游泳应激对下丘脑室旁核CRH/AVP基因转录的影响及糖皮质激素的作用

目的阐明游泳应激后下丘脑室旁核(PVN)促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)和血管加压素(AVP)基因转录的变化以及非生理剂量地塞米松对两基因转录的调节作用。方法生理盐水(100μl)或地塞米松(0.3mg/kg)腹腔内注射2h后,强迫游泳10min分别立即断头取血;血中促肾上腺皮质激素(ACTH)水平应用放射免疫分析法(RIA)测定。合成[35S]标记的RNA探针,应用原位杂交组织化学方法及放射自显影的方法检测CRH mRNA、CRH hnRNA、AVP mRNA及AVP hnRNA的表达量,放射自显影图像应用NIH Image软件系统解析。所有数据均输入数据库,以statview软件进行统计分析。结果强迫游泳10min血中的ACTH明显升高,而地塞米松可部分抑制这种由于游泳应激引起的血中ACTH升高。游泳应激10min时PVN内的CRH hnRNA表达量明显升高,地塞米松的投与完全抑制了CRH hnRNA的增加(P<0.01,n=5)。在单纯生理盐水和地塞米松注射组PVN小细胞内AVP hnRNA的表达量极少,游泳应激10min小细胞内AVP hnRNA的表达量无明显变化,地塞米松对此也无任何影响。结论糖皮质激素可以抑制急性应激所致的CRH基因转录。与此不同的是强迫游泳应激后PVN小细胞区AVP基因转录水平却并未立即增加,说明虽然AVP与CRH基因均表达于PVN区同一神经元,但是其转录调控机制却不尽相同。     

DOCK8蛋白在特应性皮炎调节性T细胞中的作用

[目的]探讨DOCK8蛋白在特应性皮炎(AD)调节性T细胞中的作用.[方法]取NC/Nga小鼠建立AD模型,利用AutoMACS仪器从NC/Nga小鼠脾脏细胞中分离调节性T细胞,用促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)处理后观察DOCK8表达变化;处理DOCK8 siRNA后观察调节性T细胞的功能性改变.[结果] CRH处理后AD调节性T细胞中DOCK8表达水平明显降低(P<0.01).Real-time PCR及ELISA检测结果显示,调节性T细胞DOCK8表达量降低后细胞因子IL-10和TGF-β表达水平明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001).[结论] DOCK8蛋白在调节性T细胞中起重要作用,调节性T细胞中DOCK8的表达水平提高可能有助于减轻AD症状.     

注意缺陷多动障碍模型大鼠HPA轴功能的变化研究

目的:观察注意缺陷多动障碍(ADHD)模型动物自发性高血压大鼠(SHR)血清皮质酮(CORT)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)水平及下丘脑糖皮质激素受体(GR)、糖皮质激素受体(MR)、CRH及海马GR、MR mRNA的表达情况,探讨SHR大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)功能及相关影响因素。方法:以幼年SHR大鼠为ADHD模型组、Wistar京都大鼠(WKY)为对照组,采用ELISA法检测血清CORT、ACTH、CRH水平,RT-PCR法检测大鼠下丘脑GR、MR、CRH及海马GR、MR mRNA的表达水平。结果:SHR大鼠血清CORT、ACTH水平明显低于WKY大鼠(P<0.01),血清CRH水平明显高于WKY大鼠(P<0.01),下丘脑及海马GR、MR mRNA的表达水平明显高于WKY大鼠(P<0.01),而下丘脑CRH mRNA表达则低于WKY大鼠(P<0.01)。结论:SHR大鼠HPA轴呈低反应性,可能与CRH启动障碍及下丘脑和海马GR、MR mRNA高表达相关。     

电针刺激足三里穴对失血性休克犬的保护作用

目的:观察电针"足三里"穴对失血性休克犬血流动力学、TNF-α及乳酸值的影响,探讨其对失血性休克犬的潜在保护作用及其可能机制。方法:30只健康杂种犬随机分为假休克组、休克组、足三里组、非经非穴组、迷切后电针组5组,每组6只。采用股动脉快速放血法复制失血性休克模型,于制模成功即刻(0min),以10-15V、30Hz强度持续电针刺激双侧"足三里"穴或非经非穴30min。刺激开始前经右颈外静脉置入5FSwan-Ganz漂浮导管连续监测MAP、CO、PAWP和CVP,0min、120min和180min时分别取股动脉血检测TNF-α,在休克前、0min和180min时分别取股动脉血检测乳酸值。结果:制模后休克组、非经非穴组和迷切后电针组MAP、CO、PAWP和CVP持续较低,血浆TNF-α含量和乳酸值逐渐上升(P<0.05);与休克组、非经非穴组和迷切后电针组比较,足三里组制模成功120min及180min时MAP、CO、PAWP和CVP均显著提高(P<0.01),180min时血浆TNF-α含量和乳酸值显著下降(P<0.01)。结论:电针"足三里"穴对失血性休克犬具有潜在的保护作用,其机制可能与激活胆碱能抗炎通路有关。     

HSP70对大鼠IL-1β性发热及脑内 AVP含量的影响

目的:观察热休克蛋白HSP70对大鼠IL-1β性发热反应的影响,并研究其与脑内精氨酸升压素(AVP)含量变化的关系,以探讨HSP70是否参与热限作用.方法:(1)60只大鼠随机分为热应激(HS)处理组(A组)和经热应激处理前10 min加用放线菌酮(CHX)组(B组),Western 印迹法观察热应激处理后0、4、8、12、16 h各自下丘脑内HSP70的表达水平.(2)24只大鼠随机分为4组:①HS IL-1β组,经热应激处理后,在HSP70表达最高时,向其下丘脑视前区(POA)注射IL-1β;②CHX HS IL-1β组,于应激前10 min腹腔注射CHX;③IL-1β组,仅注射IL-1β;④对照组,仅注射1 μl生理盐水.连续观察体温变化指标8 h,绘制体温变化曲线.(3)30只大鼠按方法(2)分为4组及HS组(只进行热应激处理,不注射IL-1β);测定体温变化曲线中体温高峰时各自脑内AVP含量.结果:(1)各时间点A组HSP70水平均显著高于B组(P<0.01),A组4、8、12、16 h的HSP70表达水平显著高于0 h,其中12 h的表达水平最高(P<0.01).(2)IL-1β注射后15 min,体温开始升高,120 min达发热高峰.HS IL-1β组各时间点的体温变化指标与IL-1β组有显著差异(P<0.05,P<0.01),高表达的HSP70能明显抑制IL-1β性发热的幅度.单独注射IL-1β 120 min时VSA中AVP的含量明显高于对照组和HS IL-1β组(P<0.05),而与CHX HS IL-1β组无显著差异.各组间大鼠体温高峰期下丘脑中AVP的含量均无显著变化.结论:高水平表达的HSP70能抑制IL-1β性发热;HSP70对IL-1β性发热的抑制作用是否与VSA中AVP含量的变化有关,是否参与了大鼠的热限作用仍待进一步探讨.     

精氨酸血管加压素 mRNA在不同免疫应答期大鼠下丘脑室旁核的表达变化

目的研究大鼠下丘脑室旁核(PVN)内精氨酸血管加压素(AVP)mRNA的表达与免疫应答反应间的动态关系.方法建立免疫增强及免疫抑制大鼠模型,应用原位杂交组织化学及图像分析技术检测免疫反应不同时期大鼠PVN内AVP mRNA的动态变化.结果①免疫抑制组大鼠PVN单个细胞内AVP mRNA阳性杂交信号的平均面积明显低于免疫增强组及对照组(P＜0.05).②PVN单个细胞内AVP mRNA阳性杂交信号的平均灰度值在免疫反应高峰时显著低于免疫反应开始增强时(P＜0.05),在免疫抑制最低时却明显高于免疫反应开始受抑制时(P＜0.05).③AVP mRNA阳性杂交信号在PVN内所占的总面积在免疫反应高峰时显著大于免疫反应开始增强时和对照组(P＜0.05),在免疫抑制最低时则明显小于免疫反应开始受抑制时(P＜0.05).④AVP mRNA阳性杂交信号在整个PVN内的平均灰度值在免疫反应高峰时明显低于免疫反应开始增强时(P＜0.05),在免疫抑制最低时却明显高于免疫反应开始受抑制时(P＜0.05).结论 PVN内AVP mRNA的含量与免疫应答反应的强度成正比,AVP基因的转录随免疫应答反应的变化而变化.     

促肾上腺皮质激素释放激素对胎盘雌激素合成的促进作用

目的:研究胎盘促肾上腺皮质激素释放激素(corticotrophin-releasing hormone, CRH)对雌激素合成的促进作用,从而探讨CRH启动分娩的机制.方法:分离正常人胎盘滋养层细胞并培养72 h,分别用不同浓度CRH和CRH受体拮抗剂α-Helical CRH9-41处理24 h,应用放射免疫方法测定细胞上清中雌二醇含量,提取细胞总RNA,用Northern印迹杂交检测雌激素合成关键酶--芳香化酶(P450aromatase,P-450arom)mRNA表达量的变化.结果:CRH明显促进胎盘细胞合成雌二醇,并显著增加P-450arom mRNA的表达; α-Helical CRH9-41不仅能阻断CRH对雌二醇合成和对P-450arom mRNA表达的促进作用,还可抑制雌二醇的合成和P-450arom mRNA的表达(P<0.01).结论:胎盘CRH促进雌二醇的合成,这种作用与其促进芳香化酶的表达有关.CRH促进激活子宫的激素--雌二醇的合成可能是其启动分娩的机制之一.     

丁酸钠抑制卵巢癌细胞侵袭转移的实验研究

目的 探讨丁酸钠抑制人卵巢癌3AO细胞侵袭转移能力的机制.方法 采用光镜和免疫组织化学染色、流式细胞术观察药物作用后细胞结构及转移抑制基因KAI1表达的变化,逆转录聚合酶链反应实验观察KAI1mRNA表达变化.结果 药物作用后KAI1mRNA表达量显著高于对照组(P<0.01);KAI1基因蛋白表达较对照组明显增强(P<0.01),流式细胞术检测KAI1阳性表达率升高(P<0.05).结论 转移抑制基因KAI1的表达变化可能是丁酸钠抑制人卵巢癌细胞增殖和侵袭的机制之一.     

头颅亚低温治疗神经源性肺水肿的研究

目的 了解神经源性肺水肿(NPE)患者应激激素的变化,并进一步探讨亚低温治疗NPE的临床意义.方法 将脑出血致神经源性肺水肿(脑出血NPE组,52例)患者进行临床神经功能缺损评分(NIHSS)后,随机分为亚低温组(23例),常规治疗组(29例),两亚组在常规综合药物治疗基础上,亚低温组加用局部亚低温治疗;观察两亚组治疗前、治疗后第7 d血浆促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(Cor)、血管加压素(AVP)以及血糖水平的应激性变化,并与脑出血无NPE组(一般脑出血组,58例)和健康对照组比较;比较脑出血NPE组2亚组治疗前、治疗后1月按美国国立卫生院神经功能缺损评分(IHSS)以判断疗效.结果 脑出血NPE组和一般脑出血组患者发病时的CRH、ACTH、Cor、AVP、血糖水平均明显高于健康对照组(P＜0.01);脑出血致NPE组CRH、ACTH、Cor、AVP、血糖水平均明显高于一般脑出血组(P＜0.05).在脑出血NPE组中:常规治疗组29例中,死亡15例,亚低温治疗组23例中死亡7例.两组的死亡率比较有显著性差异(P＜0.01);两亚组存活患者的NIHSS评分比较有显著性差异(P＜0.01);两亚组患者治疗7 d后,应激激素CRH、ACTH、Cor、AVP较治疗前明显下降(P＜0.05),且亚低温治疗组应激激素水平的下降更为明显(P＜0.05).结论 神经源性肺水肿(NPE)的发病与机体的应激反应有密切的关系,应激反应可能是NPE发生的基础.亚低温治疗脑出血致神经源性肺水肿不仅降低其死亡率而且提高其存活患者的生存质量.其效果可能与抑制应激和稳定下丘脑一垂体一肾上腺轴有关.     

参附注射液对大鼠缺血再灌注心肌Bcl-2、Bax与c-fos基因蛋白表达的影响

目的 观察大鼠急性缺血再灌注损伤与凋亡相关基因Bcl-2、c-fos和Bax蛋白表达的关系及参附注射液(SF)的影响.方法 采用整体缺血再灌注(ischemia-reperfusion,IR)模型,35只大鼠分为假手术组(C组)、生理盐水30 min对照组(IR 30)、生理盐水120 min对照组(IR 120)、SF 30 min组(SF 30)和SF 120 min组(SF 120),心肌缺血40 min再灌注30 min或120 min后,用免疫组化法检测Bcl-2、Bax和c-fos在心肌中的表达量.结果 与C组比较,IR组心肌Bcl-2、Bax和c-fos蛋白表达显著升高(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值显著下降(P＜0.01);与IR组比较,SF组Bcl-2蛋白表达显著升高(P＜0.01),Bax和c-fos蛋白表达显著降低(P＜0.01),Bcl-2/Bax比值显著升高(P＜0.01).结论 SF对IR心肌保护效应可能与其促进Bcl-2蛋白高表达、抑制Bax与c-fos蛋白表达、增加Bcl-2/Bax比值,从而抑制心肌细胞凋亡有关.     

Experimental Study on Therapeutic Effect of Combined Administration of Radix Salviae Miltiorrhizae, Ligustrazine and Radix Sanchi on Late Hemorrhagic Shock of Rabbits

Duringhemorrhagicshock,allthetissuesofthewholebodywereundertheischernicstate.Whenthebloodandoxygensupplyoftissuesarerestored,alargeamountoffreeradicalswouldbeproducedandcausedamageonorganismbylipidperoxidation(').RadixSalviaeMiltiorrhizae(RSM),ligustrazine(I-TZ)andRadixSanchi(RSC),etc.haveananti--shockeffectbyscavengingfreeoxygefl.adicals(25).Inordertoobservethetherapeuticeffectofcombinedadministrationofabove-mentioneddrugsintreatinghemorrhagicshock,thefollowingexperimentsweredonebytheaut…     

纳络酮对失血性休克失代偿期血管收缩低反应性影响与血一氧化氮浓度变化的研究

目的研究纳络酮（NAL）对失血性休克低反应期儿茶酚胺类缩血管药物升压效应及对一氧化氮（NO）的影响。探讨抗休克的机制。方法建立兔的失血性休克模型,间断静注去甲肾上腺素（NA）,通过平均动脉压改变的幅度来测定失血性休克低反应期时段。大白兔12只,建立失血性休克模型后随机分成对照组6只,NAL治疗组6只。通过静脉注射NA,研究休克低反应期的血管收缩反应性;检测两组模型在休克前、后多个时点血清中NO浓度。结果失血性休克低反应期,NAL组的血管收缩反应性高于对照组;随着NAL作用的减退,血管收缩反应性也随之降低。NAL治疗组血清中NO浓度在低反应期明显低于对照组。结论NAL能够提高失血性休克低反应期的血管收缩反应性,NAL可能是通过降低血浆NO浓度来改善血管收缩反应性。     

The role of membrane potential and calcium kinetic changes in the pathogenesis of vascular hyporeactivity during severe shock

Objective To determine the role of membrane potential and intracellular calcium kinetic changes in producing vascular hyporeactivity during severe hemorrhagic shock.Methods Rats were subjected to hemorrhagic shock (HS) for 2 hours.The spinotrapezius muscle was prepared for microscopy and the responses of arterioles in the muscle to norepinephrine(NE) were tested.The resting membrane potentials of isolated arterial strips were measured with a microelectrode.Membrane potential and intracellular Ca(2+)(［Ca(2+)］i) changes in isolated arteriolar smooth muscle cells (ASMCs) were determined with fluorescent probes and a confocal microscopy. Results The arteriolar resting membrane potential was decreased from -36.7±6.3 mV in control to -29.2±5.3 mV concurrent with the increase of vasoreactivity to NE at 20 minutes after HS.At 120 minutes post-HS, the resting potential hyperpolarized to -51.9±9.1 mV, and NE stimulated ［Ca(2+)］i increase was reduced to 50% of the control values during the appearance of arteriolar hyporeactivity, i.e.the NE threshold of the arteriolar response increased 15 fold 2 hours after the onset of hemorrhage as compared with normal animals.The state of vasoreactivity was closely related to the resting potential of vascular smooth muscle in hemorrhagic shock, with a correlation coefficient of 0.96.Treatment with glybenclamide, a selective blocker of ATP-sensitive K(+)(K(ATP)) channels, decreased the resting potential, increased NE-stimulated［Ca(2+)］i increase, and partially restored vasoreactivity in severe hemorrhagic shock. Conclusion The results suggested that membrane hyperpolarization and the reduction of NE-stimulated ［Ca(2+)］i increase in smooth muscle cells appeared to contribute to the vascular hyporeactivity in hemorrhagic shock.The mechanism is likely to involve in K(ATP)channels.     

不同浓度的亚甲蓝对创伤失血性休克家兔的血压影响

目的：用低中高浓度亚甲蓝（methylene blue,MB）处理家兔创伤失血性休克模型,观察用药后休克家兔在不同时间点血压的变化。方法：取家兔15只,建立创伤失血性休克模型,随机分成3组,分别低剂量（4 mg/kg）、中剂量（8 mg/kg）和高剂量（12 mg/kg）亚甲蓝处理,观察不同时间点动脉收缩压、舒张压和平均压的变化。结果：在用药后75 min内,与高剂量亚甲蓝比较,低中剂量亚甲蓝可显著增加创伤失血性休克模型的血压（P〈0.05）。结论：低中剂量亚甲蓝可改善家兔创伤失血性休克模型的血压。     

急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞白细胞介素18mRNA的表达及其意义

目的：动态观察急性肺损伤(ALI)大鼠肺泡巨噬细胞白细胞介索-18(IL-18)mRNA表达的变化,初步探讨IL-18mRNA的变化与ALI发生、发展的关系。方法：采取创伤性休克手段建立ALI大鼠动物模型,采用RT-PCR方法,检测肺泡巨噬细胞IL-18mRNA的表达。结果：正常大鼠肺泡巨噬细胞表达一定水平的IL-18mRNA,而遭受创伤性休克打击后,肺泡巨噬细胞IL-18mRNA表达迅速升高,4h达高峰,8h后即恢复到正常水平。结论：正常大鼠肺泡巨噬细胞可表达一定水平的IL-18mRNA,在ALI早期,IL-18mRNA表达异常增高,可能引起过度炎症反应,从而促进ALI的发生。     

高渗盐液与非控制性出血性休克

目的:研究高渗盐溶液对控制性和未控制性出血性休克的治疗效果。方法:用动脉放血至M AP为5.33kPa维持120m in制作控制性出血性休克和剪断大鼠尾静脉制作非控制性出血性休克的动物模型,分别用生理盐水和高渗盐液早期治疗休克,观察血流动力学指标和动物存活时间。结果:高渗盐液(HS)组中平均动脉压、脉压和中心静脉压明显高于生理盐水(N S)组和高渗盐液 非控制性出血性休克(HS UC)组,大鼠存活时间也明显长于N S组和HS UC组。结论:高渗盐液治疗控制性出血性休克效果好,但对非控制性出血性休克可促进休克的恶化。     

人参果皂甙对失血性休克犬心肌保护作用的电镜观察和Ca~(2+)分析

目的 :探讨人参果皂甙对失血性休克犬心肌的保护作用。方法 :采用健康杂种犬 1 6只 ,随机均分为失血性休克组 (HS,放血使血压降至 5.3k Pa,并在这个血压上维持 5h)和失血性休克人参果皂甙治疗组 (HSG,放血前 1 h肌注人参果皂甙生理盐水溶液 ,2 5mg/kg体重 ,其它处理同 HS组 )。观察失血后 5h犬存活率及心肌超微结构和 Ca2 +改变。结果 :与 HS组比较 ,1 HSG组犬存活率明显提高 ,差异显著 (P<0 .0 0 5) ;2 HSG组犬心肌超微结构病变 ,如肌膜、肌原纤维、肌浆网、线粒体、闰盘等细胞器损害明显减轻 ;3HSG组犬心肌肌浆网内 Ca2 +增加 ,线粒体内 Ca2 +减少。结论 :这些结果从不同水平上提示人参果皂甙有抗休克、保护心肌作用     

精氨酸血管加压素对非控制性出血性休克大鼠彻底止血后的复苏效果

目的 观察精氨酸血管加压素(arginine vasopressin,AVP)对非控制性出血性休克大鼠彻底止血后复苏效果.方法 采用大鼠脾实质切除及脾动脉切断方法复制非控制性出血性休克模型,在止血前采用低压复苏(50 mmHg,1 h)后结扎血管彻底止血,观察乳酸林格氏液(Lactated Ringer's,LR)、AVP(0.4 U/kg和0.04 U/kg)对大鼠血流动力学指标、血气指标、存活时间和存活率的影响.LR组在彻底止血后输注2倍失血量LR;AVP 0.1 U/kg组和0.4 U/kg组在2倍量的LR中分别加入AVP0.4 U/kg和0.04 U/kg输注.结果 非控制性出血性休克大鼠在休克后以及低压复苏后血流动力学指标包括左心室收缩压(left intraventricular systolic pressure,LVSP)、左心室压力上升或下降的最大速率(the maximal change rate of left intraventricular pressure,±dp/dtmax)明显低于休克前(P<0.05),血气也发生了明显改变;2倍失血量的LR输注不能较好地恢复平均动脉血压(mean artery pressure,MAP)和血流动力学指标,AVP 0.4 U/kg和0.04 U/kg输注,明显增加MAP和改善休克大鼠血流动力学指标,延长休克动物存活时间并提高存活率,与LR组相比明显升高(P<0.05).结论 AVP对非控制性出血性休克大鼠彻底止血后有较好的复苏效果.     

失血性休克大鼠心肌和肠上皮细胞ND1、ND2、mtTFA基因表达的变化

目的探讨失血性休克后线粒体呼吸链复合体Ⅰ亚单位ND1、ND2及其调控因子-mtTFA在大鼠心肌和肠上皮细胞内基因转录物水平改变规律.方法通过采用大鼠失血性休克模型,提取心肌和肠上皮细胞总RNA,行RT-PCR扩增呼吸链复合体Ⅰ亚单位ND1、ND2基因及mtTFA基因并对其基因转录物水平进行了检测.结果大鼠失血性休克后1～2 h,心肌细胞ND1基因的转录水平与正常对照组比较均显著升高;而肠上皮细胞ND1基因的转录水平较正常对照组显著下降,但两种细胞ND2基因的转录水平在失血性休克后的变化趋势基本一致.两种细胞mtTFA基因的转录水平在失血性休克1～2 h后的转录水平则较正常对照组显著下降.结论在缺血缺氧性损害中,心肌和肠上皮细胞内线粒体ND1亚单位基因转录物水平的改变可能具有组织差异性.