益肾蠲痹法含药血清对大鼠成骨和破骨细胞OPG/RANKL/RANK信号通路的影响

目的 探讨益肾蠲痹法含药血清对骨代谢信号通路的影响。 方法 正常SD大鼠随机分为对照组和益肾蠲痹组,分别经生理盐水和益肾蠲痹汤灌胃给药,获取含药血清;分离大鼠成骨细胞和破骨细胞,利用碱性磷酸酶和Van kossa染色鉴定成骨细胞,TRAP和甲苯胺蓝染色鉴定破骨细胞;将成骨和破骨细胞各分为4组:对照组、益肾蠲痹法含药血清低、中和高浓度组;通过免疫印迹检测成骨细胞骨保护蛋白(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)和破骨细胞核因子κB受体活化因子(RANK)的表达。 结果 低、中、高浓度含药血清诱导成骨细胞OPG的表达分别为对照组的97%(P=0.710)、122%(P=0.005)和155%(P<0.001),RANKL表达分别为对照组的81%(P<0.001)、63%(P<0.001)和53%(P<0.001),表明OPG和RANKL表达与含药血清浓度分别呈正、负相关;含药血清使破骨细胞RANK表达分别调节对照组的75%(P<0.001)、50%(P<0.001)和46%(P<0.001),表明RANK表达与含药血清剂量呈负相关。 结论 益肾蠲痹法含药血清通过调节OPG/RANKL/RANK信号轴可能在抗骨丢失过程中发挥作用。      

益肾温阳蠲痹汤治疗强直性脊柱炎28例体会

强直性脊柱炎属中医＂骨痹＂、＂肾痹＂、＂督脉痹＂范畴,本文介绍采用＂益肾温阳蠲痹汤＂中药治疗强直性脊柱炎方法和疗效。     

新伤续断汤对成骨细胞增殖及骨形态发生蛋白的影响

【目的】探讨新伤续断汤(由骨碎补、续断、地鳖虫等组成)对大鼠成骨细胞增殖以及骨形态发生蛋白2(BMP-2)表达的影响。【方法】采用血清药理学方法制备新伤续断汤含药血清,与α-MEM培养基配成细胞培养液。按酶序列消化法从SD大鼠乳鼠颅骨获取、培养成骨细胞,以碱性磷酸酯酶染色和钙结节染色鉴定细胞。取第3~4代细胞用细胞增殖—毒性(CCK-8)法检测经体积分数为5%、10%、20%新伤续断汤含药血清处理24、48、72 h后的细胞增殖情况。用含体积分数10%的新伤续断汤、续断、骨碎补、空白对照含药血清分别培养细胞,采用微量酶标法检测碱性磷酸酶的活性,酶联免疫吸附法检测BMP-2的表达。【结果】新伤续断汤对成骨细胞的影响呈时间、浓度上的依赖性,其中浓度为10%时效果明显。体积分数10%的新伤续断汤、骨碎补、续断含药血清的成骨细胞碱性磷酸酶活性较空白对照组显著升高,差异有统计学意义(P0.01);7 d时,新伤续断汤组、骨碎补组与空白对照组比较,BMP-2表达显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。【结论】新伤续断汤能促进大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性及BMP-2的表达,其中单味药骨碎补可能发挥重要作用,其促进骨折愈合机制可能与提高细胞的成骨功能有关。     

阿仑磷酸钠?辛伐他汀对体外成骨细胞和破骨细胞的作用

目的:观察阿仑磷酸钠联合辛伐他汀对体外成骨细胞?破骨细胞的影响,探讨2种药物联合应用治疗骨质疏松的可行性?方法:分离新生大鼠成骨细胞和破骨细胞,给予阿仑磷酸钠?辛伐他汀刺激,观察药物对成骨细胞增殖率?碱性磷酸酶活性及破骨细胞骨吸收的影响?结果:联合应用阿仑磷酸钠和辛伐他汀较单独用药更明显增强成骨细胞活性和抑制破骨细胞的骨吸收?结论:联合应用阿仑磷酸钠和辛伐他汀比单独应用阿仑磷酸钠可能对骨质疏松有更好的防治作用?     

全骨髓贴壁法分离培养rBMSCs及成骨诱导探讨

[摘要]　目的 通过研究在体外培养大鼠骨髓基质干细胞(rBMSCs)及其成骨生物学特性,探讨构建骨组织工程种子细胞的方法。方法 通过全骨髓贴壁培养法分离大鼠骨髓基质干细胞,应用含地塞米松、维生素C、β2甘油磷酸钠的诱导培养液定向诱导传代细胞向成骨细胞分化,并检测碱性磷酸酶活性及钙结节茜素红染色反应,进行成骨细胞鉴定。结果 全骨髓贴壁培养下,骨髓基质干细胞增殖能力强,生长迅速,呈成纤维细胞样生长。诱导条件下细胞的碱性磷酸酶活性明显增高,并且钙结节茜素红染色反应阳性。结论 采用全骨髓贴壁培养法,骨髓基质干细胞分离培养及体外扩增更为简便迅速,诱导条件下成骨能力肯定,可为骨组织工程构建提供大量种子细胞。     

低浓度唑来膦酸对成骨细胞和破骨细胞影响的体外实验

目的：观察低浓度(10-6 mol/L)唑来膦酸(zoledronate acid,ZA)对体外大鼠破骨细胞及成骨细胞的影响。方法体外分别培养大鼠来源的成骨细胞和破骨细胞,将两种细胞各分为两组：空白对照组及低浓度(10-6 mol/L)ZA组。应用抗酒石酸酸性磷酸酶染色、图像分析计算骨吸收陷窝面积,检测破骨细胞形态及骨吸收情况。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色、四甲基偶氮唑盐比色法了解成骨细胞的形态及增殖情况。结果培养1周后破骨细胞具有典型的形态特征,并在骨片上形成了吸收陷窝;ZA组与对照组相比,破骨细胞数量及生成吸收陷窝的数目和面积减少,差异有统计学意义(P＜0.05)。成骨细胞有典型的梭形、ALP染色阳性特征,培养至第7天ZA组成骨细胞光吸收值(3.37±0.11)高于对照组(2.87±0.12),差异有统计学意义(P＜0.05)。结论低浓度(10-6 mol/L)的ZA能够抑制破骨细胞的增殖和活性,促进成骨细胞的增殖,选择恰当给药方式和剂量能够在抑制破骨的同时促进成骨。     

淫羊藿黄酮苷及其代谢产物调控骨代谢的体外实验研究

为探讨淫羊藿黄酮苷及其代谢产物对骨形成和骨吸收的调控作用 ,利用酶水解法和酸水解法分别制备了淫羊藿黄酮苷的 2种代谢产物。采用鼠颅盖骨机械法分离和体外培养获得成骨细胞 ,采用新生兔长干骨机械分离法获得破骨细胞 ,采用VD3诱导鼠骨髓的造血干细胞分化成破骨样的多核巨细胞。实验组培养液为 1 0 %胎牛血清 +αMEM培养液 +不同浓度淫羊藿黄酮苷及代谢产物 ,对照组不加药。分别用四甲基偶氮唑盐和3H TdR法检测成骨细胞的增生和碱性磷酸酶 ,用骨钙素衡量成骨细胞的分化状态 ,用Actin ring染色观察破骨细胞形态变化 ,用图像分析仪分析体外骨吸收陷窝面积 ,用抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察OCL的形成 ,用RT PCR法检测和破骨样细胞形成有关的分子机制。发现 :淫羊藿黄酮苷及其代谢产物对大鼠成骨细胞的增生有明显的刺激作用 ,并能够促进成骨细胞合成分泌碱性磷酸酶 ,但对成骨细胞晚期分化指标骨钙素无显著作用。同时 ,使破骨细胞Actin ring回缩 ,从而使骨吸收陷窝面积减少。此外 ,淫羊藿黄酮苷及其代谢产物通过影响成骨细胞中RANKL和OPG的表达而达到抑制破骨样细胞形成。以上结果说明 ,淫羊藿黄酮苷及其代谢产物一方面抑制破骨样细胞形成和成熟的破骨细胞对骨基质的吸收 ,另一方面还能够通过刺激骨形成来调     

补肾壮骨方剂含药血清调控牙周膜干细胞增殖分化的效能研究

目的：探讨补肾壮骨方剂含药血清对人牙周膜细胞增殖和骨向分化的作用。方法采用酶消化法体外培养人牙周膜细胞,用不同剂量的补肾壮骨方剂含药血清处理细胞,通过四唑盐（ MTT）比色试验和碱性磷酸酶活性测试,检测补肾壮骨方剂含药血清对细胞体外增殖分化的影响。结果体外实验补肾壮骨方剂含药血清对人牙周膜细胞增殖有明显促进作用,且能促进人牙周膜细胞碱性磷酸酶的活性表达。结论补肾壮骨方剂含药血清促进牙周膜细胞的增殖活性,可明显促进牙周膜细胞骨向分化。     

仙茅酚苷类成分促进成骨细胞骨形成和抑制破骨细胞骨吸收

目的 以新生大鼠颅盖骨成骨细胞和由骨髓单核细胞诱导的破骨细胞为模型,观察仙茅代表性酚苷类成分仙茅苷、仙茅素A、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷的抗骨质疏松作用.方法 MTT法测定成骨细胞的增殖;磷酸苯二钠法测定成骨细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)和破骨细胞抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)的活性;茜素红染色观察成骨细胞骨矿化结节的形成;TRAP染色测定破骨细胞的数目;罗丹明-鬼笔环肽染色和激光共聚焦显微镜观察成骨细胞细胞骨架和破骨细胞肌动蛋白环的结构和形态;将破骨细胞与骨片共同培养,计算机图像处理测定破骨细胞在骨片上形成的骨吸收陷窝的面积.结果 仙茅苷在10-9和10-8 mol/L的浓度下可促进成骨细胞的增殖(P＜0.05),10-7～10-5 mol/L浓度时抑制破骨细胞TRAP的活性(P＜0.05).仙茅苷、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷可减少破骨细胞的数目,抑制破骨细胞的形成(P＜0.05).仙茅苷在10-10mol/L,仙茅素A、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷在10-9 mol/L浓度时均可增加成骨细胞ALP的活性和骨矿化结节的形成(P＜0.01),在一定程度上使1,25-二羟维生素D3损伤的成骨细胞细胞骨架的结构得以恢复;减少破骨细胞在骨片上形成的骨吸收陷窝面积,破坏破骨细胞伪足和F-actin的结构.结论 仙茅酚苷类成分仙茅苷、仙茅素A、苔黑酚葡萄糖苷和苔黑酚龙胆二糖苷均可促进成骨细胞的骨形成,抑制破骨细胞的骨吸收,具有显著的抗骨质疏松作用.     

袁氏生脉成骨胶囊对激素诱导骨髓基质细胞成脂分化的拮抗作用

【目的】观察中药袁氏生脉成骨胶囊(主要由丹参、川芎、鸡血藤、黄芪组成)对激素诱导骨髓基质细胞成脂分化的拮抗作用,探讨袁氏生脉成骨胶囊防治激素性股骨头坏死的病理机制。【方法】采用骨髓细胞体外培养技术和血清药理学方法,分离培养大鼠骨髓基质细胞;地塞米松诱导骨髓基质细胞的成脂分化,以含中药血清作为拮抗剂。检测培养细胞的甘油三酯含量和碱性磷酸酶活性。【结果】分离细胞培养4d后可以观察到大量成骨细胞、成纤维细胞、破骨细胞;模型组加入地塞米松造模;成骨胶囊药物组地塞米松用法同模型组,同时加入含药血清。6d后,光镜下观察成骨胶囊药物组见少量脂肪细胞,模型组脂肪细胞明显增多。成骨胶囊药物组碱性磷酸酶活性高于模型组(P<0.05);甘油三酯含量低于模型组(P<0.01)。【结论】中药袁氏生脉成骨胶囊能够有效拮抗激素诱导骨髓基质细胞成脂分化。提示活血化瘀类中药防治股骨头坏死的机理不仅是改善了股骨头的微循环,而且抑制了骨髓基质细胞成脂分化,增加了成骨细胞的表达。     

熟地、鳖甲对大鼠成骨细胞增殖、碱性磷酸酶蛋白和核心结合因子α1 mRNA表达的影响

目的观察熟地、鳖甲含药血清对大鼠成骨细胞增殖和功能的影响。方法雄性SD大鼠随机分为3组后,分别灌服高浓度熟地、鳖甲煎剂(3.25 g/kg)、低浓度熟地、鳖甲煎剂(1.625 g/kg)及等量容积的蒸馏水,连续灌胃3 d,制得大鼠高、低剂量熟地、鳖甲含药血清及空白对照血清。原代培养并传至第3代经碱性磷酸酶鉴定取得的大鼠成骨细胞,消化计数铺板并分为3组,以上述血清处理72 h,MTT法检测成骨细胞的增殖率,ELISA法检测碱性磷酸酶(ALP)分泌量并以相应OD值进行纠正,并且运用实时荧光定量PCR检测各组成骨细胞核心结合因子α1(Cbfα1)mRNA表达情况。结果低剂量含药血清组成骨细胞增殖率、ALP浓度及Cbfα1 mRNA表达量明显高于其他2组。结论熟地、鳖甲可能是通过提高成骨细胞的增殖潜能而起骨保护作用的。     

含利塞膦酸的磷硅酸钙水门汀对成骨细胞增殖和功能的影响

目的探讨含利塞膦酸磷硅酸钙水门汀浸提液对胎鼠成骨细胞增殖、分化和功能的影响。方法利用MTT法检测含利塞膦酸磷硅酸钙水门汀浸提液对成骨细胞增殖影响,用酶标仪检测碱性磷酸酶（ALP）比活性。结果添加0．1％和0．5％利塞膦酸的骨水泥对成骨细胞没有毒性,1％利塞膦酸的骨水泥浸提液与成骨细胞共同培养3d后对成骨细胞产生毒性反应。0．1％和0．5％利塞膦酸浸提液对成骨细胞ALP比活性增加。结论高剂量含利塞膦酸的磷硅酸钙水门汀对成骨细胞毒性较小,是潜在的填充骨缺损的新型材料。     

补骨脂素对酒精诱导的成骨细胞增殖的影响

【目的】观察补骨脂素对酒精诱导的成骨细胞增殖的影响,探讨补骨脂素防治酒性性骨质疏松的机制。【方法】采用碱性磷酸酶(ALP)染色法鉴定从大鼠乳鼠头盖骨分离的成骨细胞。将鉴定成功的成骨细胞随机分为4组:空白对照组、酒精组(即模型组)、补骨脂素组、补骨脂素+酒精组。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞增殖情况。【结果】与空白对照组比较,酒精组24、48、72、96 h各时间点成骨细胞增殖活性均显著降低(P0.05),补骨脂素组各时间点成骨细胞增殖活性虽升高,但差异均无统计学意义(P0.05)。与酒精组比较,补骨脂素+酒精组24 h成骨细胞增殖活性显著升高(P0.05),2组48、72、96 h细胞增殖活性差异均无统计学意义(P0.05)。【结论】补骨脂素对体外酒精诱导的成骨细胞增殖有促进作用。     

补肾活血健骨方含药血清对人成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的 观察补肾活血健骨方含药血清对体外培养的人成骨细胞增殖、分化和矿化功能的影响,为其治疗骨质疏松症提供理论依据。方法 取骨质疏松症合并股骨颈骨折患者松质骨进行成骨细胞培养,构建成骨细胞分化模型;制备低、中、高3种浓度的补肾活血健骨方含药血清;采用MTT法、细胞上清液ALP测定和茜素红染色观察含药血清对成骨细胞的影响。结果 加入含药血清干预细胞生长48h后,MTT检测显示中、高剂量组出现不同程度的细胞增殖现象,并存在一定程度的剂量依赖;作用72h后,低、中、高3个剂量组ALP活性增高,高剂量组茜素红染色钙盐沉积明显增多。结论 补肾活血健骨方含药血清具有促进体外培养的人成骨细胞增殖、分化及矿化的作用。      

喂饲补肾中药大鼠的血清对成骨细胞的生物学作用

目的 探讨喂饲补肾中药大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用。方法 在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的中药血清,并与空白组对照,分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能。结果 补肾中药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用,可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量。结论 补肾中药血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能。     

喂饲补肾中药大鼠的血清对成骨细胞的生物学作用

目的 探讨喂饲补肾中药大鼠的血清对体外培养的成骨细胞的生物学作用。方法 在新生SD大鼠头颅骨第2代成骨细胞培养液中加入不同浓度(低、中、高)的中药血清，并与空白组对照，分别观察成骨细胞的增殖、分化和矿化功能。结果 补肾中药血清具有刺激成骨细胞增殖的作用，可提高碱性磷酸酶活性并增加矿化结节形成的数量。结论 补肾中药血清具有刺激体外培养的成骨细胞增殖及分化成熟的功能。     

致敏淋巴细胞对兔颅骨成骨细胞功能的影响

目的 研究致敏淋巴细胞对兔颅骨成骨细胞增殖、分化的作用。方法 经酶消化法从新生兔颅骨中分离成骨细胞,进行成骨细胞的碱性磷酸酶染色及成骨能力的检测。从经铬（Cr^6 ）致敏的新西兰兔外周血分离淋巴细胞并提取其培养上清液（LCM）,并分别观察在无LCM、加未经抗原（Ｃr^6 )刺激的LCM和加经Ｃr^6 刺激的LCM等3种情况下成骨细胞增殖、碱性磷酸酶和骨钙素分泌的情况。结果 从兔颅骨分离的细胞碱性磷酸酶染色阳性,在长期培养中能够形成钙化结节。致敏淋巴细胞培养介质抑制成骨细胞的增殖、促进碱性磷酸酶的分泌,抑制骨钙素的产生。经方差分析检验均具有明显的统计学差异。结论 致敏淋巴细胞能够抑制成骨细胞的功能,可导致骨形成障碍。     

化合物XW630对成骨细胞的作用

为探讨新合成化合物ＸＷ６３０对成骨细胞的作用，采用噻唑蓝蓝比色法法和碱性磷酸酶测定法观察了ＸＷ６３０对体外培养的成熟大鼠头盖骨成骨细胞的增殖和ＡＬＰ的表达，并用抗酒石酸磷酸酶染色法观察ＸＷ６３０对体外培养的破骨细胞形成的影响。