褪黑素抑制早期蛛网膜下腔出血大鼠皮层小胶质细胞活化

目的:研究褪黑素对蛛网膜下腔出血大鼠(SAH)早期皮层小胶质细胞活化的影响及分子机制.方法:45只成年雄性SD大鼠分为假手术组(sham)、SAH组(SAH)和褪黑素治疗组(SAH+Melatonin).利用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,利用Western Blot检测大鼠皮层中小胶质细胞标记物CD11b的表达...     

褪黑素抑制早期蛛网膜下腔出血大鼠皮层神经细胞铁死亡

目的:研究褪黑素(Mel)对蛛网膜下腔出血大鼠(SAH)早期皮层神经细胞铁死亡的影响及分子机制.方法:利用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,通过腹腔注射法给予褪黑素治疗.利用商品化试剂盒检测脑脊液中铁离子含量和脑组中铁含量,利用Western Blot检测大鼠皮层中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达,利用2',...     

褪黑素通过上调紧密连接蛋白减轻蛛网膜下腔出血大鼠脑水肿

目的:研究褪黑素对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠脑水肿的影响及分子机制。方法:雄性SD大鼠分为假手术组(sham)、SAH组(SAH)和褪黑素预处理组(SAH+Mel)。利用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,SAH+Mel组大鼠在模型制备前1周通过皮下注射给予褪黑素预处理。利用湿干比方法检测大鼠脑含水量,利用伊文思蓝渗透实验检测血脑屏障的完整性,利用Western Blot检测大鼠皮层中闭合小环蛋白-1(ZO-1)、咬合蛋白(occludin)和闭合蛋白-5(claudin-5)的表达。结果:和假手术组大鼠相比,SAH术后48 h大鼠脑含水量增加明显(P<0.05),脑组织中伊文思蓝含量增加(P<0.05),皮层中ZO-1、occludin和claudin-5的表达下降。然而,经褪黑素预处理后,SAH大鼠脑含水量下降(P<0.05),脑组织中伊文思蓝含量减少(P<0.05),ZO-1、occludin和claudin-5的表达上调,(P<0.05)。结论:褪黑素通过上调紧密连接蛋白表达减轻SAH大鼠脑水肿。     

NLRP3通过下调claudin-1增加早期蛛网膜下腔出血大鼠血脑屏障通透性

目的:研究NLRP3炎性小体在大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)早期脑损伤(EBI)过程中对血脑屏障(BBB)的影响.方法:36雄性SD大鼠分为假手术组(sham)、SAH组(SAH)和NLRP3抑制剂MCC950处理组(SAH+MCC950),利用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,利用尾静脉注射给予SAH大鼠MCC95...     

TLR4-NLRP3介导蛛网膜下腔出血早期大鼠神经细胞焦亡

目的:研究蛛网膜下腔出血大鼠(SAH)早期神经细胞焦亡的分子机制.方法:雄性SD大鼠分为假手术组和SAH组.利用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,利用Western Blot检测大鼠皮层toll样受体4(TLR4)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)和活化型gasdermin D(GSDMD-p30)的表达,利用商品...     

三氟拉嗪通过内化水通道蛋白4减轻蛛网膜下腔出血大鼠脑水肿

目的:研究三氟拉嗪(TFP)对蛛网膜下腔出血(SAH)模型大鼠水通道蛋白4(AQP4)细胞定位及脑水肿的影响。方法:利用往小脑延髓池二次注射自体动脉血的方法制备SAH大鼠模型,治疗组通过灌胃给予TFP处理;利用湿干比方法检测大鼠脑含水量;利用伊文思蓝染料渗透实验检测血脑屏障(BBB)的完整性;利用试剂盒分别提取胞膜蛋白和胞浆蛋白,利用Western Blot方法检测AQP4的表达。结果:与SAH组大鼠相比,TFP治疗组大鼠脑含水量减少,脑组织中伊文思蓝染料的含量下降,同时AQP4在细胞膜的分布减少。结论:TFP通过内化AQP4减轻SAH模型大鼠脑水肿。     

褪黑素对阿尔茨海默病模型大鼠学习记忆能力及海马CA3区神经元的保护作用

目的 观察褪黑素(MT)对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠学习记忆及海马CA3区神经元的保护作用.方法 随机将60只雄性Wistar大鼠分为正常对照组、AD模型组与MT治疗组.采用右侧海马CA1区注射β-淀粉样蛋白1～40(Aβ1～40)构建AD动物模型,MT治疗组以MT(10mg/kg·d)腹腔注射,正常对照组与AD模型...     

姜黄素改善蛛网膜下腔出血大鼠学习记忆功能并抑制海马组织TNF-α和iNOS水平上升

目的研究姜黄素对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)模型学习记忆功能的影响及可能机制。方法 30只SD大鼠随机分为对照组、SAH组和姜黄素治疗组,利用自体血液注射的方法制备大鼠SAH模型,利用神经功能评分分析模型情况,Morris水迷宫实验检测各组大鼠的学习记忆功能,ELISA检测各组大鼠海马组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)和诱导型一氧化氮合酶(i NOS)的含量。结果 SAH模型动物神经功能评分显著低于正常对照组,姜黄素治疗组大鼠神经功能评分显著得到改善。Morris水迷宫检测结果表明,与对照组相比,SAH大鼠平均逃避潜伏期延长,经姜黄素治疗后,平均逃避潜伏期明显降低。ELISA检测结果显示,与假手术组相比,SAH大鼠海马组织中TNF-α和i NOS含量显著增加,给予连续4周的姜黄素治疗后,大鼠海马组织中TNF-α和i NOS明显下降。结论姜黄素治疗可以改善SAH大鼠学习记忆功能,降低SAH大鼠海马TNF-α及i NOS水平。     

褪黑素受体激动剂改善高糖高脂喂养大鼠脂联素敏感性

目的 观察褪黑素受体激动剂(NEU-P11)对高糖高脂饲养大鼠脂联素敏感性的影响.方法 将30 只SD大鼠随机分为对照组(CD组),高糖高脂组(HFSD组),褪黑素组(Mel组),褪黑素受体激动剂组(NEU-P11组).CD组饲以正常饲料;其余3组饲以高糖高脂饲料.6个月后,给药治疗2个月.治疗期间,Mel组每天注射Mel(4 mg/kg);NEU-P11组每天注射NEU-P11(10 mg/kg);CD组以及HFSD组注射生理盐水(5 ml/kg).测定糖脂代谢指标并做口服葡萄糖耐量实验(oral glucose tolerant test,OGTT),Western印迹检测脂联素(adiponectin,APN)在脂肪组织及脂联素受体(AdipoR)在骨骼肌组织中的表达变化.结果 高糖高脂饮食可诱导SD大鼠产生胰岛素抵抗,脂联素表达增加.Neu-P11治疗后,胰岛素敏感性增强,脂联素表达降低至正常水平.结论 Neu-P11能提高胰岛素敏感性,改善脂联素抵抗.     

褪黑素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠皮层氧化应激的影响

目的:研究褪黑素(Mel)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠皮层氧化应激的影响及分子机制.方法:54只新生SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、缺氧缺血脑损伤组(HIBD)和褪黑素治疗组(HIBD+Mel),利用左侧颈总动脉结扎联合低氧刺激制备新生大鼠HIBD模型,利用神经功能缺损评分(NSS)评测大鼠神经功能变化...     

褪黑素对1型糖尿病脑病大鼠学习记忆和海马齿状回细胞凋亡及Bax与Bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨褪黑素治疗对1型糖尿病脑病空间学习忆忆、海马齿状回细胞凋亡以及凋亡相关基因Bax与Bcl-2蛋白表达的影响。方法将成年健康雄性Wistar大鼠随机分成4组(每组均为12只大鼠):1型糖尿病脑病组、载体模型治疗组、褪黑素治疗组、正常对照组。通过腹腔注射链脲佐菌素(55mg/kg,溶于柠檬酸缓冲液中),建立1型糖尿病脑病模型;通过对该脑病模型大鼠腹腔注射褪黑素(200μg/kg,溶解于乙醇生理盐水中),建立褪黑素治疗模型;分别通过对大鼠腹腔注射等体积的柠檬酸缓冲液、乙醇生理盐水,建立载体治疗模型;但未对正常对照组大鼠进行过任何处理。应用Morris水迷宫、Bax、Bcl-2、TUNEL反应技术,观察各组大鼠空间学习记忆、海马齿状回的颗粒下区(SGZ)和颗粒细胞层(GCL)的细胞凋亡及Bax与Bcl-2基因的蛋白表达程度。结果1型糖尿病脑病大鼠在水迷宫的逃避潜伏期和游泳距离均比其它各组的对应指标明显延长(P<0.01),该脑病组大鼠海马齿伏回的SGZ和GCL的Bax阳性细胞数、TUNEL阳性细胞数也均比其它各组的对应指标明显升高(P<0.01),但该脑病组SGZ和GCL的Bcl-2阳性细胞数则明显低于其它各组的相应指标(P<0.01)。应用褪黑素治疗该脑病组大鼠30d后,可将1型糖尿病脑病组大鼠的以上各项指标逆转至接近正常水平(P<0.01)。结论褪黑素治疗不仅可纠正因1型糖尿病脑病大鼠海马齿状回凋亡基因Bax和抗凋亡基因Bcl-2蛋白质表达水平比例异常而引发的细胞凋亡,还可改善该脑病的空间学习记忆障碍,提示褪黑素在防治该脑病中具有一定的功效。     

褪黑素对SD大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质的影响

目的 研究褪黑素对正常和糖尿病大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质功能和超微结构的影响.方法 应用放射免疫法分别观察了低、中、高剂量(0.5mg/kg、10mg/kg、50mg/kg)褪黑素及对照药物硫辛酸(100mg/kg)连续腹腔注射3周,对SD大鼠血浆促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(COR)水平的影响.并运用电镜观察用药前后大鼠垂体、肾上腺皮质超微结构的变化.结果 1.正常和糖尿病大鼠低、中、高剂量褪黑素处理组CRH水平与相应对照组相比显著降低;正常大鼠低、中、高剂量褪黑素及硫辛酸处理组和糖尿病大鼠低剂量(0.5mg/kg)褪黑素、硫辛酸处理组ACTH水平比相应对照组明显降低(P＜0.05);正常大鼠低、中、高剂量褪黑素处理组和糖尿病大鼠中高剂量褪黑素处理组皮质酮水平比相应对照组显著降低(P＜0.05).2.褪黑素对正常大鼠下丘脑-垂体-肾上腺皮质超微结构无明显影响.糖尿病大鼠垂体细胞和肾上腺皮质细胞出现功能受抑制状态,褪黑素(50mg/(kg·d))处理21d后垂体促肾上腺皮质细胞和肾上腺皮质细胞代谢较处理前明显活跃.结论 褪黑素能在不同层次直接或间接地发挥对正常和糖尿病大鼠下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴的抑制作用.     

松果体摘除及褪黑素对大鼠胸腺上皮细胞白细胞介素-7表达的影响

目的 探讨松果体摘除及褪黑素对大鼠胸腺上皮细胞白细胞介素7(IL-7)表达的影响及其意义.方法 1.培养大鼠胸腺上皮细胞,应用广谱角蛋白抗体进行免疫细胞化学显色鉴定;MTT法观察褪黑素(1×10-3～10-9mol/L)干预对细胞生长的影响;细胞分空白对照组、褪黑素10-8mol/L处理组和褪黑素10-6mol/L处理组,RT-PCR法观察细胞IL-7 mRNA的表达;2.选用清洁级雄性SD大鼠110只,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素7.5ms/(kg·d)腹腔注射组和松果体摘除+褪黑素15mg/(kg·d)腹腔注射组.术后4周和8周取材,运用免疫组织化学和RT-PCR方法 观察胸腺上皮细胞IL-7表达的变化. 结果 褪黑素干预对大鼠胸腺上皮细胞的生长无显著影响,但能使IL-7 mRNA的表达水平呈剂量依赖性升高;松果体摘除对大鼠胸腺上皮细胞表达IL-7无显著影响,补充褪黑素15mg/(kg·d)4周后IL-7表达显著增高,8周后均下降至正常水平. 结论 松果体及褪黑素可能通过影响大鼠胸腺上皮细胞IL-7的表达,从而调节胸腺细胞的分化发育.     

依达拉奉通过JNK通路抑制蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经细胞自噬

目的:通过研究应用依达拉奉前后JNK通路及自噬因子Beclin-1、LC3-Ⅱ表达的变化,探讨依达拉奉对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马区c-Jun氨基端激酶(JNK)-自噬通路的影响。方法:选取雄性清洁级健康SD大鼠(350~450 g),随机分为假手术组(Sham组)、SAH模型组(SAH组)、SAH应用JNK抑制剂组(SP600125组)、SAH联合应用依达拉奉干预组(Edaravone组)。利用颅内动脉穿刺法制成大鼠SAH模型,SP600125组于造模前30 min,利用立体定向仪行侧脑室注射SP600125溶液;Edaravone组在建模成功后予以依达拉奉干预治疗。利用H-E染色观察每组大鼠海马区神经元形态及数量变化;应用免疫组织化学显色检测p-JNK以及自噬标志物Beclin-1和LC3-Ⅱ在大鼠海马区的表达情况。结果:与Sham组比较,SAH组在各时间点海马区神经元存活数量减少,与SAH组比较,SP600125组和Edaravone组正常形态细胞数量明显增多;SAH组大鼠海马区Beclin-1、LC3-Ⅱ阳性细胞数量多于Sham组,且均在24 h达到高峰,与SAH组比较,SP600125组和Edaravone组海马区Beclin-1、LC3-Ⅱ阳性细胞数均显著减少;与Sham组比较,SAH组大鼠海马区p-JNK阳性细胞数量明显增加,与SAH组比较,SP600125组和Edaravone组海马区p-JNK阳性细胞数均显著减少。结论:依达拉奉可抑制SAH后海马区JNK信号过度激活,降低自噬激活的程度,从而对SAH后海马区神经元细胞起到保护作用。     

褪黑素对带状疱疹后遗神经痛大鼠T细胞亚群及IL-2、TNF-α表达的影响

目的 分析褪黑素分泌减少对带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠T细胞亚群及IL-2、TNF-α表达的影响.方法 雄性SD大鼠40只,根据随机数字表分为4组,每组10只,分别为空白对照组,该组大鼠不造模亦不采取任何治疗措施;假手术组,该组大鼠仅暴露松果体;非治疗组,该组大鼠去松果体并接种HSV-1病毒;治疗组,该组大鼠去除松果体+接种HSV-1病毒+腹腔注射外源性褪黑素120mg/(kg.d).接种病毒前以及接种后1、14、30d对各组大鼠进行机械痛觉评分(MPRS)并记录非治疗组与治疗组组大鼠PHN发病情况;采用ELISA法检测接种病毒前、接种后1、14、30d各组大鼠外周血褪黑素水平改变;采用流式细胞技术于接种病毒后30d检测各组大鼠外周血T细胞亚群水平改变.结果 接种病毒后14d以及30d,各组大鼠褪黑素水平表现为非治疗组显著低于治疗组和空白组,差异有统计学意义(P＜0.05).接种病毒30d,CD3+,CD4+细胞数以及CD4+/CD8+均表现非治疗组显著低于治疗组和空白组,差异有统计学意义(P均＜0.05);CD8+细胞数表现为非治疗组显著高于治疗组和空白组,差异有统计学意义(P均＜0.05).接种病毒30d,IL-2、TNF-α水平均表现为非治疗组显著低于治疗组和空白组,差异有统计学意义(P均＜0.05).结论 褪黑素减少会导致带状疱疹后遗神经痛大鼠T细胞亚群失衡,影响机体免疫功能的发挥,同时会降低多种细胞因子的水平,降低免疫炎症反应;外源褪黑素能显著改善上述改变,提示褪黑素可能存在对PHN的免疫治疗作用.     

松果体及褪黑素对大鼠胸腺巨噬细胞酪氨酸激酶受体B表达的影响

目的:研究松果体摘除及补充褪黑素对大鼠胸腺巨噬细胞酪氨酸激酶受体B(trkB)表达的影响.方法:选用2月龄清洁级SD大鼠,分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素注射7.5mg·kg~(-1)·d~(-1)组和松果体摘除+褪黑素腹腔15mg·kg~(-1)·d~(-1)组,术后4、 8周取材.应用trkB和单克隆抗体ED1免疫荧光双标显色法观察分析松果体摘除及补充外源性褪黑素后胸腺巨噬细胞trkB表达的变化.结果:与对照组相比,松果体摘除术后4周胸腺双阳性细胞表达减弱,补充褪黑素后无变化.术后8周松果体摘除组与对照组相比无明显差异,而低剂量组双阳性细胞表达异常增高,高剂量组恢复正常.各组平均灰度无明显差异.结论:松果体及褪黑素在影响胸腺细胞分化发育过程中,胸腺巨噬细胞表达的trkB也随之发生变化,其与胸腺细胞表达的trkB共同作用参与胸腺细胞分化发育.胸腺神经内分泌微环境的分泌调节是松果体及褪黑素保护胸腺细胞的通路之一.     

Role of protease activated receptor-1 and 4 in the activation of microglia following subarachnoid hemorrhage

目的 探讨蛋白酶活化受体1/4(PAR-1/4)对蛛网膜下腔出血(SAH)后大鼠脑内小胶质细胞活化的影响. 方法 雄性SD大鼠100只,随机分为sham组、SAH+ control siRNA组、SAH+ PAR-1 siRNA组、SAH+PAR-4 siRNA组以及SAH +PAR-1/4 siRNA组,每组20只.应用血管内插线法建立大鼠SAH模型,治疗组在术后1h脑室注射相应剂量药物.在SAH后6h和24h,观察了各组大鼠神经功能学缺陷、脑水含量和脑内伊文思蓝含量,同时应用免疫组织化学和Western blotting方法检测了脑内肿瘤坏死因子α(TNF-α)和细胞间黏附分子-1( ICAM-1)的表达. 结果 单独应用PAR-1 siRNA或PAR-4 siRNA均可减轻SAH后大鼠的神经功能缺陷并降低血管通透性(P＜0.05),同时脑内小胶质细胞TNF-α和ICAM-1的表达也明显下降.联合应用PAR-1和PAR-4siRNA的治疗效果最为显著. 结论 PAR-1/4参与了蛛网膜下腔出血后大鼠脑内小胶质细胞的活化,而PAR-1/4 siRNA可通过抑制两者的活性减少炎性因子的产生,具有显著的神经血管保护作用.     

白藜芦醇通过SIRT1减轻蛛网膜下腔出血大鼠神经系统炎症反应

目的:白藜芦醇(RSV)对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠神经系统沉默信息调节因子同源蛋白1(SIRT1)的表达及炎症反应的影响。方法:48只成年雄性SD大鼠分为对照组(Control)、蛛网膜下腔出血组(SAH)、RSV治疗组(RSV)和RSV联合组SIRT1抑制剂EX 527处理组(RSV+EX 527),利用自身血液注射法制备SAH大鼠模型,神经功能缺损评分检测大鼠神经功能变化,Western Blot检测SIRT1表达水平变化,免疫荧光染色观察小胶质细胞表面标记CD11b的表达变化,利用ELISA检测神经系统炎性细胞因子TNF-α和IL-1β变化。结果:与正常对照组相比,SAH大鼠神经功能受损明显(P 0. 05),中枢神经系统SIRT1表达降低(P 0. 05),小胶质细胞活化明显(P 0. 05),TNF-α和IL-1β均显著升高(P 0. 05);经过RSV治疗后,与SAH大鼠相比,治疗组大鼠神经功能明显得到改善(P 0. 05),神经系统SIRT1表达增加(P 0. 05),小胶质细胞活化受到抑制(P 0. 05),炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平下降(P 0. 05);使用EX 527处理后,RSV的神经保护作用受到抑制,表现为SAH大鼠神经功能恢复不明显,中枢神经系统小胶质细胞持续活化,细胞因子TNF-α和IL-1β水平维持在较高水平。结论:RSV通过促进SIRT1表达抑制炎症反应发挥对SAH大鼠中枢神经系保护作用。     

藁本内酯对大鼠蛛网膜下腔出血后迟发性血管痉挛的影响

目的:研究藁本内酯(LIG)对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后迟发性脑血管痉挛(DCVS)的作用及其机制。方法:将100只SD大鼠采用随机数字表法分为:假手术组(Sham,n=22)、蛛网膜下腔出血组(SAH+vehicle,n=28)、藁本内酯5 mg组(SAH+LIG5,n=25)和藁本内酯20 mg组(SAH+LIG20,n=25)。采用改良的枕大池二次注血法制备大鼠SAH模型。第1次注血后30 min,SAH+LIG5组和SAH+LIG20组分别尾静脉注射藁本内酯5 mg/kg或20 mg/kg,SAH+vehicle组则注射等体积的溶剂(3%Tween 80),1次/d,连续7 d。根据Garcia神经功能评分法每天评定大鼠的神经功能。于第1次注血后7 d灌注取脑。尼氏染色观察皮层和海马区神经元形态改变; HE染色测量基底动脉横截面积及管壁厚度评估血管痉挛情况; TUNEL染色观察基底动脉内皮细胞的凋亡情况; Western Blot及免疫组化染色检测基底动脉p53、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的表达情况。结果:LIG治疗可促进SAH大鼠的神经功能缺陷恢复(P 0.01),减轻脑组织损伤程度。与SAH+vehicle组比较,SAH+LIG20组基底动脉管壁变薄,管径增大(P 0.01),痉挛缓解;基底动脉内皮细胞凋亡减轻,p53、cleaved caspase-3蛋白的表达减少(P 0.05),Bcl-2蛋白的表达增加(P 0.05)。结论:在大鼠SAH模型中,LIG可能通过减少基底动脉内皮细胞的凋亡,缓解脑血管痉挛,从而发挥神经保护作用。     

褪黑素体内外对小鼠前胃癌细胞的增殖抑制与凋亡诱导作用

目的 探讨褪黑素(MLT)在体内外对小鼠前胃癌(MFC)细胞的增殖抑制与凋亡诱导作用.方法 体内实验:建立荷胃癌小鼠模型,随机分为5组:A.正常对照组;B.荷瘤空白对照组:每日注射生理盐水100 mg/kg;C.小剂量褪黑素组:荷瘤成功后(接种第6天起)每日腹腔注射MLT 25 mg/kg;D.中剂量MLT组:每日腹腔...