三种逆行示踪工具标记小鼠前扣带回皮质传入核团的比较

目的:通过对小鼠前扣带回皮层(ACC)立体定位注射重组腺相关病毒(rAAV2-retro)、荧光乳胶微球(retrobeads)及狂犬病毒(RV)的方法,比较三种逆行示踪工具对ACC上游传入核团的标记效果。方法:将rAAV2-retro-hSyn-EGFP-P2A-Cre-WPRE-hGH-PA、retrobeads(Red)等量混合后注射到小鼠ACC脑区,待病毒表达3周后灌注取脑、切片观察。另外将rAAV2/9-EF1α-DIO-oRVG(19G)、rAAV2/9-EF1α-DIO-NLS-mCherry-P2A-TVA-T2A-RVG、rAAV2/9-CaMKIIα-Cre混合后注射到小鼠ACC脑区,待病毒表达2周后将RV-EnvA-ΔG-EGFP注射到相同部位,1周后灌注取脑、切片观察,比较三种策略标记到ACC上游传入核团的神经元数量及形态。结果:retrobeads标记到的核团最多,但无法标记神经元形态及树突结构;RV标记到的核团数量次之,胞体及树突结构标记完整,而且可以观察到清晰的树突棘;rAAV2-retro标记到的核团最少,能标记到树突,但无法标记树突棘。三者在内侧眶皮层...     

大鼠海马脑区脑源性神经营养因子慢病毒注射与表达的检测

目的:建立成年大鼠海马脑区注射脑源性神经营养因子(BDNF)慢病毒表达载体的方法,并检测BDNF慢病毒载体体内表达目的基因的能力.方法:健康雄性SD大鼠随机分为假手术组(SH)、生理盐水组(NS)、GFP慢病毒注射组(GFP)和BDNF慢病毒注射组(BDNF),每组15只.所有实验大鼠在脑立体定位仪下定位海马组织.NS、GFP和BDNF组分别给予盐水(2μL)、GFP慢病毒(2μL)和BDNF慢病毒(2μL),SH组只实行手术操作.注射手术7d、14d和30d后,分别处死大鼠并进行在冰上取各组大鼠海马组织,分别提取海马总RNA和总蛋白质通过RT-PCR和Westernblot检测各组大鼠海马组织BDNFmRNA和蛋白表达水平的变化.同时通过原位杂交方法检测BDNF的表达水平和脑区分布.结果: BDNF慢病毒注射成年大鼠7d、14d和30d后,均可以成功检测到BDNF在mRNA和蛋白水平在海马脑区都有明显的表达,同假手术组相比具有显著性差异;原位杂交检测显示BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区7d、14d和30d的BDNF表达水平和脑区分布均保持稳定.结论:成功地建立了BDNF慢病毒注射成年大鼠海马脑区的方法,并可在注射后不同时间段检测到BDNF高水平的表达和均匀的海马脑区分布,为进一步将其应用于神经系统损伤性疾病的治疗奠定了基础.     

前扣带回TRPC1/4/5通道在小鼠慢性炎性痛所致焦虑样行为中的作用

目的:探讨前扣带回(ACC)中瞬时感受器电位通道1/4/5(TRPC1/4/5)在小鼠慢性炎性痛诱发焦虑样行为过程中的表达变化。方法:将雄性C57/BL6小鼠(n=30)随机分为3组:正常对照组(Control组)、CFA1 d组和CFA 7 d组,小鼠左后肢足底皮下注射完全弗氏佐剂(CFA)建立慢性炎性痛模型。采用小鼠机械痛和热痛敏方法检测痛阈变化,旷场和高架十字迷宫法检测小鼠焦虑样行为,real time RT-PCR和Western Blot方法检测TRPC1/4/5通道表达水平变化。结果:小鼠左后肢足底注射CFA后出现明显的机械性痛敏和热痛敏现象。旷场和高架十字迷宫实验显示CFA诱发炎性痛敏7 d后,小鼠在高架十字迷宫开臂进入次数和时间、旷场中央区活动距离均明显降低,提示慢性炎性痛后小鼠出现显著的焦虑样行为。采用real time RT-PCR和Western Blot实验,观察到炎性痛诱发焦虑样小鼠ACC脑区中TRPC1/4/5通道的mRNA和蛋白表达水平较正常组均出现显著上调。结论:CFA诱发的慢性炎性痛模型中,小鼠出现明显的焦虑样症状,同时ACC脑区的TRPC1/4/5通道表达水平显著升高,提示慢性炎性痛诱发的焦虑样行为可能与痛觉神经通路中ACC脑区的TRPC1/4/5通道蛋白表达有密切关系。     

腹侧CA1到外侧隔核的神经元投射参与调控小鼠的社交记忆

目的:探讨参与调控小鼠同类个体识别及社交记忆行为的神经环路。方法:通过在腹侧CA1(vCA1)脑区注射腺相关病毒AAV5-hsyn-GFP,进行同性别陌生个体及熟悉个体社交行为,检测即早基因c-fos全脑表达情况,明晰小鼠在识别同类陌生个体及熟悉个体时各脑区神经元被激活情况。通过外侧隔核区(LS)逆向腺病毒注射及Fos表达,以确定参与调控小鼠同类个体识别及社交记忆的神经环路。通过药理学遗传的方法检测选择性抑制vCA1到LS的神经投射对小鼠同类个体识别的影响。结果:小鼠前额叶皮层(PFC)、海马齿状回(DG)、伏隔核(NAc)在识别熟悉及陌生个体时均存在较多神经元激活; vCA1及LS在识别陌生个体时存在更多神经元激活; vCA1脑区到LS脑区有直接的神经投射。药理学遗传手段抑制vCA1到LS的神经投射后,在三箱室社交行为实验中,不会影响小鼠辨别同类和无生命物体的能力,但是损害了小鼠识别陌生小鼠的能力。结论:vCA1、PFC、DG、NAc及LS等多个脑区参与小鼠同类社交行为,而vCA1及其到LS的神经投射则参与调控了小鼠对同类个体的社交记忆行为。     

雌激素易化组胺诱发小鼠瘙痒的外周受体机制研究

目的:探究雌激素在小鼠痒觉敏感性性别差异中的作用及外周机制。方法:采用正常雄性、雌性以及去卵巢雌性C57BL/6J鼠作为实验对象,分别检测其皮内注射致痒剂所诱发的搔抓行为,并通过腹腔注射不同的雌激素受体拮抗剂探究其外周受体机制。结果:雌鼠对组胺的痒觉敏感性明显高于雄鼠,氯喹引起的搔抓行为无性别差异;雄鼠注射外源性雌激素后,对组胺的痒觉敏感性明显增强;雌鼠去卵巢后,对组胺的痒觉敏感性则显著降低,外源性补充雌激素可以恢复其正常的痒觉敏感性;腹腔注射非选择性雌激素受体拮抗剂可以降低雌鼠的组胺痒觉敏感性;腹腔注射雌激素受体-α(ER-α)拮抗剂MPP可以降低雌鼠对组胺的敏感性,而雌激素受体-β(ER-β)拮抗剂PHTPP和G蛋白偶联雌激素受体(GPR30)拮抗剂G15则无明显影响。结论:雌激素在外周可以易化组胺引起的瘙痒,是引起小鼠痒觉敏感性性别差异的主要原因,并且其在外周的促痒作用是通过ER-α介导的。     

脑区硫胺素缺乏对AD模型小鼠脑神经元线粒体功能的影响

目的:检测阿尔茨海默病(AD)模型小鼠脑区硫胺素缺乏后,电压依赖性阴离子通道蛋白1(VDAC1)和细胞色素C(cytochrome C)蛋白表达的变化。方法:选用2~3月龄阿尔茨海默病模型小鼠(APP/PS1双转基因小鼠)和野生型(WT)小鼠,根据小鼠脑图谱用立体定位注射法在小鼠右海马齿状回,右前皮质脑区注射维生素B1拮抗剂,导致硫胺素缺乏(TD)。在TD处理后10 d进行动物行为学检测,TD处理后30 d应用免疫荧光、Western Blot及RT-PCR法检测VDAC1和细胞色素C在小鼠注射脑区蛋白的表达和分布并分析线粒体总DNA(mt DNA)的变化。结果:TD处理后APP/PS1小鼠和WT小鼠的主,被动规避行为与对照组相比有显著下降(P0.05),两组小鼠注射脑区的VDAC1和细胞色素C呈现高表达(P0.05),脑组织mt DNA总量增加(P0.05)。结论:硫胺素缺乏可以导致AD模型小鼠和野生型小鼠脑内线粒体功能发生改变。     

JQ-1损伤小鼠遥远线索性恐惧消退过程中前扣带回皮质区的结构可塑性

目的:探讨溴结构域和超末端结构域(BET)蛋白抑制剂JQ-1对小鼠遥远线索性恐惧消退过程中前扣带回皮质(ACC)区神经结构可塑性的影响.方法:将小鼠分为两组:JQ-1组和溶媒组.对小鼠进行5次声音和足底电击配对训练,建立线索性恐惧条件化模型.恐惧条件化前连续5 d进行JQ-1或溶媒的注射,每天1次,共5次.恐惧条件化后...     

杏仁核兴奋性神经元参与小鼠慢性痒及伴发抑郁的形态学研究

目的:观察慢性痒伴发抑郁对小鼠杏仁核内神经元的激活作用,为其参与痒觉信息的调控提供形态学证据.方法:应用二苯基环丙烯酮(DCP)建立小鼠慢性瘙痒模型,用痒行为视频追踪系统检测痒行为,以验证模型制备是否成功,并运用悬尾实验检测慢性痒模型小鼠的抑郁样行为.结合免疫荧光染色方法观察DCP模型小鼠杏仁核内各个区域的神经元激活情...     

抑制下丘脑外侧区谷氨酸能神经元对小鼠焦虑样行为的影响

目的:通过抑制下丘脑外侧区谷氨酸能神经元后观察小鼠焦虑样行为的变化,探讨小鼠下丘脑外侧区谷氨酸能神经元对焦虑样行为的调控作用。方法:成年雄性Vglut2-ires-cre小鼠随机分为A、B、C、D四组。A、B两组双侧下丘脑外侧区微注射AAV-m Cherry病毒,C、D两组注射AAV-h M4Di-m Cherry病毒。两周后A、C两组腹腔注射生理盐水,B、D两组腹腔注射CNO。30 min后进行旷场实验和明暗箱实验,观察小鼠焦虑样行为的变化。行为实验结束后处死动物,验证病毒的表达情况及注射位置的准确性。结果:标记病毒注射后Vglut2-ires-cre小鼠下丘脑外侧区谷氨酸能神经元病毒表达成功。旷场实验中,D组小鼠总的运动距离、平均运动速度及进入中央区次数与A、B、C三个对照组相比均未见统计学差异,而在中央区的停留时间则明显缩短(P0.01)。明暗箱实验中,D组小鼠在明箱侧的停留时间较A、B、C三个对照组明显缩短(P0.01),但进入次数则未见统计学差异。结论:抑制下丘脑外侧区谷氨酸能神经元后增强了小鼠的焦虑样行为,提示这类神经元和焦虑的调控有关。     

去铁敏阻抑ob/ob小鼠海马脑区的Tau蛋白过度磷酸化

目的研究去铁敏(DFO)对ob/ob小鼠脑内Tau过度磷酸化的影响,以探讨铁沉积是否涉及糖尿病(DM)的神经病理。方法繁育12只6月龄ob/ob小鼠,随机分为DFO组和对照组(n=6),分别给予腹腔注射DFO(100 mg·kg^-1)或空白溶剂15d。采用免疫组织化学和Western blot方法,检测小鼠海马脑区的Tau蛋白磷酸化及其调控蛋白激酶和磷酸酶的表达变化;DAB增强的Perl’s染色检测海马铁离子的分布。结果DFO处理后,ob/ob小鼠海马脑区Tau蛋白无明显变化,而在Ser396和Thr231位点的磷酸化水平降低。相应地,DFO组小鼠脑内蛋白激酶GSK3β和CDK5的活性显著下调,磷酸酶PP2A及其活性上调。另外,DFO组小鼠海马脑区的铁染色强度减弱。结论DFO能够有效改善ob/ob小鼠海马脑区的Tau病理,为揭示铁参与DM诱发的神经病理提供了新证据。     

慢性炎性痛诱致小鼠焦虑样行为和前扣带回TRPC3和TRPC6通道的表达上调

目的:探讨慢性炎性痛诱致小鼠焦虑样行为情况下前扣带回(anterior cingulate cortex,ACC)TRPC 3/6通道的表达改变。方法:采用小鼠痛行为检测方法、旷场行为检测方法和免疫印迹实验(Western Blot)。结果:小鼠后肢足底皮下注射完全弗氏佐剂(complete freund’s adjuvant,CFA)建立慢性炎性痛模型。痛行为检测结果显示足底皮下注射CFA可以诱致小鼠产生长时程的机械性和热痛觉过敏现象。旷场实验可见CFA致炎致痛后的小鼠较正常小鼠在旷场中央区活动距离明显降低,停留时间明显减少,提示慢性炎性痛小鼠表现为显著的焦虑样行为。进一步采用Western Blot实验发现炎性痛焦虑样小鼠前扣带回脑区的TRPC3和TRPC6通道蛋白表达水平较对照组动物显著上调。结论:CFA引发的慢性炎性痛模型中,小鼠产生焦虑样情绪,TRPC3和TRPC6通道蛋白在ACC部位的蛋白表达水平明显升高。提示这些焦虑样痛情绪的发生与疼痛痛觉通路中ACC脑区的TRPC3及TRPC6表达密切相关。     

海洛因暴露对小鼠前额叶皮层、海马和伏核caspase 3表达的影响

目的: 观察海洛因暴露对小鼠前额叶皮层(PFC)、海马(HP)和伏核(Acb)脑组织caspase 3表达的影响, 探讨发育期海洛因暴露是否干扰了学习记忆和成瘾脑区的细胞凋亡.方法: 于胚胎鼠E8～E18 d时, 给孕鼠皮下注射海洛因10 mg/(kg*d), 建立子宫内海洛因暴露的小鼠模型.按出生前处理将小鼠分为盐水(Sal) 组和海洛因(Her) 组, 待其14 d脑凋亡高峰期时取PFC、 HP和Acb脑区组织, 采用RT-PCR和Western blot法检测caspase 3表达变化.结果: 与Sal组相比, Her组小鼠的caspase 3 mRNA在PFC、 HP和Acb脑区的表达明显增加(P<0.05); 激活的caspase 3蛋白表达也明显增加(P<0.05).结论: 海洛因暴露可增加小鼠PFC、 HP和Acb脑区caspase 3的表达, 提示海洛因可通过诱导相关脑区细胞凋亡增多而发挥其神经毒性作用.     

P38丝裂原活化蛋白激酶对帕金森病模型小鼠黑质诱导型一氧化氮合酶和前列腺素E2表达的影响

目的:研究P38丝裂原活化蛋白激酶(P38MAPK)在1-甲基-4-苯基-1, 2, 3, 6四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)模型小鼠中对黑质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和前列腺素E2(PGE2)的调控作用.方法:将小鼠随机分为 MPTP模型组,腹腔注射MPTP;抑制剂组,每次注射MPTP前1h腹腔注射P38MAPK特异性抑制剂SB 203580;对照组,注射与模型组和抑制剂组等量生理盐水和DMSO.行为学观察,采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察黑质酪氨酸羟化酶(TH)、 iNOS、 PGE2和磷酸化P38MAPK (p-P38MAPK)的表达.结果:模型组小鼠出现PD典型的行为学症状,TH阳性细胞和蛋白水平下降61%～65%, p-P38MAPK、 iNOS和PGE2阳性细胞及蛋白水平显著增加;经SB 203580处理后,上述变化均明显减轻.结论: P38MAPK对PD模型小鼠黑质iNOS和PGE2表达可能有重要调控作用,SB 203580对PD小鼠具有一定神经保护作用.     

miR-210通过MMP-2下调M2/M1巨噬细胞比例抑制肺癌细胞生长

目的研究miR-210通过MMP-2调控M2/M1巨噬细胞比例对肺癌细胞生长的影响及对相关机制进行初步探讨。方法将小鼠Lewis lung carcinoma (LLC)-1细胞皮下植入C57BL/6小鼠构建小鼠肺癌模型,荧光定量PCR检测miR-210表达。进一步取40只肺癌建模成功的小鼠,并随机分为4组:对照组小鼠尾静脉注射AAV9-Fugw腺相关病毒;AAV9-OE-miR-210组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210腺相关病毒; AAV9-OE-MMP-2组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-MMP-2腺相关病毒;AAV9-OE-miR-210+AAV9-OE-MMP-2组小鼠尾静脉注射AAV9-OE-miR-210和AAV9-OE-MMP-2腺相关病毒。所有小鼠注射腺相关病毒滴度为108TU,病毒注射时间为4周。检测4组小鼠肿瘤大小变化,WGA染色检测4组小鼠肺癌细胞大小变化。另外,取生长融合至80%的LLC1细胞,并随机分为2组:WT组转染包含野生型MMP-2 3’-UTR的构建物,Mut组转染突变型MMP-2 3’-UTR的构建物。细胞转染48 h后,荧光素酶实验检测m...     

中央杏仁核GABA神经元对小鼠情绪和摄食的调控研究

目的：探讨中央杏仁核(CeA)内γ-氨基丁酸(GABA)能神经元到下丘脑室旁核(PVN)神经通路对小鼠情绪和摄食的调控作用及潜在机制。方法：采用慢性束缚应激(CRS)建立KM小鼠焦虑抑郁样模型。(1)在CRS小鼠和正常对照(NOR)小鼠的PVN注射0.3μL生理盐水(NS)或GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱(BIC)，并据此将小鼠分为4组(n=10):NOR+NS组、NOR+BIC组、CRS+NS组和CRS+BIC组。通过旷场实验、高架十字迷宫实验、大理石掩埋实验和强迫游泳实验观察小鼠行为学的变化；观察2周内小鼠摄食和体重的变化。(2)采用荧光金逆行追踪结合荧光免疫组织化学法检测CeA-PVN神经通路。(3)采用化学遗传法将腺相关病毒载体AAV2/9-mDlx-hM3D(Gq)-EGFP-ER2-WPRE-PA定向注射于CeA，小鼠分为4组(n=10):NS(腹腔注射)+NS(PVN微量注射)组、NS+BIC组、氯氮平N-氧化物(CNO)+NS组和CNO+BIC组。观察CeA-PVN的GABA能神经通路对小鼠行为学和摄食体重的影响。结果：行为学结果显示，CRS+NS组出现焦虑抑郁样行为改...     

NF-κB蛋白在柯萨奇病毒B3诱导的病毒性心肌炎小鼠心肌细胞焦亡过程中的调控作用

目的:探讨NF-κB蛋白对柯萨奇病毒B3(CVB3)诱导的病毒性心肌炎小鼠心肌细胞焦亡的调控作用.方法:将编号后的45只雄性BALB/c小鼠根据随机数表法平均分为3组,分别为对照组(normal组)、病毒性心肌炎组(CVB3组)和NF-κB蛋白抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)处理组(CVB3+PDTC组),每组各...     

FOXP3基因对ApoE-knockout小鼠动脉粥样硬化的影响

目的:研究FOXP3对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的影响。方法:构建FOXP3-siRNA慢病毒载体,免疫磁珠分选Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞。利用Westernblot方法对构建的载体进行功能性研究。实验动物分为阴性对照组、阳性对照组、FOXP3-siRNA慢病毒注射组和Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞注射组。比较各组小鼠的斑块面积和不同组织Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞的数目和功能;利用ELISA法检测各组脾细胞炎性因子浓度;利用RT-PCR和Westernblot分析不同组织中FOXP3转录水平和Foxp3蛋白表达水平。结果:与对照组和Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞注射组比较,FOXP3-siRNA慢病毒注射组小鼠斑块面积明显增加(P<0.05);Foxp3+ CD4+ CD25+Treg细胞的数目显著减少(P<0.05),功能下降;Foxp3蛋白表达和FOXP3转录水平降低(P<0.05)。与对照组和FOXP3-siRNA慢病毒注射组比较,输注Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞组斑块面积显著减小(P<0.01);Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞的数目显著增加(P<0.01),功能增强;Foxp3蛋白表达和FOXP3转录水平增高(P<0.01)。结论:FOXP3可能通过调控体内炎症反应而产生抗动脉粥样硬化作用。     

紫草素通过促进巨噬细胞Ⅰ型干扰素的产生抑制病毒感染

目的:探讨紫草素对病毒感染的影响及其作用机制.方法:C57BL/6J小鼠用水疱性口炎病毒(VSV)感染后,不同浓度紫草素通过腹腔注射处理小鼠,观察小鼠的生存率以及肝、脾和肺组织中的VSV病毒滴度和VSV-G病毒基因的转录水平变化;H&E组化实验检测肺部组织的损伤和炎症细胞的浸润.RT-PCR检测小鼠肝脏、脾脏及肺中IF...     

甘露糖受体在正常和炎症小鼠脑内小胶质细胞的表达

目的 确定脑内小胶质细胞是否表达甘露糖受体,以及在不同脑区甘露糖受体的表达是否存在差异,以进一步明确小胶质细胞的功能.方法 C57小鼠26只,分为侧脑室炎症模型组(10只)、全身炎症模型组(6只)和正常对照组(10只).通过注射细菌脂多糖(LPS)建立全脑急性炎症模型,用免疫荧光双标技术对小鼠脑组织冷冻切片进行染色,激...     

铁调素在小鼠脑内的表达及其对膜铁转运蛋白1和二价金属离子转运体1表达的影响

目的 探讨铁调素(hepcidin)在小鼠脑内的表达及其对膜铁转运蛋白1(ferroportir 1)和二价金属离子转运体1(DMT1)表达的调节作用.方法 应用RT-PCR技术检测铁调素在正常小鼠各脑区的表达分布,并观察了脑室内注射铁调素对DMT1、膜铁转运蛋白1表达的影响 结果 铁调素在小鼠脑内有广泛表达,且不同脑区表达程度不同,脉络丛部分表达较高.结论 侧脑室内注射铁调素后,能够显著影响DMT1、膜铁转运蛋白1表达,且具有明显的区域特异性.