单链构象多态性分析技术检测结核杆菌利福平耐药基因

目的：研究本地区临床分离结核杆菌ｒｐｏＢ基因突变与利福平（ＲＦＰ）耐药性的关系。方法：对３６株ＲＦＰ敏感株和４４株ＲＦＰ耐药株ｒｐｏＢ基因的３２８ｂｐ的ＰＣＲ扩增产物进行单链构象多态性（Ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄ ｃｏｍｆｏｒｍａｔｉｏｎｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ,ＳＳＣＰ）分析。结果：３６株ＲＦＰ敏感株的ＳＳＣＰ带谱均与参考株Ｈ３７Ｒｖ相同,４４株ＲＦＰ耐药株中,２５株高度ＲＦＰ耐药株和１１株低度ＲＦＰ耐药株的ＳＳＣＰ带谱与Ｈ３７Ｒｖ带谱有差异;另８株低度ＲＦＰ耐药株的ＳＳＣＰ带谱与Ｈ３７Ｒｖ带谱相同。结论：ＳＳＣＰ分析可检测出ｒｐｏＢ基因突变,该基因突变与本地区临床分离结核杆菌对ＲＦＰ耐药有关。     

结核杆菌利福平耐药与rpoB基因突变的相关性研究

目的：分析西安地区耐利福平（RIF）结核杆菌临床分离株rpoB基因突变的特点,探讨快速检测结核杆菌耐RIF基因型的方法．方法：对120株西安地区收集的结核杆菌临床分离株（药敏结果为耐RIF81株,对RIF敏感39株）,分别采用聚合酶链反应一单链构象多态性（PCR-ssce）和等位基因特异性多重聚合酶链反应（MAS—PCR）检测rpoB基因突变情况．结果：PCR—SSCP检测,耐RIF菌株中rpoB基因突变发生率为85％（69／81）,39株敏感株中仅有1株发生突变,突变率为2％（1／39）．MAS—PCR检测,耐RIF菌株中rpoB基因突变发生率为93％（75／81）,39株敏感株中未发现rpoB基因突变;531,516和526位点突变的比例分别为45％（34／75）,24％（18／75）和20％（15／75）．结论：西安地区结核杆菌临床分离株耐RIF与rpoB基因突变相关,MAS-PCR检测rpoB基因可作为临床耐RIF结核杆菌的简单快速准确的早期诊断方法．     

结核杆菌耐药的分子机制研究

近年来,结核病发病率呈上升趋势,其中一个主要原因是多重耐药结核菌株(MDR-MTB)的出现。耐药结核菌使病程延长,死亡危险性上升,治疗失败会导致长期传染性,扩大耐药性传播的机会,增加治疗费用。耐药结核菌株的快速增长和缺乏有效的新的抗结核药,以及对快速诊断耐药菌株的需求,大     

结核分枝杆菌rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度的相关性

目的 研究结核分枝杆菌，rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度强弱之间的关系。方法应用绝对浓度法测定58株结核分枝杆菌对4种－线抗结核药物的药敏特性，对耐利福平结核分枝杆菌的耐药谱进行分析。同时对含有核心突变区的结核分枝杆菌，rpoB基因片段进行PCR扩增和DNA测序，分析rpoB基因突变与多重耐药的关系，以及突变位点和突变性质与利福平耐药强弱的相关性。结果58株结核分枝杆菌中，利福平耐药株36株，敏感株22株。36株耐药株均存在，rpoB基因突变，其中88．9％(32／36)至少对利福平和异烟肼同时耐药。90．O％的利福平高度耐药株(18/20)与rpoB基因531位和526位密码子突变相关。密码子531位和526位各有1株双碱基突变，且均为多重耐药株。结论结核分枝杆菌，rpoB基因突变所致的利福平耐药株大部分对异烟肼耐药，因此单独检测rpoB基因突变即可初步筛选多重耐药的结核分枝杆菌；而rpoB基因的突变位点与利福平耐药程度之间具有一定的相关性。     

结核杆菌耐药试验结果分析

结核菌株对抗结核药物的耐受性直接影响化疗疗效,尤其因不合理用药造成继发及原发耐药菌株的出现,为控制结核病流行造成困难,是临床和防治人员十分关注的问题。本文对近年来分离到的结核菌株做了耐药性测定,现将结果分析如下。     

痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因的快速检测及利福平耐药机制研究

目的快速检测痰耐药结核分枝杆菌rpoB基因，了解利福平耐药的分予机制。方法根据结核分枝杆菌rpoB基因的耐利福平决定区设计引物．用PCR方法从耐药肺结核患者痰及临床分离菌株扩增rpoB基因片段，对扩增获得的rpoB基因片段进行序列测定，比较分析耐多药、全耐、单耐利福平、全敏感或标准结核分枝杆菌株之间的基因序列差异。结果于6h内从耐药肺结核痰中快速检测到rpoB举因。耐多药菌株、全耐及单耐利福平分离菌株均检测有rpoB基因点突变，突变位点主要为531、516或526常见密码子，且绝大多数为单碱基突变，发现1例MDR-TB出现479位和531位密码子同时突变。敏感株和标准株无基因突变。结论PCR及序列分析方法可快速、准确检测结核分枝杆菌rpoB基岗及其突变，结核分枝杆菌埘利福平的耐药性与rpoB基因点突变有关。     

结核分枝杆菌利福平耐药分子药敏结果与其表型药敏差异的研究

目的 分析结核分枝杆菌利福平耐药的分子药敏(Xpert MTB/RIF)检测结果与表型药敏(Bactec MGIT960)检测的差异性.方法 从2018年1月至2020年12月在佛山市第四人民医院进行Xpert MTB/RIF检测的4620例患者中筛选出480株结核分枝杆菌,利用Xpert MTB/RIF、Bactec...     

结核杆菌187株原发耐药分析

随着耐药结核菌株不断增多,由之而生的原发耐药结核菌株增多,使预防和治疗耐药结核病成为当务之急。本文就１８７株初治菌阳肺结核的结核杆菌进行耐药性测定,报告如下。１材料和方法１．１对象１９９３年以来在我院就诊或住院的初治肺结核患者,以前从未用过抗结核化疗...     

结核分支杆菌耐药分子机制的检测技术的研究

目的：探讨结核分支杆菌对异烟肼、利福平耐药的分子机制，建立快速检测耐药分支杆菌基因型的分子生物学方法。方法：采用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR—SSCP)同时检测结核分支杆菌敏感株和耐异烟肼、利福平耐药株的KayG基因、rpoB基因突变。结果：78株结核分支杆菌临床分离株均未发现KatG、rpoB基因缺失。以结核分支杆菌H37RV为对照，36株药物敏感株的KarG、rpoB基因SSCP图谱均正常。42株同时耐异烟肼和利福平的多耐药株中，KatG和rpoB基因突变率分别为66．7％(28／42)，90．5％(38／42)。结论：结核分支杆菌耐异烟肼、利福平耐药性的产生是由于KatG基因和rpoB基因突变所致。应用PCR-SSCP技术可同时快速检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药性。     

安徽省结核病结核杆菌耐药状况的调查

目的为了解安徽省新发涂阳肺结核病人的耐药状况。方法随机选择安徽皖南、皖中和皖北的6个县结核病项目门诊,收集项目门诊的初治涂阳病人的结核杆菌;采用WHO／IUATLD推荐的比例法,对异烟肼（H）、链霉素（S）、利福平（R）、乙胺丁醇（E）等4种抗结核药敏试验。结果449株结核分枝杆菌中对4种抗结核药物全部敏感者248例,占55．23％;201例耐药,总原发耐药率为44．77％,以耐S为最高,占31．4％。结论安徽省结核病耐药水平是较严重省份,对结核病控制工作将是一个大的挑战,耐药结核杆菌的控制将是下一步结核病控制重点之一。     

耐多药结核分枝杆菌基因突变在耐药性检测中的应用

目的:探讨结核分枝杆菌耐链霉素(SM)和利福平(RFP)的耐药分子机制,应用聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)同时检测rpsL基因、rpoB基因突变在结核分枝杆菌耐SM和RFP耐药性测定中的应用价值。方法:采用PCR-SSCP技术对168株结核分枝杆菌临床分离株rpsL基因、rpoB基因突变同时进行检测。即首先用PCR方法同时扩增RFP、SM的rpoB基因和rpsL基因,然后进行SSCP分析。结果:以结核分枝杆菌H37RV为对照,82株药物敏感株的rpsL基因、rpoB基因均未见SSCP图谱异常。特异性为100%。86株同时耐SM和RFP的耐药株中,68株(79.1%)有rpsL基因图谱异常;81株(94.2%)有rpoB基因图谱异常。结论:rpoB基因突变和rpsL基因突变分别是结核分枝杆菌耐RFP和SM的主要分子机制。应用PCR-SSCP技术可同时快速检测结核分枝杆菌SM和RFP耐药性。     

耐利福平结核分支杆菌rpoB基因突变位点的分析

目的 研究上海地区耐利福平结核分支杆菌ropB基因的突变特点,探讨DNA序列分析在药敏测定中的意义。方法 对58株结核分支杆菌rpoB基因片段（约213bp)进行PCR扩增,其中包括核心突变区的69个碱基,并对PCR产物进行DNA测序。其中耐药株36株,敏感株22株。结果 所有58例中,36株耐药株均存在rpoB基因突变,氨基酸突变率531位为47．2％,526位为25．0％,22株敏感株均无突变。结论 rpoB基因核心突变区发生突变是结核分支杆菌对利福平耐药的主要原因,其中531位丝氨酸和526位组氨酸是最常见的突变位点。     

利用寡核苷酸芯片快速检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB基因突变

目的:开发快速检测结核分枝杆菌利福平耐药rpoB寡核苷酸突变的基因芯片。方法:根据结核杆菌rpoB基因序列设计探针和引物并制备基因芯片,从临床痰标本中提取结核菌的基因组DNA,PCR扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段,荧光标记后与芯片上的特异性寡核苷酸探针进行杂交,同时与DNA测序法比较。结果:22株临床痰标本有18株可用寡核苷酸芯片检测出来,正确率可达82%;患者痰液中少量DNA足够进行芯片检测,无须细菌培养。结论:利用寡核苷酸芯片检测结核菌对利福平的耐药性具有较高的准确性和敏感性,可以应用于临床耐药性诊断。     

PCR-SSCP法检测结核分枝杆菌耐药性

目的：探讨耐多药结核分枝杆菌耐药基因突变与耐药性的关系以及聚合酶链反应-单链构象多态性分析(poly merase chain reaction-single strand cinfomlation polymorphism，PCR-SSCP)方法的临床应用价值。方法：用PCR-SSCP方法检测58株结核分枝杆菌临床分离株katG，rpoB，rpsL基因突变并与常规药敏试验检测结果进行对比。结果：经常规药敏试验检测，58株结核分枝杆菌临床分离株中共有41株耐药，其中，耐异烟肼(INH)为35株，高耐药株27株；耐利福平(RFP)为31株，高耐药株24株；耐链霉素(SM)有31株，高耐药株26株。同时耐3种药物的有21株(51．2％)，耐2种药物的14株(34．1％)，单耐药株6株(14．6％)．PCR-SSCP方法对58株临床分离株katG，rpoB，rpsL基因突变的检测率为40％(23／58)，45％(26／58)，38％(22／58)，其中检出3个基因同时突变的有13株(32％)，2种基因突变的12株(29％)，1种基因突变的有10株(23．8％)．常规药敏试验与PCR-SSCP法检出结核分枝杆菌同时耐3种药物的符合率为61．9％(13／21)，检出耐2种药物的符合率为85．70k，(12／14)，检出耐1种药物的符合率为50％(3／6)．高耐药株中突变率为80．5％(62／77)，低耐药株中突变率为60％(12／20)．结论：PCR-SS-CP方法对耐2种以上药物的结核杆菌检出率较高，且耐药基因突变率随着耐药浓度增高而增高。将PCR-SSCP法与药敏试验联合应用可互相弥补，已成为临床指导用药的好方法。     

利血平对耐药结核分枝杆菌临床株的作用

目的 观察泵抑制剂(利血平)对耐药结核分枝杆菌临床分离株的作用.方法 应用3组BacT.ALERT3D培养仪系统的培养基,分别命名为A、B、C组培养基.3组培养基均接种42株耐药结核分枝杆菌临床分离株,其中A、B组同时加入利福平1 μg/mL;环丙沙星2 μg/mL.;利福平1 μg/mL和环丙沙星2 μg/mL;A、C组同时加入利血平20 mg/L;C组未加入任何抗结核药物.结果 在A组培养基中,耐利福平1μg/mL的14株菌株中有2株恢复对利福平的敏感性,12株仍然耐药;耐环丙沙星2μg/mL的6株菌株和耐利福平1μg/mL及环丙沙星2μg/mL的22株菌株全部恢复药物敏感性.在B组培养基中,42株耐药结核分枝杆菌临床分离株,药物耐药性无变化.在C组培养基中,42株耐药结核分枝杆菌临床分离株明显生长,说明利血平对所研究菌株无抑制作用.A组与B组培养基细菌的药物敏感性差异有统计学意义(P＜0.01).结论 结核分枝杆菌存在耐药机制之一的外排系统;泵抑制剂之一利血平对耐药的结核分枝杆菌临床分离株有抑制其外排作用,使结核分枝杆菌恢复敏感性.     

丙硫乙烟胺抗结核分枝杆菌临床耐药界限的研究

目的通过测定丙硫乙烟胺（Th）对128株临床分离的结核分枝杆菌的最低抑菌浓度（MIC）,分析MIC与既往Th的用药史及经过含Th方案治疗的疗效相关性,以期确定Th的临床耐药界限。方法住院的结核病患者128例,留取痰或体液进行结核分枝杆菌培养、药敏试验及MIC测定,并系统观察47例肺结核患者接受Th治疗方案的痰菌阴转率,各组间率的比较用x^2检验。结果（1）既往未接受Th药物治疗的临床分离株中,MIC=2．5μg／mL者占72．5％,MIC≤5．0μg／mL者占77．5％;（2）既往曾接受Th药物治疗的临床分离株中,MIC〉5．0μg／mL者占96．4％;（3）如以MIC≥5．0μg／mL为临床耐药界限。MIC〈5．0μg／mL与MIC≥5．0μg／mL比较,3、6、12个月患者痰菌阴转率分别为53．6％、75．0％、82．1％及≥5．0μg／mL 3、6、12个月患者痰菌阴转率分别为53.6%,75.0%,82.1%及15．8％,31．6％、42．1％,两组比较差异均有非常显著性（P〈0．01）。结论（1）曾接受Th药物治疗的结核病患者分离株MIC显著高于未接受Th治疗的患者,随着用药时间的延长,MIC随之升高;（2）根据MIC与临床疗效分析结果,提示采用MIC≥5．0μg／mL为临床耐药界限为宜;（3）既往曾接受Th药物治疗的结核病患者,应进行Th的药敏试验,并坚持合理、联合用药的原则,防止耐药株的产生。     

128例肺结核患者结核分枝杆菌耐药情况

目的 了解唐山市肺结核患者的流行病学情况,分析患者痰液中临床菌株的耐药情况,为结核病尤其是耐药性结核病的防控提供基础依据。方法 问卷调查法收集研究对象的基本资料,调查内容包括年龄、性别、身高、体重、烟酒习惯、受教育程度、职业、初复治情况、服药情况等。经痰培养,分离患者的结核分枝杆菌后接种到改良罗氏培养基中进行培养,采用银科分枝杆菌药敏检测试剂盒对菌株进行药敏检测。对所得结果进行描述性统计分析。结果 128例患者,平均年龄(52.59±18.12)岁,男、女性比为3∶1,以初中以下文化程度居多,农民和工人所占比例为73.44%,BMI比值属于偏瘦的占43.75%,初治患者占83.59%。临床分离菌株耐药株占82.81%。耐药率前三位的药物分别为阿莫西林（49.22%）、氯法齐明（32.03%）和对氨基水杨酸（29.69%）,一线抗结核药物耐药株占36.72%,二线抗结核药物耐药株75.78%。结论 唐山市肺结核患者流行病学分布和全国平均水平相近,但耐药率偏高,尤其是二线抗结核药物耐药率远高于平均水平。     

L型结核分枝杆菌rpoB基因突变与利福平耐药性研究

目的：探讨L型结核分枝杆菌rpoB基因突变与利福平耐药性的关系。方法：采用PCR和PCR-DS技术对23例初治肺结核和45例复治肺结核患者L型结核分枝杆菌临床分离株进行rpoB基因检测和序列分析。结果：初治肺结核L型结核分枝杆菌rpoB基因突变率为4.3%,复治肺结核耐L型结核分枝杆菌rpoB基因突变率为40.0%。结论：复治肺结核L型结核分枝杆菌rpoB基因突变率高于初治肺结核,L型菌rpoB基因突变是造成结核分枝杆菌形成利福平耐药性的主要机制。     

DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐利福平基因的研究

目的用DNA微阵列芯片法检测结核分枝杆菌耐药基因,为临床诊治提供实验依据。方法收集2013年6月—2015年6月1 005份痰标本,采用直接涂片检测结核分枝杆菌情况,阳性样本分别用改良罗氏培养基培养和DNA微阵列芯片法进行鉴定,分析耐药基因情况。结果 1 005份痰标本的涂阳率为40.3%(405/1 005)。DNA微阵列芯片法的阳性率为98.0%(397/405),明显高于改良罗氏培养基培养法(44.2%,179/405),P0.01。DNA微阵列芯片法结果显示,有90株(24.9%,90/361)结核分枝杆菌发生利福平耐药,其中33株(占36.7%)发生单纯rpo B基因突变,54株(占60.0%)发生rpo B和kat G基因突变,3株(占3.3%)发生rpo B和inh A基因突变;rpo B基因最常见的突变位点依次为531、526、516、511,突变频率分别为44.4%、25.6%、10.0%、5.5%;突变频率最高的三种突变类型依次为:531位点(C-T)占54.0%(29/90),531位点(C-G)占11.1%(10/90)及526位点(C-T)占11.1%(10/90);单位点突变和二位点联合突变分别有81株(占90.0%)和9株(占10.0%)。结论 rpo B基因突变是导致肺结核患者RFP耐药的分子基础,其突变位点呈多样性。