CGRP对UUO小鼠肾组织间质纤维化与炎性因子表达的干预作用

目的 探讨CGRP对小鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型肾间质纤维化的影响.方法 选择雄性小鼠36只,建立小鼠UUO模型,前2 d治疗组和模型组分别每天给予CGRP 1 R.0 nmol·kg-1·d-1和同等量0.9%氯化钠溶液静脉注射.观察模型第14天肾小管损害百分比、肾间质纤维化程度、肾间质α-SMA平滑肌肌动蛋白、肾间质巨噬细胞数,单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)以及F4/80 mRNA的表达.结果 CGRP显著减轻肾小管损害和肾间质纤维化(P<0.05);治疗组肾间质巨噬细胞数F4/80和肾间质α-SMA表达显著低于模型组(P<0.05);CGRP显著抑制MCP-1以及F4/80 mRNA的表达(P<0.05).结论 CGRP减少小鼠UUO模型肾间质巨噬细胞浸润、降低MCP-1以及F4/80 mRNA表达、抑制α-SMA的表达,从而减轻肾间质纤维化.     

内抑素组织表达趋势与肾间质微血管损伤的相关性研究

目的探讨在幼年肾间质微血管损伤过程中内抑素、血管内皮生长因子(VEGF)、CD31组织定位表达的趋势、相关性及其潜在意义,以及用阿托伐他汀干预的效应。方法采用单侧输尿管结扎(UUO)模型,将90只SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组和阿托伐他汀治疗组(治疗组)。在术后第1,3,5,7,14天每组各取6只大鼠处死,左肾组织行Masson染色,动态观察肾脏病理学变化,并用免疫组织化学方法测定肾组织中内抑素、VEGF、CD31的表达变化。结果随着梗阻时间延长UUO模型组内抑素蛋白表达进行性增高,而VEGF及CD31蛋白表达水平却逐渐下降;与UUO模型组相比,治疗组内抑素蛋白表达减少,而VEGF及CD31蛋白表达增高。内抑素与VEGF及CD31之间呈负相关。结论在幼年大鼠肾间质微血管损伤过程中,内抑素表达上调具有重要的致病意义,而阿托伐他汀可以通过下调内抑素减轻肾间质微血管损伤。     

温阳活血方对UUO大鼠肾组织CTGF表达的影响

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在肾间质纤维化中的表达及温阳活血方的干预作用。方法采用单侧输尿管结扎(UUO)肾间质纤维化模型。将大鼠随机分为4组,即:假手术组、模型组、温阳活血治疗组、蒙诺组。药物治疗14天后,收集尿液,检测尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG),处死大鼠,腹主动脉采血观察肾功能,取肾组织观察其病理改变,并应用免疫组织化学方法检测肾组织CTGF的表达。结果模型组大鼠尿NAG,血尿素氮(BUN)较假手术组显著升高,温阳活血方组尿NAG和血BUN较模型组显著降低;模型组肾组织表现为纤维化病理改变,假手术组肾小管上皮细胞、肾间质细胞胞浆CTGF有较弱的表达;模型组呈强阳性表达;温阳活血组病理改变较模型组纤维化程度减轻,且CTGF的阳性表达较模型组显著减弱,差异有统计学意义(P<0.05),与蒙诺组比差异无统计学意义。结论温阳活血方可降低UUO大鼠尿NAG和血BUN,而具有保护肾小管功能和改善肾功能作用,可能与其能抑制肾组织CTGF过度表达而减缓肾纤维化病程进展。     

黄芪与雷米普利联合应用对UUO大鼠肾脏VEGF表达的影响

目的:探讨黄芪与雷米普利联合应用对单侧输尿管梗阻大鼠(UUO)肾脏血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:45只雄性Wistar大鼠随机分为5组:单侧输尿管梗阻(UUO)组;对照组,除不结扎离断输尿管外,其余处理同UUO组;黄芪组,给予UUO模型大鼠黄芪注射液5mL/kg/d(相当于黄芪生药10g/kg·d)灌胃,(黄芪注射液由珍宝岛药业提供,批号A20120920,每支10mL,含生药20g);雷米普利组,给予雷米普利灌胃(10mg/kg·d);黄芪、雷米普利联合组,给予黄芪注射液(5mL/kg·d)、雷米普利(10mg/kg·d)灌胃.观察第14天肾间质纤维化程度、VEGF的表达.结果:①与假手术组相比,UUO组大鼠肾间质蓝染面积显著增加(P＜0.05).②与对照组相比,UUO组VEGF阳性面积百分比显著降低(P＜0.05),黄芪、雷米普利和黄芪、雷米普利联合组的VEGF阳性面积百分比则显著增加(P均＜0.05).黄芪、雷米普利联合组与黄芪组、雷米普利组的差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论:与单用黄芪、雷米普利相比,两药联合应用能更大程度的减轻UUO大鼠肾间质纤维化,增加VEGF表达可能是其机制之一.     

丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤后凋亡相关因子表达的影响

目的观察丁苯酞(NBP)对大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织Bcl-2和Bax表达的影响。方法 40只SD大鼠随机分为4组:假手术组、缺血再灌注组、溶剂对照组和丁苯酞治疗组,用线栓法,制作大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注模型,于缺血2 h再灌注24 h后,断头取脑,用免疫组织化学法和RT-PCR法,观察脑组织Bcl-2和Bax表达水平的变化。结果大鼠脑缺血再灌注损伤后,Bcl-2和Bax显著增多;与模型组和对照组相比,治疗组Bcl-2的表达显著上调,Bax的表达显著下调,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论丁苯酞对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与上调Bcl-2的表达、下调Bax的表达有关。     

丁苯酞对癫痫小鼠脑内氨基酸的影响

目的 观察丁苯酞对癫痫小鼠脑内氨基酸含量的影响.方法 小鼠腹腔注射丁苯酞溶液30 min后制作急性癫痫模型,对癫痫小鼠脑内的4种氨基酸(天冬氨酸、γ-氨基丁酸、谷氨酸、甘氨酸)的含量变化进行观察.结果 丁苯酞能降低兴奋性氨基酸谷氨酸的含量,并能降低Glu/GABA的比值(模型组38.78;丁苯酞高剂量组5.52),与模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 丁苯酞可以调节大脑中兴奋/抑制系统的平衡,从而可能缓解癫痫的发作.     

大黄酸对输尿管梗阻大鼠肾组织纤维化的保护机制

目的：观察大黄酸（RH）对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法：将雄性SD大鼠随机分成三大组：假手术对照组（Sham组,n=6）,UUO模型组（结扎左侧输尿管制作UUO模型,n=18）,UUO大黄酸干预组（UUO＋RH组,n=18）。除Sham组外,其余2组根据不同的观察时间细分为3,7,14d亚组（n=6）分别测定大鼠左肾皮质匀浆中脂质过氧化物标志物MDA以及抗氧化酶CAT和SOD含量。免疫组织化学用sP法检测肾脏TGF-β,bFGF的表达。结果：大黄酸干预组与UUO模型组相比有显著性差异。大黄酸能减少单侧输尿管梗阻侧肾皮质脂质过氧化物的产生,同时增加抗氧化酶的含量,减少TGF-β1和bFGF表达。结论：大黄酸通过阻止TGF—β信号传导,从而阻断肾间质的纤维化,发挥肾保护作用。     

转化生长因子β1和α-平滑肌肌动蛋白在肾间质纤维化小鼠肾组织的表达

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾间质纤维化模型中肾组织的表达。方法 36只小鼠平均分为假手术组与模型组,术后3、7、14d处死小鼠,取梗阻侧肾组织行HE、Masson染色、免疫组化与RT-PCR检测。结果与假手术组比,模型组TGF-β1及α-SMA表达呈进行性升高,肾间质纤维化程度明显增高(P<0.O1)。结论 TGF-β1及α-SMA在肾间质纤维化过程中发挥重要作用。     

甲磺酸伊马替尼缓解小鼠肾组织纤维化作用研究

目的 研究甲磺酸伊马替尼（STI571）对单侧输尿管梗阻（UUO）小鼠肾间质纤维化的防治作用.方法 40只雄性清洁级昆明种小鼠随机分为4组：假手术组、模型组、小剂量治疗组（80 mg&#8226;kg^-1&#8226;d^-1）、大剂量治疗组（160 mg&#8226;kg^-1&#8226;d^-1）.治疗组在手术后分别以STI571 80,160 mg&#8226;kg^-1&#8226;d^-1灌胃.各组小鼠均于术后第8天处死.观察肾间质病理学改变;用酸水解-比色法测定肾组织胶原的含量,免疫组化技术检测α-SMA、PCNA、FN的表达.结果 与模型组相比, 治疗组肾间质纤维化程度明显减轻,肾间质α-SMA、PCNA、FN的表达也明显减少.结论 STI571能够下调肾组织α-SMA表达水平,抑制肾间质细胞增殖活化,减少肾间质细胞外基质的沉积,对UUO小鼠早期肾间质纤维化有一定防治作用.     

活性维生素D3对UUO模型大鼠肾间质OPN、TGF-β1表达的影响

目的:研究活性维生素D3在单侧输尿管梗阻模型(UUO)模型肾小管间质纤维化病理过程中对骨桥蛋白(osteopon-tin,OPN)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,寻找防治肾间质纤维化的方法.方法:36只清洁级雄性Wistar大鼠,随机分为3组,假手术组(n=12)、UUO模型组(n=12)活性维生素D3治疗组(n=12).于输尿管上1/3处用手术缝线结扎活性维生素D3治疗组及UUO模型组大鼠.罗盖全(骨化三醇)给予活性维生素D3治疗组灌胃,共28d.UUO模型组及假手术组等量生理盐水灌胃.于术后第14天、第28天分批处死各组大鼠,留取造模侧肾脏供病理分析.实验结束时,检测各组大鼠血清尿素氮(BUN)值和肌酐(Scr).HE染色及Masson染色法观察各组大鼠肾小管间质纤维化情况,OPN及TGF-β1在大鼠肾脏的表达情况应用免疫组化法测定.结果:随着梗阻时间延长,UUO模型组、活性维生素D3治疗组大鼠肾脏病理肾小管结构紊乱、周围肾间质增宽,肾间质纤维化面积明显高于假手术组,活性维生素D3治疗组的肾间质纤维化面积低于UUO模型组(P＜0.05).OPN、TGF-β1在UUO模型组和活性维生素D3治疗组表达高于假手术组,UUO模型组OPN、TGF-β1的表达高于治疗组(P＜0.05).结论:①OPN、TGF-β1的表达随着梗阻时间延长逐渐增加.提示OPN、TGF-β1参与了肾间质纤维化的发生及发展.②活性维生素D3治疗组肾间质纤维化程度较UUO模型组改善,且OPN、TGF-β1表达减少,表明活性维生素D3可减少TGF-β1、OPN表达,抑制肾间质纤维化.     

罗格列酮对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的保护作用及其机制

目的 :探讨罗格列酮 (RSG)对单侧输尿管梗阻 (UUO)大鼠肾间质纤维化的保护作用及其机制。方法 :将大鼠随机分成UUO组和UUO +RSG组 ,另设假手术组 (SHAM)为对照。用药组于术前 3d给予RSG 3 0mg·kg-1·d-1,ig ,直至术后 14d处死动物 ,对照组给予等量的灭菌去离子水同样处理。观察左侧肾脏病理学改变 ,比较肾间质基质含量和肾间质纤维化程度 ;以α 平滑肌肌动蛋白 (α SMA)的免疫组化结果观察肾小管上皮细胞转型情况。结果 :与UUO组相比 ,RSG +UUO组左侧肾脏的病理改变及肾间质纤维化程度明显减轻 (P <0 0 5 ) ,肾小管上皮细胞α SMA的表达显著减少 (P <0 0 5 ) ;而SHAM组对左侧肾脏病理学无显著影响。结论 :RSG对UUO所致的大鼠肾间质纤维化具有保护作用 ,其机制可能部分是通过减少肾小管上皮细胞向肌纤维细胞的转型 ,从而改善肾间质纤维化     

肾上腺髓质素在肾间质纤维化实验小鼠肾脏细胞增殖中的作用

目的探讨肾上腺髓质素(ADM)在梗阻性肾病中对细胞增殖的影响。方法采用单侧输尿管结扎(UUO)的方法制备梗阻性肾病模型,给予缬沙坦10mg·kg-1·d-1灌胃治疗,采用免疫组化及RT-PCR检测野生小鼠(WT)和肾上腺髓质素基因敲除小鼠(AMKO)肾脏增殖细胞核抗原(PCNA)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。结果野生UUO组小鼠与假手术组相比PCNA阳性细胞数增加,缬沙坦能减少PCNA阳性细胞数。与野生小鼠比较,AMKO假手术组PCNA阳性细胞明显增多,AMKO-UUO组尤为明显,缬沙坦能减少AMKO-UUO组的PCNA阳性细胞数,Ⅲ型胶原和TGF-β1的蛋白表达与mRNA在AM-KO-UUO组明显上调,可被缬沙坦拮抗。结论肾上腺髓质素在UUO介导的肾间质病变的细胞增殖过程中有着重要的作用。     

VEGF ameliorates tubulointerstitial fibrosis in unilateral ureteral obstruction mice via inhibition of epithelial-mesenchymal transition

Aim:

Vascular endothelial growth factor (VEGF) has been shown to be a survival factor for renal tubular epithelial cells. In the present study, we investigated whether administration of VEGF ameliorates tubulointerstitial fibrosis in a mouse model of unilateral ureteral obstruction (UUO).

Methods:

Thirty-six male CD-1 mice were randomly divided into three groups: sham-operation, UUO and UUO+VEGF group. VEGF (50 μg/kg) was subcutaneously injected twice daily from d 1 to d 14. Mice in each group were killed at d 3, 7, or 14 after the operation, and the tubulointerstitial fibrosis was histopathologically evaluated. Human proximal tubular epithelial cells (HK-2) were used for in vitro study. The expression levels of α-SMA, E-cadherin, TGF-β1, CTGF, and BMP-7 in the kidney were determined using Western blot and RT-PCR.

Results:

In the UUO mice, the degree of interstitial fibrosis was dramatically increased in a time-dependent manner. At d 3, 7, and 14, both the mRNA and protein expression levels for α-SMA, TGF-β1, and CTGF were significantly upregulated, whereas those for E-cadherin and BMP-7 were significantly downregulated. At d 3 and 7, VEGF treatment significantly reduced interstitial fibrosis and the expression levels for α-SMA, TGF-β1, and CTGF, while significantly increased the expression of E-cadherin and BMP-7, as compared with the UUO mice. At d 14 after operation, no significant differences were observed in the expression of the examined markers between VEGF-treated mice and UUO mice, with the exception of CTGF. In HK-2 cells, VEGF blocked TGF-β1-induced α-SMA and vimentin expression and restored E-cadherin expression in a dose-dependent manner.

Conclusion:

VEGF may ameliorate renal tubulointerstitial fibrosis at the early stage in UUO mice. This effect may be related to inhibition of VEGF on renal tubular epithelial-mesenchymal transition (EMT).     

MicroRNA-192在UUO幼年大鼠肾间质的表达及雷公藤多苷的干预研究

目的：研究幼年大鼠单侧输尿管结扎（UUO）致肾间质纤维化模型中,MicroRNA-192（miR-192）、Ⅰ型胶原的表达以及用免疫抑制剂雷公藤多苷（TWP）的干预效果。方法选用4~5周龄幼年SD雄性大鼠54只,按随机数字表法均分为3组,假手术组、UUO模型组及TWP治疗组,分别于治疗满3、7、14 d杀鼠取左肾,采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）方法对各组miR-192及Ⅰ型胶原mRNA进行定量检测。结果假手术组miR-192、Ⅰ型胶原mRNA仅微量表达,各时间点组内比较差异无统计学意义（P＞0．05）。与假手术组相比, UUO模型组miR-192、Ⅰ型胶原mRNA表达增加（P＜0．01）,且随着梗阻时间的延长,两者的表达逐渐增强,各时间点组内比较差异有统计学意义（P＜0．01）;与UUO模型组相比,TWP治疗组可以减低miR-192、Ⅰ型胶原mR-NA的表达（P＜0．01）,但仍高于假手术组（P＜0．01）。结论在幼年大鼠单侧输尿管梗阻致肾间质纤维化模型中, miR-192可能起促进作用;雷公藤多苷可有效抑制miR-192、collagenⅠ的表达,改善肾间质纤维化。     

骨化三醇对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化影响的研究

目的观察幼年大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)肾组织中α-肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-Cad)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、骨形态发生蛋白-7(BMP-7)mRNA的表达,探讨骨化三醇对肾小管上皮细胞转分化(EMT)干预效应及机制。方法 54只雄性SD大鼠随机分为3组:假手术组(A组)、UUO模型组(B组)及UUO模型干预组(C组)各18只,灌胃满3、7、14d取肾。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组α-SMA、E-Cad、TGF-β1、BMP-7mRNA表达水平。结果与A组相比,B组E-Cad、BMP-7mRNA表达明显下降(P<0.01),α-SMA、TGF-β1mRNA表达显著增高(P<0.01);C组与B组相比,E-Cad、BMP-7mRNA表达明显上调(P<0.01),α-SMA、TGF-β1mRNA表达明显下降(P<0.01)。结论骨化三醇对UUO模型大鼠肾小管上皮细胞转分化有抑制作用,这种抑制作用可能与下调TGF-β的表达及上调BMP-7的表达有关。     

特异性NF-κB抑制剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的治疗作用

目的探讨特异性NF-κB抑制剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的治疗作用及其可能机制。方法应用特异性NF-κB抑制剂PDTC治疗单侧输尿管梗阻大鼠模型,常规HE、PASM染色观察肾间质病理变化,电泳迁移率变动分析法检测肾组织中NF-κB的活性,免疫组化法检测TGF-β1、MCP-1的表达,并采用图像分析系统进行半定量分析。结果治疗组较模型组大鼠梗阻侧肾脏病理变化明显减轻,肾皮质NF-κB活性及小管间质TGF-β1、MCP-1表达明显降低(P<0·01)。结论特异性NF-κB抑制剂通过抑制NF-κB激活并进一步减少下游炎症和致纤维化细胞因子的表达以达到治疗肾间质纤维化的作用。     

缬沙坦干预单侧输尿管结扎大鼠肾纤维化作用的实验研究

目的探讨缬沙坦（Valsartan,Val）对单侧输尿管结扎（unilate ral ureteral obstruction,UUO）大鼠肾间质纤维化的影响及其药学作用机制。方法 18只SD大鼠制作UUO模型后随机分为3组,缬沙坦组给予缬沙坦灌胃治疗,假手术组、模型组给予生理盐水灌胃治疗。4周后腹主动脉采血,检测血浆血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ,AngⅡ）,取UUO侧肾组织,行Masson染色观察肾小管间质病变,免疫组织化学染色观察a-平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,a-SMA）和转化生长因子-β1（transforming growth factor-beta 1,TGFβ-1）在肾小管间质的表达,并运用图像分析系统进行半定量分析。结果缬沙坦可以显著减少血浆AngⅡ的含量（P〈0.01）,下调a-SMA和TGFβ-1的表达（P〈0.01）,减轻肾间质纤维化的程度（P〈0.01）。结论缬沙坦可能通过阻断AngⅡ的生成,抑制TGF-β1、a-SMA的表达,从而达到抑制肾纤维化的作用。     

福辛普利联合缬沙坦对梗阻性肾病模型幼鼠MMP-7表达的影响

目的:观察联合应用福辛普利和缬沙坦对梗阻性肾病模型(UUO)大鼠肾小管间质MMP-7表达的影响,初步探讨其在肾间质纤维化中的作用机制。方法:72只Wistar雌性幼年大鼠单侧输尿管结扎制成UUO模型,并随机分为假手术对照组(A组)、UUO模型组(B组)和福辛普利及缬沙坦联合治疗组(C组),于模型成功后第1,2,3,4周末为实验时间点,检测各组大鼠24h尿蛋白、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)。用免疫组化法研究MMP-7在肾组织的分布、表达及变化。结果:光镜下MMP-7在对照组肾小管上皮细胞胞浆呈阴性表达,术后1周UUO组MMP-7在肾小管上皮细胞胞浆区及肾间质细胞表达,在血管内皮细胞有微量表达,2周后表达增强,4周表达最强。治疗组各周MMP-7表达较UUO组下调。结论:联合应用福辛普利和缬沙坦可通过下调MMP-7在肾组织的表达而改善肾功能,延缓肾间质纤维化的进展。     

心宁片对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制研究

目的研究心宁片对小鼠心肌缺血/再灌注损伤(MI/RI)的保护作用和作用机制。方法采用3种体外自由基体系测定心宁片的自由基清除能力。C57小鼠随机分为假手术组、模型组及心宁片高、中、低剂量组(心宁片10,20和30mg·kg-1),每组10只。结扎冠状动脉左前降支制备MI/RI模型,观察给药后小鼠心功能参数,测定体内抗氧化酶水平,Western Blot法检测核因子E2相关因子2蛋白表达。结果心宁片能够有效清除体外自由基,清除能力与维生素C相当。心宁片低、中、高剂量组能够明显改善心功能参数,升高体内抗氧化酶水平,促进核因子E2相关因子2蛋白表达。敲除核因子E2相关因子2蛋白后,心宁片调节氧化酶表达的能力被取消。结论心宁片对MI/RI具有保护作用,其作用机制有可能是通过直接清除自由基和促进核因子E2相关因子2蛋白表达,从而升高抗氧化酶水平。