Zeste基因增强子人类同源物2抑制剂GSK343调节巨噬细胞分化的作用

目的 研究Zeste基因增强子人类同源物2（EZH2）抑制剂GSK343调节巨噬细胞亚群的分化,探讨EZH2在牙周炎中潜在的治疗作用。方法 将巨噬细胞RAW264.7分为4组：空白组（A组）、对照组（B组）、内毒素（LPS）刺激组（C组）、LPS+GSK343组（D组）。细胞经培养及相应处理后,利用免疫印迹和酶联免疫吸附试验检测其表型生物学标志变化,包括肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、白细胞介素-10（IL-10）和精氨酸酶-1（Arg-1）。利用大肠杆菌吞噬试验检测巨噬细胞RAW264.7在不同条件下对大肠杆菌的吞噬作用。结果 LPS可以诱导RAW264.7产生M1表型生物标志（TNF-α和iNOS表达增加）,在加入EZH2抑制GSK343后,IL-10和Arg-1表达升高,提示EZH2抑制剂GSK343可以诱导RAW264.7细胞由M1型向M2型转化;RAW264.7细胞具有吞噬大肠杆菌的作用,加入LPS的条件下吞噬大肠杆菌作用加强,而EZH2抑制剂GSK343可以调节RAW264.7细胞对大肠杆菌的吞噬作用。结论 EZH2抑制剂GSK343可以调节巨噬细胞的分化,在牙周炎的治疗中可能具有潜在作用。     

正畸应力作用下牙龈肌成纤维细胞表达的初步研究

目的 初步探讨正畸应力加载后牙龈肌成纤维细胞的表达情况。方法 选取8例正畸应力加载后需要拔除牙牙龈组织,以应力加载前拔除牙牙龈组织为对照,进行α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组织化学染色。然后进行测量和统计分析。结果 正畸应力加载前牙龈组织内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组化染色阳性,α-SMA除血管上皮外,其余为阴性表达。正畸应力加载后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）;α-SMA在牙龈组织内出现阳性表达,与加力前差异有统计学意义（P<0.05）。结论 正畸应力加载后,牙龈组织内肌成纤维细胞出现表达,其可能在正畸牙术后复发中发挥一定作用。     

正畸应力作用下牙龈肌成纤维细胞表达的初步研究

目的 初步探讨正畸应力加载后牙龈肌成纤维细胞的表达情况。方法 选取8例正畸应力加载后需要拔除牙牙龈组织,以应力加载前拔除牙牙龈组织为对照,进行α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组织化学染色。然后进行测量和统计分析。结果 正畸应力加载前牙龈组织内Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组化染色阳性,α-SMA除血管上皮外,其余为阴性表达。正畸应力加载后,Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达明显上升,差异有统计学意义（P<0.05）;α-SMA在牙龈组织内出现阳性表达,与加力前差异有统计学意义（P<0.05）。结论 正畸应力加载后,牙龈组织内肌成纤维细胞出现表达,其可能在正畸牙术后复发中发挥一定作用。     

大鼠正畸复发过程中牙周组织IL-6表达的研究

目的:研究在正畸复发的过程中,大鼠牙周组织中炎症因子白细胞介素IL-6表达的变化。方法:选取30只Wistar雄性大鼠,随机分为正常对照组(6只)与正畸牙齿移动模型组(24只),模型组在加力14 d后去除装置,并随机分为模型0 d组、模型7 d组、模型14 d组、模型21 d组,分别在去除装置的第0天、第7天、第14天、第21天处死实验动物,取牙周组织,使用Western Blot和RT-PCR法检测炎症因子IL-6蛋白及基因水平表达的变化。结果:与对照组相比,模型0 d组的IL-6的蛋白和基因表达水平并没有明显变化。但模型7 d组的IL-6的蛋白和基因表达水平显著增加并达到了IL-6表达的最高值(P<0.05)。模型14 d组的IL-6表达水平虽有下降但也明显高于对照组(P<0.05)。而与模型7 d组相比,模型21 d组的IL-6蛋白和基因表达水平显著降低(P<0.05),并接近对照组水平(P>0.05)。结论:大鼠正畸复发导致IL-6蛋白及基因的表达水平显著增加,但在正畸复发的第14天开始逐渐消退减少。     

抗牙龈素粘附片段Hgp44卵黄抗体对实验性牙周炎的抑制作用

目的: 观察抗牙龈素粘附片段Hgp44卵黄抗体(抗Hgp44-IgY)对大鼠实验性牙周炎的抑制作用。方法: 24只雄性SD大鼠随机分为4组:空白组(A),生理盐水孵育组(B),抗Hgp44-IgY孵育组(C)和西吡氯铵孵育组(D)。采用细线结扎大鼠4颗第一磨牙,分别接种经处理的牙龈卟啉单胞菌,辅以蔗糖饮水。4周后检测大鼠牙龈指数(GI),龈下菌斑的BANA试验。处死大鼠后检测牙槽骨丧失量(ABL),牙龈的HE染色,利用qRT-PCR检测牙龈中IL-10、OPG和RANKL mRNA相对表达水平以及OPG/RANKL比率。结果: C组和D组与B组相比,GI、ABL以及BANA结果均显著降低(P<0.01),牙龈组织中IL-10和OPG的mRNA表达水平均显著增高(P<0.01),RANKL mRNA的表达水平显著下降(P<0.05),OPG/RANKL比率显著增高(P<0.001),C组与D组相比,GI、ABL、BANA、IL-10,OPG mRNA水平和OPG/RANKL比率无统计学意义,OPG mRNA 表达水平显著降低(P<0.05)。结论: 抗Hgp44-IgY能减少牙槽骨的吸收,减缓大鼠实验性牙周炎的发展进程。     

TP对脂多糖介导人牙周膜成纤维细胞细胞间黏附分子-1表达的影响

目的: 检测人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLF)在脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导下细胞间黏附分子-1﹙intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1﹚的表达,探讨TP(tea polyphenols,TP)对其表达的影响。方法: HPDLF采用改良组织块法体外培养,将HPDLF随机分成LPS组、TP100组、TP200组,用酶联免疫吸附试验法(enzyme linked immuosorbent,ELISA)检测不同浓度TP对LPS介导下HPDLF分泌ICAM-1的活性。实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)检测ICAM-1 mRNA的表达。结果: 在LPS干预下,不同时间不同浓度的TP影响下均可抑制ICAM-1分泌,其活性降低,与LPS组比较差异有统计学意义(P<0.05);且ICAM-1 mRNA表达水平显著降低,与LPS组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论: TP对ICAM-1的抑制作用明显,100 μg/mL TP对其的抑制作用更显著,提示TP的抗炎机制可能与抑制ICAM-1有关。     

吸烟对慢性牙周炎牙龈微循环影响的初步研究

目的 从牙龈微循环方面探讨吸烟促进慢性牙周炎的机制。方法 试验一选取慢性牙周炎吸烟患者（A组）、慢性牙周炎不吸烟患者（B组）、牙周健康不吸烟志愿者（C组）上前牙各102颗,应用激光多普勒血流仪进行上前牙区牙龈血流量（GBF）检测。试验二根据是否吸烟将牙周翻瓣术中取材牙龈分为吸烟组（A’组）和不吸烟组（B’组）,并将牙周健康不吸烟者行牙冠延长术或埋伏阻生智齿拔除术中取材牙龈作为对照组（C’组）,通过组织切片进行3组牙龈组织微血管密度（MVD）计数。采用SPSS 22.0软件包进行数据统计分析。结果 B组与C组相比,各牙位GBF均有增加,其中12牙、21牙、23牙差异有统计学意义（P<0.05）。B’组MVD高于C’组（P<0.05）;A’组与B’组MVD间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 牙周炎症会引起GBF、牙龈MVD的增高,但吸烟并不会引起牙龈微循环（GBF、MVD）的显著变化,尚不支持吸烟通过影响牙龈微循环促进慢性牙周炎发生发展这一机制。     

吸烟对慢性牙周炎牙龈微循环影响的初步研究

目的 从牙龈微循环方面探讨吸烟促进慢性牙周炎的机制。方法 试验一选取慢性牙周炎吸烟患者（A组）、慢性牙周炎不吸烟患者（B组）、牙周健康不吸烟志愿者（C组）上前牙各102颗,应用激光多普勒血流仪进行上前牙区牙龈血流量（GBF）检测。试验二根据是否吸烟将牙周翻瓣术中取材牙龈分为吸烟组（A’组）和不吸烟组（B’组）,并将牙周健康不吸烟者行牙冠延长术或埋伏阻生智齿拔除术中取材牙龈作为对照组（C’组）,通过组织切片进行3组牙龈组织微血管密度（MVD）计数。采用SPSS 22.0软件包进行数据统计分析。结果 B组与C组相比,各牙位GBF均有增加,其中12牙、21牙、23牙差异有统计学意义（P<0.05）。B’组MVD高于C’组（P<0.05）;A’组与B’组MVD间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 牙周炎症会引起GBF、牙龈MVD的增高,但吸烟并不会引起牙龈微循环（GBF、MVD）的显著变化,尚不支持吸烟通过影响牙龈微循环促进慢性牙周炎发生发展这一机制。     

RT-qPCR检测CPC对中重度慢性牙周炎患者口内环境中红色复合体的影响

目的:利用RT-qPCR检测CPC对中重度慢性牙周炎患者口内环境中红色复合体构成比的影响。方法:临床选择40例中重度慢性牙周炎患者,随机分成CPC(试验)组、溶媒(对照)组,牙周基础治疗后分别使用该药品含漱+袋内冲洗。记录患者基线和用药4周后的临床指标;采集龈下菌斑、龈沟液和唾液样本,BANA试验检测胰蛋白酶样酶含量,RT-qPCR检测P.gingivalis、T.forsythia、T.denticola在总菌量中的构成比。结果:治疗后:1)试验组AL、BOP、PLI显著改善(P<0.01),对照组仅AL改善(P<0.01);2)两组龈下菌斑和龈沟液样本中胰蛋白酶样酶含量均显著下降(P<0.05);3)两组P.gingivalis构成比均显著下降(P<0.01),T.forsythia在试验组构成比显著下降(P<0.01),而T.denticola治疗前后无变化;4)P.gingivalis、T.forsythia、T.denticola两两之间构成比均显著相关(P<0.01)。结论:CPC可抑制牙菌斑形成,改善患者的临床症状,并对龈下菌斑中的P.gingivalis有一定的抑制作用,临床上可用于辅助治疗中重度慢性牙周炎。     

4-1BB、CD8在口腔扁平苔藓组织中的表达研究

目的 检测共刺激信号4-1BB及CD8在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)组织中的表达,探讨OLP病损中4-1BB介导CD8⁺ T细胞免疫应答的潜在机制。方法 选取31例OLP患者(糜烂型15例、非糜烂型16例),15例健康成人(对照组)为研究对象,收集其临床及病理资料,采用免疫组织化学法检测局部组织中4-1BB、CD8的表达情况。结果 OLP患者局部组织中4-1BB及CD8的表达高于对照组(P<0.05),且两者表达呈正相关(r=0.389,P<0.05),糜烂型OLP患者中CD8、4-1BB表达高于非糜烂型(P<0.05)。在OLP不同的临床亚组中,VAS评分、REU评分及基底细胞损伤程度均表现出差异(P<0.05)。Spearman相关性分析结果显示,CD8与基底细胞损伤程度呈正比(P<0.05),CD8、4-1BB分别与VAS评分、REU评分存在正相关性(P<0.05)。结论 OLP患者局部组织中4-1BB表达升高,其与疾病活动进展程度呈正相关,4-1BB可能通过调控CD8⁺ T细胞参与OLP的发生发展。     

P物质在牙周炎诱导全身炎症反应致多器官功能损伤中的作用和机制研究

目的 本研究通过在牙周炎模型小鼠和体外细胞实验中给予NK-1受体拮抗剂阻断P物质(SP),探讨SP在牙周炎诱导全身炎症反应致多脏器功能损伤中的作用.方法 通过反复龈沟注射牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)的方式诱导牙周炎小鼠模型.同时给予NK-1受体拮抗剂,观察牙周炎小鼠全身炎症因子分泌及器官功能损伤情况;细胞实验使用LP...     

低强度脉冲式超声波在脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞分化中的抗炎和抗氧化作用

目的研究低强度脉冲式超声波（LIPUS）对RAW264.7巨噬细胞极化的影响及相关分子机制。 方法100 ng/mL脂多糖（LPS）和10 ng/mL白细胞介素（IL）-4诱导巨噬细胞RAW264.7分别向M1和M2型极化，45 mW/cm²强度LIPUS对巨噬细胞处理25 min。采用流式细胞术检测巨噬细胞氧化应激活性氧（ROS）水平、M1分化标志物CD80和CD11b，以及M2分化标志物CD163的表达水平。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测CD80、CD11b、核转录因子κB（NF-κB）p65、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素（IL）-1β和IL-6的mRNA水平。采用Western blot技术检测细胞p65、p-p65、TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平。采用流式细胞术检测细胞培养上清TNF和IL-6表达水平。 结果LIPUS可明显减少LPS诱导的RAW264.7细胞ROS水平。LPS诱导后，RAW264.7细胞M1分化标志物CD80和CD11b表达和转录水平均上调；LIPUS可抑制LPS对RAW264.7细胞向M1的诱导，差异具有统计学意义。并且，LIPUS可促进IL-4诱导的巨噬细胞M2分化标志物CD163表达。LPS诱导的RAW264.7细胞炎症因子NF-κB p65、TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA水平上调，LIPUS可下调这些炎症因子的mRNA水平，差异均具有统计学意义。LIPUS抑制了LPS对RAW264.7细胞因子蛋白p65和p-p65、IL-1β、TNF-α和IL-6蛋白表达上调的作用。胰酶可以通过激活ROS-NF-κB通路，回复LIPUS促进巨噬细胞M1分化的作用。 结论LIPUS可通过ROS-NF-κB抑制RAW264.7向巨噬细胞M1型分化，促进RAW264.7向巨噬细胞M2型分化。氧化应激和炎症因子表达水平被抑制。LIPUS可能在牙周疾病中起到抑制氧化和炎症的作用，从而发挥对牙周疾病的治疗功能。     

Effect of iRoot SP and mineral trioxide aggregate (MTA) on the viability and polarization of macrophages

ObjectiveThis study was performed to investigate the effect of iRoot SP and mineral trioxide aggregate (MTA) on the viability and polarization of macrophages.MethodsThe effect of iRoot SP and MTA on the viability of RAW 264.7 macrophages was tested using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay after 1 and 2 days of culture. The gene expression levels of interleukin 1β (IL-1β), tumor necrosis factor α (TNF-α), interleukin 10 (IL-10), interleukin 12p40 (IL-12p40) were measured by quantitative real time polymerase chain reaction (qRT-PCR) after stimulation of the RAW 264.7 macrophages with iRoot SP and MTA. The expression levels of CD11c and CD206 in RAW 264.7 macrophages were examined by immunofluorescence and flow cytometry after stimulation with iRoot SP and MTA. The data were analyzed by one-way analysis of variance and the Tukey test.ResultsBoth iRoot SP and MTA were non-toxic to the RAW 264.7 macrophages. The use of iRoot SP and MTA increased the expression of IL-1β, TNF-α, IL-10, IL-12p40 on the first day of culture and could promote macrophage M1 and M2 polarization.ConclusionsMTA and iRoot SP have good biocompatibility with macrophages, and they induced both M1 and M2 polarization of the RAW 264.7 macrophages.     

硅酸二钙对小鼠巨噬细胞系RAW264.7的促炎反应机制研究

目的:探讨硅酸二钙对小鼠巨噬细胞系RAW264.7的促炎反应机制。方法:选取小鼠巨噬细胞系RAW264.7作为研究对象,磷酸三钙(Tricalcium phosphate,简称TCP)颗粒作为对比,硅酸二钙(Dicalcium silicate,简称C2S)、磷酸三钙颗粒均设置两种浓度:10 mg/L和100 mg/L,观察RAW264.7对两种材料的吞噬作用,观察是否有细胞自噬现象发生,采用qRT-PCR的方法,检测硅酸二钙、磷酸三钙颗粒分别与RAW264.7共培养6 h和24 h后TLR2(Toll like receptor2)、TLR9基因的表达量,初步探讨硅酸二钙促炎反应的机制。结果:硅酸二钙与磷酸三钙颗粒与RAW264.7共培养后,细胞吞噬颗粒,通过透射电镜观察可见细胞自噬现象。与磷酸三钙颗粒组相比,硅酸二钙颗粒组与RAW264.7共培养6 h后,TLR2、TLR9基因的表达均无明显变化;共培养24 h后,硅酸二钙颗粒组的TLR2基因表达量明显增高(P<0.001),10 mg/L磷酸三钙颗粒组的TLR2基因表达可能增高(0.05<P<0.1)。结论:硅酸二钙对小鼠巨噬细胞RAW264.7的促炎反应与TLR2基因的高表达可能有密切的关系。     

低氧状态下骨细胞参与破骨细胞形成的作用机制研究

目的 探究低氧状态下骨细胞对破骨细胞形成的作用及其机制。方法 用去铁胺甲磺酸（DFO）刺激骨细胞系MLO-Y4建立体外低氧骨细胞培养体系。CCK-8实验检测DFO对MLO-Y4细胞增殖活性的影响;采用DFO处理后的MLO-Y4细胞培养液制备条件培养基诱导RAW264.7细胞分化,行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测;利用实时荧光定量聚合酶链反应、细胞免疫荧光和蛋白质印迹（Western blot）检测DFO作用下MLO-Y4表达低氧诱导因子（HIF）-1α与核因子κB受体活化因子配体（RANKL）的情况;检测HIF-1α siRNA转染对MLO-Y4表达HIF-1α和RANKL的影响。结果 100 μmol·L ^-1 DFO作用24 h时MLO-Y4增殖活性升高,之后随着时间延长细胞增殖活性下降（P<0.01）。加入可溶性RANKL后,低氧组可见破骨细胞形成明显增加（P<0.001）。100 μmol·L ^-1 DFO作用下,HIF-1α mRNA表达稳定,RANKL mRNA的表达随时间明显变化,24 h时最高（P<0.01）;HIF-1α、RANKL蛋白表达升高（P<0.01）。低氧状态下siHIF-1α转染可降低HIF-1α和RANKL的表达（P<0.01）,破骨细胞减少（P<0.01）。结论 低氧状态下MLO-Y4可通过上调HIF-1α的蛋白水平促进RANKL的生成,进而加速RAW264.7细胞向破骨细胞分化。     

布鲁顿酪氨酸激酶对破骨细胞增殖及分化作用的实验研究

目的 观察布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）对破骨细胞增殖及分化的影响,探讨BTK对根尖周炎骨破坏的作用。方法 破骨前体细胞RAW264.7经100 ng·L ^-1核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导5 d后,通过观察细胞形态、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色及实时荧光定量PCR（RT-qPCR）的方法,验证破骨细胞是否诱导成功。破骨细胞诱导成功后,转染BTK-小干扰RNA（siRNA）24 h,利用RT-qPCR检测TRAP mRNA的表达,采用CCK-8和TRAP酶活性检测法检测破骨细胞的增殖及分化情况。结果 RAW264.7细胞经RANKL诱导5 d后,可见大量体积较大,外观呈圆形、椭圆形,周围有不规则突起及TRAP染色阳性的多核破骨细胞。经BTK-siRNA转染24 h后,破骨细胞TRAP mRNA的表达水平显著降低（P<0.05）,其增殖及分化能力也明显受到抑制（P<0.05）。结论 抑制BTK表达,可以抑制破骨细胞的增殖及分化;BTK可作为抑制破骨细胞的新靶点。     

脱蛋白牛骨基质对骨膜细胞影响巨噬细胞M1表型的调控

目的:探讨脱蛋白牛骨基质骨替代材料与炎症环境中骨膜细胞的条件培养液对巨噬细胞M1表型的影响.方法:取P3代小鼠颅骨骨膜细胞,10 ng/mL LPS刺激24 h,分别换成常规培养基和脱蛋白牛骨基质(Bio-Oss骨粉)浸提液培养24 h,取上清记为A液、B液.体外培养小鼠RAW264.7细胞,100 ng/mL LPS...     

布鲁顿酪氨酸激酶对破骨细胞增殖及分化作用的实验研究

目的 观察布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）对破骨细胞增殖及分化的影响,探讨BTK对根尖周炎骨破坏的作用。方法 破骨前体细胞RAW264.7经100 ng·L ^-1核因子κB受体活化因子配体（RANKL）诱导5 d后,通过观察细胞形态、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色及实时荧光定量PCR（RT-qPCR）的方法,验证破骨细胞是否诱导成功。破骨细胞诱导成功后,转染BTK-小干扰RNA（siRNA）24 h,利用RT-qPCR检测TRAP mRNA的表达,采用CCK-8和TRAP酶活性检测法检测破骨细胞的增殖及分化情况。结果 RAW264.7细胞经RANKL诱导5 d后,可见大量体积较大,外观呈圆形、椭圆形,周围有不规则突起及TRAP染色阳性的多核破骨细胞。经BTK-siRNA转染24 h后,破骨细胞TRAP mRNA的表达水平显著降低（P<0.05）,其增殖及分化能力也明显受到抑制（P<0.05）。结论 抑制BTK表达,可以抑制破骨细胞的增殖及分化;BTK可作为抑制破骨细胞的新靶点。