二十二碳六烯酸对体外大鼠C6胶质瘤细胞促凋亡作用

目的 探讨二十二碳六烯酸（DHA）对大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法 10、25、50、75和100 μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后检测细胞活力;100 μmol/L DHA处理C6细胞24 h后,应用TUNEL方法检测凋亡细胞,流式细胞术检测凋细胞的比例;应用免疫荧光和Western blotting方法检测剪切后含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved Caspase-3）在凋亡细胞中的表达情况。结果 25、50、75和100 μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后,抑制细胞活力;100 μmol/L DHA处理细胞24 h后,能够检测到TUNEL阳性的凋亡细胞; 流式细胞术检测后发现,DHA能够明显上调凋亡细胞的比例;此外,细胞经100 μmol/L DHA处理后,免疫荧光能够检测到cleaved Caspase 3阳性细胞,Western blotting能够检测到cleaved Caspase-3阳性蛋白条带。结论 DHA具有促进大鼠C6胶质瘤细胞凋亡的作用。     

BMS-345541对人骨肉瘤细胞MG63凋亡及其作用机制

目的研究BMS-345541对人骨肉瘤细胞MG63凋亡的影响及其可能的机制。方法以0、2、4、6、8、10μmol/L BMS-345541处理MG63细胞24、48 h后,用CCK-8法检测细胞存活率。用0、2、4、8μmol/L药物作用细胞24 h后,以PI染色法观察细胞凋亡情况、流式细胞仪检测细胞凋亡。以同样浓度作用细胞48 h,Western-blot检测cleaved Caspase-3蛋白表达情况。结果 (4-10)μmol/L的BMS-345541均可抑制MG63细胞的增殖,其抑制效应呈剂量-时间依赖性,48 h最低存活率只有(0.412±0.024)(P0.05)。PI染色荧光显微镜观察结果发现:随药物浓度增高,相同视野下正常细胞数逐渐降低,凋亡细胞数逐渐增高。流式细胞仪分析:0、2、4、8μmol/L的作用BMS-345541 24 h后,凋亡率分别为(5.2±0.78)%、(5.82±0.82)%、(8.86±1.71)%、(11.01±2.69)%,与对照组相比,8μmol/L组差异有统计学意义(P0.05)。Western blot结果显示MG 63细胞中的cleaved caspase-3蛋白表达量上调,与对照组相比,2、4、8μmol/L组差异均有统计学意义(P0.05)。结论 BMS-345541可抑制MG63细胞增殖,并诱导其发生凋亡,其作用机制可能与cleaved caspase-3表达上调有关。     

香菇多糖在体外对白血病HL-60细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响

目的:研究香菇多糖在体外对人白血病HL-60细胞凋亡的调节作用及其对PI3K/AKT信号通路的影响。方法:分别用浓度为0 mg/L、15 mg/L、30 mg/L和45 mg/L的香菇多糖作用于体外培养至对数期的HL-60细胞,24 h、48 h和72 h后用MTT法检测香菇多糖对HL-60细胞活力的抑制作用。用流式细胞术检测香菇多糖对HL-60细胞凋亡的影响,Western blot检测cleaved PARP、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8、cytochrome C、PI3K、AKT和p-AKT的蛋白水平。用浓度为5 mg/L的PI3K抑制剂LY294002处理HL-60细胞72 h后,检测细胞的凋亡情况。结果:香菇多糖(15 mg/L、30 mg/L和45 mg/L)作用24 h、48 h和72 h后,HL-60细胞的活力受到抑制(P0.05),且具有浓度依赖性和时间依赖性。香菇多糖(15 mg/L、30 mg/L和45 mg/L)作用72 h后,以浓度依赖性的方式促进HL-60细胞的凋亡(P0.05)。30 mg/L香菇多糖诱导HL-60细胞凋亡过程中,cleaved PARP、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3及胞浆cytochrome C的蛋白水平随着处理时间的延长而明显升高,而caspase-8没有变化(P0.05);PI3K、AKT和p-AKT的蛋白水平随着香菇多糖浓度的增加而明显降低(P0.05)。PI3K通路抑制剂LY294002处理HL-60细胞与香菇多糖处理产生类似的凋亡效果(P0.05)。结论:香菇多糖可通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导白血病HL-60细胞凋亡。     

小分子酪氨酸激酶抑制剂A2B通过调控PI3K/Akt通路诱导胃癌细胞凋亡

目的：探讨小分子酪氨酸激酶抑制剂A2B诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的分子机制。方法：体外培养人胃癌SGC-7901细胞并加入2.5～160μmol/L梯度浓度的A2B分别干预24、48和72 h，利用CCK-8法检测细胞活力的半数抑制浓度（IC50），筛选出药物最适浓度。后续实验将SGC-7901细胞随机分为对照组（正常培养组）、溶剂组（含0.08%DMSO培养液处理）、A2B 10μmol/L实验组和A2B 20μmol/L实验组，每组每项实验均重复3次。利用EdU细胞染色实验和平板集落形成实验检测各组细胞增殖能力；Annexin V-FITC/PI双染法检测各组细胞凋亡率；线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1染色法）检测各组细胞线粒体膜电位变化；Western blot检测各组细胞中表皮生长因子受体（EGFR）、人表皮生长因子受体2(HER2)、细胞间充质-表皮转化因子（c-Met）、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、caspase-3、cleaved caspase-3、蛋白激酶B(PKB/Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白的表达情况。结果：（...     

曲古霉素A促进胶质瘤细胞系凋亡

目的组蛋白的异常修饰(去乙酰化)与胶质瘤的发生和发展关系密切,本研究的目的是探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古霉素A(trichomycin A,TSA)对胶质瘤细胞系凋亡的调节作用。方法将浓度分别为0.2μmol/L、0.4μmol/L和0.8μmol/L的TSA加入胶质瘤细胞系U251细胞中,应用Westernblot法检测U251细胞系经不同浓度的TSA处理后细胞内胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3),乙酰化组蛋白H3和H4的表达,应用流式细胞术(Annexin V-FITC染色)检测不同药物浓度处理组中U251细胞的凋亡率。结果 TSA处理后,U251细胞内乙酰化组蛋白H3、H4及caspase-3的蛋白水平明显上调(P<0.01),具有明显的剂量依赖性。流式细胞术结果显示U251细胞TSA处理后细胞的凋亡率具有剂量依赖性显著上调。结论 TSA剂量依赖性上调胶质瘤细胞系U251中caspase-3表达,促进细胞凋亡。     

血管紧张素(1-7)通过抑制JAK/STAT信号通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤

目的:研究血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]能否通过抑制JAK/STAT信号通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤。方法:CCK-8检测细胞存活率;Western blot法检测内皮细胞JAK2、STAT3、pJAK2、p-STAT3、cleaved caspase-3和内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的蛋白水平;Hoechst 33258染色荧光显微镜照相法检测内皮细胞凋亡数量;DCFH-DA染色荧光显微镜照相法检测内皮细胞内活性氧簇(ROS)的水平。结果:应用高糖(40 mmol/L)处理HUVECs 12~48 h能明显上调JAK2的磷酸化水平,于24 h达最高峰;在24~48 h能明显上调STAT3的磷酸化水平,于36 h最高;在12~24 h能明显上调cleaved caspase-3的表达,在3~48 h随着时间延长,e NOS的表达逐渐降低。2μmol/L的Ang-(1-7)或20μmol/L的JAK/STAT通路抑制剂AG490预处理0.5 h可显著抑制由高糖引起的内皮细胞损伤,表现为p-STAT3、p-JAK2及cleaved caspase-3蛋白水平降低、细胞存活率及e NOS表达升高,细胞凋亡数量和胞内ROS生成减少。结论:Ang-(1-7)能通过抑制JAK/STAT通路对抗高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤。     

PM2.5对血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响及机制

目的:从大气细颗粒物PM2.5对血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响,研究PM2.5对血管内皮细胞的毒性。方法:体外培养血管内皮细胞株EA.hy926,用不同浓度的PM2.5染毒24 h后,用CCK-8法测细胞的活性,用DCFH-DA荧光标记法检测细胞内氧自由基生成情况,用流式细胞术检测细胞凋亡率,然后用Western blot法检测凋亡相关蛋白细胞色素C、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达变化。结果:CCK-8法结果显示PM2.5对血管内皮细胞有明显的毒性,在浓度大于25 mg/L时可使EA.hy926细胞活性显著下降;PM2.5染毒24 h后可见DCFH-DA荧光染色增强,说明细胞内有大量的氧自由基形成;流式细胞术和Western blot检测证实PM2.5可以通过上调细胞色素C表达和活化cleaved caspase-9和cleaved caspase-3而诱导EA.hy926细胞凋亡。此外,用N-乙酰半胱氨酸抑制氧自由基生成可以抑制血管内皮细胞凋亡,提示PM2.5引起的细胞凋亡与氧化应激有关。结论:PM2.5可导致血管内皮细胞氧化应激水平增强和凋亡增加,这可能是其影响心血管系统功能的机制之一。     

二十二碳六烯酸对体外大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对大鼠C6胶质瘤细胞的促凋亡作用。方法 10、25、50、75和100μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后检测细胞活力;100μmol/L DHA处理C6细胞24 h后,应用TUNEL方法检测凋亡细胞,流式细胞术检测凋亡细胞的比例;应用免疫荧光和Western blotting方法检测剪切后含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved Caspase-3)在凋亡细胞中的表达情况。结果 25、50、75和100μmol/L DHA处理C6细胞24、48和72 h后,抑制细胞活力;100μmol/L DHA处理细胞24 h后,能够检测到TUNEL阳性的凋亡细胞;流式细胞术检测后发现,DHA能够明显上调凋亡细胞的比例;此外,细胞经100μmol/L DHA处理后,免疫荧光能够检测到cleaved Caspase-3阳性细胞,Western blotting能够检测到cleaved Caspase-3阳性蛋白条带。结论 DHA具有促进大鼠C6胶质瘤细胞凋亡的作用。     

穿心莲内酯对急性淋巴细胞白血病细胞的生长抑制及凋亡诱导作用

目的:研究穿心莲内酯(andrographolide,AND)对急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)细胞生长和凋亡的影响。方法:人ALL细胞株CEM-C1经AND处理12 h、24 h和48 h,应用CCK-8法检测AND对细胞活力的影响;应用Wright-Giemsa染色法观察AND处理24 h对CEM-C1细胞形态及数量的影响;应用流式细胞术+annexin V-FITC/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染色法分析AND作用24 h对CEM-C1细胞凋亡的作用;采用流式细胞术+PI染色法分析AND作用24 h对CEM-C1细胞周期分布的作用;用Western blot法检测AND对CEM-C1细胞凋亡相关蛋白水平的影响;应用JC-1线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)检测试剂盒检测AND作用24 h对CEM-C1细胞MMP的影响。最后将CEM-C1细胞接种于BALB/c-nu雌性裸鼠右胁腹侧建立裸鼠ALL移植瘤模型,通过检测肿瘤体积及重量观察AND的体内抗ALL作用,并应用免疫组化法检测裸鼠肿瘤组织凋亡蛋白cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:CCK-8实验结果表明,AND对CEM-C1细胞活力的抑制作用呈时间及剂量依赖性。Wright-Giemsa染色结果显示,应用AND后CEM-C1细胞缩小、凝聚,细胞染色加深,细胞质呈均质红染并且细胞数减少。流式细胞术检测结果表明,AND处理细胞24 h后,随着AND浓度的增加,凋亡细胞数量增多,且细胞周期被阻滞在G2期,细胞生长被抑制。Western blot结果显示,AND上调活化凋亡蛋白cleaved caspase-3、cleaved caspase-7及促凋亡蛋白Bax的水平,并下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达;且cleaved caspase-3/caspase-3、cleaved caspase-7/caspase-7和Bax/Bcl-2的比值随AND浓度升高而增大。JC-1染色法结果表明,CEM-C1细胞的MMP随AND剂量增大而降低。体内实验结果显示,AND明显抑制荷瘤鼠的肿瘤生长,并上调肿瘤组织cleaved caspase-3的水平。结论:穿心莲内酯在体内外均抑制ALL细胞的生长并诱导其发生凋亡。     

舒尼替尼对胃癌细胞BGC-823增殖的影响及机制

探索舒尼替尼对胃癌细胞BGC-823增殖的影响及机制。不同浓度舒尼替尼处理BGC-823细胞24、48、72、96 h后,MTT法检测细胞增殖,得出药物的半数抑制浓度为0.592 8μmol/L。筛选出比较接近半数致死量的3个药物浓度0.25、0.50、1.00μmol/L作用细胞48 h后,细胞核染色检测细胞凋亡;免疫荧光染色法检测Notch-1的表达及细胞凋亡水平;蛋白质免疫印迹检测Notch-1、caspase-3、caspase-9蛋白表达水平。MTT检测结果显示,舒尼替尼在浓度0.156 25～10μmol/L时可显著抑制BGC-823细胞增殖,且具有时间和剂量依赖性。细胞核染色结果显示,不同浓度的舒尼替尼处理BGC-823细胞48 h后随浓度的增加,细胞凋亡数量显著增多。蛋白质免疫印迹结果显示,不同浓度舒尼替尼作用48 h后,Notch-1蛋白的表达水平随浓度的增加而降低,caspase-3、caspase-9表达水平随浓度的增加而升高。舒尼替尼通过抑制Notch-1的信号通路活性,进而抑制BGC-823细胞的增殖并诱导细胞凋亡。     

NF-κB抑制剂PDTC对人骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨NF-κB特异性抑制剂PDTC对多发性骨髓瘤U266细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法:采用不同浓度PDTC(25、50、100和200μmol/L)处理U266细胞,CCK-8法和活细胞计数检测U266细胞的增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期;RT-qPCR及Western blot检测PDTC处理前后DNA甲基转移酶1(DNMT1)mRNA和蛋白的表达;Western blot检测NF-κB(P65)、DNMT1、Bcl-2、cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8的蛋白水平。结果:PDTC处理U266细胞48 h后,NF-κB(P65)的蛋白水平被抑制;PDTC抑制U266细胞增殖,作用呈浓度及时间依赖性;PDTC作用48 h后,与对照组比较,细胞凋亡率呈浓度依赖性增高(P0.05),细胞被阻滞在G2期;DNMT1的mRNA及蛋白水平均降低;Western blot结果显示PDTC可通过抑制NF-κB下调Bcl-2的表达,使cyclin D1、cleaved caspase-3和cleaved caspase-8蛋白水平增加。结论:PDTC抑制NF-κB信号通路,通过诱导U266细胞凋亡从而抑制细胞增殖,其机制可能与抑制DNMT1的表达、阻滞细胞周期和启动凋亡途径有关。     

蒿甲醚对人乳腺癌细胞的增殖抑制作用研究

目的研究蒿甲醚对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖活性、凋亡的影响及其机制。方法利用浓度为0,2.5,5,10,20,40,80及160μmol/L的蒿甲醚孵育24h。利用CCK8法测定细胞增殖抑制率。然后用浓度为0、20、40及80μmol/L的蒿甲醚培养MDA-MB-231细胞24h,利用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡及细胞周期。最后利用Western blot法检测MDA-MB-231细胞活化caspase-3及8的表达水平。结果蒿甲醚使MDA-MB-231细胞的增殖活性受到显著抑制,同时随着浓度升高抑制作用增强。与对照组相比,蒿甲醚显著促进MDAMB-231细胞的凋亡并使细胞周期维持在G+M期,显著上调caspase-3及8的活化水平。结论蒿甲醚对人乳腺癌2MDA-MB-231细胞有潜在的治疗作用。     

RORα对人胃癌细胞株AGS凋亡的影响

目的 探寻维甲酸相关孤儿受体（RORα）对于人胃癌细胞AGS的凋亡的影响。方法 根据处理浓度不同将以1 μmol/L的SR001处理的AGS设为1 μmol/L浓度组,将以0.1 μmol/L的SR001处理的AGS设为0.1 μmol/L浓度组,另设溶媒组及对照组,分别给予等量的溶媒、等量喜树碱（50 μmol/L）处理。采用MTT检测化疗药物5-FU介导的细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中磷酸化RORα（p-RORα）的表达及cleaved caspase-3的蛋白的含量并比较。结果 用RORα激动剂处理可显著增加5-FU介导的AGS细胞凋亡率,差异有统计学意义（P＜0.05）;RORα激动剂处理48h后,人胃癌细胞中磷酸化RORα的表达增高,cleaved caspase-3的蛋白含量增多,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 RORα可以提高人胃癌细胞AGS5-中FU介导的细胞凋亡,具有作为化疗药物的增敏剂的潜质。     

塞来昔布减低HL-60和HL-60A细胞活力、诱导凋亡及抑制自噬

目的:探讨塞来昔布对急性髓细胞白血病(AML)HL-60细胞和HL-60A细胞的活力、凋亡及自噬的影响。方法:用不同浓度的(0、20、40、60、80和100μmol/L)塞来昔布作用于HL-60细胞和HL-60A细胞,24h、48h和72h后用MTT法检测细胞活力。用流式细胞术检测塞来昔布作用HL-60细胞和HL-60A细胞24 h后的凋亡率。用Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、cleaved PARP,自噬相关蛋白LC3、P62,以及mTOR信号途径相关蛋白。结果:塞来昔布作用于HL-60细胞24h、48h和72h的IC_(50)分别为49.4μmol/L、32.0μmol/L和25.1μmol/L,对于HL-60A细胞,相应的IC_(50)分别是69.1μmol/L、42.5μmol/L和29.6μmol/L。塞来昔布作用24h后,流式细胞术检测显示HL-60细胞中Annexin-V~+PI~-、Annexin-V~+PI~+及Annexin-V~-PI~+细胞的比例增多;HL-60A细胞中Annexin-V~+PI~-及Annexin-V~+PI~+细胞的比例增多。Western blot实验结果显示塞来昔布作用后,cleaved caspase-3和cleaved PARP的蛋白水平增高,提示该凋亡作用是通过caspase途径的。自噬相关蛋白LC3Ⅱ及P62的表达均增加,mTOR、p-mTOR以及下游的4-EBP、p-4-EBP的蛋白水平没有变化,说明塞来昔布能够抑制AML细胞自噬,该作用与mTOR途径无关。结论:塞来昔布对HL-60细胞和HL-60A细胞活力的抑制作用呈浓度以及时间依赖性,该作用与塞来昔布诱导细胞凋亡及坏死有关。塞来昔布能够通过非mTOR依赖途径抑制AML细胞自噬,有望联合应用于AML的治疗,有助于增强某些引起保护性自噬的化疗药物的细胞毒作用。     

阿魏酸通过调节PTEN/PI3K/AKT信号通路抑制急性T淋巴细胞白血病进展

目的 探究阿魏酸是否可通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路在体内外抑制急性T淋巴细胞白血病进展。方法将急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞分为对照组、阿魏酸处理组和LY294002处理组进行体外实验,对照组正常培养;阿魏酸处理组分别给予不同浓度（1.25、2.5、5、10、20、40、80、160μmol/L）阿魏酸,采用CCK-8法检测细胞增殖能力,筛选实验浓度;LY294002处理组给予50μmol/L PI3K/AKT抑制剂LY294002,采用克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭情况,采用Western blot检测核蛋白Ki67、增殖细胞核抗原（PCNA）、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、PTEN、p-PI3K、PI3K、p-AKT和AKT蛋白相对表达量。使用30只雄性BALB/c裸鼠建立移植瘤裸鼠模型,平均分为正常组和阿魏酸处理组进行体内实验,正常组接种Jurkat细胞后以生理盐水灌胃,阿魏酸处理组接种Jurkat细胞后以75 mg...     

硼替佐米促进霍奇金淋巴瘤细胞系L428的凋亡

目的探究硼替佐米对霍奇金淋巴瘤细胞系L428凋亡的影响及可能的机制。方法不同浓度的硼替佐米(0、10、30与50 nmol/L)培养L428细胞后,用倒置显微镜观察L428细胞形态;Hoechst33258染核观察细胞核;MTT法检测细胞活力;TUNEL染色试剂盒和Annexin V-FITC双染细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡;Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2的表达。结果与对照组相比,硼替佐米促使L428细胞出现拉丝、稀疏现象;细胞核出现核固缩和凋亡小体;硼替佐米浓度依赖性抑制L428细胞活力(P0.05),诱导细胞凋亡(P0.05);浓度依赖性下调Bcl-2蛋白水平(P0.05);浓度依赖性上调cleaved caspase-3和Bax蛋白水平(P0.05)。结论硼替佐米可能通过影响凋亡蛋白的表达促进霍奇金淋巴瘤细胞系L428凋亡。     

坏死性凋亡介导高糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤

目的:研究坏死性凋亡是否介导高糖(HG)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤。方法:CCK-8法检测细胞存活率;Western blot法测定受体相互作用蛋白3(RIP3)、cleaved caspase-3的蛋白水平;罗丹明123染色荧光显微镜照相法检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP);双氯荧光素(DCFH-DA)染色荧光显微镜照相法测定胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的水平。结果:应用不同浓度葡萄糖(10、20和40 mmol/L)处理HUVECs 24 h,RIP3的蛋白水平随葡萄糖剂量增加而升高,40 mmol/L时达高峰;应用40 mmol/L葡萄糖处理HUVECs 3 h、6 h、9 h、12 h和24 h能上调RIP3的蛋白水平,于9 h达最高峰;应用20μmol/L凋亡蛋白酶抑制剂Z-VAD-FMK预处理HUVECs 30 min促进RIP3表达;应用100μmol/L坏死性凋亡抑制剂necrostatin-1预处理HUVECs 1 h能抑制HG诱导HUVECs的细胞存活率降低,ROS过度生成及MMP丢失,但能升高cleaved caspase-3的蛋白水平。结论:坏死性凋亡介导高糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤,但与内皮细胞凋亡存在负相关。     

靶向TRIM29基因的siRNA通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导鼻咽癌细胞凋亡

目的:探讨沉默TRIM29基因表达对鼻咽癌细胞凋亡及PI3K/AKT信号通路的影响。方法:将人鼻咽癌5-8F细胞分为空白组、阴性对照(NC)组(转染阴性对照siRNA)和si-TRIM29组(转染TRIM29的特异性siRNA),通过CCK-8法检测si-TRIM29转染5-8F细胞0～96 h的细胞活力。通过流式细胞术及Western blot分别检测si-TRIM29转染5-8F细胞48 h的细胞凋亡率及TRIM29、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、Bcl-2、Bax、t-AKT和p-AKT的蛋白水平。10μmol/L的PI3K/AKT信号通路特异性抑制剂LY294002及si-TRIM29单独或联用处理细胞,细胞分为空白组、LY294002组和LY294002+si-TRIM29组,流式细胞术检测3组细胞凋亡率。结果:转染TRIM29 siRNA的5-8F细胞TRIM29蛋白表达明显低于空白组(P0.05)。和空白组比较,si-TRIM29组细胞活力明显降低,凋亡率明显升高,cleaved caspase-3、cleaved caspase-9和Bax蛋白的水平明显升高,Bcl-2和p-AKT蛋白的水平明显降低(P0.05)。LY294002组的细胞凋亡率高于空白组,而LY294002+si-TRIM29组的细胞凋亡率高于LY294002组(P0.05)。结论:沉默TRIM29基因表达可通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导鼻咽癌细胞凋亡。     

槲皮苷通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导胃癌SGC7901细胞凋亡

目的:探讨槲皮苷是否通过抑制PI3K/AKT信号通路诱导人胃癌SGC7901细胞凋亡。方法:选取SGC7901细胞作为研究对象,采用MTT法检测槲皮苷对SGC7901细胞的毒性作用并测定IC50值。实验分为对照组(不加药处理)、槲皮苷组(采用200μmol/L槲皮苷处理)、PI3K/AKT通路激动剂胰岛素样生长因子1(IGF-1)组(采用100μg/L IGF-1处理)和槲皮苷+IGF-1组(采用200μmol/L槲皮苷+100μg/L IGF-1共处理)。处理48 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测cleaved caspase-3、p-AKT(Ser473)、AKT、p-PI3K(Tyr508)和PI3K的蛋白水平。结果:从100μmol/L开始,随着槲皮苷处理浓度的逐渐升高,SGC7901细胞活力显著降低(P 0. 05),槲皮苷作用48 h的IC50值为275. 40μmol/L。200μmol/L槲皮苷作用SGC7901细胞48 h后,与对照组比较,细胞凋亡率和cleaved caspase-3蛋白水平显著上升(P 0. 05),p-AKT和p-PI3K蛋白水平显著降低(P 0. 05),然而IGF-1与槲皮苷共同作用时,IGF-1可逆转槲皮苷对SGC7901细胞的作用效果。结论:槲皮苷能够诱导胃癌SGC7901细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路的激活有关。     

沉默癌胚抗原相关细胞黏附分子1基因抑制SHG44人胶质瘤细胞增殖并促进其凋亡

目的采用RNA干扰技术(RNAi)沉默癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)基因的表达,观察沉默效果及沉默CEACAM1表达后对SHG44人胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法设计并化学合成针对CEACAM1的3对小干扰RNA(siRNA),脂质体法瞬时转染SHG44细胞。流式细胞术(FCM)检测转染效率,采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测siRNA转染前后SHG44细胞中CEACAM1 mRNA的表达,Western blot法检测CEACAM1蛋白的表达。CCK-8法检测SHG44细胞细胞增殖活性,annexin V-FITC/PI染色结合FCM检测SHG44细胞凋亡,Western blot法检测cleaved caspase-3和裂解型多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(cleaved PARP)的变化。结果 CEACAM1 siRNA转染效率达85%。与空白对照组和阴性对照组比较,qRT-PCR及Western blot结果显示,3组特异性siRNA转染48 h后,在mRNA和蛋白水平上CEACAM1的表达均降低,以CEACAM1-siRNA3效果最明显。siRNA组SHG44细胞的增殖能力较正常对照组明显下降,凋亡细胞比例增加。沉默CEACAM1表达可以上调cleaved caspase-3和cleaved PARP的表达。结论沉默CEACAM1基因表达可有效抑制SHG44胶质瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡。