银杏二萜内酯A,B,K抗血小板聚集作用机制研究

为研究银杏二萜内酯A,B,K(GA,GB,GK)对家兔血小板聚集功能的影响,比较三者作用机制的异同及强弱,该研究采用体外实验法,观察不同剂量GA,GB,GK对血小板活化因子(PAF)诱导家兔血小板聚集作用的影响。研究结果显示,3种银杏二萜内酯均可抑制PAF诱导的体外家兔血小板聚集,其强弱顺序为GKGBGA;三者还能够拮抗[~3H]PAF与PAF受体的特异性结合,拮抗能力同样为GKGBGA。进一步研究三者对于PAF诱导后血小板中胞内[Ca~(2+)]i动员及胞内c AMP水平的变化,发现三者均能够剂量依赖性的抑制胞内[Ca~(2+)]i动员并提高胞内c AMP水平,且它们的作用强弱与拮抗PAF受体能力的强弱一致。表明银杏二萜内酯GK对于PAF受体具有高度的选择性,并能够通过激活c AMP信号通路、抑制胞内[Ca~(2+)]i动员的方式达到抑制血小板聚集的目的,GB、GA对PAF受体也有较强的拮抗作用,但弱于GK。     

银杏内酯B衍生物抗血小板聚集作用和作用机制

目的：探讨银杏内酯B衍生物（XQ）抗血小板聚集的作用及其机制。方法：运用比浊法测定静脉给药后PAF诱导的家兔血小板聚集作用,采用放射配基结合试验观察[3H]PAF与兔血小板受体特异性结合的作用。结果：XQ1.95、3.90、7.80mg·kg^-1对家兔血小板聚集的抑制率分别为29.8%、43.5%和55.2%（P〈0.01）,PAF与家兔血小板膜上PAF受体结合的平衡解离常数（KD）=8.31×10^-5mmol·L^-1,最大结合容量（BMAX）=2.62×10^-9mmol/10^8血小板。XQ和银杏内酯B（GB）可抑制[3H]PAF与兔血小板受体的特异性结合,抑制常数（Ki）分别为8.72×10^-8、7.13×10^-7mol·L^-1。结论：XQ具有抗血小板聚集作用,Ki值接近,其拮抗PAF受体的能力与GB相似。     

银杏二萜内酯类化合物拮抗PAF诱导的血小板聚集及对神经细胞的保护作用

该研究通过对银杏二萜内酯类化合物拮抗PAF诱导的血小板凝集和神经保护作用进行检测来探讨银杏内酯制剂治疗缺血性脑卒中的作用机制。实验以PAF作为血小板聚集诱导剂,将银杏二萜内酯分别加入采集的兔血中,采用比浊法检测各化合物对血小板凝集的抑制作用;在L-谷氨酸诱导的原代皮质神经细胞损伤模型上采用MTT检测细胞活率,使用荧光染料Fura-2 AM检测细胞内游离钙离子浓度,通过Hoechst 33258染色法检测银杏二萜内酯对神经细胞凋亡的抑制作用。结果发现银杏二萜内酯类化合物中抑制PAF诱导的血小板凝集活性大小依次为银杏二萜内酯K(GK)、银杏二萜内酯B(GB)、银杏二萜内酯A(GA)、银杏二萜内酯C(GC)、银杏二萜内酯M(GM)、银杏二萜内酯J(GJ)和银杏二萜内酯L(GL);其中GB和GK(1~100μmol·L~(-1))能显著减轻L-谷氨酸所致的细胞损伤,表现为神经细胞活率明显提高(P0.05),细胞内钙离子浓度明显下降(P0.05)和细胞凋亡率明显减少(P0.05)。该研究明确了银杏二萜内酯各化合物在抑制PAF诱导的血小板凝集和神经细胞保护方面的活性与作用特征。     

银杏内酯B对血小板活化因子激活的大鼠中性白细胞功能的影响

探讨了银杏内酯Ｂ对体外血小板活化因子激活的大鼠中性白细胞某些功能,包括溶酶体酶的释放,超氧阴离子的产生以及细胞内游离钙浓度改变的影响。结果显示：银杏内酯Ｂ在０．５￣１００μｍｏｌ／Ｌ终浓度下,可使β－葡萄糖苷酸酶释放量降低４４．２％￣７３．２％,在０．１￣４０μｍｏｌ／Ｌ终浓度下,可使超氧阴离子生量降低２７．４％￣５０．０％;在０．１￣１００μｍｏｌ／Ｌ终浓度下,使ＰＡＦ和ｆＭＬＰ刺激引起的细胞内     

PAF受体拮抗剂苦银杏内酯B对内毒素休克不同介质的作用

目的：研究内毒素休克时ＰＡＦ对ＴＮＦ、ＮＯ２／ＮＯ３的影响，探讨其可能的机理。材料与方法：将家兔随机分为５组，Ⅰ组：假手术对照组ｎ＝８；Ⅱ组：低剂量内毒素休克组ｎ＝１５，Ｅ．ｃｏｌｉ内毒素静脉一次性注射２００μｇ／ｋｇ；Ⅲ组：高剂量内毒素休克组ｎ＝１５，内毒素静脉一次性注射３００μｇ／ｋｇ；Ⅳ（或Ⅴ）组：低（或高）剂量内毒素并苦银杏内酯Ｂ预处理组ｎ＝１５，苦银杏内酯Ｂ５ｍｇ／ｋｇｉｐ注射，１０分钟后再分别静脉注射内毒素２００或３００μｇ／ｋｇ。于给药前、给药后即刻、３０、６０、１８０、３００、４８０分钟取血，测定血ＰＡＦ、ＴＮＦ、ＮＯ２／ＮＯ３。结果：内毒素休克时血浆ＰＡＦ、ＴＮＦα、ＮＯ２／ＮＯ３等均显著升高，且与内毒素的剂量密切相关。苦银杏内酯Ｂ预处理后对ＰＡＦ、ＴＮＦα的水平没有明显影响；对血浆ＮＯ２／ＮＯ３的升高有明显的抑制作用。苦银杏内酯Ｂ预处理后可使动物的存活率有较大的提高。结论：ＰＡＦ受体拮抗剂苦银杏内酯Ｂ可选择性地影响休克介质（如ＰＡＦ、ＴＮＦ、ＮＯ２／ＮＯ３等）的释放，提高动物的存活率。     

百裕银杏内酯注射液抑制家兔血小板聚集作用的实验研究

目的观察不同低剂量的百裕银杏内酯注射液对家兔血小板聚集功能、超微结构及PF-4和B—TG的影响。方法将日本大耳兔分为百裕银杏内酯高、中、低剂量组及生理盐水组,分别予相应药物静注1周．采用体内实验法,观察各组对血小板活化因子（PAF）诱导的家兔血小板聚集作用的影响,以及血小板超微结构和PF-4和B—TG水平的变化。结果百裕银杏内酯各剂量组较生理盐水组均能抑制PAF诱导的家兔血小板聚集,减少聚集型血小板数量并使树突型血小板突起变少变短,降低PF-4和8-TG的表达（P〈0．01）。结论百裕银杏内酯注射液能够抑制PAF诱导的血小板聚集,抑制血小板的活化。     

香丹注射液对家兔血小板聚集功能的影响

目的研究香丹注射液对血小板聚集功能的影响。方法进行体内、体外试验,观察香丹注射液对不同诱导剂诱导的家兔血小板聚集率的影响。结果香丹注射液体内能抑制二磷酸腺苷(ADP)、血小板活化因子(PAF)诱导的血小板聚集;体外试验对ADP、PAF诱导的血小板聚集亦有抑制作用,半数抑制浓度(IC50)分别为76.73 mg mL-1、89.21 mg mL-1。结论香丹注射液具有抑制血小板聚集的作用。     

LC-MS/MS分析银杏二萜内酯葡胺注射液在人尿液中的代谢产物

目的:研究银杏二萜内酯葡胺注射液在人尿液中的主要代谢产物及其代谢途径。方法:3名受试者静脉滴注银杏二萜内酯葡胺注射液后收集0~6 h的尿样,分别按酸化和不酸化样品处理后,以液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)对样品进行分析。采用ACE C_(18)-AR色谱柱(4.6 mm×150 mm,3μm),酸性HPLC条件流动相Ⅰ为乙腈-0.4%甲酸铵水溶液(p H3.2)梯度洗脱,中性HPLC条件流动相Ⅱ为乙腈-水梯度洗脱,流速0.7 m L·min~(-1)。通过比较空白尿样和给药后尿样的总离子流和提取离子流色谱图以及各个色谱峰的保留时间、准分子离子和二级碎片离子,分析银杏内酯A(GA),银杏内酯B(GB)和银杏内酯K(GK)在人体内可能的代谢产物。结果:除原型药外,共鉴定了12个代谢产物,其中GA相关的代谢产物有6个,包括5个Ⅰ相和1个Ⅱ相代谢产物;GB相关的有4个,包括1个Ⅰ相和3个Ⅱ相代谢产物;GK相关的有2个,包括1个Ⅰ相和1个Ⅱ相代谢产物。结论:GA在人体内主要的代谢途径为羟基化和内酯环水解,并可进一步共价结合成硫酸酯;GB主要的代谢途径为羟基化和内酯环水解,并可进一步共价结合成硫酸酯、葡萄糖醛酸苷或谷胱甘肽结合物;GK在人体内主要的代谢途径为甲基化葡萄糖醛酸结合反应。     

补阳还五汤注射液对PAF诱导的家兔血小板聚集功能的影响

观察补阳还五汤注射液体外给药对血小板活化因子诱导的家兔血小板聚集功能的影响。方法应用体外血小板聚集功能测定法;结果补阳还五汤注射液体外给药可明显抑制家兔洗涤血小板和未洗涤血小板的聚集功能,对洗涤血小板聚集功能的抑制作用强于未洗涤血小板,且有一定的量效关系。     

银杏苦内酯B对家兔内毒素休克心功能抑制的防治作用研究

家兔内毒素休克时MAP、LVSP、±dp/dtmax、IP和Lo等显降低，此变化与血中PAF水平呈显的负相关。PAF受体拮抗剂银杏苦内脂B预处理后能有效逆转内毒素引起的心血管功能紊乱的表现，表明PAF可能在内毒素休克早期的心血管功能紊乱中具有重要作用，PAF受体拮抗剂银杏苦内酯B具有明显的预防保护作用。     

银杏二萜内酯K抗血小板聚集及神经保护作用研究

观察不同浓度的银杏二萜内酯K(GK)对血小板活化因子(PAF)诱导血小板聚集的拮抗作用及对缺血再灌注损伤细胞和动物模型的神经保护作用。制备GK家兔含药血清,用血小板聚集功能测定法观察GK含药血清对PAF诱导的家兔血小板聚集的影响。建立缺糖缺氧复氧(OGD/R)细胞模型,采用Hoechst/PI双染考察不同浓度的GK对OGD/R损伤的SHSY5 Y细胞凋亡的影响;建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型(I/R),检测GK对神经行为评分及脑梗死体积的影响。GK能剂量依赖性的抑制PAF诱导的血小板聚集,逆转OGD/R损伤造成的细胞凋亡并改善大鼠脑缺血再灌注损伤后的神经行为评分及脑组织梗死体积。GK能抑制PAF诱导的血小板聚集、改善脑缺血再灌注神经损伤。     

银杏内酯B纳米混悬剂的制备及其体外释放研究

制备银杏内酯B纳米混悬剂(ginkgolide B nanosuspension, GB-NS),并考察其体外溶出行为。采用微型化介质研磨法制备GB-NS,以平均粒径(PS)和多分散指数(PDI)为评价指标,单因素试验法优化其处方,Box-Behnken效应面法优化其制备工艺;使用扫描电镜(SEM)和X射线衍射(XRD)考察其形态与结晶度;使用桨法考察其体外溶出度。以最优处方和工艺制备的GB-NS的PS为(180±7) nm,PDI为0.196±0.036;SEM显示GB-NS呈棒状或不规则的颗粒状,XRD显示GB-NS的结晶度较GB原料药明显减弱;体外溶出试验结果显示GB-NS在30 min内累积溶出度接近90%,显著优于GB原料药。结果表明介质研磨法能较好的应用于GB-NS的制备,且工艺简单、高效可行。GB原料药制备为GB-NS后溶出度显著提高。     

银杏内酯B药物洗脱支架抗血栓实验研究

目的观察银杏内酯B药物洗脱支架在体内外模型中的抗血栓作用。方法 1体外抗凝血试验检测:抽取健康成人全血,迅速置于含有2 ml枸橼酸钠抗凝剂的抗凝管中,然后倒入带有PLA-银杏内酯B的316L不锈钢槽与不带有PLA-银杏内酯B的不锈钢槽底部作用2 h,检测凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT);每组重复3次。2动静脉分流模型:健康广西巴马小香猪1只制作猪动静脉分流模型,分为银杏内酯B药物支架与316裸金属支架2组,采取相应干预;每组重复3个样本,电子放大镜下观察支架表面血栓形成的情况。3高负荷血栓模型:健康广西巴马小香猪2只制备高负荷血栓模型,分为银杏内酯B药物支架与316裸金属支架2组,采取相应干预;每组重复3个样本,观察2组支架形成支架内血栓的时间。结果 1体外抗凝血试验结果显示,银杏内酯B涂层组APTT时间、TT时间较316L不锈钢组明显延长。2动静脉分流模型研究结果显示,银杏内酯B药物洗脱支架血栓重量较316L裸金属支架支架血栓重量少。3高负荷血栓模型研究结果显示,银杏内酯B药物洗脱支架平均在(140.7±12.3)s形成支架内血栓,而对应316L裸支架平均在(52.7±6.0)s形成支架内血栓,差异有统计学意义(P0.05)。结论银杏内酯B药物洗脱支架具有良好的抗血栓作用,有望成为药物洗脱支架的涂层药物。     

银杏内酯A和B混合物对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用

目的研究银杏内酯A和B混合物(ginkgolide A and ginkgolide B,GKAB)对大鼠永久性局灶性脑缺血的保护作用。方法采用大鼠永久性大脑中动脉阻塞(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)模型观察GKAB12.5、25、50mg/kgiv给药对脑梗死体积、脑含水量、行为学症状及组织形态学(光镜)的影响。结果GKAB12.5、25、50mg/kgiv给药呈剂量依赖性减少pMCAO大鼠脑梗死体积、降低脑含水量、改善行为学症状及减轻脑组织形态改变。50、25mg/kg组与模型组相比均有显著性差异(P<0.01、0.05)。结论GKAB对大鼠永久性局灶性脑缺血损伤具有保护作用。     

益母草碱、丁香酰胍醇及丁香酸氨基醇酯类化合物抗血小板聚集活性及其与结构的关系

目的：观察和比较益母草碱、丁香酰胍醇及丁香酸氨基醇酯类化合物抗血小板聚集活性及其与结构的关系。方法：以血小板聚集为指标并计算ＩＣ（５０）以比较各样品的作用强度。结果：益母草碱（Ⅰ），化合物Ⅱ，Ⅲ和Ⅳ１，２均能对抗ＡＤＰ诱导大鼠和兔的血小板聚集作用，其ＩＣ（５０）分别为０．９７，４．４，５．２，０．３６和１．１４ｍｇ／ｍｌ。所有化合物在体外均有抑制ＡＤＰ诱导大鼠和兔的血小板聚集的作用，以Ⅳ１，Ⅴ１和Ⅶ１，２的作用最强，ＩＣ（５０）在０．１５～０．３６ｍｇ／ｍｌ，其次为Ⅳ３，５，７，８和Ⅵ１，２．ＩＣ（５０）在０．４３～０．９４ｍｇ／ｍｌ。化合物Ⅰ，Ⅱ，Ⅳ２，４，６和９虽有抑制作用，但无实际意义。结论：益母草碱具有明显的抗血小板聚集活性，完整的益母草碱分子是维持这种活性的基本结构，改变分子结构碱性胍基为氨基，引入双键或碳链加长以及丁香酸氨基醇酯乙烯化或乙氧羰基化，其活性均比母体化合物强。     

喜炎平注射液对血小板聚集、凝血功能及凝血因子活性的影响

目的:探讨喜炎平注射液对大鼠体内外及人血体外抗血小板聚集作用及其对凝血功能、凝血因子活性的影响。方法:以二磷酸腺苷(ADP)作为诱导剂,测定喜炎平注射液在大鼠体内外及健康人血体外给药对血小板5min之内的最大聚集率;并测定喜炎平注射液对健康人体外全血凝血象和凝血因子活性水平。结果:喜炎平注射液在SD大鼠体内给药剂量400、800mg/kg,体外血药浓度在3.13mg/ml、6.25mg/ml时血小板聚集率与空白对照组比较,可显著性降低血小板5min之内最大聚集率,抑制率与给药剂量呈正相关;健康人体外血药浓度在2.5mg/ml下血小板5min之内最大聚集率与对照组比较,可显著性降低5min之内血小板最大聚集率,抑制率明显提高。健康人的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)与自身空白对照组比较,时间均有不同程度的延长,具有显著性差异。纤维蛋白(Fi B-C)含量减低、抗凝血酶III(AT-III)活性明显下降。纤维蛋白降解产物(FDP)含量显著性增多。凝血因子II、V、VII、VIII、IX、X、XI、XII的活性与自身空白组比较,均有不同程度的显著降低。结论:喜炎平注射液具有抗血小板聚集作用和抗凝血作用,同时又通过降低AT-III活性来促进凝血的作用,因此,喜炎平注射液对凝血系统既有抗凝也有促凝的双重效果。     

Effects of tetrandrine and fangchinoline on human platelet aggregation and thromboxane B2 formation.

Tetrandrine (TET) and fangchinoline (FAN) are two major components of the radix of Stephania tetrandra. The effects of TET and FAN on human platelet aggregation and formation of thromboxane (TX) B2, a stable metabolite of TXA2, were examined in the aspect of platelet aggregation. TET and FAN inhibited platelet-activating factor (PAF)-induced human platelet aggregation. IC50 values for TET and FAN were 28.6+/-3.24 microM and 21.7+/-2.61 microM, respectively. In the PAF-receptor binding assay, neither TET nor FAN showed any inhibitory effects on the specific bindings of PAF to its receptor. TET and FAN also inhibited PAF-, thrombin- and arachidonic acid-induced thromboxane B2 formation in human washed platelet. These results indicate that TET and FAN inhibit the platelet aggregation by interfering with the intracellular messengers system, but not by inhibiting the binding of PAF to PAF-receptor on the platelet membrane directly, and the suppression of TXA2 formation by TET and FAN may be responsible for their inhibitory activities on the platelet aggregation and further on the thrombosis.