BKCa通道对小鼠杏仁核锥体神经元兴奋性的影响

目的:观察大电导钙依赖性钾通道(large conductance calcium-activated potassium channels,BKCa)对小鼠外侧杏仁核锥体细胞神经元兴奋性的影响。方法:采用全细胞脑片膜片钳技术,记录小鼠杏仁核锥体神经元动作电位频率和幅度的变化。结果:在电流钳全细胞记录模式下输入一定强度的正电流诱导神经元发放动作电位,观察到灌流BKCa通道阻断剂iberiotoxin(IBTX100nmol/L)可显著增加动作电位发放频率,并缩短首个动作电位出现潜伏期;相反,BKCa通道激动剂NS1619(10μmol/L)可显著降低动作电位发放频率,并延长首个动作电位出现潜伏期。此外,BKCa通道参与单个动作电位后超极化电位(after hyperpolarizing potential,AHP)的形成。在电极内液中加入快速型钙离子螯合剂BAPTA(10mmol/L)可取消IBTX和NS1619对动作电位的影响。结论:BKCa通道对杏仁核锥体神经元的兴奋性具有重要的调节作用。     

慢性复合性应激对大鼠学习和记忆影响及海马中CaMKⅡCaMmRNA和CREBmRNA水平的变化

目的探讨慢性复合应激对大鼠学习与记忆的作用,以及Ca2 /钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、钙调蛋白(CaM)mRNA、环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)mRNA水平的变化及其在学习和记忆中的作用。方法Wistar大鼠被随机分为慢性复合应激组(16只)和对照组(16只)。慢性复合应激组动物给予6周的慢性复合应激刺激,制备慢性复合应激模型;Morris水迷宫和Y迷宫测试大鼠空间学习和记忆的行为表现;免疫组织化学、Western blotting和RT-PCR检测大鼠海马CaMKⅡ、CaM mRNA和CREB mRNA水平的变化;观察分析CaMKⅡ在海马CA1和CA3区的分布和表达;电镜观察海马CA3区突触间隙的宽度和突触后致密物质(PSD)的厚度的变化。结果慢性复合应激6周后,应激组大鼠的学习与记忆能力均高于对照组(P<0.05,P<0.01);应激组海马CA3区突触间隙的宽度为5.0580±1.4216,PSD的厚度为20.9547±2.5693。与对照组相比,海马CA1和CA3区辐射层和始层CaMKⅡ的免疫染色明显增强,特别是始层;CaMKⅡ、CaM mRNA及CREB mRNA水平均明显增高(P<0.05,P<0.01)。结论慢性复合性应激后,大鼠的学习与记忆能力增强;海马CaMKⅡ、CaM mRNA和CREB mRNA水平增加可能是参与了慢性复合应激性学习记忆增强的机制。     

皮质酮对原代培养的海马神经元及其[Ca2+]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的:探讨皮质酮(CORT)对培养的海马神经元及其[Ca2 ]i和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达的影响和可能的机制。方法:海马神经元被分为不同终浓度的CORT处理组、CORT MK-8 0 1或高浓度葡萄糖组。采用MTT法、流式细胞术、荧光标记和免疫细胞化学法,观察海马神经元活力、死亡方式[、Ca2 ]i和CaMKⅡ表达的变化规律。结果:1 0-6和1 0-5mol/L CORT组,其海马神经元的活力明显降低,分别以凋亡和坏死为主,并使海马神经元[Ca2 ]i显著升高;CaMKⅡ的表达明显减少。MK-8 0 1和高浓度葡萄糖均能拮抗1 0-6mol/L CORT对海马神经元的损伤作用。结论:在CORT的作用下,海马神经元发生凋亡和坏死;[Ca2 ]i升高可能既是海马神经元损伤的结果,又是引起其发生凋亡和CaMKⅡ表达下降的原因。     

慢性复合性应激大鼠学习和记忆与海马突触后致密物质CaMKII的表达变化

目的　探讨慢性复合性应激对大鼠学习和记忆的影响 ,Ca2 + 钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(CaMKII)的表达 ,及其在学习与记忆中的作用。　方法　采用行为训练和免疫组织化学相结合的方法 ,将大鼠随机分为应激组和对照组 ,应激组动物进行 6周的慢性复合性应激试验。实验后 ,动物进行 3d的Morris水迷宫和Y迷宫测试 ,记录其学习和记忆成绩 ,同时观察CaMKII在海马CA1和CA3区的分布和表达。　结果　应激组动物的学习与记忆成绩均超过或优于对照组 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;与对照组比较 ,CaMKII在应激组海马CA3区辐射层灰度明显降低(P <0 0 1) ,而始层灰度无明显变化 (P >0 0 5 ) ,在应激组CA1区海马辐射层和始层的灰度均较对照组降低 (P <0 0 5 ) ;大鼠的学习记忆成绩与CaMKII的表达呈正相关。　结论　慢性复合性应激致大鼠的学习与记忆能力加强 ,CaMKII在海马CA1区和CA3区的表达增加 ,说明CaMKII参与了慢性复合性应激对学习记忆的影响。     

慢性痒与抑郁交互恶化的机制

<正>在日常生活中,大家都经历过痒,或是一过性,或是慢性迁延;或是有皮肤表现,或是痒无定位。急性痒是一种机体的保护机制,可使人避开伤害和危险,或早期发现疾病;而慢性瘙痒则丧失了保护作用,会导致睡眠障碍、心境恶劣、兴趣丧失、快感缺失,久而久之,就会导致焦虑、抑郁等负性情绪,甚至自杀。另一方面,长期精神压力大或患有焦虑、抑郁等精神疾病的人,也会诱发或加重各种瘙痒性皮肤病,比如特     

不同睡眠剥夺时间对大鼠海马和前额皮层Ng、PKC、CaMKⅡ mRNA表达的影响

目的：探讨不同睡眠剥夺时间对大鼠海马和前额皮层神经颗粒素（Ng)、蛋白激酶C (PKC)、 Ca2+ -CaM依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）mRNA表达的影响。方法： 雄性Wistar大鼠随机分为3组,即24 h实验组、48 h实验组和72 h实验组,每组再分为睡眠剥夺组（SD组）和对照组（C组）。利用睡眠剥夺箱建立大鼠SD模型,Trizol一步法提取海马和前额皮层总RNA,用SYBRA　green Ⅰ荧光定量RT-PCR测定Ng、PKC和CaMKⅡ mRNA水平。结果： (1)大鼠海马Ng mRNA水平在睡眠剥夺24 h、48 h和72 h后,较对照组均显著降低（P＜0.05）,PKC和CaMKⅡ mRNA水平在睡眠剥夺48 h和72 h后显著降低（P＜0.05）; (2)在睡眠剥夺24 h和48 h后,大鼠前额皮层Ng、PKC和 CaMKⅡ mRNA水平较对照组有降低趋势,在睡眠剥夺72 h后均显著降低（P＜0.05）。结论： 睡眠剥夺可以使大鼠海马和前额皮层Ng、PKC和CaMKⅡ mRNA表达水平降低,且随着睡眠剥夺时间的延长,降低更为明显,这可能是睡眠剥夺损害认知功能的原因之一。     

莪素油对慢性低氧大鼠学习与记忆和海马p-CaMKII表达的影响

目的：探讨不同浓度的莪术油注射液对慢性低氧大鼠学习与记忆的影响和可能的机制。方法:将SD大鼠随机分为对照组、慢性低氧组、慢性低氧+低、中和高浓度的莪术油组，持续饲养28 d。实验结束次日，测试大鼠学习和记忆成绩的变化；测定血清和海马组织MDA和SOD的浓度；测定海马组织Ca2+浓度；观察磷酸化Ca2+/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II（p-CaMKII）在海马组织染色和表达情况；应用透射电镜观察海马组织超微结构的变化。结果:慢性低氧组发现隐蔽平台的潜伏期延长；MDA含量明显增高，SOD活力明显降低；［Ca2+］_i明显增高；p-CaMKII染色较弱和表达量明显降低。中、高浓度莪术油组发现隐蔽平台的潜伏期缩短（P<0.05）；莪术油各组MDA含量均显著降低；中、高浓度莪术油组血清SOD活力显著增加；莪术油各组［Ca2+］_i明显降低；中、高浓度莪术油组p-CaMKII免疫组化染色较强，表达量也明显增加（P<0.05，P<0.01）。慢性低氧组突触界限不清楚，树突棘和轴突均见水肿，突触囊泡及突触后致密物质消失；随着莪术油浓度的增加，突触和线粒体水肿逐渐减轻，突触后致密物质逐渐增多。结论:莪术油能够通过清除和对抗自由基的产生，增加突触后致密物质的表达来改善低氧大鼠学习和记忆能力，此作用呈剂量依赖效应。     

长期甲状腺素刺激对大鼠心肌Ca /钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ的影响

目的: 通过观察长期甲状腺素刺激对心肌Ca²⁺/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKII)的影响,探讨CaMKII是否参与甲亢性心脏病的发生发展。方法: 将20只SD大鼠随机分为甲状腺素刺激组和对照组,每组各10只。以0.2 mg·kg^-1·d^-1的剂量腹腔注射甲状腺素或等体积生理盐水3个月(每次给药前称体重),造模后3个月处死大鼠。以心重(HW)、心重与体重之比(HW/BW)、左心室重与体重之比(LVW/BW)及心肌细胞直径大小反映心肌肥厚;以心肌血管周围胶原面积(PVCA)/血管腔面积(VA)的比值反映心肌纤维化。用实时定量RT-PCR和Western blotting分别从mRNA水平和蛋白表达水平反映CaMKII的变化。结果: 造模3个月后与对照组相比,甲状腺素刺激组的HW/BW、LVW/BW、心肌细胞直径大小和心肌纤维化程度(PVCA/VA)均明显高于对照组,分别是对照组的1.87、1.84、2.15和1.94倍,差异均显著(P<0.05,P<0.01);甲状腺素刺激组心肌细胞中CaMKII mRNA表达水平、蛋白含量与对照组相比均降低,分别是对照组的40%和79%,但CaMKII的活性较对照组增加1.58倍,其差异均显著(P<0.05)。结论: 长期甲状腺素刺激诱导大鼠心肌肥厚模型中,甲状腺素降低心肌CaMKII的表达,但心肌CaMKII的活性增加,CaMKII可能参与甲状腺素诱导的甲亢性心脏病的发生发展。     

抑郁模型大鼠杏仁核神经元凋亡及Bax/Bcl-2的变化

目的:探讨抑郁模型大鼠杏仁核神经元凋亡现象。方法:将成年健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组(15只)和模型组(15只)。采用慢性强迫游泳(4周)制备慢性强迫游泳应激抑郁模型。采用TUNEL和流式细胞术检测杏仁核神经元凋亡和凋亡率,WesternBlot检测凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2的表达变化。结果:模型组和对照组凋亡细胞阳性率分别为24.08±4.30和3.08±0.91,凋亡率分别为17.14±2.71和3.34±0.80,Bax/Bcl-2比值分别为1.73±0.15和0.92±0.07,差异均有统计学意义(P0.01)。结论:抑郁模型大鼠杏仁核存在明显的神经元凋亡,这可能是抑郁患者杏仁核体积异常的原因之一。     

莪素油对慢性低氧大鼠学习与记忆和海马p—CaMKⅡ表达的影响

目的：探讨不同浓度的莪术油注射液对慢性低氧大鼠学习与记忆的影响和可能的机制。方法：将SD大鼠随机分为对照组、慢性低氧组、慢性低氧＋低、中和高浓度的莪术油组，持续饲养28d。实验结束次日，测试大鼠学习和记忆成绩的变化；测定血清和海马组织MDA和SOD的浓度；测定海马组织Ca^2＋浓度；观察磷酸化Ca^2＋／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（p—CaMKⅡ）在海马组织染色和表达情况；应用透射电镜观察海马组织超微结构的变化。结果：慢性低氧组发现隐蔽平台的潜伏期延长；MDA含量明显增高，SOD活力明显降低；[Ca^2＋]i明显增高；p—CaMKⅡ染色较弱和表达量明显降低。中、高浓度莪术油组发现隐蔽平台的潜伏期缩短（P〈0．05）；莪术油各组MDA含量均显著降低；中、高浓度莪术油组血清SOD活力显著增加；莪术油各组[Ca^2＋]i明显降低；中、高浓度莪术油组p—CaMKⅡ免疫组化染色较强，表达量也明显增加（P〈0．05，P〈0．01）。慢性低氧组突触界限不清楚，树突棘和轴突均见水肿，突触囊泡及突触后致密物质消失；随着莪术油浓度的增加，突触和线粒体水肿逐渐减轻，突触后致密物质逐渐增多。结论：莪术油能够通过清除和对抗自由基的产生，增加突触后致密物质的表达来改善低氧大鼠学习和记忆能力，此作用呈剂量依赖效应。     

脊髓背角长时程增强中CaMKⅡ磷酸化水平的变化

目的探讨长时程增强诱导和维持过程中脊髓背角钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)磷酸化水平的变化。方法(1)细胞外记录脊髓腰膨大部背角浅层神经元C-纤维诱发电位;(2)免疫组化技术观察脊髓背角CaMKⅡ磷酸化水平的变化。结果(1)LTP30min、LTP3h脊髓背角CaMKⅡThr286的磷酸化水平明显高于对照组;(2)强直刺激前30min脊髓局部给予KN-93(CaMKⅡ选择性抑制剂,100μmol/L),LTP的诱导被完全阻断,CaMKⅡ磷酸化水平与对照组无明显差别;(3)强直刺激后30min给予KN-93,明显抑制LTP,CaMKⅡ的磷酸化水平也显著降低;(4)LTP3h后给予KN-93,LTP幅度和CaMKⅡ磷酸化水平与用药前相比,差异没有统计学意义。结论CaMKⅡ磷酸化可能在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强诱导和早期维持中发挥重要作用。     

过氧化氢对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2表达的影响及CaMKⅡ的作用

目的： 探讨过氧化氢（H₂O₂）对肺动脉内皮细胞环氧合酶-2（COX-2）表达的影响及钙-钙调蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）在其中的作用。方法: 采用活细胞计数法(CCK-8法)检测H₂O₂处理肺动脉内皮细胞后的细胞活性，采用RT-PCR检测 COX-2 mRNA的表达水平，采用Western blotting检测COX-2蛋白质的表达水平。结果: H₂O₂增强COX-2表达，呈浓度和时间依赖性。100 μmol/L H₂O₂处理肺动脉内皮细胞4 h，COX-2 mRNA和蛋白质表达水平明显高于正常对照组，COX-2 mRNA水平为正常对照组的256.01%±22.36%（P<0.05），蛋白质水平为正常对照组的216.65%±21.52%（P<0.05）。 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93能抑制H₂O₂的这一效应。结论: H₂O₂可增强肺动脉内皮细胞COX-2基因的表达，CaMKⅡ是H₂O₂增强肺动脉内皮细胞COX-2基因表达的途径之一。     

CaMK Ⅱ活性对H_2O_2所致SK-N-SH细胞氧化应激损伤的影响

目的:评价钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性对过氧化氢所致人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤的影响。方法:SK-N-SH细胞生长至对数期时,接种于96孔培养板或6孔培养板,采用随机数字表法,将其分为4组:正常对照组,培养基中添加H_2O_2组(H_2O_2组),培养基中只添加CaMKⅡ活性抑制剂KN93组(KN93组),培养基中同时添加H_2O_2和KN93组(H_2O_2+KN93组),倒置显微镜观察细胞形态学,采用CCK-8法测定细胞活力,采用Fura-2/AM荧光法检测细胞内Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]_i),采用免疫印迹测定CaMKⅡ和磷酸化CaMKⅡ的表达,采用RT-PCR法检测CaMK mRNA表达。结果:与正常对照组比较,H202组细胞体呈圆形的细胞和脱落细胞增加,细胞突起长度缩短,细胞存活率降低,[Ca~(2+)]_i升高,磷酸化CaMKⅡ表达上调,CaMKⅡmRNA表达下调。与H_2O_2组比较,H_2O_2+KN93组脱落细胞明显减少,突起变长,细胞存活率增加,[Ca~(2+)]_i降低,磷酸化CaMKⅡ表达下调,CaMKⅡmRNA表达水平上调。结论:CaMKⅡ增强了H_2O_2诱导的人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤。     

前列腺素EP3受体激动剂诱导发热及其机制初探

目的：研究前列腺素EP₃受体激动剂对大鼠体温的影响并初步探讨其作用机制。方法：观察脑室注射前列腺素EP₃受体激动剂sulprostone对大鼠体温的影响，并与同当量PGE₂比较；利用PI-PLC及CaM KⅡ特异性抑制剂初步分析PGE₂和sulprostone诱导发热的机理。结果：脑室注射sulprostone可剂量依赖性升高大鼠体温，较之同当量PGE₂发热峰值更高、持续时间更长；同时给予PI-PLC、CaM KⅡ抑制剂可以明显抑制PGE₂和sulprostone诱导的体温升高。结论：前列腺素E₂可能主要通过EP₃受体诱导大鼠发热，其胞内环节可能与PI-PLC-IP₃-Ca²⁺/CaM-CaM KⅡ通路有关。     

人CaMKKβ蛋白的原核表达、纯化及活性测定

目的对原核体系表达的CaMKKβ蛋白体外活性进行探索,为针对CaMKKβ、AMPK药物研发提供科研基础。方法克隆人CaMKKβ基因,建立原核表达载体pET28a-CaMKKβ,将其转化入E.coli Rosetta(DE3)感受态细胞内,在16℃、0.02 mmol/L IPTG条件下诱导重组表达CaMKKβ蛋白,Ni-NTA纯化6His-CaMKKβ蛋白,并利用Glo?Max Assay方法检测其活性。结果通过基因测序表明pET28a-CaMKKβ质粒构建成功;重组人CaMKKβ蛋白可溶性表达量较高,Ni-NTA纯化6His-CaMKKβ蛋白纯度可达80%以上,活性检测结果表明,大肠杆菌体系内表达的人CaMKKβ蛋白在CaM/Ca2+存在与否情况下,酶活基本一致。结论成功构建原核表达载体pET28a-CaMKKβ,实现重组人CaMKKβ在原核体系内可溶性表达,活性测定表明原核体系内表达的CaMKKβ自主酶活性较强,受CaM/Ca2+影响较小。     

发育中突触可塑性相关分子的研究进展

突触传递效能的各种变化称为突触可塑性,它是脑内信息存储的基础,同时也使繁杂的信息储存及学习行为、意识、记忆等功能的获得成为可能。参与突触可塑性形成及调节的主要机制包括活动（activity）依赖的兴奋性谷氨酸受体转运（trafficking）、钙离子／钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）介导的信号转导以及存在于突触前/后膜的细胞黏附分子（CAMs）等。     

精氨酸加压素对大鼠视前区GABA_A受体亚单位磷酸化的影响

目的:研究精氨酸加压素(AVP)对大鼠视前区γ-氨基丁酸(GABA)A型受体(GABA_A受体)亚单位(α、β和γ2)表达和磷酸化的影响。方法:实验分为对照组、AVP组、V1a受体抑制剂+AVP组和V1a受体抑制剂组(均n=10);腹腔注射AVP或V1a受体抑制剂0.5 h后,采用RT-qPCR和Western blot法检测视前区GABA_A受体亚单位(α、β和γ2)表达及磷酸化的变化。结果:与对照组相比,AVP或V1a受体抑制剂组大鼠视前区GABA_A受体亚单位表达均无显著变化;AVP能显著上调视前区GABA_A受体γ2亚单位的磷酸化水平(P0.05);AVP显著增加蛋白激酶C(PKC)和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达和磷酸化(P0.01)。结论:外源性AVP不影响GABA_A受体亚单位(α、β和γ2)表达,但主要通过V1a受体激活PKC和CaMKⅡ,影响γ2亚单位磷酸化水平,从而调制视前区GABA_A受体介导的抑制性突触传递。     

慢性强迫游泳应激抑郁模型大鼠行为学及海马Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ的变化

目的 探讨慢性强迫游泳应激(CFSS)模型大鼠行为学的改变和海马神经元Ca~(2+)/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(CaMKⅡ)的表达变化. 方法 成年健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为对照组(30只)和慢性强迫游泳应激组(30只).慢性强迫游泳组强迫游泳4周,制备慢性强迫游泳应激模型;糖水偏好实验、开场实验和Morris水迷宫检测大鼠行为学改变;荧光探针标记法测定海马神经元内Ca~(2+)浓度;胶体金免疫电镜、免疫印迹和RT-PCR检测CaMKⅡ的表达变化. 结果 慢性强迫游泳应激组糖水消耗量和糖水偏好百分比分别为4.114±0.644和86.610±4.450,对照组为8.157±1.105和94.930±2.893,差异有统计学意义(P<0.01);开场实验中慢性强迫游泳应激组和对照组的直立次数分别为1.75±0.96和6.00±0.82,差异有统计学意义(P<0.05);水迷宫实验逃避潜伏期分别为(20.762±3.236)s和(5.632±1.065)s,差异有统计学意义(P<0.01);海马神经元内游离Ca~(2+)浓度分别为(498.94±40.45)nmol/L和(288.91±32.42)nmol/L,差异有统计学意义(P<0.01);CaMKⅡ蛋白和mRNA相对表达水平均高于对照组(P<0.01). 结论 海马Ca~(2+)及CaMKⅡ的表达上调,可能是抑郁模型大鼠情感行为异常的病理生理基础之一.     

慢性强迫游泳应激抑郁模型大鼠行为学及海马Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ的变化

目的 探讨慢性强迫游泳应激(CFSS)模型大鼠行为学的改变和海马神经元Ca²⁺/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ（CaMKⅡ）的表达变化。 方法 成年健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为对照组（30只）和慢性强迫游泳应激组（30只）。慢性强迫游泳组强迫游泳4周,制备慢性强迫游泳应激模型;糖水偏好实验、开场实验和Morris水迷宫检测大鼠行为学改变;荧光探针标记法测定海马神经元内Ca²⁺浓度;胶体金免疫电镜、免疫印迹和RT-PCR检测CaMKⅡ的表达变化。 结果 慢性强迫游泳应激组糖水消耗量和糖水偏好百分比分别为4.114±0.644和86.610±4.450,对照组为8.157±1.105和94.930±2.893,差异有统计学意义（P<0.01）;开场实验中慢性强迫游泳应激组和对照组的直立次数分别为1.75±0.96和6.00±0.82,差异有统计学意义（P<0.05）;水迷宫实验逃避潜伏期分别为（20.762±3.236）s和（5.632±1.065）s,差异有统计学意义（P<0.01）;海马神经元内游离Ca 2+浓度分别为（498.94±40.45）nmol/L和（288.91±32.42）nmol/L,差异有统计学意义（P<0.01）;CaMKⅡ蛋白和mRNA相对表达水平均高于对照组（P<0.01）。 结论 海马Ca²⁺及CaMKⅡ的表达上调,可能是抑郁模型大鼠情感行为异常的病理生理基础之一。