神经酰胺上调bax表达诱导人内皮细胞凋亡

目的观察外源性神经酰胺（C2-ceramide）对内皮细胞凋亡及相关基因bax表达变化的影响。方法原代培养人脐静脉血管内皮细胞,用不同浓度的ceramide干预内皮细胞24h,并用同一浓度的ceramide作用内皮细胞不同时间后,采用TUNEL法检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）、Westernblot技术对baxmRNA及蛋白表达分析。结果神经酰胺处理组内皮细胞的凋亡阳性率显著高于对照组（P〈0．05）,且具有时间和剂量依赖性;对照组和5、12．5、25、50μmol／L神经酰胺处理24h后,各组细胞凋亡率随干预剂量的加大逐渐上升;终浓度25μmol／L的神经酰胺处理6、24、48h后,细胞凋亡率随时间延长而逐渐升高;神经酰胺处理组baxmRNA及蛋白的表达较对照组显著升高（P〈0．01～0．05）。结论外源性神经酰胺能通过上调bax表达诱导内皮细胞凋亡。     

白藜芦醇诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡及其机制

目的探讨白藜芦醇诱导人宫颈癌Hela细胞的凋亡作用及其分子机制。方法应用不同浓度的白藜芦醇作用于人宫颈癌Hela细胞,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡、细胞周期分布：免疫组化法检测Survivin及Caspase-3的表达。结果白藜芦醇能明显抑制Hela细胞的增殖,并呈剂量和时间依赖性。经白藜芦醇处理Hela细胞后,FCM分析发现各实验组S期细胞比例增高,G2／M期细胞比例减少,凋亡率明显高于对照组,并呈剂量依赖性（P〈0．01）;各实验组Heal细胞Survivin的表达均低于对照组,而Caspase-3的表达均高于对照组（P〈0．01）。结论白藜芦醇能明显抑制人宫颈癌Hela细胞的增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制Survivin的表达、上调Caspase-3的表达有关。     

人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞诱导凋亡作用

目的探讨人参皂苷Rg3对人宫颈癌Hela细胞的诱导凋亡作用。方法用浓度梯度Rg3处理Hela细胞,用流式细胞仪方法检测细胞凋亡及细胞周期的变化,用RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2、bax表达。结果 10、20、40 mg/L Rg3作用Hela细胞24 h后的凋亡率分别为(5.6±1.4)%、(10.3±2.7)%、(21.2±4.9)%,均高于对照组(P<0.01);同时随着Rg3浓度的增加,G2/M期细胞比例升高,Bcl-2表达明显降低,bax基因表达明显升高(P<0.01)。结论 Rg3能将Hela细胞阻滞在G2/M期,通过上调bax和下调Bcl-2表达诱导肿瘤细胞凋亡。其作用呈浓度依赖性。     

二氢青蒿素抑制结肠癌细胞株HCT-116并诱导凋亡的实验研究

目的：研究二氢青蒿素（Dihydroartemisinin,DHA）对人结肠癌HCT-116细胞的体外抑制并诱导凋亡,并探讨其作用机制。方法：以不同浓度的DHA作用于体外培养的HCT-116细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）检测细胞生长抑制率;应用流式细胞仪进行周期分析检测细胞凋亡情况;用Western Blotting法,检测不同浓度的DHA作用于肿瘤细胞时,凋亡相关蛋白Bcl-2,bax,cleavad-PARP表达情况。结果：在DHA作用后,HCT-116细胞生长受到明显抑制,IC50（半抑制浓度）值为14.18μmol/L。并呈一定的量效和时效依赖关系。流式细胞仪检测亚二倍体（sub-G0）比例增高;Western-Blotting检测药物处理细胞后Bcl-2表达水平下调,而Bax、cleavad-PARP表达水平明显上调。结论：DHA能抑制HCT-116细胞的生长增殖并诱导细胞发生凋亡。     

白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及其机制观察

目的 探讨白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及其可能机制.方法 体外培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs).在检测白藜芦醇影响AngⅡ诱导VSMCs增殖和活力的实验中,将细胞分为对照组、AngⅡ组(1μmol/L)、白藜芦醇浓度梯度(10、30、100μmol/L)组及AngⅡ+白藜芦醇浓度梯度组,各组细胞均反应0、6、12、24h,采用细胞计数法检测VSMCs增殖情况,MTT法检测VSMCs活力.在检测腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂复合物C对VSMCs生物活性影响的实验中,将细胞分为对照组、AngⅡ组、白藜芦醇+AngⅡ组及复合物C组+白藜芦醇+AngⅡ组,各组细胞反应24h后采用Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达.结果 与对照组比较,6、12、24h后AngⅡ组细胞活力和细胞数目均显著增高(P＜0.05);与AngⅡ组比较,不同浓度白藜芦醇+AngⅡ组细胞活力和细胞数目均显著降低(P＜0.05).另一方面,与对照组比较,AngⅡ组PCNA蛋白表达显著增高(P＜0.05);与AngⅡ组比较,白藜芦醇+AngⅡ组PCNA蛋白表达显著降低(P＜0.05);而与白藜芦醇+AngⅡ组比较,复合物C+白藜芦醇+AngⅡ组细胞数目、细胞活力及PCNA蛋白表达显著增高(P＜0.05).结论 白藜芦醇可抑制AngⅡ诱导的VSMCs增殖,其机制可能与AMPK的激活有关.     

紫檀芪对人食管癌EC9706细胞生长的影响及其机制

目的探讨紫檀芪（PrIT）对人食管癌EC9706细胞生长影响及其抗凋亡的机制。方法EC9706细胞分为对照组（正常DMEM培养液孵育）和肿组（DMEM培养液中含PTT,分别为15、30、45、60trM）,各组细胞分别处理24、48、72h。MTr法检测各组细胞存活率;黏附实验测定各组细胞黏附率;Westernblot方法检测各组细胞抗凋亡相关蛋白Bcl-2和凋亡相关蛋白Caspase．3表达。结果MTY结果显示,Prr对EC9706细胞生长有抑制作用,其中60trM处理72h组抑制效果最明显,呈药物浓度及时间依赖效应;黏附实验结果显示,PrITll处理72h可以显著减弱EC9706细胞黏附能力,并呈浓度依赖效应;Westernblot结果显示（72h）：P1Tr处理72h可以显著降低EC9706细胞Bcl-2的表达,同时显著升高其Caspase-3的表达。结论紫檀芪可抑制EC9706细胞生长,促进其凋亡,其机制与激活Caspase-3并抑制Bcl-2表达有关。紫檀芪可能是食管癌治疗领域具有开发前景的新药。     

川芎嗪对Ang Ⅱ诱导的大鼠VSMCs增殖的干预作用

目的探讨不同浓度川芎嗪不同作用时间对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响。方法建立AngⅡ诱导VSMCs增殖模型，用酶促反应定磷法观察不同浓度川芎嗪在不同作用时段对血管平滑肌细胞CaN活性的影响；应用免疫细胞化学法观察原癌基因c-fos和增殖细胞核抗原（PCNA）表达水平的变化。结果成功建立了AngⅡ诱导的VSMCs增殖模型，与对照组比较，AngⅡ组刺激后VSMCs增殖活度明显升高（P〈0.05）；川芎嗪各组CaN活性和c-fos及FCNA表达水平随川芎嗪的浓度和作用时间的延长而显著下降（P〈0.05）。结论AngⅡ能显著刺激大鼠血管平滑肌细胞增殖，川芎嗪能使血管平滑肌细胞中PCNA和原癌基因c-fos的表达减弱，其抑制细胞增殖的作用机制可能与其干预CaN依赖的信号转导途径有关，且在一定范围内呈剂量和时间依赖性。     

熊果酸对体外胃癌细胞Mcl - 1基因表达的影响

目的：观察熊果酸（ursolic acid）对体外胃癌细胞凋亡相关基因Mcl-1表达的影响。方法：胃癌细胞株（SGC-7901）分为对照组和熊果酸不同浓度组,将终浓度分别为1、5、25p,mol／L的熊果酸加入培养液中,观察胃癌细胞形态学变化,测定各组熊果酸作用2、8、24h后细胞凋亡率（流式细胞术）、Mcl-1转录及蛋白表达变化（RT—PCR法和Westernblot法）。结果：与对照组比较,熊果酸不同浓度组出现细胞皱缩、脱壁、细胞漂浮及细胞破碎现象,细胞凋亡率增加,Mcl-1转录及蛋白表达水平下降,有明显的药物作用时间和浓度依赖关系。结论：熊果酸能提高胃癌细胞凋亡发生率,降低Mcl-1基因的表达。     

雷公藤内酯醇诱导人脉络膜黑色素瘤株OCM-1凋亡的机制研究

目的探讨雷公藤内酯醇(TPL)对人脉络膜黑色素瘤株OCM-1增殖的影响,分析其诱导人OCM-1细胞凋亡的作用机制。方法将OCM-1细胞分为对照组和实验组,实验组加入20μl不同终浓度(5、10、20、40、80、160nmol/L)的TPL,对照组加入等量无血清RPMI 1640培养液,分别作用24、48、72h。采用MTT法检测TPL对OCM-1细胞增殖的影响,瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态学变化,流式细胞术检测不同浓度TPL诱导后OCM-1细胞的凋亡比例,Western blotting检测TPL诱导后凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、survivin及caspase-3的表达。结果 TPL可抑制OCM-1细胞增殖,48h及72h的IC50值分别为56.14±6.72、15.57±4.28nmol/L。TPL诱导OCM-1细胞后,在瑞氏-吉姆萨染色中可观察到凋亡小体。流式细胞术在不同浓度TPL诱导后的OCM-1细胞中均检测到亚二倍体凋亡峰。TPL诱导OCM-1细胞凋亡过程中,Western blotting检测显示Bax蛋白表达上调(P<0.01),Bcl-2、survivin蛋白表达下调(P<0.01),并可检测到活化的caspase-3。结论 TPL可抑制人OCM-1的增殖并诱导其凋亡,Bax、Bcl-2、survivin及caspase-3蛋白在其中可能具有重要作用。     

人参总皂甙对K562细胞凋亡相关基因XIAP和Survivin表达的影响

目的探讨人参总皂甙（TSPG）对K562细胞凋亡相关基因XIAP和Survivin表达的影响。方法采用四唑盐比色试验（MTT法）检测TSPG对K562细胞增殖的影响;Hoechst33342/PI荧光染色法观察K562细胞的凋亡;逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测K562细胞XIAP和Survivin基因的mRNA的表达。结果TSPG在低浓度时有促进细胞增殖的作用（P〉0.05）,高浓度时逐渐出现抑制作用（P〈0.05）;荧光技术显示不同浓度TSPG培养K562细胞后24和48小时后凋亡细胞数目明显增多（P〈0.01）;TSPG下调K562细胞XIAP和Survivin基因的表达（P〈0.01）。结论TSPG通过下调K562细胞XIAP和Survivin基因的表达从而诱导K562细胞凋亡。     

不同浓度地塞米松对人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响

目的观察不同浓度地塞米松对体外培养人骨髓间充质干细胞（hMSCs）成骨分化、增殖能力及凋亡率的影响。方法以梯度密度分离法获取人骨髓间充质干细胞进行体外培养,以1×10^-9、1×10^-8、1×10^-7、1×10^-6mol／L4种不同浓度地塞米松分别处理细胞。检测各组细胞的碱性磷酸酶（ALP）活性;RT-PCR法检测骨桥蛋白（OPN）基因的表达;四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定各组细胞的增殖率;流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果低浓度（1×10^-9mol／L）地塞米松对ALP的表达无显著作用（P〉0．05）,而1×10^-8mol／L及以上浓度的地塞米松可明显增加ALP的活性（P〈0．01）;所有实验组的hMSCs均有OPN mRNA表达,其表达强度随着地塞米松浓度增加而增强;1×10^-9mol／L地塞米松对细胞增殖无明显影响（P〉0．05）,1×10^-8mol／L及以上浓度的地塞米松可明显抑制细胞的增殖（P〈0．01）;体外培养的hMSCs凋亡率随地塞米松浓度的增加而升高（P〈0．01）。结论1×10^-8mol／L及以上浓度的地塞米松可显著增强hMSCs成骨分化能力,同时抑制细胞增殖并促进其凋亡。     

米非司酮对子宫肌瘤、内膜组织ER、PR、bcl-2、bax的影响

 目的 观察米非司酮治疗子宫肌瘤的效果及对子宫内膜的影响.方法 子宫肌瘤患者(对照组)20例及经米非司酮治疗的子宫肌瘤患者(治疗组)30例术中均取瘤体及内膜,采用免疫组化SP方法检测肌瘤和内膜组织中雌、孕激素受体ER、PR和凋亡基因bcl-2、bax的表达.结果 服米非司酮后,PR在肌瘤和内膜组织的阳性表达率明显下降(P<0.05),ER的阳性表达率变化不大(P>0.05);bcl-2在肌瘤组织的阳性表达率无变化(P>0.05),在内膜组织的阳性表达率明显下降(P<0.05);bax在肌瘤组织的阳性表达率明显上升(P<0.05),在内膜组织的阳性表达率无差别(P>0.05).米非司酮治疗后内膜83.3%(25/30)表现为增生期改变,其中32%(8/25)为简单增生过长.结论 米非司酮能促进子宫肌瘤细胞凋亡,同时又可能促进子宫内膜的增生.     

高同型半胱氨酸血症致血管平滑肌细胞增殖的机制初探

 目的 探讨高同型半胱氨酸血症(hyperhomocysteinemia, HHcy)致血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMC)增殖在动脉粥样硬化发病中的机制.方法 整体水平实验:82例研究对象分为动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)组54例,对照组28例.荧光生化法检测血浆总同型半胱氨酸(total homocysteine, tHcy)水平,甲基化特异的 PCR(Methy-specific PCR,MSP)法检测雌激素受体α(estrogen receptor-α ,ER-α)启动子区CpG岛的甲基化状态.细胞水平实验:体外培养的人脐动脉VSMC,用不同浓度同型半胱氨酸(homocy steioe, Hcy)处理,MTT法观察Hcy对平滑肌细胞生长的影响,MS-PCR法和Rt-PCR法检测ER-α基因启动子区甲基化程度及mRNA的表达.结果 整体水平实验中,AS患者中甲基化率为70.4%,对照组甲基化率为28.6%,差异具有统计学意义(P<0.05).细胞水平实验中,MTT结果显示Hcy对VSMC具有明显促增殖效应.Hcy显著增加ER-α基因启动区的甲基化修饰,并使ER-αmRNA的表达进行性减少.结论 Hcy通过干扰DNA的甲基化修饰,使ER-а基因高甲基化可能是高同型半胱氨酸血症促使VSMC增殖,并引起动脉粥样硬化的重要机制.     

白介素-1β对人牙周膜成纤维细胞MMP-13表达影响的研究

目的 探讨白介素-1β（IL-1β）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）中基质金属蛋白酶-13（MMP-13）表达影响的研究.方法 体外分离培养hPDLFs并随机分为对照组和实验组,对照组中加入等量无血清培养液,实验组加入不同浓度IL-1β（0 ng/ml、0.5 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml）作用hPDLFs 24 h.采用RT-PCR检测MMP-13 mRNA的表达情况,并选取最适浓度作用24 h,采用Western blot检测MMP-13蛋白表达的变化情况.结果实验组与对照组比较,MMP-13在IL-1β浓度为10 ng/ml和20 ng/ml时mRNA表达最为明显（P＜0.05）,10 ng/ml组和20 ng/ml组MMP-13 mRNA表达相比较,无明显差异（P＞0.05）.采用10 ng/ml IL-1β作为最适浓度进行刺激,并作用hPDLFs 24 h,与对照组比较,MMP-13蛋白表达显著增加,具有显著差异性（P＜0.05）.结论 在IL-1β调控下,hPDLFs中MMP-13的表达显著增加,并呈明显的浓度依赖性,而MMP-13表达的增加可能是引起正畸治疗过程中牙根吸收的重要机制之一.     

染料木黄酮联合5-FU对结肠癌HCT-116细胞株增殖及凋亡的影响

目的探讨染料木黄酮联合5-氟尿嘧啶对HCT-116细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法经不同浓度的Gen和(或)5-FU处理HCT-116细胞后,用MTT法检测细胞的生长抑制效应;流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化情况;RT-PCR检测Suvivin表达水平。结果 Gen与5-FU联合应用后能明显抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,使细胞发生S期阻滞,均较对照组和单用药组作用增强,并且下调了Suvivin的mRNA表达,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 Gen可抑制结肠癌HCT-116细胞的增殖,将细胞阻滞于S期,并诱导细胞的凋亡,与5-FU联合应用具有显著协同效应,其机制可能与下调Suvivin表达有关。     

类胰蛋白酶对肝星状细胞增殖及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响

目的观察类胰蛋白酶对肝星状细胞（HSC）增殖及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响，探讨类胰蛋白酶在肝纤维化中的作用。方法用Percoll密度梯度离心法分离、培养大鼠HSC，经系列浓度类胰蛋白酶作用后，分组进行如下实验：用噻唑兰比色法（MTT）检测HSC的增殖；用RT—PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA的表达。结果肥大细胞（MC）类胰蛋白酶（1-100ng／m1）能够促进HSC增殖及Ⅰ型胶原mRNA的表达，此作用呈剂量依赖性（各实验组与对照组比较，P〈0．05）。结论肥大细胞类胰蛋白酶可直接作用于HSC，参与肝纤维化过程。     

华蟾素诱导人膀胱癌细胞株T24凋亡研究

目的研究华蟾素注射液（cinobufacin,Cino）对膀胱癌细胞株T24的体外增殖抑制及诱导凋亡作用,探讨其对膀胱癌的l临床应用价值。方法不同浓度Cino单独作用和配伍丝裂霉素C（MMC）作用于膀膀癌T24细胞株后,通过流式细胞术（FCM）以及DNA凝胶电泳检测细胞的凋亡情况,应用光学显微镜观察细胞形态学的变化。结果除Cino（25mg／m1）组外,其它处理组均可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化。DNA琼脂糖电泳可见到凋亡的特征性“梯子”条带。流式细胞仪结果示,除高浓度的Cino（25mg／m1）组外．其余各组均见到在G0／G1期前出现亚二倍体峰（APO峰）,且阻滞细胞生长在G0／G1期。各药物浓度组与对照组的S期比率（SPF）和增殖指数（PI）分别进行比较（P〈O．05）有统计学差异。结论Cino对膀胱肿瘤1、24细胞有诱导凋亡和直接杀死的双重作用。具体表现为高浓度（25mg／m1）作用于细胞时,对细胞表现为直接杀死作用。而在较低浓度范围内（O．001～2．5mg/ml）,表现为对细胞诱导凋亡的作用,且具有一定的时效和量效关系：配伍丝裂霉素应用时．对T24细胞的诱导凋亡作用明显增强．两药有协同作用。具有治疗膀胱癌的临床价值     

钾离子通道阻断剂及开放剂对大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的检验钾离子通道开放剂及阻断剂对培养大鼠血管平滑肌细胞凋亡的影响。方法采用组织块法原代培养大鼠腹主动脉血管平滑肌细胞。原代培养的第5代细胞消化后培养于多个25T培养瓶中。在培养瓶中加入不同的试剂：A．对照组;B．Pinacidil 0．2mM;C．优降糖0．05mM;D．Pinacidil 0．2mM＋优降糖0．05mM。显微镜下观察并拍照。药物作用24h后消化细胞,以AnnexinV和PI双染色。上流式细胞仪检测。结果使用KAT,通道开放剂Pinacidil 0．2mM后12h,显微镜下观察见细胞形态皱缩,呈球形,体积缩小。流式细胞仪检测见晚期凋亡细胞比例增加,而优降糖0．05mM可逆转Pinacidil0．2mM的这种作用,优降糖0．05mM本身并不增加或减少凋亡细胞的比例。结论血管平滑肌细胞膜上的钾离子通道KAT,参与了血管平滑肌细胞凋亡。