能的改变,研制计算机控制的培养细胞牵张损伤装置和相应的测试系统.方法应用空气动力学原理,采用微型空气压缩机、电磁阀、压力传感器、程控放大器和模数转换多功能卡研制了体外培养细胞牵张损伤装置,用于实验研究.其致伤参数由计算机精确控制,并采用压力法获取细胞在致伤过程中的应变规律.对培养的新生大鼠大脑皮层星型胶质细胞应用本致伤装置采用不同的条件致伤,检测乳酸脱清酶(LDH)活性和台盼蓝含量,并观察其形态学的改变.结果采用不同的致伤参数可复制出轻、中、重度的细胞损伤模型.结论培养细胞牵张损伤装置及测试系统的各项性能指标均达到设计要求,致伤过程简便、重复性好、结果稳定.新的乳胶膜变形规律检测方法和装置,明显优于国外文献报道的图像处理检测法,满足实验研究的需要.     

颅脑火器伤早期脑微血管三维构型和超微结构实验研究

目的 探讨颅脑火器伤早期猫脑微血管三维构型和超微结构变化。方法 应用脑微血管铸型扫描电镜观察伤后脑微血管三维结构的变化,同时行脑超薄切片透射电镜观察微血管内皮细胞和神经细胞结构的变化。结果 颅脑火器伤后,脑微血管发生紊乱,既有血管痉挛又有血管扩张,出血和缺血并存,微血管括约肌出现病理性强力收缩,部分微血管破裂,血管内皮细胞微绒毛、空泡增多,紧密连接增宽,基底膜断裂,血管周围水肿及周围神经细胞损伤。结论 颅脑火器伤早期脑微血管结构出现损害,引起了脑微循环功能紊乱,导致脑的继发性损害。     

视神经牵拉伤的实验研究

目的 研究视神经牵拉伤后不同时期神经组织超微结构的变化及相应的电生理表现。方法 豚鼠单眼视神经牵拉延长20%-25%，分期行视觉诱发电位检查及取视神经标本进行透视电镜观察。结果 牵拉伤24h内电生理变化明显，同期出现轴突水肿，线粒体肿胀，髓鞘松散等变化；96h后电生理变化达到高峰；9拉伤24h内电生理变化明显，同期出现轴突水肿，线粒体肿胀，髓鞘松散等变化。96h后电生理变化达到高峰；9d后有缓慢恢复的趋势，同期轴突有萎缩与修复的表现；2个月电生理有轻度恢复，但部分轴突萎缩现象明显，甚至消失，胶原纤维增生明显。结论 视神经牵拉损伤后神经纤维超微结构变化明显，并伴有相应的电生理表现。     

星形胶质细胞AQP9在体外损伤反应中的表达变化

目的 通过体外培养星形胶质细胞,探讨星形胶质细胞水通道蛋白-9（aquaporin-9,AQP9）对损伤反应的表达变化及其所起的作用.方法 取出生后2 d的Wistar大鼠乳鼠大脑皮层进行星形胶质细胞纯培养,随机分为对照组和损伤组,每组分为1、3、5、7 d共4个时间点,采用划伤的方法建立星形胶质细胞对损伤反应的实验模型,通过形态学观察、免疫细胞化学染色、原位杂交图像分析等方法研究星形胶质细胞对损伤的反应及AQP9的表达变化.结果 星形胶质细胞受损后,形态学上表现为胞体肥大、突起增粗,呈反应性胶质化的典型特征;胶质纤维酸性蛋白（GFAP）免疫细胞化学染色增强;原位杂交分析表明,AQP9 mRNA表达在损伤后1 d显著增高,第3天至第5天达到高峰,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论 体外培养的星形胶质细胞对损伤表现为反应性胶质化、AQP9 mRNA表达增强,提示AQP9可能直接参与损伤性脑水肿的形成.     

颅脑火器伤早期脑微血管三维构型和超微结构实验研究

目的 探讨颅脑火器伤早期猫脑微血管三维构型和超微结构变化。方法 应用脑微血管铸型扫描电镜观察伤后脑微血管三维结构的变化，同时行脑超薄切片透射电镜观察微血管内皮细胞和神经细胞结构的变化。结果 颅脑火器伤后，脑微血管发生紊乱，既有血管痉挛又有血管扩张，出血和缺血并存，微血管括约肌出现病理性强力收缩，部分微血管破裂，血管内皮细胞微绒毛、空泡增多，紧密连接增宽，基底膜断裂，血管周围水肿及周围神经细胞损伤。结论 颅脑火器伤早期脑微血管结构出现损害，引起了脑微循环功能紊乱，导致脑的继发性损害。     

神经细胞牵张损伤后CsA对CaN活性和APP表达的影响

目的 研究神经细胞牵张损伤后环孢霉素A (cyclosporin A, CsA)对钙调神经磷酸酶(calcineurin, CaN)活性和淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein, APP)表达的影响.方法 在Bioflex培养皿原代培养大鼠大脑皮层神经元.细胞分为正常对照组、损伤组和CsA组.多功能小型生物撞击机25 kPa的压力牵张细胞.损伤后损伤组不予以处理,而CsA组则给以10 nM CsA. 各组伤后1、6、24h,3d标本的CaN活性和APP蛋白表达,分别采用酶底物显色和Western blot方法进行检测.结果 牵张损伤后1h神经元的CaN活性已较正常对照组显著增加(P＜0.05),伤后6h更为明显(P＜0.01),并持续到伤后3d(P＜0.01);而伤后10nM CsA干预能在各时相点非常显著地降低CaN的活性(P＜0.01).APP伤后1h有增加趋势,但在伤后6h差异才具有统计学意义(P＜0.05),伤后24h、3d这种增加则更加明显(P＜0.01).伤后10nM CsA干预能在6、24h,3d显著地降低APP的表达增加(P＜0.05),其APP的表达仍显著高于正常对照组(P＜0.05).结论 CsA能降低神经细胞牵张损伤后CaN活性的增加并减少APP表达的增加,可能起到神经保护作用.     

Effects of hydrostatic pressure on cultured bovine trabecular meshwork cells

Elevationofintraocularpressureisoneofthemaincharacteristicsofglaucoma,whichcausesdamagetovariousoculartis-sues[1'2].Theinvestigationofpressureontrabecularmeshworkcellswasseldomre-ported,andwaslimitedtoinvivoresearch-es[3'4],whichinvolvedmanyinfluencingfactors.Therefor,weculturedbovinetra-becularmeshwork(BTM)cellsinvljroandsubjectedthecellstodifferentlevelsofhy-drostaticpressuretoexploreitspossibleef-fects.1METHODS1.1ProcedureofBTMCellCuItureTheprocedureofisolationofbovinetrabeculumandth…     

豚鼠冲击波负压暴露后耳蜗毛细胞扫描电镜和透射电镜观察

目的 探讨冲击波负压(BUP)暴露后豚鼠耳蜗毛细胞的超微结构变化特点.方法 将豚鼠暴露于不同强度的实验性BUP 1次,8h～7d后应用扫描电镜和透射电镜技术观察耳蜗基底膜毛细胞的超微结构变化.结果 负压峰值为-22.4 ～-63.3kPa的BUP暴露后,豚鼠耳蜗毛细胞的超微结构变化发生了不同程度的病理性改变,主要表现为第2、3排外毛细胞散在性缺失,甚至节段性外毛细胞缺失、纤毛融合甚至巨纤毛形成及胞浆溢出,纤毛内微丝解聚、线粒体肿胀、溶酶体数量增多和胞浆内空泡形成.结论 不同强度的BUP暴露可导致豚鼠耳蜗毛细胞的超微结构病变,且BUP强度越高,病变越重.